镇心省睡益智方对快动眼睡眠剥夺大鼠促醒和认知功能的影响

目的研究镇心省睡益智方(省睡方)的促醒和提高认知能力作用。方法采用改良多平台水环境法复制96 h快动眼睡眠剥夺(REMSD)大鼠模型,利用旷场实验和Morris水迷宫实验评价省睡方的促醒作用和提高认知能力作用,并考察省睡方对REMSD大鼠一般情况和体质量的影响。结果本实验成功复制了96 h大鼠REMSD模型,省睡方可提高REMSD大鼠水平和垂直得分;也可抑制REMSD导致的定位导航试验的潜伏期延长,并可明显增加穿越平台次数、平均速度、目的象限游泳路程和时间百分比。结论省睡方可提高REMSD大鼠兴奋性和探究活动,有促醒和提高REMSD大鼠认知功能的作用,其中最佳有效剂量为250 mg·kg-1。

镇心省睡益智方及其精油对AD模型小鼠学习记忆的影响

目的:观察镇心省睡益智方水提液及其精油对β淀粉样前体蛋白基因/早老素基因(APP/PS1)双转基因小鼠学习记忆的影响并探讨其可能机制。方法:采用APP/PS1双转基因痴呆小鼠及同月龄相同遗传背景C57BL/6JNju小鼠2种小鼠。C57BL/6JNju小鼠作为正常组,APP/PS1双转基因痴呆小鼠随机分为模型组,镇心省睡益智方精油低、高质量浓度组(12.13,48.50 mg·L^(-1)),镇心省睡益智方水提液组(0.46 g·kg^(-1)),每组12只。每天给药1次,连续给药22 d。给药结束后采用跳台实验、Morris水迷宫实验对小鼠行为学能力进行检测,采用尼氏染色观察海马CA1区神经元变化,采用硫磺素(Th S)染色观察海马DG区老年斑(SP)沉积,采用免疫组化法检测小鼠脑组织中葡萄糖转运蛋白1(GLUT1),胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠海马组织中乙酰胆碱(ACH),γ-氨基丁酸(GABA),谷氨酸(GLU)含量的变化。结果:与正常组比较,模型组小鼠跳台实验潜伏期显著缩短,错误次数显著增加(P<0.01),Morris水迷宫实验定位航行逃避潜伏期明显延长(P<0.05,P<0.01),海马CA1区神经元出现缺失,DG区出现明显的老年斑沉积(P<0.05),ACH,GLUT1含量均显著下降(P<0.01),GABA,GLU水平及IRS-1的表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组均可显著延长小鼠跳台实验潜伏期、减少跳台错误次数(P<0.01),明显降低定位航行小鼠逃避潜伏期(P<0.05,P<0.01),可一定程度保护小鼠海马CA1区神经元,减少DG区老年斑沉积(P<0.05,P<0.01),明显增加小鼠脑组织中ACH,GLUT1表达(P<0.05,P<0.01),显著降低GABA,GLU水平及IRS-1的表达(P<0.01)。结论:镇心省睡益智方水提液及其精油能够改善APP/PS1小鼠的学习记忆行为,保护神经元,增加脑组织GLUT1的表达,减少脑组织IRS-1的表达,减少老年斑沉积,升高ACH含量,降低GABA,GLU含量,可能是其防治阿尔茨海默症的机制。

镇心省睡益智方及其挥发油对记忆损伤小鼠的保护作用研究

目的:观察镇心省睡益智方(省睡方)水提液及其省睡方药对益智-石菖蒲挥发油对Aβ1-42诱导阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆及神经递质的影响。方法:运用ICR小鼠侧脑室注入Aβ1-42复制记忆损伤模型小鼠,将省睡方水提液(0.455 g/kg)进行灌胃给药,不同剂量益智-石菖蒲挥发油(12.13μg/mL、48.50μg/mL)进行吸嗅给药,采用跳台实验、Morris水迷宫实验对小鼠行为学能力进行检测,采用尼氏染色光镜下观察海马CA1区神经元变化,运用Elisa法检测小鼠海马组织中乙酰胆碱(Ach)、伽马氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)含量的变化。结果:跳台实验中,与空白组相比,模型组跳台实验潜伏期明显缩短、错误次数明显增加;与模型组相比,各给药组均可以显著延长小鼠跳台实验潜伏期、减少跳台错误次数;Morris水迷宫定位航行实验显示,模型组小鼠基本丧失学习记忆能力;各给药组与第一天相比,逃避潜伏期明显减少;空间探索实验显示各组之间无显著差异;在尼氏染色中,镇心省睡益智方灌胃给药和益智-石菖蒲挥发油吸嗅给药均可以一定程度保护小鼠海马CA1区神经元;Elisa结果显示,与空白组相比,模型组小鼠海马组织中Ach含量显著降低,GABA、Glu含量显著性升高;与模型组相比,镇心省睡益智方灌胃0.455 g/kg组及益智-石菖蒲挥发油吸嗅给药12.13μg/mL、48.50μg/mL组小鼠海马组织中Ach含量明显升高,GABA、Glu含量明显降低。结论:镇心省睡益智方水提液及挥发油灌胃及吸嗅给药可以改善Aβ1-42所致AD模型小鼠的学习记忆行为、保护神经元,升高Ach含量,降低GABA、Glu含量可能是其防治AD的机制之一。

镇心省睡益智方抗Aβ25-35诱导人脑微血管内皮细胞损伤的作用

目的:观察镇心省睡益智方(省睡方)水提液对抗β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的神经保护作用和潜在机制。方法:采用Aβ25-35诱导的HBMEC细胞损伤作为阿尔茨海默病(AD)细胞模型。本研究分为空白组,Aβ25-35组,省睡方水提液低、中、高剂量组(125,250,500 mg·L^-1)。对其进行相关治疗后,采用噻唑蓝(MTT)比色法确定不同浓度药物及Aβ25-35的细胞毒性,采用Hoechst-33258染色观察细胞凋亡情况,采用比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测晚期糖基化终产物受体(RAGE),低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP1),葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)及葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)的表达。结果:与空白组比较,Aβ25-35组细胞活力显著下降(P<0.01),Hoechst-33258染色观察到明亮的蓝色荧光、染色质固缩、呈致密浓染或碎块状致密浓染,颜色有些发白,凋亡细胞百分比显著增加(P<0.01),Caspase-3活性显著增加(P<0.01),RAGE蛋白表达显著增加(P<0.01),LRP1,GLUT1和GLUT3蛋白表达显著下降(P<0.01);与Aβ25-35组比较,省睡方水提液组细胞存活率以剂量依赖性方式显著增加,500 mg·L^-1省睡方水提液组保护作用比其他组更明显(P<0.05),500 mg·L^-1省睡方水提液组及显著抑制凋亡细胞的数量(P<0.01),且显著降低Caspase-3活性(P<0.01),125 mg·L^-1省睡方水提液组RAGE蛋白表达未显著降低,250,500 mg·L^-1省睡方水提液组RAGE蛋白表达显著下降(P<0.01),而各剂量省睡方水提液组LRP1,GLUT1和GLUT3蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论:省睡方水提液能够减弱Aβ25-35寡聚体诱导的HBMEC细胞毒性,抑制细胞凋亡,降低Caspase-3活性,降低RAGE蛋白的表达,升高LRP1,GLUT1和GLUT3蛋白的表达,从而降低Aβ在脑内异常聚集和沉积可能是其防治AD的机制。