银染高尔基染色法用于神经元完整结构成像

高尔基染色是神经元树突和树突棘可视化的经典方法,目前仍被广泛用于神经元形态可视化。银高尔基染色目前存在易产生黑色沉淀、染色神经元形态结构不完整等问题。对重铬酸钾(K_(2)Cr_(2)O_(7))和硝酸银(AgNO_(3))如何影响银染高尔基染色方法的染色效果进行了研究,通过研究染色液组成成分重铬酸钾、硝酸银质量浓度变化和组分的不同作用方式,实现了对银染高尔基染色方法的优化。结果表明,35 mg/mL多聚甲醛(Paraformaldehyde,PFA)和20 mg/mL K_(2)Cr_(2)O_(7)混合液染色效果要明显优于20 mg/mL K_(2)Cr_(2)O_(7)单独染色效果,在K_(2)Cr_(2)O_(7)的质量浓度优化过程中,80 mg/mL K_(2)Cr_(2)O_(7)的染色效果最佳,35 mg/mL PFA与20 mg/mL K_(2)Cr_(2)O_(7)混合溶液和80 mg/mL K_(2)Cr_(2)O_(7)最佳染色时长比为3∶1,染色过程中AgNO_(3)的最佳质量浓度为10 mg/mL,在最终的染色液组成成分以及作用方式中40 mg/mL PFA固定2 d、35 mg/mL PFA和20 mg/mL K_(2)Cr_(2)O_(7)混合溶液处理3 d、80 mg/mL K_(2)Cr_(2)O_(7)处理1 d和10 mg/mL AgNO_(3)处理5 d对脑组织神经元形态的可视化具有最佳效果。优化后的银染高尔基染色方法可实现对神经元的完整形态结构染色,同时在染色过程也将产生更少的成像杂质沉淀噪点。该工作将提供一种新的高尔基改良染色方法,实现神经元完整形态结构的染色,有望为研究脑神经元结构变化与脑疾病之间的关系提供新的染色方法。

纳米金标记银染增强法快速检测淋病奈瑟球菌

目的建立一种可以在微孔板上快速检测淋病奈瑟球菌的纳米金标记银染增强法。方法以淋病奈瑟球菌的16S rRNA基因为靶基因,分别与纳米金巯基探针、生物素探针杂交,形成三明治杂交结构,然后借链酶亲和素将靶基因锚定在微孔内,通过纳米金催化的银染放大效应产生高灵敏的识别信号,在酶标仪上检测其吸光度值。将该方法与培养法、PCR法同时对105份疑似淋病患者泌尿生殖道标本进行对比。结果纳米金标记银染增强法最低检测限为1 pmol/L,105份标本淋病奈瑟球菌的检测率与PCR法一致,均为36.19%(38/105),培养法的检出率为33.33%(35/105),差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建的纳米金标记银染增强方法,可快速检测临床疑似淋病患者泌尿生殖道标本,具有简便快速、灵敏度高、特异性强、检测成本低等优点。

银染mRNA差异显示法的建立及其应用

以银染 m RNA差异显示方法对原发及转移灶胃癌标本总 RNA为研究对象进行银染差示分析和回收差异条带 ,从中获得系列差异表达片段 .随机选取 5个从原发性胃癌样品回收的表达条带 ,以取自体外培养胃癌细胞株的 RNA进行点杂交验证 ,均被证实为真实带 .对 2个差异表达片段进行分析、测序和 Gen Bank同源比较结果表明 :MGD1片段与肿瘤转移相关基因 MTA1完全同源 ,属胃癌转移相关基因 ;PGD2与胃癌转移抑制相关 ,并与细胞周期抑制蛋白 p2 7/ Kip1具 99%的同源性 .结果表明 ,银染差异显示法具有快速、直观、假阳性率低等优点 。

DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳三种银染方法比较

目的 探讨DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)三种银染方法的特点及其适用性。方法 采用非变性PAGE垂直板对不同稀释度的 pBR 32 2MspⅠ分子量标准进行电泳分离 ,利用二种硝酸银染色法和一种银氨染色法染色 ,分析其灵敏度和噪声。结果 分子量Marker的所有条带都能染出灵敏度均为 2 5ng。在至少一个条带能染出的灵敏度方面 ,银氨染色法 ( 6 .2 5ng)低于其他两种方法。结论 时间方面Carlos等所建立的银染方法最快 ,仅需 2 0min。银氨法的噪声最低 ,结果易于保存。

银染-TRAP法检测胸腹水脱落细胞端粒酶活性的研究

目的:探讨检测胸腹水脱落细胞端粒酶活性对于鉴别良恶性肿瘤的临床意义.方法:用Kim法处理48例胸腹水细胞后,利用改进的银染—TRAP(端粒重复序列扩增)法测其端粒酶活性.结果:24例临床及细胞涂片检查证实恶性胸腹水细胞端粒酶活性全部阳性;12例临床证实恶性而细胞检查未找到癌细胞的胸腹水细胞端粒酶活性阳性7例,阴性5例;12例良性胸腹水细胞端粒酶活性全部阴性.结论:端粒酶的激活与恶性胸腹水的发生发展密切相关,并有可能成为一种鉴别良恶性胸腹水快速、灵敏的临床诊断指标.

两种陆龟的核型与银染带型研究

两种陆龟的核型与银染带型研究郭超文汪鸣聂刘旺（安徽师范大学生物系，芜湖２４１０００）ＴｈｅＫａｒｙｏｔｙｐｅａｎｄＮＯＲｓｏｆＴｗｏＳｐｅｃｉｅｓｏｆＴｕｒｔｌｅｓｏｆＴｅｓｔｕｄｉｎｉｄａｅＧｕｏＣｈａｏｗｅｎＷａｎｇＭｉｎｇＮｉｅＬｉｕｗａｎｇ（...

蛋白质凝胶电泳的高灵敏度染色法——复合银染

本实验以牛血清白蛋白为样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后用考马斯亮兰Ｒ－２５０和银染法分步染色。这种复合银染法的灵敏度比单独使用银染法提高约１０００倍，比单独使用考马斯亮兰Ｒ－２５０染色法提高约１０６倍。它在１ｍｍ厚的聚丙烯酰胺凝胶上至少可检测出５ｐｇ／ｍｍ２的蛋白质。在没有放射性防护设施的任何一个生物实验室中，采用复合银染法基本上能够达到或接近放射性标记检测的灵敏度。相比之下，它不仅省去了繁琐的各式各样的标记过程及其放射性污染，同时还具有很高的灵敏度，因此复合银染具有广泛的应用性。

肺癌患者淋巴细胞姊妹染色单体互换和银染核仁形成区的观察

本文对16例肺癌患者和13名正常人进行了淋巴细胞姊妹染色单体互换(SCE)频率的比较研究。肺癌患者SCE 明显高于正常人,证实SCE 可作为癌症患者的细胞遗传标志物。对17例肺癌患者,20名正常人进行外周血淋巴细胞银染核仁组织者区(Ag-NORs)频率和银染近端端着丝粒染色体联会频率(Ag-AAs)的观察,发现肺癌组Ag-NORs 和Ag-AAs 明显高于正常人,提示肿瘤是全身性疾病影响到了患者外周血淋巴细胞rRNA 基因的活性。

避免Golgi银染标本表层产生铬银沉淀的一个改进方法

经典的Golgi镀银染色法是神经组织研究和教学的重要技术。与其它几种银染技术相比，Golgi镀银染色法操作相对简便，能同时显示神经元与胶质细胞的整体形态，图像对比清晰，耐长久保存。但美中不足的是，标本表层易产生浓黑的铬银沉淀，影响某些重要结构的观察。

聚合酶链反应银染色检测病原体DNA

聚合酶链反应(PCR)技术自问世以来,以其灵敏度高,特异性强,简单快速等特点广泛用于临床检验。我们参照Bright等的银染技术并加以改进用以检测扩增后的结核杆菌(TB)、人巨细胞病毒(HCMV)和乙型肝炎病毒(HBV)的DNA。实验结果表明,其灵敏度与溴化乙锭法近似,且不需特殊的仪器和设备,结果容易保存并可通过光密度计扫描,便于比较和观察。

简单快速的DNA银染和胶保存方法

本文介绍了一套简单快速的DNA银染以及胶保存的方法 ,整个过程仅需 10～ 15分钟 ,而且背景浅 ,条带清楚 ,灵敏度高 ,稳定性好。胶保存采用双层玻璃纸夹心法 ,可长久地保存胶显色时的原貌。以常规PAG胶检测和HLA的SSCP分型为例 ,利用该套方法进行了银染以及胶的保存 ,均得到了满意的结果。该方法具有推广价值。

玉米品种SSR标记毛细管电泳荧光检测法与变性PAGE银染检测法的比较研究

以192份玉米品种为材料,用7对SSR引物对毛细管电泳荧光检测和常规的变性PAGE银染检测两种SSR标记检测方法进行比较分析。结果表明,两种方法检测的SSR标记片段大小一致。毛细管电泳荧光检测法检测的结果更为精确、灵敏、高效,更适用于高通量材料的检测分析。对少量材料进行检测分析以及SSR标记的筛选时,使用常规的变性PAGE银染检测法更经济适用。

聚丙烯酰胺凝胶快速、高效银染方法的建立

聚丙烯酰胺凝胶电泳目前已经广泛应用在SSR标记、SNP标记以及遗传图谱的构建等过程中,但是一直以来凝胶银染方法由于染色时间长、染色步骤繁琐,使得对于开展大批量的实验研究极为不利。文章通过对常规方法的改良,建立了一个银染步骤只需要10min,整个染胶过程只需约20min的快速、高效的银染方法。

微卫星PCR产物变性与非变性PAGE-银染检测方法的比较

用鸡的微卫星引物对6个中国地方鸡种的两个微卫星位点进行PCR扩增。将扩增产物在变性与非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)上进行电泳,经银染,表明微卫星产物在二者上的电泳结果有明显的差异。在非变性聚丙烯酰胺凝胶中,表现为有较多的非特异带,而在变性胶中微卫星扩增产物条带清晰,易于鉴定。

一种新的DNA银染方法

本文介绍一种有效的聚丙烯酰胺中的DNA银染方法 ,其具有背景浅、快速、灵敏度高等特点。利用该方法对MarkerX和棉花的RAPD产物进行银染 ,取得了较满意的结果。说明该方法适于聚丙烯酰胺中的DNA银染。

PAGE凝胶制备方法和银染方法的改进

PAGE凝胶分析技术已广泛运用于小分子量PCR产物的分离,但因操作环节多、耗时长,不利于大规模分子标记分析工作的开展。对PAGE凝胶的制备和银染方法作些改进,省去常规凝胶制备中亲和硅烷/剥离硅烷处理过程,以及常规银染过程中的固定和定影两步骤。与常规方法相比,该方法操作简便、耗时短、带谱的分辨率高,可代替常规方法用于SSR等标记的PCR产物的分离。

板栗基因组AFLP银染反应体系的建立

为了建立准确、高效、实用的板栗品种鉴别体系和方法,采用改进的CTAB—DNA提取方法,从板栗的嫩叶和老叶中提取获得总DNA。所得DNA样品的D260nm/D280nm值为1.7～1.9,琼脂糖凝胶上主带清晰、较少降解、样品纯度高、蛋白去除干净且获得率高。该体系使用操作简便、快捷、高效,适合于板栗DNA提取,所提取的DNA样品不含PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂,可被限制性内切酶MseI和EcoRI完全酶切,适合AFLP-PCR反应应用,得到清晰的指纹式样,适宜用作板栗品种鉴别的有效方法。

棉花AFLP银染技术及品种指纹图谱应用初报

本文介绍了一种适合于棉花研究的ＡＦＬＰ银染方法。