血清微小RNA-200C、微小RNA-101、肝肠钙黏蛋白和糖类抗原72-4联合检测对胃癌的诊断价值

目的探究血清微小RNA-200C(miR-200C)、微小RNA-101(miR-101)、肝肠钙黏蛋白(CDH17)及糖类抗原72-4(CA72-4)联合诊断胃癌的价值。方法选择2017年1月至2019年2月三门峡市中心医院收治的150例胃癌病人及同期收治的50例胃良性疾病病人及50例健康体检者作为研究对象,分别纳入胃癌组、胃良性疾病组及对照组,采用实时荧光定量-反转录聚合酶链式反应检测血清miR-200C、miR-101水平,采用酶联免疫吸附法、电化学发光免疫分析法检测血清CDH17及CA72-4浓度,分析各指标与胃癌临床参数的关系及其诊断价值。结果胃癌组病人血清miR-200C[(1.10±0.22)(0.68±0.15)、(0.95±0.20)]、miR-101[1.45(0.29,2.01)、0.30(0.10,0.65)、1.32(0.33,1.85)]表达水平显著低于良性组及对照组,CDH17[38.59(18.59,68.66)、88.12(33.25,152.12)、41.74(25.14,75.45)]、CA72-4[5.22(3.09,15.14)、17.15(6.71,32.12)、6.42(2.71,17.63)]水平显著高于良性组及对照组(P<0.05)。血清miR-200C、miR-101、CDH17与胃癌病人浸润深度、淋巴结转移、脉管浸润、临床分期相关(P<0.05);CA72-4与胃癌病人淋巴结转移相关(P<0.05)。miR-200C、miR-101、CDH17及CA72-4诊断胃癌的曲线下面积分别为0.899、0.904、0.871、0.793;其中miR-101诊断曲线下面积最大。miR-200C、miR-101、CDH17分别联合CA72-4诊断胃癌的曲线下面积为0.956、0.947、0.961,四种联合诊断曲线下面积最大,其曲线下面积为0.995。结论 miR-200C、miR-101、CDH17、CA72-4对胃癌有一定诊断效能,相比于单项检测常见肿瘤标志物CA72-4,miR-200C、miR-101、CDH17诊断价值更高,临床上可通过联合多种指标共同诊断以提高诊断效能。

亚洲玉米螟中肠类钙黏蛋白Cry1A毒素结合区对Cry1Ac毒素杀虫活性的影响

通过原核表达及亲和层析获得亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis中肠类钙黏蛋白Cry1A毒素结合区MPR及其在Cry1Ac抗性玉米螟中的突变体MPR-r2多肽片段。采用饲料混合法测定了MPR和MPR-r2及其分别与Cry1Ac毒素混合对亚洲玉米螟幼虫的杀虫效果。结果表明,MPR和MPR-r2多肽片段对亚洲玉米螟幼虫都有一定的杀虫作用;当MPR多肽片段与Cry1Ac毒素混合时,杀虫活性具有加性效应,而MPR-r2多肽片段与Cry1Ac毒素混合的杀虫效果则没有显著提高。

血管内皮细胞钙黏蛋白在心肌梗死中的表达及他汀类药物对其影响

目的探讨急性心肌梗死大鼠中血管内皮细胞钙黏蛋白的表达及他汀类药物对其的影响。方法结扎大鼠左前降支制备心肌梗死模型。将40只大鼠随机分为:假手术组(SH组)10只,心肌梗死组(AMI组)10只,他汀组(P组)根据服用他汀类药物剂量的不同将他汀组分为常规剂量组(A组)(20mg/kg·d)10只和大剂量组(B组)(80mg/kg·d)10只。分别采用免疫组化发检测急性心肌梗死梗死区血管内皮细胞钙黏蛋白,RT-PCR法检测其mRNA的表达。结果各组大鼠心肌梗死区心肌组织中内皮细胞钙黏蛋白mRNA和蛋白质的表达高于SH组(P<0.005)。心肌梗死组不同他汀类药物剂量组中B组浓度低于A组(P<0.005)。结论血管内皮细胞钙黏蛋白浓度在急性心肌梗死组增高,而且在心肌梗死组中大剂量的他汀类药物可抑制血浆中内皮细胞钙黏蛋白的增高,他汀类药物可调节其表达促进心肌梗死的预后。

转移抑制蛋白1及上皮钙黏蛋白E在非肌层浸润性膀胱癌中的作用

目的探讨转移抑制蛋白1（metastasis suppressor protein 1,MTSS1）及上皮钙黏蛋白E（E-cadherin）在非肌层浸润性膀胱癌（non-muscle invasive bladder cancer,NMIBC）生长、凋亡及预后过程中的作用。方法回顾性分析NMIBC患者63例,取患者癌肿组织进行免疫组织化学分析,根据细胞学检查分为A、B、C、D组。A组：Ecadherin（＋）、MTSS1（-）;B组：E-cadherin（-）、MTSS1（＋）;C组：E-cadherin（＋）、MTSS1（＋）;D组：E-cadherin（-）、MTSS1（-）。比较不同临床特征间MTSS1及E-cadherin表达;以MTSS1及E-cadherin为因变量,以各临床指标为自变量,进行Cox回归分析。结果 C组1年复发率最低仅13.33%,5年生存率最高达93.33%;D组1年复发率最高达68.75%,5年生存率最低仅12.50%,A、B组患者1年复发率和5年生存率介于C、D组之间。复发者MTSS1和E-cadherin阳性表达高于未复发者,病理分级G3期MTSS1和E-cadherin阳性表达高于G1-G2期（P〈0.01）。Cox回归分析显示,复发和病理分级是MTSS1及E-cadherin阳性的危险因素,不同性别、年龄、进展情况、肿瘤大小、肿瘤数目间MTSS1和E-cadherin阳性表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 MTSS1与E-cadherin表达降低是癌细胞发生恶化的重要分子生物学基础,将成为NMIBC术后治疗和判断预后的新型靶向研究目标。

神经型钙黏蛋白在肝门部胆管癌中的表达及意义

目的研究神经型钙黏蛋白(N-cadherin)在肝门部胆管癌组织中的表达及临床意义。方法免疫组化检测26例肝门部胆管癌与癌旁及5例正常胆管组织中N-cadherin表达差异。Western blot对比N-cadherin在肝门部胆管癌组织中与癌旁中差异。结果免疫组化示26例肝门部胆管癌癌组织中有14例N-cadherin表达阳性,癌旁组织中6例阳性(P<0.05)。正常胆管阳性表达0例。N-cadherin在低分化癌组阳性表达率高于中、高分化癌组。Western blot示N-cadherin在肝门部胆管癌组织中的表达高于癌旁组织(0.88±0.12 vs 0.43±0.09,P<0.05)。结论 N-cadherin可能参与肝门部胆管癌的发生发展。

鼻咽癌组织、细胞及患者外周血E-钙黏蛋白基因启动子的异常甲基化

目的探讨鼻咽癌组织和细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)基因表达水平与启动子甲基化的相关性,以及患者外周血E-cadherin甲基化作为肿瘤分子标志物的可能。方法采用RT-PCR检测鼻咽癌组织及两种鼻咽癌细胞株HNE1和CNE2中E-cadherin表达水平,以甲基化特异性PCR及硫化测序方法甲基化状态分析鼻咽癌组织、两种鼻咽癌细胞株及鼻咽癌患者外周血中E-cadherin启动子区域的甲基化状态。结果 40例鼻咽癌组织中E-cadherin表达下调率为80%(32/40),甲基化率为65%(26/40),5例正常鼻咽组织中未检测到E-cadherin甲基化,鼻咽癌患者外周血中E-cadherin甲基化率为45%(9/20)。结论基因启动子区域高甲基化状态可能是导致鼻咽癌组织中E-cadherin表达下调的重要机制,经外周血检测E-cadherin甲基化将为鼻咽癌的筛查诊断提供敏感、特异的无创检测方法。

胰腺癌患者表皮生长因子受体-2和E-钙黏蛋白表达的临床意义

目的探讨胰腺癌组织中表皮生长因子受体-2(Her-2)和E-钙黏蛋白的表达水平。方法收集山西医科大学第一医院病理科2010年3月至2016年6月期间诊断为胰腺癌患者的标本45例,采用免疫组织化学方法检测胰腺癌组织中Her-2和E-钙黏蛋白的表达水平。结果 Her-2在胰腺癌组织中表达上升;E-钙黏蛋白在胰腺癌组表达降低,且E-钙黏蛋白高表达随胰腺癌组织分化程度进展、淋巴结出现转移以及临床分期增加而降低。结论 Her-2和E-钙黏蛋白参与胰腺癌的发生、发展、侵袭、转移过程。

钙黏蛋白17是后肾腺瘤的敏感和特异标志物

Yakirevich E, Magi-Galluzzi C, Grada Z, et al. Cadherin 17 is a sensitive and specific marker for metanephric adenoma. Am J Surg Pathol, 2015,39（4） ：479 - 86.后肾腺瘤（MA）是一种罕见的良性肾脏肿瘤，其形态学和免疫表型与上皮样为主型肾母细胞瘤（e-WT）和乳头状肾细胞癌（s-PRCC）有重叠。钙黏蛋白17（CDH17）主要在正常小肠、消化道肿瘤中表达，而在包括肾肿瘤在内的其他部位肿瘤中的表达尚未见报道。作者首次对CDH17在MA、e-wT和s-PRCC中的诊断价值进行了研究。

卵巢癌中E-Cadherin异常甲基化与激素受体蛋白表达的相关性

目的探讨卵巢癌中E-cadherin启动子甲基化与蛋白表达及激素受体蛋白表达的相关性以及经甲基化药物5-Aza-dC处理前后肿瘤细胞增殖与侵袭能力的变化。方法采用甲基化特异性PCR与免疫组化染色检测50例卵巢癌组织中E-cadherin甲基化状态与蛋白表达水平;以RT-PCR与Western印迹分析药物处理前后SKOV3细胞中E-cadherin表达变化;MTT比色法与侵袭实验测定细胞增殖与侵袭能力变化;免疫组化法检测E-cadherin、ER、PR、Ki-67。结果卵巢癌中E-cadherin甲基化率为64%,显著高于正常卵巢组织(P<0.05);E-cadherin蛋白表达阳性率为60%,同基因甲基化状态呈负相关(P<0.05);SKOV3细胞经5-Aza-dC处理后可逆转E-cadherin甲基化状态从而上调其表达水平,同时显著抑制肿瘤细胞的增殖能力与侵袭能力;E-cadherin甲基化与ER、PR与Ki-67表达均无显著相关(P>0.05)。结论基因启动子区域高甲基化状态是导致卵巢癌中E-cadherin表达下调的重要机制,应用去甲基化药物处理可恢复E-cadherin表达并抑制肿瘤细胞恶性生物学行为。

不同级别卵巢浆液性癌中E-cadherin和p120蛋白的表达及意义

目的:探讨上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)和连环蛋白p120在不同组织学级别卵巢浆液性癌中的表达及意义。方法:用免疫组化EnVision二步法,分别检测31例卵巢低级别浆液性癌和70例卵巢高级别浆液性癌中E-cadherin和p120蛋白的表达水平,分析其与卵巢浆液性癌临床病理资料的相关性。结果:E-cadherin在低级别浆液性癌和高级别浆液性癌中的阳性率分别为71.0%和61.4%(P=0.356);p120的阳性率分别为83.9%和60.0%(P=0.018)。高级别浆液性癌中,E-cadherin和p120蛋白表达率随着FIGO分期(P=0.015和P=0.011)、淋巴结转移(P=0.001和P=0.001)及大网膜受累(P=0.028和P=0.018)显著降低。E-cadherin蛋白表达率随年龄增高显著降低(P=0.011),而p120蛋白表达率与年龄无显著相关性(P=0.226)。低级别浆液性癌中,仅p120蛋白表达率与淋巴结转移(P=0.042)、大网膜受累(P=0.048)及术前CA125水平(P=0.042)具有显著相关性。结论:卵巢高级别浆液性癌中p120蛋白的表达缺失率显著高于卵巢低级别浆液性癌,同时仅在高级别浆液性癌中E-cadherin和p120的低表达均与FIGO分期和肿瘤转移潜能相关,提示E-cadherin和p120蛋白可能在不同级别卵巢浆液性癌的发生发展中具有不同的作用。

电针对面神经损伤后面神经元中神经型钙黏素、上皮型钙黏素和胎盘型钙黏素表达的影响

背景:作者所在课题组前期研究发现周围性面神经损伤能引起神经元中黏附分子的表达变化,而电针穴位治疗周围性面神经损伤的机制尚不清楚。目的:探讨电针穴位在面神经外周部受损后对中枢面神经元的形态学变化及面神经元中神经型钙黏素、上皮型钙黏素及胎盘型钙黏素表达的影响。方法:将新西兰大白兔随机分为正常对照组(n=4)、面神经损伤组(n=24)和电针组(n=24)。面神经损伤组与电针组均建立右侧面神经上颊支压榨损伤模型。造模成功后每天对电针组实验兔颊车、地仓、翳风、颧缪、四白、阳白电刺激,选择频率为18-20 Hz、电压为1.5 V的疏密波,另外埋针合谷穴不予以电刺激,针灸每次30 min,1次/d。结果与结论:(1)原位杂交结果显示各组兔面神经元中均未见上皮型钙黏素和胎盘型钙黏素mRNA表达,且正常对照组兔面神经元中未见神经型钙黏素mRNA表达,而面神经损伤组和电针组兔面神经元中出现神经型钙黏素mRNA的阳性表达,电针组兔面神经元中神经型钙黏素mRNA阳性细胞数均多于面神经损伤组(P<0.05);(2)免疫组化染色可见正常对照组兔面神经元中神经型钙黏素、上皮型钙黏素和胎盘型钙黏素蛋白表达;损伤后1 d时三者表达下降(电针组神经型钙黏素蛋白除外);损伤后1,4,14 d时电针组兔面神经元中神经型钙黏素和胎盘型钙黏素蛋白表达高于面神经损伤组(P<0.05);损伤后各时间点,电针组上皮型钙黏素蛋白表达均高于面神经损伤组(1 d时除外)(P<0.05);(3)苏木精-伊红染色可见面神经损伤组逐渐出现面神经元变性及类似神经元死亡表现,21 d时神经元开始恢复。电针组变性及类似死亡表现的神经元较面神经损伤组少,且14 d时神经元开始恢复,28 d时2组神经元形态均基本恢复;(4)提示面神经损伤引起了钙黏素的表达变化,电针治疗减轻了面神经元的变性并促进神经元恢复,这可能与电针促进面神经元中经典钙黏素的高表达密切相关。

多西他塞联合雷替曲塞对老年晚期胃癌上皮钙黏素的影响

目的观察多西他塞与雷替曲塞联合治疗老年晚期胃癌的效果及对上皮钙黏素(E-cadherin)水平的影响。方法选取我院2017年12月至2019年11月收治的90例老年晚期胃癌患者作为研究对象,采用随机数字表法分为2组,观察组45例,行多西他塞与雷替曲塞联合治疗;对照组45例,行多西他塞治疗。2组均治疗2个周期,观察2组患者短期疗效、治疗前后E-cadherin水平及不良反应发生情况。结果治疗2周期后,观察组总有效率(40%)较对照组高(18%),差异具有统计学意义(P<0.05)。2组治疗期间均未发生Ⅲ、Ⅳ级严重不良反应,2组消化系统毒性、血液系统毒性、神经骨骼毒性、心脏毒性等不良反应发生率差异均无统计学意义(P>0.05)。2组患者治疗前E-cadherin水平差异无统计学意义(P>0.05)。治疗2周期后,2组E-cadherin水平均增加,但观察组E-cadherin水平较对照组显著增高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论多西他塞与雷替曲塞联合治疗老年晚期胃癌效果显著,安全性高,且可增加E-cadherin表达,多西他塞与雷替曲塞联合可用于临床治疗老年晚期胃癌。

高亲和型酪氨酸蛋白激酶类受体和上皮性钙黏连蛋白与鼻腔鼻窦腺样囊性癌病理及预后的关系

目的分析高亲和型酪氨酸蛋白激酶类受体(tyrosine protein kinase-like receptor,TrkA)、上皮型钙黏蛋白(epithelial calreticulin,E-cadherin)与鼻腔鼻窦腺样囊性癌病理、预后的关系。方法回顾性收集2019年1月—2021年7月郑州大学第一附属医院收治鼻腔鼻窦腺样囊性癌患者样本68例。用免疫组化SP法检测鼻腔鼻窦腺样囊性癌患者组织标本中TrkA、E-cadherin的表达,分析鼻腔鼻窦腺样囊性癌患者的TrkA、E-cadherin表达及与其病理特征的关系。进行随访,用寿命表法计算鼻腔鼻窦腺样囊性癌患者生存状况。用Kaplan-Meir生存曲线分析鼻腔鼻窦腺样囊性癌患者组织中TrkA、E-cadherin的表达与其生存率的关系;用Cox比例风险模型分析影响鼻腔鼻窦腺样囊性癌患者总生存期的危险因素。结果68例鼻腔鼻窦腺样囊性癌患者标本中,TrkA表达阳性率为60例(88.23%),E-cadherin表达阳性率为13例(19.11%)。Ⅲ期~Ⅳ期、实质型、局部有复发者的TrkA高表达占比高于Ⅰ期~Ⅱ期、筛状型/管状型、局部无复发者,差异具有统计学意义(P<0.05);Ⅲ期~Ⅳ期、实质型、局部复发、淋巴结侵犯者的E-cadherin低表达占比高于Ⅰ期~Ⅱ期、筛状型/管状型、局部无复发者,差异具有统计学意义(P<0.05)。经随访了解,18例死亡,1年、2年生存率分别为88.23%、73.52%。经Kaplan-Meir生存曲线得知,TrkA高表达2年生存率为66.67%,低于TrkA低表达组90.00%,差异具有统计学意义(P<0.05);E-cadherin低表达2年生存率为72.13%,低于E-cadherin高表达组的85.71%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论鼻腔鼻窦腺样囊性癌组织中TrkA主要呈高表达,E-cadherin主要呈低表达,两者在鼻腔鼻窦腺样囊性癌发生、发展及预后具有一定作用。进一步探究TrkA和E-cadherin在该癌症中的具体功能和作用机制,对于临床开发新的治疗策略及准确评估患者预后具有重要意义,可为相关治疗提供坚实的理论依据。

EpCAM和E-cadherin在膀胱尿路上皮癌的表达及意义

目的探讨上皮特异性黏附分子(EpCAM)和E-钙黏素(E-cadherin)在膀胱癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测156例不同级别膀胱癌组织和80例癌旁正常组织中EpCAM和E-cadherin的表达,分析它们在不同临床病理因素膀胱癌中的表达情况,及两者在膀胱癌发展过程中的相互关系。结果膀胱癌组织中EpCAM表达高于癌旁组织(53.2%vs13.8%,P<0.01),膀胱癌组织中E-cadherin表达低于癌旁组织(35.9%vs56.3%,P<0.01)。高分级膀胱尿路上皮癌标本中可见较为典型的EpCAM高表达,低分级膀胱尿路上皮癌中可见典型E-cadherin阳性表达。EpCAM在肌层浸润性(pT2、pT3或pT4)、高分级、合并远处转移、多发及复发膀胱肿瘤中表达上调(P<0.05),E-cadherin在肌层浸润性、高分级、合并远处转移、多发膀胱肿瘤中表达下调(P<0.05)。膀胱癌中EpCAM与E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.607,P<0.01)。结论 EpCAM和E-cadherin与膀胱癌的分化、浸润转移等恶性行为有关,两者联合检测对判断肿瘤侵袭转移能力具有一定价值。

RhoB和E-cadherin在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中RhoB和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达及其临床意义。方法采用免疫组化Super Pic TureTMPolymer二步法,检测116例NSCLC组织(NSCLC组)和同期116例正常余肺组织(正常组)中RhoB和E-cadherin的表达,并分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果 NSCLC组RhoB、E-cadherin阳性表达率均低于正常组(57.76%vs 87.07%,54.31%vs 85.34%,均P<0.01)。NSCLC组织中RhoB的表达强度在不同肿瘤病理类型、肿瘤分化程度及淋巴结转移情况间的差异有统计学意义,E-cadherin的表达强度在不同TNM分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移情况间的差异有统计学意义。NSCLC组RhoB与E-cadherin的表达呈正相关(r=0.503,P<0.01)。RhoB高表达的患者3年生存率高于低表达者(83.93%vs 40.00%,Log-rankχ2=18.992,P<0.01);Ecadherin高表达的患者3年生存率高于低表达者(85.11%vs 44.93%,Log-rankχ2=16.680,P<0.01)。RhoB和E-cadherin共同低表达、淋巴结转移是影响NSCLC患者预后的危险因素。结论 RhoB与E-cadherin在NSCLC组织中的表达呈现较好的相关性,检测二者的表达对判断NSCLC患者的临床病理学特征及预后有一定提示作用。

TGF-β1、Slug及E-cadherin在胆管癌组织中的表达及意义

目的探讨TGF-β1、Slug和E-cadherin在胆管癌组织中的表达并分析其临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测TGF-β1、slug和E-cadherin在70例胆管癌组织和20例癌旁组织中的表达情况,分析其临床意义。结果 70例胆管癌、20例胆管癌癌旁组织中TGF-β1、Slug和E-cadherin阳性表达率差异均有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1和Slug阳性表达率在淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P<0.05),在肝动脉或门静脉受侵者高于无受侵者(P<0.05)。E-cadherin阳性表达率在淋巴结转移者低于无淋巴结转移者(P<0.05),在肝动脉或门静脉受侵者低于无受侵者(P<0.05)。胆管癌组织中,TGF-β1与Slug表达呈正相关(rs=0.658,P=0.000);TGF-β1与E-cadherin表达呈负相关(rs=-0.527,P=0.000);Slug与E-cadherin表达呈负相关(rs=-0.526,P=0.000)。结论 TGF-β1、Slug及E-cadherin表达对胆管癌的发生发展可能发挥重要的作用。

FOXQ1和E-cadherin在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨叉头框蛋白Q1(FOXQ1)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测42例ESCC组织(ESCC组)及其癌旁正常食管鳞状上皮组织(正常组)中FOXQ1和E-cadherin的表达情况,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果 ESCC组FOXQ1的阳性表达率高于正常组(64.29%vs 28.57%,χ2=5.384,P<0.05),E-cadherin的阳性表达率低于正常组(52.38%vs 90.48%,χ2=7.691,P<0.05)。FOXQ1的表达强度在不同TNM分期及不同淋巴结转移情况间的差异有统计学意义,E-cad-herin的表达强度在不同浸润深度、分化程度、TNM分期和淋巴结转移情况间的差异有统计学意义。ESCC组织中FOXQ1和E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.412,P<0.05)。FOXQ1高表达者的5年生存率低于低表达者(18.52%vs 66.67%,χ2=9.737,P<0.05),E-cadherin高表达者的5年生存率高于低表达者(59.09%vs 10.00%,χ2=10.996,P<0.05)。COX比例风险回归模型分析结果显示,FOXQ1高表达、E-cadherin低表达、有淋巴结转移是影响ESCC患者预后的独立危险因素。结论 FOXQ1和E-cadherin在ESCC组织中的表达呈现较好的相关性,联合检测两者的表达对于ESCC患者的预后判断及指导治疗具有一定的临床价值。

类转录激活因子效应物核酸酶介导的E-cad和Bmi-1基因联合干预鼻咽癌的体外研究

目的:检测类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)介导的E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-lymphoma Moloney murine leukemia virus insertion region-1,Bmi-1)基因联合干预对鼻咽癌细胞生物学行为的影响。方法:构建多位点基因打靶载体p UC-DS1-E-cad-2ANeo-DS2(以下简称E-cad打靶载体)和p UC-DS1-Bmi-1 sh RNA-Zeo-DS2(以下简称Bmi-1打靶载体),将E-cad打靶载体、Bmi-1打靶载体及佛山科学技术学院分子医学研究院前期构建的TALEN载体以不同组合转染鼻咽癌CNE-2细胞。采用PCR检测靶基因的整合,Western印迹检测靶基因蛋白表达水平变化,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖能力变化,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡变化,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力变化。结果:靶基因E-cad和Bmi-1 sh RNA表达元件成功整合到鼻咽癌CNE-2细胞的基因组中;转染后鼻咽癌CNE-2细胞中E-cad的蛋白表达水平明显上升,Bmi-1的蛋白表达水平明显下降;干预E-cad及Bmi-1不影响细胞的增殖、周期和凋亡,但显著抑制细胞的迁移和侵袭能力,且E-cad和Bmi-1联合干预比单独干预更能显著抑制鼻咽癌CNE-2细胞体外迁移能力(均P<0.01)。结论:TALEN介导的E-cad和Bmi-1联合干预能有效抑制鼻咽癌CNE-2细胞的体外迁移和侵袭,可为人类癌症的基因治疗建立前期的实验基础。

Bt Cry2Ab对美国白蛾的杀虫活性及与几种中肠受体蛋白体外结合特性分析

美国白蛾(Hyphantria cunea)是危害我国蚕区桑树的重要害虫之一,为明确苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白对其作用机制,本文利用大肠埃希菌表达苏云金杆菌Bt Cry2Ab蛋白,在活性测定基础上进行毒素蛋白与美国白蛾中肠类钙黏蛋白(cadherin)功能区(HcCAD-1、HcCAD-2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)HcALP1、HcALP3的结合特性分析。原核表达并纯化的Bt Cry2Ab蛋白用美国白蛾3龄幼虫进行生物测定,对幼虫生长发育抑制作用明显,当质量浓度为224 mg/L时抑制率为71.14%,抑制中浓度为68.44 mg/L。将Bt Cry2Ab毒素分别与美国白蛾HcCAD-1、HcCAD-2、HcALP1、HcALP3重组蛋白进行体外配体印迹试验,Bt Cry2Ab与HcCAD-2、HcALP1重组蛋白发生特异结合,而与HcCAD-1、HcALP3不结合,推测HcCAD-2、HcALP1可能为美国白蛾Bt Cry2Ab蛋白的中肠受体蛋白。

沉默T-cadherin对ox-LDL诱导人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo生物学行为的影响

目的 探讨沉默T-钙黏蛋白(T-cadherin)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo生物学行为的影响。方法 将人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo分为空白对照组、ox-LDL组、Tcadherin小干扰RNA(siRNA)阴性对照组、T-cadherin siRNA组。各组细胞转染后,实时荧光定量PCR检测各组Tcadherin mRNA水平;MTT法检测HTR-8/SVneo细胞增殖情况;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Transwell小室实验、划痕实验分别检测细胞侵袭、迁移能力;蛋白免疫印迹实验检测细胞胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达水平。结果 与空白对照组相比,ox-LDL组和T-cadherin siRNA阴性对照组T-cadherin mRNA、细胞增殖抑制率、凋亡率、Caspase-3、Bax蛋白表达水平升高,克隆形成率、侵袭细胞数、划痕愈合率、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05);与ox-LDL组和T-cadherin siRNA阴性对照组相比,T-cadherin siRNA组T-cadherin mRNA、细胞增殖抑制率、凋亡率、Caspase-3、Bax蛋白表达水平降低,克隆形成率、侵袭细胞数、划痕愈合率、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 沉默T-cadherin可抑制ox-LDL诱导的HTR-8/SVneo细胞异常凋亡,并促进细胞的增殖、侵袭、迁移能力。