银杏黄酮苷元减轻多柔比星心脏毒性的作用机制

目的探究银杏黄酮苷元(GA)减轻多柔比星(DOX)心脏毒性的潜在作用机制。方法将雄性ICR小鼠随机分为对照组(CON组)、模型组(DOX组)和GA+DOX组(GDOX组),每组12只。DOX组小鼠隔天尾静脉注射DOX药液3mg/kg,GDOX组小鼠每天灌胃GA混悬液100mg/kg+隔天尾静脉注射DOX药液3mg/kg,连续15d。给药结束后,检测各组小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平。基于代谢组学方法,采用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱串联质谱技术,在主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)的基础上,以变量重要性投影值≥1、峰面积差异倍数>1且P<0.05为标准筛选差异代谢物(DEMs),并基于HMDB、PubChem等数据库进行生物学分析。结果与CON组比较,DOX组小鼠血清中AST、CK、CK-MB、LDH水平均显著升高(P<0.05);与DOX组比较,GDOX组小鼠血清中上述指标(CK-MB除外)水平均显著降低(P<0.05)。PCA、OPLS-DA结果均显示,CON组、DOX组、GDOX组小鼠心脏组织样品均能完全分离。经数据库匹配后,鉴定出37个共有DEMs,其中DOX组显著上调而GDOX组显著下调的DEMs有17个,DOX组显著下调而GDOX组显著上调的DEMs有8个;涉及通路包括不饱和脂肪酸的生物合成、花生四烯酸代谢、亚油酸代谢、牛磺酸和次牛磺酸代谢,关键代谢物包括二十二碳六烯酸、花生四烯酸、磷脂酰胆碱(16∶0/18∶3)和牛磺酸。结论GA可能通过作用于二十二碳六烯酸、花生四烯酸等关键代谢物来调节不饱和脂肪酸的生物合成、花生四烯酸代谢等代谢途径,进而减轻DOX的心脏毒性。

基于转录组学和蛋白质组学研究银杏黄酮苷元减轻多柔比星心脏毒性的作用机制

目的基于转录组学和蛋白质组学研究银杏黄酮苷元(GA)降低多柔比星(DOX)心脏毒性的作用机制。方法将36只小鼠随机分为对照组(CON组,隔天尾静脉注射等体积生理盐水+每天灌胃等体积生理盐水)、DOX组(隔天尾静脉注射3 mg/kg DOX)和GDOX组(每天灌胃100 mg/kg GA+隔天尾静脉注射3 mg/kg DOX),每组12只,连续给药/生理盐水15 d。收集小鼠心脏组织进行RNA-Seq转录组学测序和4D-Label-free定量蛋白质组学分析,筛选差异表达基因和蛋白并对其进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。测定小鼠心脏组织中爱帕琳肽(Apelin)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)的mRNA和蛋白表达水平及PI3K、Akt蛋白的磷酸化水平进行验证。将H9c2心肌细胞分为对照组(CON组)、DOX组(2μmol/L)和GDOX组(2μg/mL GA+2μmol/L DOX),测定细胞存活率及细胞中糖酵解关键物质水平。结果筛选得到6条转录组学与蛋白质组学的共同通路,包括Apelin信号通路、PI3K-Akt信号通路、胰岛素抵抗等;其中以Apelin、PI3K-Akt信号通路中富集到的基因数目最多。靶点验证实验结果显示,与CON组比较,DOX组小鼠心脏组织中Apelin、PI3K和Akt的mRNA相对表达量和蛋白表达水平,以及PI3K、Akt蛋白的磷酸化水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);与DOX组比较,GDOX组小鼠心脏组织中Apelin、PI3K和Akt的mRNA相对表达量及PI3K、Akt蛋白的磷酸化水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。细胞实验表明,与CON组比较,DOX组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞中葡萄糖相对摄取量以及丙酮酸、乳酸的相对生成量均显著增加(P<0.05),ATP相对生成量显著减少(P<0.05);与DOX组比较,GDOX组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞中丙酮酸、乳酸的相对生成量均显著减少(P<0.05)。结论GA可能是通过上调心脏组织中Apelin、PI3K和Akt的mRNA及其蛋白表达,调控糖酵解过程,进而改善DOX引起的心脏毒性作用。

银杏黄酮苷与复方丹参片对冠心病心绞痛患者心电图、心功能、血液流变学的影响对比分析

目的:对比分析银杏黄酮苷与复方丹参片对冠心病心绞痛患者心电图、心功能、血液流变学的影响。方法:对我院在2015年1月至2016年12月期间新疆医科大学第六附属医院收治的冠心病心绞痛患者88例的临床治疗进行回顾性分析。采用随机抽样的方式将患者分成观察组与对照组,每组44例。对照组患者予以复方丹参片治疗,观察组患者予以银杏黄酮苷治疗,2组患者共治疗1个月,观察2组患者治疗前后心电图、心功能、血液流变学改善情况以及有无发生不良反应情况。结果:治疗后观察组患者一般症状改善总有效率、心绞痛疗效、心电图疗效均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前2组患者心功能各指标比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后心功能各指标均有改善情况,但观察组患者改善情况明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前2组患者全血低切黏度、全血高切黏度、血浆高切黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后2组患者全血低切黏度、全血高切黏度、血浆高切黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数值均有改善,但观察组患者改善程度明显大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2组患者治疗期间未发生明显不适情况。结论:银杏黄酮苷治疗冠心病心绞痛的临床疗效明显优于复方丹参片,并且安全性高,更适合临床应用。

银杏黄酮苷元的平衡溶解度和表观油水分配系数的测定

目的测定银杏黄酮苷元中3种黄酮苷元的平衡溶解度和表观油水分配系数。方法采用饱和溶液法和摇瓶法,分别测定银杏黄酮苷元的平衡溶解度和表观油水分配系数,采用高效液相色谱法测定样品溶液的浓度。结果 25℃时,3种黄酮苷元的平衡溶解度均较小,其中槲皮素和山柰素在水中的平衡溶解度均为最大值,三者平衡溶解度分别为17.16,32.48和1.13μg.ml-1,槲皮素和山柰素的平衡溶解度受溶剂pH影响较大,而异鼠李素的平衡溶解度受溶剂pH影响较小;3种黄酮苷元在不同的pH溶剂中各自的Log P差别不大,pH对3种黄酮苷元的油水分配系数影响不显著,其中槲皮素和山柰素的油水分配系数均较大。结论银杏黄酮苷元为典型的疏水性药物。

大孔树脂分离纯化银杏黄酮苷元的研究

以银杏提取物的酶水解液为实验材料,研究大孔吸附树脂分离纯化其中的银杏黄酮苷元的工艺。通过静态吸附-解吸和吸附动力学实验,从3种大孔吸附树脂中筛选出非极性YWD07a为最适合分离纯化银杏黄酮苷元的树脂。YWD07a树脂吸附分离银杏黄酮苷元的最佳工艺条件为:吸附:银杏黄酮苷元的浓度3.26 mg/mL,pH 5.0,流速2 BV/h;解吸:洗脱体积6BV,流速3.0 BV/h,乙醇浓度70%。在最优条件下得到的银杏黄酮苷元产品中银杏黄酮苷元含量由18.5%提高到80.5%,回收率为73.6%。

银杏黄酮苷元对氧化型低密度脂蛋白诱导的人主动脉内皮细胞氧化损伤的影响

目的观察银杏黄酮苷元(Ginkgo flavone aglycone,GA)对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-den-sity lipoprotein,ox-LDL)诱导的人主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cells,HAECs)氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法体外培养HAECs,分为6组,即空白对照组、ox-LDL组、VitE组以及GA30、60、90mg/L组。除空白对照组外,其余5组均加入ox-LDL150mg/L复制氧化损伤模型;GA30、60、90mg/L组分别给予相应剂量GA干预;VitE组给予VitE200μmol/L干预。采用MTT法检测细胞存活率;CM-H2DCFDA荧光探针测定细胞内活性氧(ROS)含量;酶联免疫吸附法检测NADPH氧化酶含量;硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平;Griess reagent法测定一氧化氮(NO)含量;黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)的含量。结果与空白对照组(100.00%)比较,ox-LDL组(70.68%)细胞存活率明显降低(P<0.05);VitE组、GA30mg/L组、GA60mg/L组细胞存活率分别为88.95%、83.25%、94.93%,均明显高于ox-LDL组(P<0.05),以60mg/L GA作用更强。与空白对照组比较,ox-LDL组细胞内ROS、MDA及NADPH氧化酶水平增加,NO含量及SOD活性降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与ox-LDL组比较,GA30mg/L组、GA60mg/L组及VitE组细胞内ROS、MDA及NADPH氧化酶水平降低,NO含量及SOD活性增加,差异均有统计学意义(P<0.05),以60mg/L GA作用更强。结论 GA可明显抑制ox-LDL诱导的ROS合成,降低MDA水平,升高NO。其作用机制可能与SOD活性增加及NADPH氧化酶活性降低有关。

银杏黄酮苷治疗早产儿缺氧缺血性脑病

目的 观察银杏黄酮苷对治疗早产儿缺氧缺血性脑病（HIE）的疗效、安全性及心肌酶学的影响。方法 将符合诊断标准HIE患儿59例，随机分为治疗组30例，对照组29例。治疗组予常规治疗＋10％葡萄糖注射液30mL＋银杏黄酮苷6mg／kg静滴。1疗程／7d，用2～3个疗程。观察新生儿行为神经评分（NBNA）、脑CT及血清酶变化。结果 治疗组疗效、治疗后心肌酶及NBNA改善明显优于对照组。结论 银杏黄酮苷治疗早产儿HIE疗效好，无不良反应。

银杏黄酮苷元对小鼠脑缺血模型和鹌鹑动脉粥样硬化模型的影响

目的研究银杏黄酮苷元(GFA)抗脑缺血、动脉粥样硬化形成及降血脂的药理学活性。方法通过夹闭小鼠双侧颈总动脉复制脑缺血模型和高脂饲料饲喂鹌鹑复制动脉粥样硬化模型,检测GFA对小鼠喘息时间、脑组织含水量、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)含量变化以及鹌鹑动脉粥样硬化进程中脂斑块形成和血脂[总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)]水平变化的影响。结果 GFA可延长小鼠夹闭双侧颈总动脉后喘息时间,降低脑含水量,减少MDA和NO的生成,提高SOD的活力(P<0.05,P<0.01);并且200 mg·kg-1 GFA预防组和中剂量组可降低动脉粥样硬化脂斑块发生率(P<0.05,P<0.01),100 mg·kg-1 GFA组TC、LDL含量降低(P<0.05)。结论 GFA对脑缺血和动脉粥样硬化具有较好的防治作用,为GFA防治心脑血管疾病提供了实验数据。

银杏黄酮苷元干预兔颈总动脉损伤后内膜增生及血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1的表达

背景:银杏叶提取物中的黄酮苷元具有较强的抗氧化活性,课题组前期实验证实可抑制氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1。目的:进一步探讨银杏黄酮苷元对兔颈总动脉内皮损伤后内膜增生和血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1表达的影响。方法:将雄性新西兰大白兔随机分为对照组、假手术组、模型组和治疗组。对照组予普通饲料,其余各组予高脂饮食,假手术组仅作颈外动脉结扎,模型组和治疗组均球囊损伤右颈总动脉,治疗组损伤后用银杏黄酮苷元灌胃。4周后检测各组血脂水平,观察各组右颈总动脉形态,用免疫组织化学法和RT-PCR检测血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达。结果与结论:模型组术后4周内膜增生明显,有粥样斑块形成,血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1表达明显增加(P<0.05)。治疗组银杏黄酮苷元灌胃4周后内膜增生较轻,内膜面积,血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1阳性细胞数和其基因表达水平均低于模型组(P<0.05),但血脂与模型组比较无差异。提示银杏黄酮苷元可减轻新生内膜增生及动脉粥样硬化病粥样斑块的形成,这种作用可能与抑制兔颈总动脉内皮损伤后血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1的表达有关。

银杏黄酮苷对实验性糖尿病大鼠肾脏保护作用的研究

目的:探讨银杏黄酮苷对糖尿病大鼠肾脏保护作用及其机制。方法:选择雄性SD大鼠24只,随机分为三 组,每组8只,即正常对照组(N组),糖尿病组(DM组),银杏黄酮苷治疗组(DG组)。DM、DG组腹腔注射链脲佐菌素 (STZ)制模成功后,DG组给予银杏黄酮苷灌胃,10周后观察各组血糖、血浆内皮素-1(ET-1)、24h尿白蛋白排泄率、肾 重等指标。用免疫组化方法观察肾脏基质金属蛋白酶-3(MMPs-3)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)的表达及肾脏 的病理形态学改变。结果:与DM相比,DG组ET-1、尿白蛋白排泄率降低(P<0.05,P<0.01),肾脏肥大指数DG明显 降低(P<0.05);肾组织PAI-1表达DG组低于DM组(P<0.01),MMPs-3DG组则高于N组及DM组(P<0.01)。结 论:STZ诱导的糖尿病大鼠存在纤溶系统功能紊乱、内皮细胞受损及与之平行的尿蛋白排泄率、ET-1的增加,PAI-1表达 增强、MMPs-3表达下调。应用银杏黄酮苷干预治疗,可以降低尿白蛋白排泄率、减少内皮素释放,使PAI-1的表达下 调,MMPs-3的表达上调,对糖尿病大鼠肾脏有部分保护作用。

银杏黄酮苷元对氧化低密度脂蛋白所致内皮细胞功能的影响

目的探讨银杏黄酮苷元(GA)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导脐静脉内皮细胞株ECV304单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和植物血凝素样低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的调节作用。方法应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附反应(ELISA)、SP免疫组化法等,探讨ox-LDL诱导下内皮细胞表达MCP-1、LOX-1及银杏黄酮苷元的干预作用。结果6.25～25 mg/L银杏黄酮苷元与脐静脉内皮细胞株ECV304共同培养6～48 h可显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞MCP-1、LOX-1 mRNA和蛋白表达(P<0.05),具有浓度、时间效应关系(P<0.05)。LOX-1拮抗剂PIA可抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1、MCP-1 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论银杏黄酮苷元可显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞黏附因子MCP-1表达,该作用可能通过抑制LOX-1的表达来实现。

银杏黄酮苷提取方法的研究

采用正丁醇萃取水溶液中银杏黄酮苷,研究萃取时间、萃取温度、萃取次数对萃取效果的影响,并对银杏黄酮苷的检测方法做了改进,获得最佳萃取条件为萃取时间5min,萃取温度60℃,萃取次数4次,在此条件下萃取物中黄酮苷的含量为57%,收率为77%。

银杏黄酮苷治疗血管性痴呆43例

目的 :观察银杏黄酮苷治疗血管性痴呆的疗效及安全性。方法 :治疗组 43例 ,给予银杏黄酮苷 70mg ,加入 0 .9%氯化钠溶液 3 0 0mL ,静脉滴注 ,qd ,15d为 1个疗程 ,然后口服银杏黄酮苷 80mg,tid ,连用 75d。对照组 43例 ,给予吡拉西坦注射液 0 .8g加入 0 .9%氯化钠注射液 3 0 0mL ,静脉滴注 ,qd ,15d为 1个疗程 ,然后口服吡拉西坦 0 .8g ,tid ,连服 75d。 3个月后两组再重复静脉用药 (同剂量 ,同疗程 ) ,两组疗程均为 6个月。结果 :治疗 3和 6个月后 ,治疗组MMSE评分明显优于对照组 (P <0 .0 1) ,社会功能活动量表 (FAQ)评分治疗 6个月后明显优于对照组 (P <0 .0 1)。结论 :银杏黄酮苷能持续改善血管性痴呆患者的认知及社会功能 ,能延缓痴呆的发展 。

银杏黄酮苷调控CIRI大鼠神经营养素信号通路的抗感染免疫机制

目的借助网络药理学手段,预测银杏黄酮苷治疗缺血性中风的可能作用靶点,并进行GO分析和KEGG通路分析,选择富集显著性强、排名靠前的通路,通过动物实验的方式进行验证分析,阐述银杏黄酮苷通过调控脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)大鼠神经营养素信号通路发挥抗炎等脑保护作用的机制。方法选用SPF级SD大鼠75只,随机分为假手术组(15只)和造模组(60只)。然后采用线栓法复制CIRI模型并评价,再将造模组随机分为模型对照组、银杏黄酮苷组、阳性对照组,分别给予相应的干预因素进行干预,观察各组大鼠神经功能缺损评分;血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量;缺血半暗带脑组织中NGF、BDNF及Pan-Trk、p-Trk、PI3K、Akt、p-Akt、IκB的表达水平。结果共获取227个银杏素可能作用的靶点,脑梗死的疾病靶点24450个;二者交集靶点81个。与假手术组比较,其余各组大鼠神经功能缺损评分、血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量及缺血半暗带脑组织中NF-κB、p-NF-κB的表达水平显著升高(P<0.01),而Pan-Trk、p-Trk、PI3K、Akt、p-Akt、IκB的表达水平显著降低(P<0.01);与模型对照组比较,2干预组大鼠神经功能缺损评分、血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量及缺血半暗带脑组织中NF-κB、p-NF-κB的表达水平显著降低(P<0.05),而Pan-Trk、p-Trk、PI3K、Akt、p-Akt、IκB的表达水平显著升高(P<0.01)。结论银杏黄酮苷的抗炎作用可能是通过活化神经营养素信号通路,进而激活PI3K/Akt信号通路,抑制NF-κB的表达和磷酸化水平而实现的。

银杏黄酮苷元对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞P-选择素、LOX-1表达的影响

目的:探讨银杏黄酮苷元(ginkgetin aglycone,GA)对氧化低密度脂蛋白(oxidized-low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞P-选择素和植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1)表达的影响。方法:培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,分为对照组、ox-LDL组、LOX-1拮抗剂聚肌苷酸加ox-LDL混合刺激组(聚肌苷酸组)、不同含量GA加ox-LDL混合刺激组(GA6.25mg/L组、GA12.5mg/L组、GA25mg/L组和GA50mg/L),通过逆转录聚合酶链式反应检测P-选择素mRNA和LOX-1mRNA表达,用ELISA检测各组培养基上清中P-选择素蛋白含量,辣根过氧化物酶免疫组织化学法检测LOX-1蛋白,并作比较。结果:ox-LDL上调内皮细胞P-选择素和LOX-1表达(P<0.05);6.25～50mg/LGA明显抑制ox-LDL诱导的内皮细胞P-选择素mRNA和LOX-1mRNA和蛋白表达(P<0.05);聚肌苷酸可部分或完全阻断ox-LDL诱导的内皮细胞P-选择素mRNA、LOX-1mRNA及其蛋白表达(P<0.05)。结论:GA通过抑制LOX-1表达而降低内皮细胞合成和分泌黏附分子P-选择素,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。

银杏黄酮苷对氧化损伤内皮细胞产生NO、eNOS和ICAM-1的影响

目的观察银杏黄酮苷对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)产生NO、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和人可溶性细胞间黏附分子(ICAM-1)的影响。方法体外培养HUVEC,传至3代后,以不同浓度的银杏黄酮苷分别作用于HUVEC,然后进行氧化损伤处理。以硝酸还原酶法测定培养液上清中的NO水平,免疫细胞化学法检测内皮细胞eNOS的表达,ELISA法测定细胞培养液中ICAM-1的含量。结果HUVEC在氧化损伤(H2O2100μmol/L,2h)后产生NO的量显著减少(P<0.01),eNOS表达下调,ICAM-1表达上调;银杏黄酮苷可以剂量依赖性的增加内皮细胞NO生成量,上调eNOS的表达,下调ICAM-1表达。结论银杏黄酮苷可能通过增加HUVEC eNOS的表达增加N0的释放、抑制ICAM-1的表达等机制对内皮细胞起保护作用。

银杏黄酮苷与复方丹参片治疗冠心病心绞痛疗效比较

目的 :比较银杏黄酮苷 (舒血宁片 )与复方丹参片治疗冠心病心绞痛的疗效。方法 :68例冠心病心绞痛患者随机分为 ,治疗组 3 8例 ,口服银杏黄酮苷 2片 ,tid ;对照组 3 0例 ,口服复方丹参片 3片 ,tid。两组疗程均为 4周 ,治疗前后观察临床症状、心电图、心功能、血液流变学、硝酸甘油用量及不良反应。结果 :治疗组在临床症状及心电图、心功能及血液流变学的改善、硝酸甘油停减率方面均优于对照组 (P <0 .0 5 ) ,无明显不良反应。结论 :银杏黄酮苷治疗心绞痛安全有效 ,优于复方丹参片。

银杏黄酮苷元对兔颈动脉粥样硬化及NOX2、NOX4表达的影响

目的探讨银杏黄酮苷元(GFA)对兔颈动脉粥样硬化及斑块处NOX2、NOX4表达的影响。方法 24只健康新西兰雄性大白兔随机分为对照组、假手术组、模型组、治疗组4组。对照组予普通饲料,其余各组均予高脂饲料,假手术组行颈外动脉结扎,模型组和治疗组行左颈总动脉内膜球囊损伤,治疗组每日予GFA(25mg·kg-1)干预4周,检测血脂水平;HE染色观察左颈总动脉形态,测定损伤处内膜面积及内膜中膜面积比值;免疫组化染色和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测颈动脉斑块处NOX2、NOX4表达。结果与模型组比较,银杏黄酮苷元明显降低颈动脉内膜面积及内膜/中膜面积,下调斑块处NOX2、NOX4蛋白和mRNA表达(P<0.05)。结论银杏黄酮苷元可干预动脉粥样硬化病变形成,其作用可能与抑制NOX2、NOX4表达有关。