聚合酶链反应方法检测阴道毛滴虫准确性的meta分析

目的系统评价聚合酶链反应检测阴道毛滴虫的应用价值。方法检索中国知网数据库(CNKI)、万方数据知识服务平台、维普数据库和PubMed数据库自建库到2023年5月30日以来基于PCR方法检测阴道毛滴虫的研究文献。经文献筛选、数据提取后,使用软件RevMan 5.4.1和网页服务Meta-Disc 2.0进行Meta分析。结果共纳入36篇文献,16454个临床样本。Meta分析结果显示:聚合酶链反应检测阴道毛滴虫的合并敏感度为0.972(0.943,0.987),合并特异度为0.979(0.968,0.986),诊断比值比为1643.398(673.168,4012.008),阳性似然比为46.209(30.549,69.897)和阴性似然比为0.028(0.013,0.059);亚组分析表明不同性别的临床样本不会影响聚合酶链反应的检测准确性,但不同的PCR检测方法的准确性有差异。结论聚合酶链反应检测阴道毛滴虫的准确性较高,具有良好的应用价值。

荧光聚合酶链反应检测急性早幼粒细胞白血病PML／RARα的临床价值

实时定量逆转录聚合酶链反应是目前最精确地检测急性白血病微小残留病的方法,对急性早幼粒细胞PML／RARα融合基因表达量的测定及动态变化监测,取得PML／RARα融合基因的表达拷贝数,对临床治疗、预防复发、延长患者生存期,最终治愈白血病具有重要的指导意义。

数字聚合酶链反应技术对甲状腺结节术前良恶性的鉴别诊断价值

目的探讨数字聚合酶链反应(dPCR)技术在甲状腺结节术前良恶性鉴别诊断中的价值。方法收集2019年6月至2022年9月在该院进行超声引导下细针穿刺细胞学检查(FNAC)且接受手术治疗的甲状腺结节患者穿刺液标本141份,采用dPCR和扩增阻滞突变系统(ARMS)-PCR检测BRAF V600E基因突变,dPCR同时检测NRAS Q61R基因突变、TERT基因启动子C228T和C250T突变。以患者术后病理检测结果为金标准,比较几种方法的准确率,评价dPCR技术在甲状腺结节术前良恶性鉴别诊断中的价值。结果141份穿刺液标本中,dPCR对BRAF V600E的检出率为69.50%(98/141),ARMS-PCR对BRAF V600E的检出率为64.54%(91/141),差异有统计学意义(P<0.05);dPCR检测NRAS Q61R、TERT C228T、TERT C250T在甲状腺乳头状癌(PTC)中的突变检出率分别为15.32%(17/111)、12.61%(14/111)和1.80%(2/111)。单独使用dPCR检测BRAF V600E鉴别诊断甲状腺结节良恶性的准确率为89.36%,明显高于ARMS-PCR(84.40%)和FNAC(77.30%),差异均有统计学意义(P<0.05)。dPCR(BRAF V600E)+FNAC的诊断准确率为97.16%,dPCR多基因[BRAF V600E+NRAS Q61R+TERT(C228T+C250T)]+FNAC的诊断准确率为97.87%,均高于单独dPCR(BRAF V600E)、dPCR(多基因)的诊断准确率,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论dPCR可检测出ARMS-PCR漏检的基因突变位点,也可以弥补FNAC的不足,该技术联合FNAC可提高甲状腺结节术前良恶性鉴别诊断的效能。

多重荧光定量聚合酶链反应法检测肉制品中的3种食源性致病菌

目的建立多重荧光定量聚合酶链反应法(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)快速检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌的方法。方法根据沙门氏菌的invA基因、单增李斯特菌的hemolysin基因、大肠杆菌O157:H7的rfbE基因序列分别设计特异性引物及探针,通过优化反应体系,测定其灵敏度、特异性和重复性,建立了可同时检测上述3种食源性致病菌多重qPCR方法。结果该方法只扩增3种靶细菌,对其他供试菌不扩增;沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H7的检出限分别为10^(1)、10^(2)、10^(2)拷贝数/μL,并且拥有良好的重复性和特异性。人工污染的猪肉样品经SLE培养基富集8 h后,分别可以检测到初始菌液浓度为1.56×10^(2)CFU/25 g的沙门氏菌,2.13×10^(2)CFU/25 g的单增李斯特菌,2.32×10^(2)CFU/25 g的大肠杆菌O157:H7。结论所建立的多重qPCR灵敏度高、特异性强、重复性好,可同时检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌,在提高食品安全和保护人类健康方面有重要意义。

荧光定量聚合酶链反应检测脑脊液中结核分枝杆菌DNA对鉴别诊断结核性脑膜炎的应用价值分析

目的 探究荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测脑脊液中结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)DNA对鉴别诊断结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的应用价值。方法 选择2019年7月—2021年6月于安陆市普爱医院就诊的存在脑膜刺激征的80例患者作为研究对象,所有患者均经MTB培养后明确诊断,将确诊为TBM的37例患者分入脑膜炎组,疑似TBM的18例患者分入疑似组,非TBM的25例患者分入非TBM组,对3组患者行腰椎穿刺,留取5 m L脑脊液及时送检,分别行MTB培养法、抗酸染色涂片法、荧光定量PCR检测。对比3种检测方法在MTB中的阳性检出率,对比脑膜炎组与疑似组患者MTB的DNA检测数值。结果 脑膜炎组应用荧光定量PCR检测MTB的阳性检出率高于疑似组,差异有统计学意义(P<0.05);脑膜炎组与疑似组采用MTB培养法、抗酸染色涂片法的MTB阳性检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。脑膜炎组患者MTB的DNA检测数值为(4.71±0.97),疑似组患者MTB的DNA检测数值为(4.35±0.83),2组患者MTB的DNA检测值比较,差异无统计学意义(t=1.351,P=0.183)。结论 应用荧光定量PCR检测脑脊液中MTB的DNA,有助于判断TBM患者病情严重程度,在鉴别诊断TBM中具有较高的临床应用价值,为临床诊疗提供新思路及方向,值得临床推广应用。

用两种聚合酶链反应方法检测流感病毒

目的 建立特异敏感的快速检测流感病毒的分子生物学方法。方法 用多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应扩增甲1、甲3 和乙型流感病毒的HA基因的HA1片段。根据扩增产物的大小检测流感病毒。结果 以流感病毒的HA基因为模板设计的 3对引物能特异性地扩增出 94 2bp、1117bp和 75 1bp的核酸片段 ,它们分别和甲1,甲3 和乙型流感病毒有稳定对应关系。根据扩增产物的大小可以检测流感病毒。用这个方法能检测病毒浓度为0 1TCID50 的样品。结论 多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应是检测流感病毒的特异敏感的方法。

实时定量聚合酶链反应与巢式聚合酶链反应在289例白血病融合基因检测中的比较

目的比较实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)与巢式聚合酶链反应(nPCR)在白血病融合基因BCR/ABL、PML/RARa及AML1/ETO检测中的结果。方法分别应用RT-PCR与nPCR对289例急慢性白血病初诊和完全缓解的患者BCR/ABL、PML/RARa及AML1/ETO融合基因进行检测,结合患者骨髓细胞形态学及临床转归予以分析。结果 46例初诊慢性粒细胞白血病(CML)患者中,RT-PCR与nPCR检测BCR/ABL融合基因阳性率分别为95.7%和93.5%(P=0.997);69例完全缓解CML患者中,RT-PCR与nPCR检测阳性率分别为78.4%和58.1%(P<0.05)。32例初诊急性早幼粒细胞白血病(APL)患者中,RT-PCR与nPCR检测PML/RARa融合基因阳性率分别为93.8%和90.6%(P=0.996);114例完全缓解APL患者中,RT-PCR与nPCR检测阳性率分别为12.3%和7.0%(P<0.05)。12例初诊急性粒细胞白血病M2(ANLL-M2)患者中,RT-PCR与nPCR检测AML1/ETO融合基因阳性率分别为50.0%和50.0%(P=1.0);16例完全缓解ANLL-M2患者中,RT-PCR与nPCR检测阳性率分别为50.0%和12.5%(P<0.05)。结论 RT-PCR较nPCR更为敏感而准确,应用RT-PCR可以提高微小残留病的检出率,为临床诊断和治疗提供更为有效的分子生物学依据。

涂片、培养、聚合酶链反应和连接酶链反应几种方法检测宫颈淋球菌感染

目的:评价4种方法检测宫颈淋球菌的临床应用价值。方法:用美蓝染色涂片、培养、聚合酶链反应(PCR)淋球菌试剂盒和连接酶链反应(LCR)4种方法对比检测宫颈淋球菌感染情况。结果:4种方法相应的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为:涂片方法是56.2%、97.6%、69.2%、95.5%;细菌培养方法是68.8%、100.0%、100.0%、97.1%;PCR方法是:68.8%、97.6%、73.3%、97.0%;LCR方法是:93.8%、92.3%、53.6%、99.4%。如果把涂片和细菌培养并联检测淋球菌,即两者之一阳性即为阳性,则这两种方法并联起来的敏感性为81.3%,特异性为97.6%。结论:涂片和培养并联检测淋球菌比单独涂片和培养的敏感性有所提高,而特异性并没有明显的降低。

聚合酶链反应检测肝硬化患者腹水中细菌DNA

目的:探讨PCR方法检测肝硬化患者腹水中细菌DNA的可行性。方法:在细菌16SrRNA基因保守区设计一对通用引物,对7种对照菌株、人基因组DNA、HBVDNA、3 7份肝硬化患者腹水进行聚合酶链反应扩增。结果:7种对照菌株均获得5 3 0bpDNA片段。而与人基因组DNA、HBVDNA无交叉阳性反应,敏感性试验可检测出1pg的细菌DNA。3 7份腹水中有9份获得5 3bpDNA片段,阳性率2 4 3 % (9/3 7) ,而腹水细菌培养阳性率为5 4%(2 /3 7) ,两者比较差异有显著性意义(P <0 0 5 )。结论:将通用引物通过PCR方法扩增细菌16SrRNA基因,具有高度敏感性、特异性,可应用于肝硬化患者腹水中细菌DNA的检测及细菌移位的研究。

多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应快速检出含漱液中的乙型流感病毒

目的建立特异敏感的快速检测含漱液中的流感病毒的分子生物学方法。方法用多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应扩增甲１、甲３和乙型流感病毒ＨＡ基因的ＨＡ１片段，得到各病毒与特异性大小的扩增产物的对应关系。用同样的方法扩增含漱液中流感病毒的ＨＡ基因的ＨＡ１片段。根据这对应关系检测含漱液中的流感病毒。结果以流感病毒的ＨＡ基因为模板设计的三对引物，用多重逆转录聚合酶链反应能特异性地扩增出９４２ｂｐ、１１１７ｂｐ和 ７５１ｂｐ的核酸片段，它们分别和甲１、甲３和乙型流感病毒有稳定对应关系。用多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应扩增含漱液中流感病毒ＨＡ基因的ＨＡ１片段，根据扩增产物的大小检出含漱液中的乙型流感病毒。结论 多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应能特异敏感地检出含漱液中的乙型流感病毒。

基因测序技术与聚合酶链反应(PCR)技术在医学检验中的应用分析

比较基因测序技术与聚合酶链反应(PCR)在结核病诊断中的效能,为结核病的规范化诊断提供循证依据。方法 前瞻性随机对照研究。纳入2022年6月-2023年6月住院的100例疑似结核病患者,随机分为PCR组和测序组,每组50例。分别采用PCR和基因测序技术对痰液等临床标本进行检测,判断结核分枝杆菌阳性。比较两组的诊断敏感性、特异性、准确性及检测时间。结果 测序组诊断结核病的敏感性、特异性、准确性分别为96.00%、98.00%、97.00%,均高于PCR组的84.00%、90.00%、87.00%,差异均有统计学意义(P<0.05)。测序组的检测时间为(4.5±1.2)h,短于PCR组的(6.8±1.6)h(P<0.05)。结论 基因测序技术在结核病诊断中的敏感性、特异性、准确性及检测速度方面均优于PCR方法,有望成为结核病诊断的"新贵"。将基因测序技术规范化应用于结核病的常规诊断,有助于结核病的早期发现和精准治疗,对控制结核病流行,降低疾病负担,保障人民健康具有重要意义。

缺口连接酶链反应检测沙眼衣原体DNA的实验研究

目的 :建立缺口连接酶链反应方法检测沙眼衣原体。方法 :根据编码CT主要外膜蛋白的基因 (ompl)的稳定区设计2对互补的寡核苷酸探针。采用G -LCR和常规PCR扩增CT标准株DNA ,并对二者检测CT的敏感性进行比较。结果 :对5种CT标准株进行G -LCR扩增 ,均出现 5 4bp长度的DNA片段。敏感性实验可检测出 2个CT原体 ,而PCR可检测出2 0EBs。G -LCR较PCR敏感 10倍 ;在特异性方面 ,不扩增肺炎衣愿体及其他细菌DNA ,具有很高的特异性。结论 :G -LCR用于检测沙眼衣原体特异、敏感、快速、准确 ,可为CT感染的临床诊断提供依据。

细菌培养与聚合酶链反应(PCR)检测在细菌性痢疾检测中的应用分析

探究细菌培养与聚合酶链反应(PCR)检测在细菌性痢疾检测中的应用价值。方法 选取我院就诊的800例腹泻患者作为检验样本(2021.11~2023.11期间),使用细菌培养方法,聚合酶链反应(PCR)检测方法,探讨不同年龄段患者的细菌性痢疾检出率。结果 聚合酶链反应(PCR)检测检出率:(75.00%),(33.33%),(50.00%),(41.67%),(40.00%),(27.14%),(33.33%),(60.00%),(50.00%),(55.25%)优于细菌培养阳性检出率:(2.78%),(2.22%),(3.33%),(5.00%),(2.00%),(4.29%),(3.33%),(6.67%),(5.00%),(3.25%),(p值小于0.05)。结论 细菌培养与聚合酶链反应(PCR)检测在细菌性痢疾检测中,聚合酶链反应(PCR)检测方法,应用价值更为理想,可准确的评估患者是否存在细菌性痢疾疾病,有助于临床医师结合检测数据,为患者后期治疗提供理论借鉴依据,进一步改善患者的治疗效果,有临床推广及借鉴意义。

荧光定量聚合酶链反应检测肺结核和非典型分枝菌肺病的结果分析

目的了解荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测在临床工作中对结核分枝杆菌检测的敏感性和特异性,鉴别结核分枝杆菌和非典型分枝杆菌。方法留取病者痰液行FQ-PCR检测及抗酸杆菌培养鉴定。结果FQ-PCR监测结核病组阳性率52.5%,而非典型分枝杆菌肺病组也有12.5%阳性率,经χ2检查P<0.01,两者差异显著。结论FQ-PCR检测对于鉴别结核分枝杆菌和非典型分枝杆菌有一定的意义,但在临床工作中的敏感性和特异性有待提高。

连接酶链反应(LCR)技术检测男性尿标本的淋病奈瑟菌

目的应用连接酶链反应(LCR)技术检测男性尿标本中的淋病奈瑟菌,初步评价其敏感性和特异性。方法采集受检者晨起或较长时间(2小时以上)不排尿后的首段尿(FVU)标本1 131例,利用LCR检测此尿液标本中的淋球菌,针对Cut-off值在灰区以上的标本进行聚合酶链反应(PCR)检测。对LCR和PCR结果相异的标本,用另一LCR试剂复检,参照“扩大的金标准”来确定检测结果。结果LCR的敏感性和特异性分别为100%和99.9%。结论LCR作为一种探针检测技术,是一种既敏感又特异的诊断方法,可避免取尿道标本给患者带来的痛苦,可作为筛检男性淋病奈瑟菌感染的一种非损伤性方法。

用改良的巢式逆转录聚合酶链反应技术检测血中CK20mRNA

目的建立一种简便、快速的检测血中微量大肠癌细胞CK20mRNA的方法。方法用改良的巢式逆转录聚合酶链反应技术检测血中大肠癌标准细胞株VoLo的CK20mRNA。结果浓度分别为1、10、100、1000个/mL的大肠癌标准细胞株LoVo的每份标本,均扩增出了符合所设计片段大小的303bp的目的产物条带。结论用改良的巢式逆转录聚合酶链反应技术检测血中微量存在的大肠癌细胞CK20mRNA具有简便、快速、灵敏的优点,可以大力地推广于临床。

荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA的探讨

目的 用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)定量检测血清中乙型肝炎病毒的数量以指导临床。方法 以荧光探针杂交技术为基础的实时定量PCR法。结果 所检的 5 12份HBV的HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)的标本 ,HBV -DNA阳性率为 98.1% (10 3/ 10 5 ) ,平均拷贝数为 2 .4× 10 8/ml;HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)的标本 ,HBV -DNA阳性率为 6 8.5 7% (82 / 10 5 ) ,平均拷贝数为 8.9× 10 5/ml;HBsAg(+)、HB cAb(+)的标本 ,HBV -DNA阳性率为 5 6 .6 % (30 / 5 3) ,平均拷贝数为 3.2× 10 5/ml;HBsAb(+)、HBeAb(+)、HB cAb(+)的标本 ,HBV -DNA阳性率为 31.4% (2 1/ 6 7) ,平均拷贝数为 3.2× 10 5/ml;非乙型肝炎和健康者没有检出HBV -DNA。结论 FQ -PCR具有简便、快速、特异性强、准确定量的优点 ,能够有效识别假阳性、假阴性 ,可以检测HBV的真实感染和复制的情况 ,对于乙型肝炎的临床诊断。