错配杂交化学发光法检测细胞色素P4501A1基因多态性

建立一种检测细胞色素P4 5 0 1A1基因多态性的新方法。针对每个多态位点设计两根寡核苷酸探针 ,两根探针的区别仅在于突变位点处一个碱基。每个样品分别与两根探针进行杂交 ,采用化学发光法检测杂交体 ,通过两根探针的杂交信号强度之比确定基因型。与参考方法比较 ,该法具有快速、简便。

基于错配杂交化学发光定量检测MGMT基因过甲基化

目的利用错配杂交和化学发光技术,建立一种检测MGMT基因启动子区过甲基化的定量分析方法。方法基因组DNA经过亚硫酸氢钠修饰,所有未甲基化的胞嘧啶都被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不发生变化。设计特异的PCR引物(不含CpG位点),同时扩增含有CpG位点甲基化或非甲基化目的 MGMT基因启动子区,用两条分别与甲基化及非甲基化CpG位点互补的寡核苷酸探针与扩增产物杂交,化学发光检测,通过两条探针的杂交信号强度之比确定样品DNA中MGMT甲基化的程度。结果检测混合样品中MGMT基因的甲基化水平与结果完全相符,并可用于肿瘤组织样品的MGMT甲基化定量检测。结论与现有方法相比,本法是一种检测快速、操作简便的MGMT基因甲基化的定量检测方法。

错配杂交化学发光法检测亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性

目的建立一种基于错配杂交及化学发光技术的检测亚甲基四氢叶酸还原酶(m ethylenetetrahydrofolate reducatase,MTH-FR)基因多态性的新方法。方法针对多态位点设计两条寡核苷酸探针,分别与野生型及突变型序列互补。将两条探针分别与含多态位点C677T的PCR扩增产物杂交,然后用化学发光法检测,根据两条探针的发光值之比确定样品的基因型。结果用本法随机检测了50例DNA样品,结果3种基因型的发光值之比可以严格区分,其中野生型(C/C)15例,杂合型(C/T)28例,突变型(T/T)7例,与参考方法(PCR-RFLP)的检测结果完全一致。结论本方法操作简便、检测快速而且费用低廉,可广泛应用于MTHFR基因突变及多态性检测。

错配杂交化学发光法检测MTHFR基因多态性

目的建立一种基于错配杂交及化学发光技术检测亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolatere-ductase,MTHFR)基因多态性的新方法。方法针对多态位点设计两条寡核苷酸探针,分别与野生型及突变型序列互补。将2条探针分别与含多态位点C677T的PCR扩增产物杂交,根据2条探针的发光值之比确定样品的基因型。结果用本法随机检测50例DNA样品,结果3种基因型的发光值之比可以严格区分,其中野生型(C/C)15例,杂合型(C/T)28例,突变型(T/T)7例,与参考方法(PCR-RFLP)的检测结果完全一致。结论本方法操作简便、快速且费用低廉,可广泛应用于MTHFR基因突变及多态性检测。

错配杂交酶联免疫法检测亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性

目的建立一种基于错配杂交及酶联免疫检测亚甲基四氢叶酸还原酶(Methylenetetrahy drofolate redu-catase,MTHFR)基因多态性的新方法。方法针对多态位点设计两条寡核苷酸探针,分别与野生型及突变型序列互补。将两条地高辛标记的探针分别与含多态位点C677T的PCR扩增产物杂交,然后显色检测,根据两条探针的吸光度值之比确定样品的基因型。结果用本法随机检测了50例DNA样品,结果可见三种基因型的发光值之比可以严格区分,其中野生型(C/C)15例,杂合型(C/T)28例,突变型(T/T)7例,与参考方法(PCR-RFLP)的检测结果完全一致。结论本方法操作简便、检测快速而且费用低廉,可广泛应用于MTHFR基因突变及多态性检测。

错配杂交化学发光法定量检测p16基因过甲基化

目的建立一种基于错配杂交化学发光检测p16基因启动子区过甲基化的定量分析方法.方法用亚硫酸氢钠修饰基因组DNA,所有未甲基化的胞嘧啶都被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不发生变化.设计合成1对不含CpG位点的引物,同时扩增甲基化或非甲基化目的DNA片段,用2条分别与甲基化及非甲基化CpG位点互补的寡核苷酸探针与扩增产物进行杂交及化学发光检测,通过探针杂交信号强度比确定样品DNA中甲基化的p16基因的比例.结果错配杂交化学发光法具有较好的精密度(CV=5.2%～6.4%)和灵敏度(2.5×10-4pmol),检测已知混合样品的p16基因甲基化率分别为0%、23%、52 %、70% 及93%,与实际结果一致.结论本研究建立的错配杂交化学发光法是一种检测快速、操作简便的p16基因甲基化的定量检测方法.

一种快速定量检测p16基因甲基化方法的建立

目的建立一种基于错配杂交-化学发光检测的p16基因启动子区过甲基化的定量分析方法。方法用亚硫酸氢钠修饰基因组DNA,所有未甲基化的胞嘧啶都被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不发生变化。设计合成一对不含CpG位点的引物同时扩增甲基化或非甲基化目的DNA片段,用两根分别与甲基化及非甲基化CpG位点互补的寡核苷酸探针与扩增产物进行杂交,化学发光检测,通过两根探针的杂交信号强度之比确定样品DNA中甲基化的p16基因的比例。结果检测结果与肿瘤细胞DNA样品中甲基化的p16基因的量成正比,而且与其表达水平呈逆相关。结论与现有方法相比,本法是一种检测快速、操作简便的p16基因甲基化的定量检测方法。