钾通道阻断剂对低氧/复氧诱导的培养海马神经元死亡的防护作用

目的研究钾通道阻断剂对单纯低氧/复氧诱导的培养海马神经元死亡的防护作用。方法培养8 d的海马神经元置于低氧环境(95% N2/5% CO2)6 h,复氧再培养直至72 h,复氧后0.5 h培养液内分别给予不同钾通道阻断剂,用细胞计数及MTT比色法检测神经元死亡情况。结果低氧/复氧诱导培养海马神经元出现迟发性死亡;四乙铵以剂量依赖性的方式防护低氧/复氧诱导的培养海马神经元免于死亡;大电导钙激活钾通道(BK通道)阻断剂iberiotoxin(IbTX)可完全消除低氧/复氧诱导的神经元死亡(P<0.001);A型钾通道阻断剂4-氨基吡啶不能防护低氧/复氧诱导的神经元免于死亡(P>0.05)。结论钾通道阻断剂四乙铵和IbTX能防护低氧/复氧诱导的培养海马神经元免于死亡,提示某些类型的钾通道尤其是BK通道活动增强可能参与了低氧/复氧诱导的培养海马神经元死亡。

钾通道阻断剂四乙铵对氧葡萄糖剥夺诱导大鼠海马神经元死亡的保护作用

目的研究钾通道阻断剂四乙铵(TEA)对氧葡萄糖剥夺(OGD)诱导的培养海马神经元死亡的保护作用。方法培养12 d的海马神经元培养基更换为Earle′s平衡盐溶液(EBSS)后置于37℃三气缺氧(N2:CO2:O2=94%:5%:1%)培养箱内培养,4 h后恢复正常条件培养,同时在培养液内加入不同浓度钾通道阻断剂TEA,继续培养24 h后噻唑蓝(MTT)比色法检测神经元死亡情况。结果OGD组、OGD+不同浓度TEA组与对照组比较,海马神经元细胞存活率明显降低(P<0.05);OGD+10μmol.L-1TEA组和OGD+500μmol.L-1TEA组与OGD组比较,海马神经元细胞存活率明显升高(P<0.05);而OGD+1μmol.L-1TEA组和OGD+5 mmol.L-1TEA组与OGD组比较,海马神经元细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。结论钾通道阻断剂TEA能保护OGD诱导的培养海马神经元免于死亡,提示某些类型的钾通道活动增强可能参与了OGD诱导的培养海马神经元死亡。

海南斑等蝎钾通道阻断剂Im58的克隆、表达、纯化和鉴定

为表达钾离子通道阻断剂Im58,设计了4条搭桥PCR引物,通过overlap PCR的方法扩增出蝎毒肽Im58DNA全长片段,选用表达载体pGEX-4T-1,将测序正确的克隆转化至大肠杆菌E.coli/Rosetta(DE3)中.通过检测不同诱导时间和IPTG浓度下融合蛋白的表达量,筛选出最优表达条件.表达蛋白经IPTG诱导后,融合蛋白再经GSH亲和层析柱纯化,将洗脱液经超滤浓缩脱盐、纯化后得GST-Im58融合蛋白,蛋白用小肠激酶酶切后通过RP-HPLC C18柱分离获得色谱纯的蝎毒肽.蝎毒肽通过Tricine系统的SDS-PAGE蛋白质电泳鉴定重组多肽的分子量大小和纯度,并由MALDI-TOF-MS来精确测定重组多肽的分子量.结果表明:Im58阳性克隆子证明成功构建了Im58原核表达载体,Tricine系统的SDS-PAGE蛋白质电泳和MALDI-TOF-MS鉴定Im58多肽表达纯化成功.

钾通道阻断剂对心房快速起搏兔右心耳场电位时限的影响

目的应用微电极阵列（MEA）研究钾通道阻断剂对快速起搏（RAP）兔右心耳场电位时限（fAPD）的变化。方法成年新西兰大白兔40只，体重2．5～3．0kg，雌雄不拘，由新疆医科大学动物实验中心提供，动物质量属于一级标准。随机分为3组，对照组（non．pace，n=8），起搏＋钾通道阻断剂组（TEA、4-AP和BaCl2，每组n=8），起搏＋胺碘酮组（n=8）。RAP24h后，迅速开胸取心脏，剪下右心耳，随即切片（厚度500um），将标本固定在MEA记录系统。分别记录正常对照组，给予阻断剂及胺碘酮组MEA形态和fAPD改变。结果对照组右心耳fAPD为（188．33±18．29）ms，起搏组fAPD为（173．91±6．83）ms。给予20mmol／LTEA阻断Ix，fAPD由（176．67±8．66）ms延长到（196．11±10．76）ms（P=0．012），5mmol／L4-AP阻断Ito，fAPD由（169．38±10．56）ms延长到（188．56±13．82）ms（P=0．005）。10～mol／L BaCl2阻断IKir，fAPD由（182．22±12．87）ms延长到（191．11±13．09）ms（P=0．039）。2×10-6mmol／L胺碘酮使fAPD由（167．38±13．67）ms延长到（185．00±15．14）ms（P=0．002）。结论应用MEA技术可真实客观反映心肌组织切片的电生理特性。24hRAP后，以阻断Ito，IKur IK1和IKs为主的钾通道阻断剂延长右心耳fAPD。胺碘酮可有效逆转或阻止右心耳fAPD的延长。

钾、氯离子通道阻断剂对staurosporine诱导心肌细胞凋亡的调节作用

目的 :探讨钾、氯离子通道在心肌细胞凋亡过程中的调节作用与Caspase 3激活的关系 .方法 :在staurosporine诱导原代培养鼠心肌细胞凋亡模型中 ,观察钾、氯离子通道阻断剂 (Quinine ,BaCl2 ,DIDS和NPPB)对心肌细胞的存活率、DNA片断、Caspase 3活性及细胞膜完整性的影响 .实验分为阴性对照组 (无药物处理 )、阳性对照组 (staurosporine处理 )与药物干预组 (staurosporine加离子通道阻断剂 ) .结果 :①钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制staurosporine诱导的心肌细胞凋亡 .与阳性对照组 (2 9.8% )相比细胞的成活率在奎宁、氯化钡、DIDS和NPPB组分别是 5 9.7% ,4 7.2 % ,5 8.6 %和 6 0 .7% ,均有显著的增加 (P <0 .0 1 ) .相对应的DNA片断电泳显示 :Qui nine,BaCl2 ,DIDS和NPPB组均有显著的抑制DNA的降解 .②钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制Caspase 3活性的激活 ,与阳性对照组 (6 0 0 .4 % )相比细胞的Caspase 3活性在Quinine,BaCl2 ,DIDS和NPPB组分别是 1 84 .2 % ,2 1 6 .3% ,1 75 .6 %和2 2 1 .4 % ,均有显著的抑制 (P <0 .0 1 ) .③细胞膜完整性实验乳酸脱氢酶水平显示各组中细胞的坏死性死亡小于 1 0 % .结论 :在staurosporine诱导的心肌细胞凋亡模型中 ,钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制Caspase 3?

钾离子通道阻断剂对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响

化疗是人胶质瘤手术切除之后的诸多治疗环节中重要的一环,但是至今疗效难以令人满意。钾离子通道是广泛存在的膜通道蛋白,有实验证实其阻断剂可以抑制肿瘤细胞的增殖,对凋亡和细胞周期等亦产生影响。本文对钾离子通道及其阻断剂对肿瘤细胞的影响等做了重点阐述。

Kv1.3钾离子通道阻断剂抑制NLRP3炎症小体活化的研究

NLRP3炎症小体在炎症反应中发挥重要作用.为了探讨Kv1.3钾离子通道阻断剂对NLRP3炎症小体活化的抑制作用.通过体外培养THP-1细胞,佛波酯诱导其分化为巨噬细胞,LPS联合ATP刺激,试验组提前加入Kv1.3通道阻断剂ADWX-1和不同浓度的PAP-1干预,ELISA检测上清中炎性细胞因子IL-1β分泌,Western blotting检测IL-1β、caspase-1蛋白表达,免疫荧光检测ASC的表达和斑点的形成等试验进行研究.结果显示:浓度为100 pmol/L ADWX-1和不同浓度的Kv1.3通道阻断剂PAP-1(浓度分别为100 nmol/L,1μmol/L,10μmol/L)能够浓度梯度依赖的抑制THP-1细胞上清中细胞炎性因子IL-1β产生.浓度为100 pmol/L ADWX-1处理能够抑制IL-1β成熟片段p17的分泌,浓度为10μmol/L PAP-1处理能够抑制caspase-1切割片段p10的生成.THP-1细胞中LPS,ATP双刺激能够形成ASC斑点,浓度为10μmol/L PAP-1处理能够抑制ASC的表达和斑点的形成.

阻断钙激活钾通道对宫颈癌细胞增殖及钾通道电流的影响

目的观察钙激活性中电导钾离子通道(IKCa1)被阻断后对宫颈癌He La细胞增殖及IKCa1膜电位的影响。方法分别用IKCa1阻断剂克霉唑和RNA干扰法阻断He La细胞的IKCa1后,用RT-PCR技术检测He La细胞的IKCal mRNA,MTT法检测细胞OD值,膜片钳技术检测细胞IKCa1电流。结果克霉唑阻断IKCa1后,He La细胞的IKCa1 mRNA表达降低、IKCa1电流减弱、细胞OD值下降,与对照组相比,P均<0.05。RNA干扰法阻断IKCa1后,Hela细胞的IKCa1 mRNA表达下降、IKCa1电流减弱、细胞OD值降低,与空白对照组和阴性转染组相比,P均<0.05。结论阻断IKCa1能有效抑制He La细胞增殖,下调细胞IKCa1 mRNA的表达,降低其IKCa1电流;IKCa1通过调控He La细胞膜电位而影响其信号传递,调控He La细胞的增殖。

大黄素对豚鼠结肠带平滑肌细胞钾通道活性的影响

用检测平滑肌细胞电活动和张力技术，研究了大黄素对豚鼠结肠带平滑肌细胞电和收缩活动的影响并与ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ，ｇｌｙｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ，四乙胺及ＢａＣｌ２的作用进行比较。结果表明，大黄素加强平滑肌细胞电和收缩活动，作用效果与剂量有关；大黄素与ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ的作用相互抑制。其促进平滑肌细胞电和收缩活动的作用与ｇｌｙｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ相似，而与四乙胺和ＢａＣｌ２有明显区别。提示大黄素的作用机制与抑制细胞膜ＫＡＴＰ等钾通道的活性相关。

少棘蜈蚣钾通道毒素多肽KTX-Ssm175的表达、纯化与鉴定

采用Illumina II代转录组测序技术构建了湖北少棘蜈蚣毒腺转录组数据库,从中筛选到一个全新的毒素多肽编码基因KTX-Ssm175.经序列比对显示KTX-Ssm175多肽与κ-SLPTX-Ssm1a高度同源,提示KTX-Ssm175多肽为一种新的电压门控性钾通道阻断剂.采用基因工程技术构建了p GEX-4T-1-KTX-Ssm175原核表达载体,通过GST融合蛋白表达法对KTX-Ssm175多肽在大肠杆菌Rosetta中进行诱导表达和分离纯化.MALDI-TOF-MS质谱测定显示纯化的KTX-Ssm175多肽分子量与理论值相吻合,说明成功实现了KTX-Ssm175多肽的基因工程制备,为深入研究其结构与功能提供了物质基础.

15-HETE对缺氧兔肺动脉平滑肌钾离子通道的影响(英文)

用肺动脉环和全细胞膜片钳技术研究15-羟化二十烷四烯酸(15-HETE)对缺氧兔肺动脉平滑肌钾离子通道的影响。新出生的幼兔分两组,一组放入吸氧分数为0.12 的低氧舱内;另一组保持正常氧环境。9 d 后, 称重、取肺动脉进行细胞培养并制作肺动脉环。分别加入4-氨基吡啶(4-aminopyridione, 4-AP)、四乙胺(tetraethylammonium, TEA)、glyburide(GLYB)三种特异性钾离子通道阻断剂, 观察15-HETE 对兔肺动脉平滑肌钾离子通道的作用变化,同时采用全细胞膜片钳测定钾电流。结果显示: 5 mmol/L 4-AP 阻断KV通道后可以抑制15-HETE 诱导的缺氧兔肺动脉收缩;TEA和GLYB 分别阻断大电导型钙激活钾通道(BKCa)和KATP通道后并不影响15-HETE诱导的缺氧兔肺动脉收缩; 15-HETE可降低兔肺动脉平滑肌细胞钾电流幅度。上述结果提示: 缺氧兔肺动脉中,15-HETE阻断电压依赖钾通道(KV通道), 引起膜去极化, 可能是缺氧性肺血管收缩的机制之一。

脑血管细胞膜钾通道开放是脑血管扩张的重要机制

脑血管细胞膜钾通道存在着人ATP敏感钾通道、钙激活钾通道、延迟整流钾通道、内向整流钾通道等多种亚型。钾通道开放是一些内源性扩血管物质及某些药物扩血管的重要机制,在慢性高血压、蛛网膜下腔出血、动脉粥样硬化等病理情况下,脑血管细胞膜钾通道发生改变,某些药物可通过开放或阻断钾通道,调节脑血管及脑血流量。

钾离子通道在抑郁症中的作用

抑郁症是一种常见的心理性疾病,随着社会压力的日益加大,发病率逐渐升高。以往研究证实,抑郁症主要与脑内神经递质(5-羟色胺,去甲肾上腺素等)系统紊乱有关,目前又发现脑内电压依赖性钾离子通道以及双孔钾离子通道也与该疾病有着紧密关系。该文综述了钾离子通道与抑郁症的相关研究进展,为新型抗抑郁药物的研发提出了新的思路。

III类抗心律失常药RP58866对豚鼠及犬内向整流及瞬时外向钾电流的作用

目的：研究ＩＩＩ类抗心律失常药ＲＰ５８８６６ 对ＩＫ１ ，瞬时外向钾电流（Ｉｔｏ） 的作用。方法：用豚鼠和犬离体心肌细胞及全细胞电压钳技术。结果：在－ １００ ｍ Ｖ 时，ＲＰ５８８６６ 以浓度依赖方式明显减少了豚鼠心室肌细胞ＩＫ１ ，其ＩＣ５０ 为（３－４±０－８） μｍｏｌ·Ｌ－ １ 。在犬心室肌细胞，ＲＰ５８８６６ 可明显抑制Ｉｔｏ（ 在１００ μｍｏｌ·Ｌ－ １ 时减少８７％ ±２－１％ ），其ＩＣ５０ 为（２－３±０－５） μｍｏｌ·Ｌ－ １ 。结论：ＲＰ５８８６６ 对心肌细胞的ＩＫ１ 和Ｉｔｏ 均有抑制作用。

黔产吴茱萸水煎剂对家兔离体胸主动脉作用及机制的研究

目的研究黔产吴茱萸水煎剂对家兔离体胸主动脉平滑肌的作用及其机制。方法采用离体血管环灌流方法,观察吴茱萸水煎剂累积浓度对家兔离体胸主动脉平滑肌张力的影响,并探讨用α受体阻断剂酚妥拉明、钾离子通道阻断剂四乙胺、四氨基吡啶孵育离体胸主动脉后,吴茱萸水煎剂对去除内皮及内皮完整的家兔胸主动脉环张力的影响。结果①吴茱萸水煎剂可使家兔离体胸主动脉环张力呈浓度依赖性增加,且内皮完整的胸主动脉环收缩作用明显强于去内皮组。②酚妥拉明阻断离体胸主动脉平滑肌α受体后,吴茱萸水煎剂不再使去内皮及内皮完整的胸主动脉环张力增加。③四氨基吡啶与吴苵萸收缩家兔离体胸主动脉平滑肌的作用无关,四乙胺对吴茱萸水煎剂的缩血管具有协同作用。结论吴茱萸水煎剂对家兔离体胸主动脉的收缩作用是内皮依赖性的,其机制与α受体有关。

白芷水煎剂对大鼠离体肺动脉环的作用及其机制

目的用组织浴槽血管环技术研究白芷水煎剂对大鼠离体肺动脉的作用及其机制。方法游离健康SD大鼠的肺内肺动脉，直径约为0．5～1．0mm，剪成长约3mm的血管环，观察不同剂量的白芷水煎剂对大鼠离体肺动脉的作用，并探讨去除血管内皮、钾离子通道阻断剂、L-型钙离子通道阻断剂以及无钙Krebs液对白芷水煎剂对大鼠离体肺动脉作用的影响。结果①白芷水煎剂以浓度（0—1．0g/mL）依赖的方式收缩大鼠离体肺动脉环，但去除肺动脉环的内皮，白芷水煎剂收缩大鼠离体肺动脉环曲线明显右移；②10^-4mol／L4-氨基吡啶（4-amonopyridione，4-AP）可明显降低白芷水煎剂收缩离体肺动脉环的作用；③10^-2mol／L四乙胺（tetraethylammonium，TEA）和10^-6mol／L格列本脲（glyburide，GLYB）对白芷水煎剂收缩大鼠离体肺动脉环的作用无明显影响；④10^-6mol／L维拉帕米（verapamil）和无钙Kreb’s液显著降低白芷水煎剂引起的离体肺动脉环的收缩。结论白芷水煎剂可浓度依赖性收缩大鼠离体肺动脉环，其机制与血管内皮、Kv通道、细胞外液钙离子和L-型钙离子通道有关。

心肌细胞上的KCNK通道

KCNK通道是一类新型的钾离子通道,具有4个跨膜片断和2个膜孔区。它广泛分布于兴奋和非兴奋组织中,在心肌细胞上主要为TWIK、TASK和TREK。此类通道对经典的钾通道阻断剂并不敏感,机械刺激、不饱和脂肪酸、pH、吸入性麻醉剂等因素则可影响其活动。KCNK通道可能作为背景钾通道,在调节心肌细胞动作电位平台期的时程、幅度及静息电位维持等方面有重要作用。

15-酮基二十碳四烯酸对大鼠离体肺动脉环的作用

目的 用组织浴槽血管环技术研究15-酮基二十碳四烯酸（15-KETE）收缩大鼠离体肺动脉的作用及其离子通道机制。方法 16只健康的Wistar大鼠，体重为（220±20）g，随机分为两组（n=8）；正常组置于正常环境中饲养（FiO2=21％），缺氧组置于缺氧的培养箱中饲养（FiO2=10％），连续饲养9d后处死，游离直径为0．5～1、0mm肺内肺动脉（PA）剪成3mm长的血管环，观察钾离子通道阻断剂、L-型钙离子通道阻断剂和无钙离子Krebs液对15-KETE诱导的正常和缺氧大鼠肺动脉环收缩的影响。结果①15-KETE以浓度（10-～10^-6mol·L^-1）依赖的方式收缩大鼠离体肺动脉环；②2mmol·L^-14-氨基吡啶（4-aminopyridione，4-AP）可明显降低15．KETE收缩大鼠离体肺动脉环的作用，正常组和缺氧组的结果相似；③10mmol·L^-1四乙胺（tetraeth—ylammonium，TEA）、10～mol·L^-1格列本脲（glyburide，GLYB）对15-KETE收缩大鼠离体肺动脉环的作用无明显影响；④10～mol·L^-1硝苯地平（nifedipine）和无钙Krebs液对10～mol·L^-1 15-KETE引起的离体肺动脉环收缩具有显著抑制作用。结论 15-KETE收缩离体肺动脉环的作用依赖于KV通道、细胞外液钙离子和L-型钙离子通道。