自身免疫性甲状腺疾病钠/碘同向转运体的相关性研究

目的研究不同自身免疫性甲状腺疾病(AITD)钠/碘同向转运体抗体(NISAb)与甲状腺球蛋白抗体(Tg Ab),甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)含量之间的相关性,并观察甲亢患者药物治疗前后NISAb含量的变化。方法选择甲亢(GD)患者,桥本甲状腺功能低下者(HT),健康正常人组(NC)各40例,检测NISAb、Tg Ab、TPOAb含量,比较NISAb含量与Tg Ab、TPOAb含量之间的相关性,并分析20例甲亢患者药物治疗前后NISAb含量的差异。结果 (1)甲亢患者NISAb与Tg Ab、TPOAb含量,相关系数R分别为0.90、0.85,P均<0.05,呈直线相关性,GD患者NISAb与Tg Ab,TPOAb呈正相关,HT患者NISAb与Tg Ab、TPOAb含量,相关系数r分别为-0.64、-0.52,P均<0.05,呈线性负相关性。正常人群NISAb,Tg Ab,TPOAb含量之间,相关性分析,P值分别为0.63、0.22,P均>0.05,无线性相关性。(2)甲亢患者NISAb含量与正常人群对比分析,t检验,P<0.05,NISAb含量高于正常人群。HT患者NISAb含量与正常人群对比分析,t检验,P<0.05,NISAb含量低于正常人群。(3)甲亢患者治疗前后NISAb含量对比分析,t检验,P<0.05差异有统计学意义。结论 (1)GD和HT患者血浆NISAb含量与Tg Ab,TPOAb含量之间具有相关性,GD患者血浆NISAb含量与Tg Ab,TPOAb含量之间呈正相关,HT患者血浆NISAb含量与Tg Ab,TPOAb含量之间呈负相关。(2)GD患者血浆NISAb含量高于健康人群,HT患者NISAb含量低于健康人群。(3)GD患者治疗后NISAb含量明显降低,差异明显。

高碘摄入对SD大鼠钠/碘同向转运体蛋白表达影响的免疫组化研究

目的:动态观察长期高碘摄入对SD大鼠甲状腺细胞钠/碘同向转运体(NIS)蛋白表达的影响。方法:SD大鼠分别饲以去离子水及不同碘浓度的碘化钾水,给碘后1 d及1,2,4,8周处死。测定尿碘、组织碘含量,免疫组织化学方法观察甲状腺细胞NIS蛋白表达水平。结果:高碘摄入可引起甲状腺滤泡细胞膜表面NIS蛋白表达的下降。短期较低浓度的高碘摄入对NIS蛋白的表达无明显影响,而较高浓度的碘摄入则引起NIS蛋白表达的明显减少;长期高碘摄入对NIS蛋白表达的抑制作用,可在机体自我调节机制作用下得以部分恢复,但NIS蛋白表达仍处较低水平。结论:高碘摄入可导致甲状腺细胞表面NIS蛋白表达下降,随摄碘浓度的增加抑制作用增强;不同浓度的碘摄入对NIS蛋白表达的抑制作用表达时间不同。

钠/碘同向转运体基因获取及其克隆与测序

目的 :获取、构建并鉴定携带人钠 /碘同向转运体 (NIS)基因的pGEMTeasy质粒载体。方法 :利用逆转录和聚合酶链反应 (RT-PCR)获取Graves甲亢病人甲状腺NIS基因可编码区片段 ,与pGEMTeasy质粒载体连接、经转化、蓝白斑筛选、酶切鉴定 ,获得pGEMTeasy -NIS重组质粒 ,进行序列测定鉴定。结果 :所构建的pGEMTeasy -NIS重组质粒中NIS与文献报告序列 99%同源性。结论 :成功构建pGEMTeasy -NIS重组质粒。

钠/碘同向转运体在人不同组织学分型胃癌中的表达

目的研究钠/碘同向转运体(sodium-iodide symporter,NIS)在人不同组织学分型胃癌组织中的表达,分析NIS表达与胃癌组织学分型的关系。方法选取于中国医科大学附属第一医院肿瘤外科行手术治疗的180例患者的胃癌组织为研究对象。依据胃癌的组织学分型分为6组,其中乳头状腺癌30例,管状腺癌30例,低分化腺癌30例,黏液腺癌30例,印戒细胞癌30例,未分化癌30例。选取上述180例患者的癌旁组织及30例慢性胃炎患者的胃组织作为对照。采取免疫组织化学SP法对上述组织的石蜡切片进行染色。结果在人胃癌组织、人胃癌旁组织及人慢性胃炎组织中,NIS阳性细胞率分别为10.6%(19/180)、28.3%(51/180)和90%(27/30)。人胃癌组织与人胃癌旁组织相比(P<0.01)、人胃癌组织与人慢性胃炎组织相比(P<0.01)、人胃癌旁组织与人慢性胃炎组织相比(P<0.01),NIS阳性细胞率均具有显著统计学差异。在人乳头状腺癌、管状腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌、印戒细胞癌及未分化癌中,NIS阳性细胞率分别为30%(9/30)、10%(3/30)、13.3%(4/30)、6.7%(2/30)、3.3%(1/30)和0(0/30)。人乳头状腺癌与人黏液腺癌相比(P<0.05)、人乳头状腺癌与人印戒细胞癌相比(P<0.01)以及人乳头状腺癌与人未分化癌相比(P<0.01),NIS阳性细胞率均具有统计学差异。在人慢性胃炎组织及人胃癌旁组织中,NIS仅表达于胃黏膜细胞的细胞膜上,而在人胃癌组织中,NIS在癌细胞膜有表达,在细胞质也有较明显的表达。结论在人胃癌组织、癌旁组织、慢性胃炎组织中,NIS阳性细胞率依次增高。在本研究人各种组织学分型的胃癌中,随着胃癌恶性程度的增高,NIS表达呈现出减少的趋势。人胃癌组织NIS在癌细胞的细胞膜和细胞质均有表达,而人慢性胃炎组织和人胃癌旁组织NIS仅在胃黏膜细胞的细胞膜表达。

人钠/碘同向转运体基因转染肺癌A549细胞介导放射性碘摄取实验研究

目的:研究重组人钠/碘同向转运体基因(hNIS)腺病毒介导肺癌A549细胞的碘摄取、外流和杀伤情况,为放射性碘治疗肺癌提供理论和实验依据。方法:用重组hNIS腺病毒(AdNIS)感染肺癌A549细胞,检测感染细胞内hNIS蛋白的表达;在体外培养的条件下研究其125I的摄取、外流情况以及131I的杀伤情况。结果:hNIS蛋白在实验组肺癌A549细胞中表达阳性且主要分布于细胞膜上;实验组细胞摄碘能力较对照组高;细胞摄碘后碘外流过程十分迅速;实验组细胞可被131I有效杀伤。结论:应用腺病毒为载体,可以有效的将hNIS基因转染至体外培养的肺癌A549细胞中,并介导肺癌细胞对放射性碘的摄取及选择性杀伤作用。

钠/碘同向转运体在甲状腺癌^(131)I治疗中的应用

钠/碘同向转运体(Na+/I-symporter,NIS)是一种膜蛋白,介导甲状腺滤泡细胞的碘转运,在甲状腺癌的病理生理及131I治疗中起着重要的作用。多数研究表明,甲状腺癌的NISmRNA及蛋白表达水平降低;维甲酸、去甲基化及组蛋白脱乙酰酶抑制剂可刺激失分化甲状腺癌细胞的NIS表达,为甲状腺癌131I的有效治疗进行了有益的探索。NIS基因的克隆和其特性的揭示为甲状腺癌的靶向基因放射治疗提供了可能。

人钠/碘同向转运体基因cDNA的克隆与序列测定

为研究人钠/碘同向转运体(hNIS)的生物学性能和用于肿瘤放射性碘治疗的可能性,运用反转录聚合酶链反应 (RT-PCR)从人甲状腺组织总RNA中扩增出hNIS基因cDNA序列,将其克隆至pUCm-T载体中。序列分析证实克隆 片段与文献报道的hNIS基因cDNA序列完全一致,说明已成功克隆到hNIS基因cDNA。

钠/碘同向转运体与放射性碘治疗

钠 /碘同向转运体 (NIS)是一种调节甲状腺及其他组织碘转运活性的膜蛋白。NIS在甲状腺的病理生理中发挥着关键性作用 ,它实现了甲状腺组织摄取碘并进行甲状腺激素的生物合成 ,实现了甲状腺功能亢进和分化型甲状腺癌的显像诊断和放射性碘治疗。近年来 ,对 NIS的进一步分子学研究表明 。

钠/碘同向转运体

钠 /碘同向转运体是甲状腺滤泡细胞基底细胞膜上的糖蛋白 ,介导甲状腺对碘的主动运输。本文综述钠 /碘同向转运体在基因、蛋白质二级结构、电生理学特征、调控及组织分布等方面的进展 ,及其对甲状腺疾病和放射性碘治疗的意义。

钠/碘同向转运体的研究进展

甲状腺对I-的摄取是甲状腺激素合成的第一步 ,而调节这一过程的重要物质是位于甲状腺滤泡细胞基底膜上的钠 /碘同向转运体 (sodium/iodidesymporter,NIS)。NIS主要存在于甲状腺组织 ,其调节I-摄取要依赖Na+ 的存在 ,摄取过程可被SCN-、ClO4-等一价阴离子所抑制。人和大鼠NIS的基因都已经被克隆 ,对其基因表达调控的研究也逐渐兴起。促甲状腺激素 (TSH)对NIS的基因的表达及I-摄取具有很强的刺激作用。研究人员在一些自身免疫性甲状腺疾病患者的血清中发现了针对NIS的抗体 ,而且 ,认识到NIS的基因突变是先天性甲状腺功能低下的一个重要原因。此外 ,人们利用NIS的基因 。

人重组pcDNA3人钠/碘同向转运体核表达质粒的构建

目的:获取、构建并鉴定携带人钠/碘同向转运体(hNIS)基因的pcDNA3.0质粒载体。方法:利用逆转录和聚合酶链反应获取Graves甲亢患者甲状腺NIS基因可编码区片段。与pUCm-T质粒载体连接、经转化、蓝白斑筛选、酶切鉴定,序列测定鉴定,获得pUCm-T-重组质粒。pUCm-T-重组质粒亚克隆得到pcDNA3-hNIS重组质粒。结果:所构建的pcDNA3-hNIS重组质粒中的hNIS基因序列与文献报道序列一致。结论:成功构建pcDNA3-hNIS重组质粒。

人甲状腺钠/碘转运体基因全长的克隆及其重组表达质粒的构建

目的:利用基因工程的方法制备甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)cDNA,为今后的转基因治疗奠定物质基础。方法:采用TRIzol一步法,从甲状腺组织中提取总RNA,再应用RT-PCR扩增出hNIS基因全长,然后采用TOPO克隆技术构建重组表达质粒pcDNA3.1D/FLhNIS,并进行酶切和测序鉴定。结果:成功制备了hNIScDNA并构建了其重组表达质粒。结论:为最终实现131I治疗不摄碘的肿瘤提供了分子生物学基础。

转染甲状腺钠／碘同向转运体的卵巢癌^99mTcO4^-显像及^131I治疗

目的通过观察^131I对转染人甲状腺钠／碘同向转运体（hNIS）的卵巢癌的治疗作用，为最终实现^131I治疗非甲状腺肿瘤提供理论依据。方法应用hNIS基因全长转染人卵巢癌细胞系，建立裸鼠卵巢癌荷瘤模型，在整体水平研究hNIS转染后介导的卵巢癌移植瘤^99mTcO4^-显像和^131I的治疗作用。结果转染hNIS基因后，原本不摄碘的卵巢癌可以应用^99mTcO4^-显像，并且在^131I作用下，肿瘤体积有所缩小。结论^131I对转染hNIS基因的卵巢癌移植瘤增殖具有较强的抑制作用。

人钠/碘转运体基因G395R与先天性甲状腺功能减退症相关

先天性甲状腺功能减退症 5 2例和 10 6例健康婴幼儿 ,采用PCR RFLP技术对钠 /碘同向转运体 (hNIS)基因 3 95位点进行基因突变筛查。研究表明hNIS基因G3 95R突变可能不是青岛地区先天性甲状腺功能减退症发病的主要原因。

MUC1启动子驱动人钠/碘共转运体基因靶向表达于胰腺癌细胞的研究

目的克隆人 Mucin (MUC1)黏蛋白的启动子序列,并研究其驱动人钠/碘共转运体(hNIS)基因在胰腺癌细胞内的靶向性表达功能。方法利用巢式 PCR 方法从人胰腺癌细胞株CAPAN-Ⅱ细胞中扩增出 MUC1启动子。采用基因重组方法构建质粒 pDC316-MUC1/hNIS。采用脂质体转染的方法把 pDC316-MUC1/hNIS 导入到 MUCI 阳性的人胰腺癌细胞株 CAPAN一Ⅱ、PANC-1和MUC1阴性的人宫颈癌细胞株 HeLa,转染后48h 采用 RT-PCR 方法及免疫组化方法检测转染细胞内的 hNIS mRNA 水平和蛋白表达,转染48h 后检测肿瘤细胞内 NIS 对125碘吸收功能。结果扩增的MUC1启动子核心调控区序列与参考序列一致。重组 pDC316-MUC1/hNIS 转染后48h,hNIS 蛋白在CAPAN-Ⅱ、PANC-1细胞阳性表达,而在 Hela 细胞内不表达。pDC316-MUC1/hNIS 转染后仅在CAPAN-Ⅱ、PANC-1细胞内检测到高水平吸碘,分别是 pDC316-MUC1转染组的7和12倍。结论MUC1启动子能驱动 NIS 基因在 MUC1阳性的肿瘤细胞内靶向功能表达,为进一步在体内运用放射碘靶向治疗胰腺癌奠定了基础。

甲状腺功能异常者摄碘率与血液中NIS-Ag甲状腺过氧化物酶的相关性研究

目的探讨甲状腺功能减退(甲减)和甲状腺功能亢进(甲亢)患者治疗前后摄碘率(RAIU)与甲状腺钠/碘同向转运体抗原(NIS-Ag)、甲状腺过氧化物酶(TPO)含量变化的相关性。方法选取2015年2月—2016年8月濮阳市安阳地区医院36例健康体检人员和108例甲状腺疾病就诊患者做为研究对象。电化学发光法检测血清中游离三碘甲状腺素原氨酸(FT3)、游离甲状腺素原氨酸(FT4)和促甲状腺激素(TSH)含量。用甲状腺摄碘功能仪分别检测各组的3 h RAIU、24 h RAIU,用酶联免疫吸附试验测定血浆中NIS-Ag、TPO含量,比较各组别RAIU、NIS-Ag、TPO含量,并分析患者药物治疗前后RAIU与NIS-Ag、TPO相关性。结果FT3、FT4、TSH含量,除甲减摄碘率增高组和减低组之间比较无差异外,其余各组含量比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。甲减摄碘率增高组和减低组FT3、FT4含量最低,TSH最高;甲亢组FT3、FT4含量最高,TSH最低。各组治疗前3 h RAIU、24 h RAIU、NIS-Ag及TPO含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。24 h RAIU、3 h RAIU、NIS-Ag及TPO在甲减甲状腺摄碘率减低组中最低,而在甲亢组中最高。各患病组3 h RAIU、24 hRAIU与NIS-Ag、TPO均呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05),但在正常组该指标间无相关性(P>0.05)。各组治疗后24 h RAIU、3 h RAIU、NIS-Ag及TPO值均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05)。各患病组治疗后3 h RAIU、24 h RAIU与NIS-Ag、TPO均呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论甲减患者和甲亢患者RAIU与NIS-Ag、TPO存在正相关性;药物治疗能降低RAIU、NIS-Ag及TPO。

hNIS转基因介导^(131)碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:克隆人的甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)基因,研究其转导在鼻咽癌细胞内的功能,以及131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到pcDNA3.1(+)-FLAG载体,获得重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG。采用脂质体转染的方法,将pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG质粒导入到鼻咽癌细胞株CNE2,G418筛选得到稳定表达hNIS鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS,体外培养条件下检测其对放射性碘的摄取和外流情况。CCK8试剂盒检测131碘对鼻咽癌细胞增殖的作用,AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞技术(FCM)检测131碘作用后鼻咽癌细胞凋亡情况。结果:成功克隆hNIS基因,并建立能稳定表达hNIS的鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS。CNE2-hNIS对125碘的吸收量比CNE2高约15倍,但在无碘的环境中,细胞内滞留的碘外流迅速,有效半衰期约8min。131碘在72 h后对CNE2-hNIS的增殖产生抑制作用,细胞早期凋亡率增加,并随着131碘浓度的增加,作用逐渐增强(P<0.01)。结论:从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染鼻咽癌细胞后,能使鼻咽癌细胞发挥高水平吸碘功能,131碘能够抑制转染hNIS的鼻咽癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。

siRNA沉默survivin增强hNIS转染的鼻咽癌细胞株对^(131)碘的敏感性

目的:研究Survivin特异性小片段干扰RNA(siRNA)能否增强人钠碘同向转运体(hNIS)转染的鼻咽癌细胞株(CNE-2-hNIS)对131碘的放射敏感性.方法:设计并合成针对survivin基因的特异性siRNA,利用脂质体法转染CNE-2-hNIS细胞,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和Westernblot方法检测细胞survivin基因沉默效果.CCK-8、克隆形成实验和Annexin VFITC/PI双染流式细胞仪检测131碘孵育后对细胞增殖和凋亡的影响.结果:SurvivinsiRNA转染CNE-2-hNIS细胞72h后,细胞的survivin基因mRNA和蛋白表达明显降低,Si-survivin组较SiRNA-NC组细胞增殖率降低,131碘孵育后,Si-survivin组较SiRNA-NC组细胞增殖率降低,凋亡率增高,差别有统计学意义(P<0.05).结论:Survivin特异性siRNA能显著沉默CNE-2-hNIS细胞的survivin基因的表达,增加CNE-2-hNIS对131碘的放射敏感性.

hTPO和hNIS共转染肺癌细胞系H460介导放射性碘摄取的研究

背景与目的肺癌严重危害人类生命和健康,目前国内外肺癌的发病率和死亡率仍在不断上升。尤其是非小细胞肺癌(non-small cell lungcacer,NSCLC)治疗效果多年来一直没有显著提高。本研究旨在将人甲状腺过氧化物酶(hTPO)基因及人钠碘转运体(hNIS)基因共转入肺癌细胞系后研究其摄碘能力的变化。方法克隆,重组,包装并扩增纯化得到重组腺病毒(AdTPO),测定病毒滴度,Western blot检测重组腺病毒的表达。使用脂质体转染法将hNIS基因转染入人肺癌细胞系H460中,经G418抗生素筛选获得稳定表达hNIS的细胞系hNIS-H460,为hNIS-H460组;使用重组腺病毒将hTPO基因转导入hNIS-H460中,使肺癌细胞系获得hTPO基因,为AdTPO-hNIS-H460组;未转入hTPO和hNIS的细胞为对照组(H460)。然后进行三组稳定表达细胞系的体外摄125I实验。三组间两两比较用q检验(Newman-Keuls法)。结果AdTPO-hNIS-H460细胞、hNIS-H460细胞和H460细胞所摄取125I分别为(59637.67±1281.13)、(48622.17±2242.28.)和(1440.17±372.86)计数·min-1。三组间总体具有统计学差异(P<0.01)。AdTPO-hNIS-H460组较对照组(H460)摄125I能力增高约41倍(P<0.01),hNIS-H460组较对照组(H460)摄碘能力增高约34倍(P<0.01)。AdTPO-hNIS-H460组较hNIS-H460组高约1.2倍(P<0.01)。结论将hTPO和hNIS基因共转染至肺癌细胞系H460后,可有效提高H460的摄碘能力。

全反式维甲酸对甲状腺癌细胞NIS基因表达及吸碘能力影响的实验研究

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对甲状腺癌细胞株钠/碘同向转运体(NIS)基因表达、吸碘能力的影响,为ATRA用于放射性碘治疗甲状腺癌提供理论依据。方法:分别以不同浓度(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L)的ATRA处理体外培养的甲状腺癌细胞株(FTC-133),48h后利用半定量RT-PCR检测细胞NISmRNA表达,γ-计数仪检测细胞吸碘能力。结果:ARTA浓度在(0～10-5)mol/L范围内,细胞NIS基因表达及吸碘能力随ARTA剂量的增加而增加(P<0.05)。当ARTA浓度达10-4mol/L时,增加与前一浓度相比无统计学意义(P>0.05)。结论:ATRA可上调甲状腺癌FTC-133细胞NIS基因表达,增强其吸碘能力,而且这种作用在一定浓度范围内具有剂量依赖性。