枸杞多糖调节Nrf2/HO-1/GPX4铁死亡途径对妊娠期糖尿病大鼠胰岛素抵抗的改善作用

目的 探讨枸杞多糖调节Nrf2/HO-1/GPX4铁死亡途径对妊娠期糖尿病(GDM)大鼠胰岛素抵抗的改善作用。方法 将SD成年大鼠雌雄合笼得到孕鼠,建立GDM模型,随机分为模型组,枸杞多糖低、中、高剂量组,ferrostatin-1组,每组8只,另设对照组,腹腔注射等剂量柠檬酸缓冲液。末次给药24 h后,检测大鼠FBG、FINS、IRI水平。再次复制GDM模型32只,随机分为模型组、枸杞多糖组、ML385组、枸杞多糖+ML385组,另设对照组。药物分组干预后,检测大鼠FBG、FINS、IRI、TG、TC水平,妊娠第19天检测母体及胎鼠体质量以及血清IL-18、IL-6、SOD、MDA水平,子宫内膜组织ACSL4、PTGS2、Nrf2/HO-1/GPX4通路蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠FBG、FINS、IRI,母体及胎鼠体质量,血清TG、TC、IL-18、IL-6、MDA水平,子宫内膜组织ACSL4、PTGS2蛋白表达升高(P<0.05),血清SOD水平、子宫内膜组织Nrf2、HO-1、GPX4蛋白表达降低(P<0.05);与枸杞多糖+ML385组比较,枸杞多糖组大鼠FBG、FINS、IRI,母体及胎鼠体质量,血清TG、TC、IL-18、IL-6、MDA水平,子宫内膜组织ACSL4、PTGS2蛋白表达降低(P<0.05),血清SOD、子宫内膜组织Nrf2、HO-1、GPX4蛋白表达升高(P<0.05)。结论 枸杞多糖可通过促进Nrf2/HO-1/GPX4信号传导,抑制铁死亡途径,降低GDM大鼠血糖血脂水平,减弱其胰岛素抵抗。

中药提取物抑制铁死亡途径对糖尿病性勃起功能障碍的神经保护作用机制研究进展

糖尿病性勃起功能障碍(DMED)是伴发于血糖控制不佳的性功能障碍疾病,是临床最常见的器质性ED,而神经系统的病变是其发生过程中最主要的一个病理机制。铁死亡途径是一种新的自噬依赖性细胞死亡形式,参与了多种疾病的发生和发展,且与神经细胞的死亡有密切相关性。研究证实铁死亡途径参与了DMED的神经调节机制,可作为DMED治疗的重要依据。有研究表明部分中药提取物可以抑制神经细胞的铁死亡途径,本文从中药提取物通过抑制神经细胞的铁死亡途径,对DMED的神经保护机制进行总结,为今后临床治疗该病奠定理论基础。

小檗碱通过铁死亡途径的对RSV感染小鼠病毒载量及肺部炎症反应的调节作用

为了基于核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2 related factor 2, Nrf2)-谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione peroxidase 4,Gpx4)通路介导的铁死亡途径,探讨小檗碱对呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)诱导的肺炎小鼠模型体内病毒载量和肺部炎症反应的影响及其作用机制,本研究利用雄性BALB/c幼龄小鼠建立RSV诱导的肺炎动物模型,并随机分为空白组、模型组、低浓度小檗碱组(30mg/kg)、中浓度小檗碱组(45mg/kg)、高浓度小檗碱组(60mg/kg)和阳性药(利巴韦林)组,每组10只。除空白组外,均采用RSV滴鼻的方法制备肺炎小鼠模型,造模后各组分别予相应的药物干预,空白组和模型组给予生理盐水。给药4d后处死小鼠,摘取肺组织并称重计算肺指数;RT-PCR检测肺组织核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione Peroxidase 4,Gpx4)和RSV-F的mRNA表达水平;Western blot法检测肺组织Nrf2和Gpx4蛋白表达水平;ELISA法检测肺泡灌洗液中白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;HE染色观察小鼠肺组织病理变化。实验数据显示,与空白组相比,模型组肺指数升高,肺部Nrf2、Gpx4的mRNA表达水平降低、RSV-F的mRNA表达水平升高,肺部Nrf2和Gpx4的蛋白表达水平降低,肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α的含量升高,数据均具有统计学意义(P<0.05),且模型组小鼠肺组织明显充血,并伴有大量炎症性细胞浸润;与模型组相比,低、中、高浓度小檗碱组肺指数均下降,肺部Nrf2、Gpx4的mRNA表达水平均降低、肺部Nrf2和Gpx4的蛋白表达水平均降低,肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α的含量均升高,且小鼠肺组织病理损伤得到不同程度改善;与阳性药组相比,高浓度小檗碱组肺指数、肺部Nrf2和Gpx4的mRNA表达水平及蛋白表达水平、肺泡灌洗液中IL-6和TNF-α的含量都无显著差异。根据以上实验结果,推测小檗碱可以通过铁死亡途径发挥抗RSV病毒和减轻肺部炎症的作用,其主要作用机制涉及到上调Nrf2和Gpx4基因的表达水平,以及下调IL-6、TNF-α等炎症因子的表达水平,降低肺部RSV病毒载量。

甜橙黄酮通过抑制铁死亡途径改善溃疡性结肠炎小鼠肠道黏膜功能障碍的研究

目的研究甜橙黄酮通过抑制铁死亡途径对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道黏膜功能障碍的影响。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、阳性组和低、中、高剂量实验组。除对照组外,其余各组建立UC模型。在造模的同时,对照组和模型组均给予灌胃等量0.9%NaCl,低、中、高剂量实验组灌胃10、20、40mg·kg^(-1)甜橙黄酮,阳性组给予灌胃50mg·kg^(-1)美沙拉嗪,每天1次,灌胃14d。观察小鼠一般情况、结肠长度、肠质量指数、疾病活动指数(DAI)、黏膜损伤指数(CMDI)评分,以试剂盒法检测D-乳酸(D-LA)、二胺氧化酶(DAO)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,以蛋白质印迹(Western blot)法检测紧密连接蛋白闭合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、非糖基化的xCT(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白的表达水平。结果对照组、模型组和低、中、高剂量实验组血清DAO分别为(9.23±1.28)、(34.61±3.95)、(29.36±3.34)、(23.41±2.74)和(16.75±2.57)U·mL^(-1),血清D-LA分别为(7.04±1.71)、(18.25±1.05)、(15.14±1.56)、(11.43±1.70)和(8.93±1.56)ng·mL^(-1),Occludin蛋白相对表达水平分别为0.89±0.08、0.25±0.05、0.37±0.03、0.48±0.05和0.66±0.07,Claudin-1蛋白相对表达水平分别为0.83±0.09、0.33±0.05、0.47±0.05、0.59±0.06和0.72±0.07,GPX4蛋白相对表达水平分别为0.85±0.06、0.23±0.05、0.36±0.04、0.53±0.06和0.72±0.08,SLC7A11蛋白相对表达水平分别为0.95±0.06、0.30±0.04、0.42±0.05、0.65±0.05和0.84±0.05。对照组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05);模型组的上述指标与低、中、高剂量实验组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论甜橙黄酮可抑制铁死亡途径,进而改善UC小鼠肠道黏膜功能障碍。

铁死亡基因风险评分和PET代谢参数对晚期非小细胞肺癌预后的影响

目的:探讨联合循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)铁死亡相关基因构建的风险评分与正电子发射计算机断层显像/电子计算机X射线断层扫描技术(positron emission tomography/computed tomography,PET/CT)评估的肿瘤代谢负荷结合用于晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)预后分层的临床意义。方法:选择2019年1月至2022年1月就诊于唐山市人民医院(唐山市肿瘤医院)的101例Ⅲ~Ⅳ期NSCLC患者,通过PET/CT定量评估代谢肿瘤体积(metabolic tumor volume,MTV)和糖酵解的总病变(total lesion glycolysis,TLG),分离患者外周血中CTCs并通过聚合酶链式反应(PCR)检测铁死亡相关基因(ALOX5、TFRC、PHKG2、FADS2、NOX1)表达,构建风险评分。结果:根据风险评分中位数,将患者分为风险评分低组(评分≤0.70,n=51)和风险评分高组(评分>0.70,n=50)。与风险评分低的患者相比,风险评分高的患者表现出明显更高的MTV和TLG水平(P<0.05)。风险评分和MTV、TLG之间存在显著的正相关(r=0.618、0.462,均P<0.001)。低MTV和低风险评分的患者的中位无进展生存期(progression-free survival,PFS)和中位总生存期(overall survival,OS)高于低MTV和高风险评分的患者(P<0.001)。低TLG和低风险评分患者的中位PFS和中位OS高于低TLG和高风险评分的患者(P<0.001)。多变量Cox回归分析显示,与低风险评分组相比,高风险评分组OS的风险比(HR)显著增加(HR=3.22,P=0.001)。在多变量分析中调整MTV和TLG后,NSCLC患者中高风险评分的HR相似(P<0.01)。结论:低风险评分和低MTV或低TLG显示出比低风险评分和高MTV或高TLG更好的预后。

雷夫尼特诱导非小细胞肺癌铁死亡

目的探究雷夫尼特诱导非小细胞肺癌(NSCLC)铁死亡的机制。方法将A549细胞分为4组:对照组及7.5、15、30μmol/L雷夫尼特组。雷夫尼特处理组采用相应浓度的雷夫尼特处理24 h,对照组采用DMSO处理。采用RNA测序法分析雷夫尼特处理后A549细胞基因变化,KEGG途径富集分析筛选雷夫尼特抑制NSCLC的可能通路。采用实时定量PCR和Western blot在mRNA和蛋白质水平验证雷夫尼特处理后铁死亡途径相关蛋白的变化。采用试剂盒检测雷夫尼特处理后细胞氧化应激水平的变化。结果KEGG途径富集分析表明,失调基因主要参与补体和凝血级联、抗坏血酸和醛糖代谢、铁死亡等途径,其中铁死亡途径相关基因有23个。雷夫尼特处理后,GPX4、SLC7A11、SLC40A1基因mRNA表达较对照组显著下调(P<0.05),ACSL4、HOMX1基因mRNA表达显著上调(P<0.05)。此外,GPX4、SLC40A1、FTH1蛋白表达量显著降低(P<0.05),ACSL4蛋白表达量显著上升(P<0.05)。氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)活性和还原型谷胱甘肽(GSH)含量较对照组显著下降(P<0.05),丙二醛(MDA)含量显著增高(P<0.05)。结论雷夫尼特可能通过铁死亡途径参与调节NSCLC。

四君子汤通过miR-375/xCT/GPX4途径改善ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质沉积的分子机制

目的观察四君子汤通过调节铁死亡途径对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质沉积的影响。方法ApoE^(-/-)小鼠20只饲喂高脂饲料8周,随机分为模型组和四君子汤组,四君子组给予四君子汤[130mg/(kg·d)]灌胃,连续4周;另选10只C57BL/6J小鼠作为正常组;全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量;HE和油红O染色观察肝脏组织病理变化;ELISA法检测Fe^(2+)及GSH水平;Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测xCT(SLC7A11)及GPX4蛋白表达;RT-qPCR法检测miR-375﹑xCT(SLC7A11)及GPX4 mRNA表达。结果四君子汤能降低动脉粥样硬化小鼠血清TG、TC和LDL-C含量,提升HDL-C含量;抑制Fe^(2+)水平,提高GSH水平;铁死亡相关蛋白检测结果显示四君子汤可以使动脉粥样硬化小鼠GPX4、xCT/SLC7A11蛋白水平显著升高;RT-qPCR结果显示四君子汤组小鼠肝脏xCT、GPX4 mRNA表达上升(P<0.01,P<0.05),miR-375 mRNA表达显著下降(P<0.01)。结论四君子汤能够改善ApoE^(-/-)小鼠肝脏脂质沉积,可能与干预肝细胞铁死亡相关蛋白作用有关。