间充质干细胞改善长期培养人胰岛功能的体外研究

目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)对长期培养的人胰岛功能的改善作用。方法将hUC-MSCs根据不同浓度分成3组:104组、105组、106组,每组平行三孔接种于12孔板中,经培养24 h贴壁后,各孔分别加入150 IEQ培养了17 d的人胰岛,以无hUC-MSCs的胰岛培养为对照组。经37℃,5%CO_(2)培养24 h后,比较不同组胰岛外形、活性和静态葡萄糖刺激胰岛素释放指数(insulin release index,GSI)。结果培养后,各组胰岛形态紧实,106组培养液有较多细胞成膜片漂浮,105组胰岛活性显著高于对照组胰岛(P<0.01),106组胰岛活性相对较差(P<0.01)。105组胰岛的葡萄糖刺激GSI与对照组具有显著性差异(3.63±0.16比2.52±0.10,P<0.01),其余两组人胰岛GSI与对照组无显著性差异。结论hUC-MSCs可以改善长期培养后人胰岛细胞团的体外活性和功能,但与MSCs细胞浓度有关。

用多孔微载体大规模长期培养动物细胞的方法

长期大规模高密度动物细胞培养是生物制药产业中的关键技术，文中介绍了利用多孔微载体在中试规模生物反应器中长期大规模连续培养分泌尿激酶原的DNA重组中国仓鼠卵巢细胞（rCHO）的方法。

长期培养后小鼠造血基质细胞差异表达基因的筛选

为了进一步研究长期培养体系 (long termculture ,LTC)中造血基质细胞调控造血的分子基础及其作用机制 ,并发现新型造血调控因子 ,以LTC体系培养后小鼠骨髓造血基质细胞 (LTC St)为被扣除杂交组 ,以未经培养的小鼠骨髓细胞 (BMC)为扣除杂交组 ,采用抑制性扣除杂交法 (SSH)进行杂交 ,将杂交产物克隆并测序 ,进行生物信息学分析。结果 :获得了 131个差异表达EST克隆 ,这些克隆代表了 2 6种已知或部分已知的不同基因和 7条无任何线索的全新基因 ,5条具有完整开放阅读框架 ,无功能线索的新基因中 3条有信号肽。结论 :通过本实验得到了LTC体系中特异性表达的一个消减文库 ,获得了几条可能与造血调控相关的新型基因或EST 。

大鼠真皮间充质干细胞的体外长期培养及胶原海绵对其生长的影响

从新生大鼠真皮组织中分离多能干细胞 ,体外长期传代培养 ,观察细胞形态和超微结构的变化 ,检测细胞增殖和分化能力的改变及胶原基质对细胞生长的影响 ,揭示体外长期传代培养对大鼠真皮间充质干细胞生物学性状的影响。结果表明 :大鼠真皮组织中的间充质干细胞体外培养至 180 d,传至 2 5代的细胞仍具有干细胞的特征 :形态均一 ,细胞核结构原始 ,细胞器不发达 ;体外增殖迅速 ,保持了向成骨细胞和软骨细胞分化的潜能 ;胶原基质成分可促进细胞的生长 ,而胶原海绵支架更利于细胞的三维生长。结论是体外长期传代培养后大鼠真皮间充质干细胞仍保持良好的干细胞特性 。

长期培养的人脐带间充质干细胞PCNA、IL-6、IL-11和galectin-3的表达

目的:探讨长期培养的人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)增殖细胞核抗原(PCNA)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-11(IL-11)和半乳糖凝集素-3(galectin-3)mRNA及蛋白表达的变化情况,为hUC-MSCs的实验研究和临床应用提供实验资料和理论依据。方法:取剖宫产新生儿脐带,分离、传代培养hUC-MSCs;收集第3、8、18、28和33代细胞及培养上清,用qRT-PCR、ELISA及Western bloting检测PCNA、IL-6、IL-11和galectin-3 mRNA和蛋白水平。结果:(1)hUC-MSCs PCNA、IL-6、IL-11 mRNA及IL-6、IL-11蛋白的表达随培养传代次数增加而减少,第33代较第3代分别降低了33%、56%、37%和50.3%、58.9%,差异显著(均P<0.01)。(2)各代间galectin-3 mRNA表达无显著差异(P>0.05),且各代间蛋白表达亦无明显差异。结论:(1)体外长期传代培养过程中hUC-MSCs增殖能力和支持造血能力可能逐渐减弱甚至丧失。(2)体外长期传代培养可能对hUC-MSCs的免疫调节功能无显著影响,这有待进一步的实验验证。

胎盘血移植特性的研究——Ⅰ.人胎盘血粒单系祖细胞体外长期培养观察

本文采用体外甲基纤维素长期培养观察脐血(又称胎盘血)粒单系集落形成单位(CFU—GM)生长情况。结果:脐血(n=20)7、14、21、28天CFU—GM产率分别为28.78±37.82、143.30±168.64、286.40±497.00、107.93±131.98/2×10~5,35天(n=13)为93.27±111.20,42天(n=6)为68.67±103.30/2×10~5;14、21、28天脐血与7天骨髓的产率(180.91±134.07)无明显差异(P>0.05)。正常骨髓CFU-GM产率:14天(n=11)、21天(n=9)、28天(n=6)分别为115.14±87.85、59.81±68.05、25.00±20.45/2×10~5,14天集落产率开始下降,21天后明显减少;14天后集落脐血明显大于骨髓,细胞>1000个细胞,有些特大集落,>5000个细胞;脐血集落细胞于35天开始部分溶解(骨髓为14天,21天时多已完全溶解)。可见脐血造血细胞体外培养维持时间明显长于骨髓造血细胞(4～6^+周/3周~±),表明脐血造血细胞的生物学特性不同于骨髓造血细胞——富含扩增潜能更强、可维持长期造血重建的早期造血干细胞群。

长期培养的急性粒细胞白血病患者骨髓贴壁细胞中src原癌基因的高水平表达

在人骨髓细胞长期培养中,观察造血细胞与基质细胞的关系,检测不同类型的白血病患者及其他非血液病患者骨髓贴壁细胞中src原癌基因的mRNA表达水平。基质细胞培养采用人骨髓细胞长期培养的方法,mRNA表达的检测采用地高辛标记cDNA探针和细胞原位斑点杂交法。培养4-6周时,部分急性粒细胞白血病(AML),慢性粒细胞白血病(CML)及骨髓增生异常综合征(MDS)患者的造血细胞获得独立生长的能力。与对照组相比,AML患者骨髓贴壁细胞中src原癌基因表达明显增高(P<0.05)。src原癌基因的高表达,提示在白血病发病中有造血微环境异常。

MIP-1β对长期培养体系中造血祖细胞增殖的影响

目的 :探讨MIP - 1β对长期培养体系中造血祖细胞增殖的影响。方法 :在骨髓长期培养的第 3、4、5周 ,分别加入MIP - 1β ,每周半换液时换出上清进行细胞计数 ,做CFU -GM培养。第 6周做3HTdR自杀实验 ,检测CFU -HPP。结果 :加MIP - 1β组上清中有核细胞数 ,CFU -GM数较对照组略有增加 ,但无显著差异(P >0 .0 5 ) ;第 6周MIP - 1β组造血祖细胞3HTdR自杀率较对照组明显增高。 (P <0 .0 5 )。CFU -HPP与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :MIP - 1β可解除骨髓基质层的内源性抑制活性 。

脐带血中长期培养启动细胞在转染FL和/或TPO基因骨髓基质细胞层上的生长

检测长期培养启动细胞 (LTC IC)含量可反映造血干细胞的存在和变化。用正常人骨髓基质细胞、人骨髓基质细胞系和转基因骨髓基质细胞系做培养底层 ,接种CD34+ 细胞 ,进行连续 8周的长期体外培养。研究结果表明 ,在共转染FL和TPO基因的基质细胞系HFT为培养底层所产生的LTC IC为 3.6 5± 0 .5 8 10 0 0CD34+ 细胞 ,在原代骨髓基质细胞层上所产生的LTC IC为2 .6 5± 0 .76 10 0 0CD34+ 细胞 ,二者在统计学上无显著性意义。结论 :转染FL TPO基因的HFT细胞系可作为LTC

长期培养的CIK细胞hTERT基因表达水平的动态变化

目的:初步探讨长期培养的CIK细胞hTERT基因表达水平的变化,进一步评价CIK细胞治疗的安全性。方法:抽取3名健康人外周静脉血进行CIK细胞培养,每周台盼蓝染色计数细胞,实时荧光定量PCR法检测培养第0、2、7、21及42天的CIK细胞hTERT基因的表达水平,流式细胞仪分析培养第0、7、14、28、49及56天的CIK细胞周期的改变并检测凋亡,MTT法测定培养第14、30天的CIK细胞对肺癌LTE细胞系的细胞毒活性。结果:CIK细胞在体外培养第28天至第35天细胞增殖达高峰,与第0天相比扩增约6.7至15.95倍,此后存活细胞逐渐减少,最终约60天左右细胞全部死亡,与流式细胞仪检测细胞凋亡结果一致。hTERT表达水平在培养48小时最高,较第0天增加约(2.84±1.27)倍,随后随培养时间延长表达水平下降,在培养1周时降至培养初始水平,并在此后的培养过程中维持低水平表达。在CIK培养1周时处于S期细胞比例最高,约(41.27±4.57)%,随培养时间延长G0/G1期细胞比例占绝大部分,在培养第49天G0/G1期细胞比例在90%以上[(97.56±1.17)%];CIK细胞在第14天杀瘤活性约(58.58±8.52)%,在30天时杀瘤活性明显下降,约(32.47±7.51)%。结论:长期培养的CIK细胞随培养时间延长hTERT表达水平下降,未见细胞永生化倾向。

人骨髓基质细胞的长期培养及其对病毒的敏感性

为了长期培养人骨髓基质细胞和研究其对病毒的敏感性 ,我们采用静置贴壁培养法 ,体外长期培养了胎儿、儿童和成人骨髓基质细胞 ,并将传至 5代以上的肌样骨髓基质细胞采用微量细胞病变 (CPE)法 ,开展了对 5种病毒的敏感性试验。结果表明 ,人骨髓基质肌样细胞对滤泡性口腔炎病毒 ,脊髓灰质炎病毒、I型和Ⅱ型单纯疱疹病毒均敏感 ,能产生明显的CPE ,其效价 (TCID50 )可达10 - 3～ 10 - 4,其中胎儿骨髓基质肌样细胞对病毒敏感性至少比儿童高 2倍 ,比成人高 4倍 ,即胎儿>儿童 >成人 ,但对B3型柯萨奇病毒均不敏感。我们的研究结果不仅可为人骨髓基质细胞体外长期培养提供了确实可行的简便方法 ,而且为该细胞对病毒的敏感性提供了实验依据 ,并为该细胞的利用开辟了新的应用前景。

混合脐血清在骨髓长期培养中的效应

目的 :揭示脐血清在骨髓长期培养中的效应 ,为脐血清的应用提供基础。方法 :以Dexter培养法 ,观察混合脐血清 (MCBS)、组合细胞因子 (CK)在长期骨髓培养中对骨髓单个核细胞 (BMMNC)形成鹅卵石造血区 (CAFC)、长期培养起始细胞 (LTC IC)、有核细胞 (NCC)的生长。结果 :10例人骨髓 ,10 6 BMMNC培养 5周后 ,CAFC、LTC IC分别为37.1± 12 .4/ (ml.well) ,40 .9± 10 .6 (ml.well) ,NCC由接种时的 10 6 (ml.well)增至 (1.63± 0 .17) 10 6 (ml.well) ,加入10 %MCBS则可使三者得到明显扩增 ,但不及组合CK ;10 %MCBS还能明显提高组合CK对三者的扩增 ;2 0 %MCBS不能取代骨髓长期培养中的血清和组合CK对三者的扩增。结论 :MCBS中含有类似GM CSF、SCF、IL 3、IL 6、EPO等一类能使CAFC、LTC IC、NCC得到明显扩增的“活性物质”

长期培养人胚神经干细胞对兔脊髓损伤的修复作用

[目的]观察长期培养人胚神经干细胞(hNSCs)的体外生长特性与转染EGFP基因后移植治疗兔脊髓横切损伤模型在体内的生物学活性及对神经结构修复和功能恢复的影响。[方法]体外分离、培养并鉴定hNSCs,用逆转录病毒介导的增强绿色荧光蛋白基因(EGFP)进行转染;制备兔T9全横断脊髓损伤模型;观察hNSCs移植对脊髓损伤后神经结构修复和功能恢复的影响。[结果]从胎龄10～20周的新鲜人胚脑皮层中成功分离出神经干细胞,该细胞具有连续克隆传代能力,诱导分化后表达分化细胞的特异抗原。本实验室已成功连续培养10个月(17代),转染EGFP基因后,仍保持未分化状态,能够自我更新形成新的神经球;移植入兔SCI模型后,hNSCs能在体内存活、迁移、分化并增殖。与对照组相比,hNSCs移植组明显促进了脊髓神经的再生、结构的修复和下肢运动功能的恢复。[结论]hNSCs移植促进了脊髓损伤后神经结构的修复和功能的恢复,是治疗急性脊髓损伤的一种有效方法。

哺乳动物耳蜗感觉上皮细胞长期培养体系的建立及临床意义

目的建立哺乳动物耳蜗感觉上皮细胞（CSEC）长期培养体系，为内耳毛细胞再生、分子及基因研究提供细胞来源。方法取1d龄wistar大鼠耳蜗感觉上皮作组织块培养，有限稀释法纯化并得到CSEC单克隆细胞系。胰蛋白酶＋胶原酶消化培养传代，传25代。取第25代CSEC，在倒置显微镜、透射电镜下对CSEC的生长特征、形态结构进行观察；免疫细胞化学检测细胞角蛋白18、波形蛋白，鉴定CSEC细胞来源。免疫荧光细胞化学、RT—PCR检测毛细胞标志物Brn．3a、Calretinin及AchRa9、MyosinVllamRNA的表达，鉴定CSEC特征。结果第25代CSEC均呈扁平、多角形、核大而圆的上皮细胞形态，细胞之间连接紧密，单层时呈“铺路石样”外观，可见“dome”结构；其可表达细胞角蛋白和不表达波形蛋白，微绒毛丰富，细胞间连接紧密，提示其为上皮细胞来源：并可表达毛细胞特征性标志物Brn3．a、Calretinin及AchRa9、Myosin Vlla mRNA。结论本实验成功建立了哺乳动物CSEC长期培养体系。长期培养的CSEC性状未发生明显改变，具有毛细胞前体细胞的特征。这为毛细胞再生的机制及内耳分子、基因研究提供了稳定的细胞来源。

诺基亚E系列手机面世 企业级市场需长期培养

10月24日,诺基亚在成都发布了其针对商务用户的首款E系列手机—E50。据了解,这款手机是目前市场上最小的基于S60平台的诺基亚智能手机,它不仅具有卓越的商务功能,还拥有E系列产品独特的诺基亚办公室工具套件,能够收发电子邮件、支持多种移动邮件(pushmail)以及多种企业应用解决方案,在娱乐功能方面,诺基亚E50具有出色的语音和多媒体功能,内置130万像素数码相机、高品质音乐播放器和视频播放器。

体外大鼠肝卵圆细胞的长期培养方法

背景:肝卵圆细胞是目前公认的成体肝干/祖细胞,但其体外长期培养时会不可避免地丢失干细胞的活性。目的:探索大鼠肝卵圆细胞体外长期培养的方法。方法:构建2-乙酰胺基芴/部分肝切除肝再生大鼠模型,通过酶消化和Percoll梯度离心分离纯化大鼠异质卵圆细胞并进行免疫染色鉴定,用含表皮生长因子、白血病抑制因子的培养基体外长期培养,后撤去表皮生长因子、白血病抑制因子,通过形态学的观察和分子标志物的检测判断其能否保持干/祖细胞活性。结果与结论:采用含表皮生长因子、白血病抑制因子的培养基体外培养卵圆细胞4个月后,大鼠异质卵圆细胞仍能表达肝细胞标志物ALB、胆管上皮细胞标志物CK-19,经不含表皮生长因子、白血病抑制因子的培养液继续培养后,卵圆细胞胎肝标志AFP表达量迅速下降。该研究结果表明大鼠肝卵圆细胞在表皮生长因子、白血病抑制因子等培养条件下可长期增殖并保持干细胞活性。

骨髓细胞体外长期培养前后特性比较及其临床意义

目的通过体外骨髓细胞的培养，观察其细胞特征，为临床治疗疾病提供新的帮助。方法对10例急性白血病患者和5例正常人进行体外长期骨髓细胞培养：结果获得了3株与基质细胞共生的有长期生存力的造血细胞，其形态原始，这些细胞均有造血干细胞标记，其细胞化学、细胞表面免疫标记及超微结构与培养前细胞相比均发生了很大的变化，其中1例急性白血病原有核型异常者经培养后只出现正常核型。这些细胞在体外可以增殖，培养3个月足够达到骨髓移植所需细胞数。结论初步分析这些细胞为正常造血细胞，可用于目前所进行的造血干细胞移植，为今后造血干细胞移植开创一个新的方法。

探讨绒毛细胞长期培养法在产前诊断及早孕和早中孕期自然流产病因检测中的应用价值

目的探究产前诊断及早孕和早中孕期自然流产病因检测中绒毛细胞长期培养法的应用效果,另分析产前诊断及早孕和早中孕期自然流产时期绒毛细胞长期培养法的检测结果差异。方法共计抽取1058例患者参与本次研究,其中使用B超引导进行产前诊断的患者236例,早孕和早中孕期自然流产患者822例,患者均于2015年12月-2019年11月入我院进行检查治疗,分组对比患者检测结果。结果绒毛细胞长期培养在产前诊断中绒毛培养的成功率与早孕和早中孕期自然流产中的成功率相比较高,早孕和早中孕期自然流产绒毛染色体异常率与产前检查相比明显较高,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者绒毛细胞长期培养法的培养时间分组对比无明显差异,无统计学意义(P>0.05)。结论绒毛细胞长期培养在临床中的应用可以作为产前诊断以及流产诊断的标志,临床诊断中需要确保检验标本的新鲜度以及无菌性,严格按照要求进行绒毛细胞培养,为临床诊断及治疗提供基础。

用于人类脂肪干细胞的纯化和体外长期培养的聚合物涂层

采用紫外固化法制备了基于丙烯酸酯类水凝胶的聚合物涂层(PC),并用X射线光电子能谱(XPS)、水接触角(WCA)和原子力显微镜(AFM)分别对PC进行了化学组成和表面性能的表征.在PC表面进行了人类脂肪干细胞(h ASC)的体外长期培养扩增,得到的第3代细胞的生物学表征结果表明,干细胞在PC表面能正常黏附生长,流式细胞仪检测发现干细胞对特征标记物CD49d,CD73,CD105的阳性显性比例较高,对HLA-DR和CD31几乎不显性,说明扩增的干细胞具有h ASC特征.对PC上扩增的干细胞进行诱导分化,并用油红O、茜素红和阿利新蓝分别进行染色分析,结果表明,该干细胞保留了h ASC的多能特性:能分化为成脂、成骨和成软骨细胞.含有单体甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵(DMC)、甲基丙烯酸环己酯(CHMA)和甲基丙烯酸-2-(二乙氨基)乙酯(DEAEMA)的PC2(质量比为3∶1∶2)在用于h ASC体外长期培养时,比其它PC和TCP更有利于细胞的黏附和增殖,纯化细胞,保持其多能性.实时荧光定量PCR(RT-q PCR)的分析表明PC2上得到的细胞更容易向成骨和成软骨细胞分化.