钙调素蛋白磷酸酶对Slingshot-1L的调控作用

目的探讨钙调素依赖蛋白激酶(Calcinenurin/PP2B/CnA/Cn)对Slingshot-1L(SSH-1L)活性的调控作用。方法用脂质体法将含YFP-SSH-1L的重组质粒转染至MG63细胞,经钙离子载体A23187诱导10min,进行免疫细胞化学染色,观察细胞形态变化;体内及体外实验检测PP3B对SSH-1L的活性调控作用;应用免疫共沉实验检测PP2B与SSH-1L的相互结合情况。结果Ca2+信号诱导骨肉瘤细胞形成伪叶,同时SSH-1L与F-actin移位共聚集至细胞膜伪叶,但是被PP2B有效抑制剂Cypermethrin完全阻断;在体外,SSH-1L磷酸酶活性测定实验以及SSH-1L与PP2B结合实验证实SSH-1L与PP2B在细胞内是一对相互结合的蛋白质,同时PP2B具有促进SSH-1L酶活性的作用。结论PP2B通路对细胞伪叶的形成及细胞运动具有重要调控作用,同时对SSH-1L酶具有促进其活性的作用。