长链非编码RNA浆细胞瘤转化迁移基因1在结直肠癌组织和细胞中的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)在结直肠癌(CRC)组织和细胞中的表达及临床意义。方法选取2006年4月至2011年3月在新乡医学院第一附属医院接受手术切除治疗的CRC患者的癌组织和配对癌旁组织标本112例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测CRC组织和癌旁组织中PVT1 mRNA的表达;并分析PVT1 mRNA表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系。培养CRC细胞系LoVo和RKO细胞,待细胞融合度达70%以上时随机分为siPVT1组(转染PVT1干扰序列)和siRNA-对照序列组(转染阴性对照序列),转染后继续培养48 h。采用实时荧光定量PCR法检测LoVo和RKO细胞中PVT1mRNA表达,流式细胞术检测LoVo和RKO细胞增殖和凋亡情况;Transwell分析法检测LoVo和RKO细胞的侵袭和迁移能力。结果CRC组织和癌旁组织中PVT1 mRNA高表达率分别为61.61%(69/112)、44.64%(50/112),CRC组织中PVT1 mRNA高表达率显著高于癌旁组织(χ^2=6.472,P<0.05)。CRC组织中PVT1表达与患者的年龄及性别无关(P>0.05),与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移及远处转移有关(P<0.05)。siPVT1组LoVo、RKO细胞中PVT1 mRNA相对表达量均显著低于siRNA-对照序列组(P<0.05)。培养0、24 h时,siPVT1组与siRNA-对照序列组LoVo细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);培养48、72、96 h时,siPVT1组LoVo细胞增殖能力显著低于siRNA-对照序列组(P<0.05)。培养0 h时,siPVT1组与siRNA-对照序列组RKO细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);培养24、48、72、96 h时,siPVT1组RKO细胞增殖能力显著低于siRNA-对照序列组(P<0.05)。siPVT1组LoVo和RKO细胞凋亡率均显著高于siRNA-对照序列组(P<0.05)。siPVT1组LoVo、RKO细胞迁移和侵袭数均显著低于siRNA-对照序列组(P<0.01)。结论PVT1在CRC组织中呈高表达,且与肿瘤的恶性程度有关,沉默LoVo、RKO细胞中PVT1可有效抑制细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导细胞凋亡。

长链非编码RNA牛磺酸上调基因1对胃癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)对胃癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响。方法基于公共数据库分析LncRNA TUG1在胃癌组织和癌旁组织中的表达水平。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测lncRNA TUG1在胃癌细胞系中的表达;采用si-TUG1、si-NC转染胃癌细胞SGC-7901,分别采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、克隆形成实验、Transwell实验和基质胶成管实验分析敲低lncRNA TUG1对胃癌细胞增殖、集落形成、迁移和血管生成的影响。基于公共数据库分析烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)基因与lncRNA TUG1的相关性。采用放线菌素D实验验证ALKBH5与lncRNA TUG1的调控关系。通过细胞功能实验分析敲低ALKBH5对胃癌细胞增殖、集落形成、迁移和血管生成的影响。结果lncRNA TUG1在胃癌组织和胃癌细胞系中均表达上调;敲低lncRNA TUG1后,SGC-7901细胞增殖、集落形成、迁移、血管生成能力均较对照细胞下降,差异有统计学意义(P<0.05)。数据库分析结果显示,在胃癌中,ALKBH5与lncRNA TUG1表达呈正相关(r=0.37,P<0.05)。与对照细胞相比,敲低ALKBH5的SGC-7901细胞lncRNA TUG1的RNA稳定性下降,且细胞增殖、集落形成、迁移、血管生成能力均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ALKBH5通过诱导lncRNA TUG1表达,促进胃癌细胞的增殖、集落形成、迁移和血管生成。

转录因子ETS1激活长链非编码RNA XIST促进胶质瘤细胞增殖

目的探讨ETS原癌基因1(ETS1)在胶质瘤中的生物学功能及其下游机制。方法生物信息学和免疫组织化学分析ETS1在胶质瘤组织中的表达;实时定量PCR(qRT-PCR)检测ETS1 mRNA和长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异转录本(XIST)的表达水平。CCK-8和5-乙炔基-2'-脱氧尿苷摄入实验检测细胞增殖。Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Bak、Bcl-2)的表达。PROMO数据库预测ETS1与XIST启动子的结合位点。双荧光素酶报告基因实验和染色质免疫共沉淀-PCR用于验证ETS1与XIST启动子区域的结合关系。cBioPortal数据库分析ETS1 mRNA与lncRNA XIST在胶质瘤组织中表达的相关性。结果ETS1 mRNA和蛋白的表达水平在胶质瘤中显著上调(P<0.05)。敲低ETS1可显著抑制胶质瘤细胞增殖(P<0.05)并促进细胞凋亡(P<0.05)。ETS1可靶向结合XIST并促进XIST的表达(P<0.05),过表达XIST可逆转敲低ETS1对胶质瘤细胞增殖的抑制作用(P<0.05)以及对细胞凋亡的促进作用(P<0.05)。结论ETS1在胶质瘤组织中高表达,其可能通过促进lncRNA XIST高表达而减少细胞凋亡和促进胶质瘤细胞增殖。

长链非编码RNA母系表达基因8通过微小RNA-495-3p调控急性髓性白血病细胞高迁移率族蛋白A1表达及对细胞增殖、凋亡的作用机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因8(MEG8)通过微小RNA-495-3p(miR-495-3p)调控急性髓性白血病细胞(AML)高迁移率族蛋白A1(HMGA1)表达及对细胞增殖、凋亡的机制。方法:选取50例经确诊为AML患者的骨髓活检标本与52例健康骨髓捐赠者骨髓标本,常规培养人AML细胞株HL-60,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法骨髓单个核细胞中lncRNA MEG8 mRNA表达。将HL-60细胞分为六组,即HL-60组(HL-60细胞)、si-NC组(转染si-NC)、si-lncRNA MEG8组(转染si-lncRNA MEG8)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、miR-495-3p mimic组(转染miR-495-3p mimic)、si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组(转染si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic),CCK-8法检测培养24、48、72 h各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中HMGA1表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MEG8、miR-495-3p、HMGA1之间的关系。结果:与对照组相比,观察组lncRNA MEG8 mRNA表达升高(P<0.05)。与miR NC+MEG8 WT组比较,miR-495-3p mimic+MEG8 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05),与miR NC+HMGA1 WT组比较,miR-495-3p mimic+HMGA1 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组、mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8组、miR-495-3p mimic组和si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组24、48 h细胞增殖能力均显著下降,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组细胞增殖率最低(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HL-60细胞凋亡率高于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HMGA1蛋白表达低于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。结论:沉默lncRNA MEG8可能通过上调miR-495-3p来下调HMGB1,来抑制HL-60细胞的恶性生物学行为,可为探索AML潜在治疗靶点提供了新思路。

沉默长链非编码RNA浆细胞瘤可变易位1基因提高胃癌细胞对阿霉素的化疗敏感性

目的研究长链非编码RNA浆细胞瘤可变易位1 (PVT1)基因调控胃癌细胞对阿霉素化疗敏感性的作用。方法 RNA干扰靶向沉默SGC7901/ADR细胞中PVT1的表达,实时定量PCR检测沉默效果。增强CCK8法检测SGC7901/ADR细胞的增殖活力和化疗药物敏感性;碘化丙啶单染流式细胞术检测SGC7901/ADR细胞的细胞周期;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测SGC7901/ADR细胞的凋亡。结果 PVT1沉默能够显著降低阿霉素在SGC7901/ADR细胞中的半数抑制浓度。在0.5μg/mL阿霉素的作用下,PVT1沉默能够抑制SGC7901/ADR细胞的增殖活力,阻滞细胞于G1期,并促进细胞凋亡。PVT1沉默能够提高SGC7901/ADR细胞对阿霉素的化疗敏感性,并提高阿霉素诱导的细胞毒性作用。结论长链非编码RNA PVT1基因与胃癌的化疗耐药相关,PVT1沉默能够提高胃癌耐药细胞对阿霉素的化疗敏感性。

长链非编码RNA浆细胞瘤多样异位基因1对幽门螺旋杆菌感染胃上皮细胞系引起的炎症反应和细胞迁移的影响

目的研究长链非编码RNA浆细胞瘤多样异位基因1(PVT1)在幽门螺旋杆菌(HP)感染相关胃癌中的作用。方法在HP感染的胃黏膜正常上皮细胞(GES-1)中,用实时定量PCR(qRT-PCR)检测PVT1的表达;通过瞬时转染小干扰RNA,在胃癌细胞系SGC-7901中敲低PVT1,然后与HP共培养,用qRT-PCR检测炎症相关细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-1β、IL-6及IL-8的表达情况;在敲低PVT1后,通过细胞划痕实验,检测PVT1对胃癌细胞增殖及迁移能力的影响。RNA下拉联合质谱分析技术检测能够与PVT1相互结合的蛋白,并用RNA下拉实验联合Western blot验证质谱分析结果的准确性。结果在HP感染的胃黏膜正常上皮细胞GES-1中,PVT1明显上调(t=7.160,P=0.019)。在胃癌细胞中敲低PVT1,再用HP感染,发现炎症因子TNF-α(t=3.899,P=0.011)、IL-1β(t=14.610,P=0.000)、IL-8(t=6.557,P=0.001)的表达受到明显抑制。PVT1敲低后,对胃癌细胞的增殖能力无影响,但抑制细胞的迁移能力。PVT1可能与RPS8蛋白相互作用。结论PVT1可能作为促炎因子促进胃癌细胞迁移,在HP感染相关的胃癌中发挥调节作用。

长链非编码RNA Pvt1致癌基因在胶质瘤细胞增殖和上皮-间充质转化过程中的作用研究

目的研究长链非编码RNA Pvt1致癌基因(PVT1)在胶质瘤细胞增殖和上皮-间充质转化(EMT)过程中的作用。方法收集不同级别胶质瘤临床样本,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PVT1表达水平;U87MG和U251细胞系分别转染siRNA-PVT1及siNC后,CCK-8检测细胞增殖活性,Transwell法检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹(Western blot)法检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达情况。结果与正常脑组织相比,随着胶质瘤分级的增加,PVT1表达水平逐渐升高(P﹤0.05)。胶质母细胞系U87MG和U251的PVT1表达水平均明显高于正常HEB细胞系(P﹤0.01)。培养2、3天后,siRNA-PVT1组U87MG和U251细胞光密度值均低于siNC组。与siNC组相比,siRNA-PVT1组U87MG和U251细胞侵袭细胞数量均减少。siRNA-PVT1组U87MG和U251细胞系中E-cadherin蛋白相对表达量均高于siNC组,N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量均低于siNC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论长链非编码RNA PVT1在胶质瘤中高表达,其表达水平与胶质瘤恶性程度有关;沉默PVT1可抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭和EMT过程,为胶质瘤的基因疗法提供了一个新的潜在靶点。

长链非编码RNA叉头框蛋白D2相邻对链RNA1在胶质瘤细胞中的表达和功能

目的研究长链非编码RNA叉头框蛋白D2相邻对链RNA1(lncRNA FOXD2-AS1)对胶质瘤生物学行为的影响。方法首先用qPCR实验检测FOXD2-AS1在U251、LN229、U87这3种胶质瘤细胞系中的表达情况,筛选出高表达的2种细胞系进行培养,再构建慢病毒载体转染2种细胞系敲低FOXD2-AS1作为实验组,将空载慢病毒颗粒转染的细胞作为阴性对照组,将常规培养未进行转染的细胞作为空白组,采用划痕实验、Transwell实验检测2种胶质瘤细胞系中各组细胞迁移及侵袭能力,将FOXD2-AS1敲低后进行转录组测序,进行差异基因取交集,并对共同差异基因进行富集分析。结果qPCR实验显示FOXD2-AS1在LN229、U251这2种胶质瘤细胞系中明显高表达,与阴性对照组和空白组相比,被慢病毒载体转染敲低FOXD2-AS1时,2种胶质瘤细胞系中实验组细胞迁移及侵袭能力明显下降。生信数据库分析敲低FOXD2-AS1时发现2种胶质瘤细胞系共有48个相关差异性表达基因,进一步通过KEGG通路富集分析发现,2种胶质瘤细胞系中FOXD2-AS1敲低都与多种信号通路(细胞过程中的聚焦粘附、环境信息处理中的神经活性配体-受体相互作用、遗传信息处理中的剪接体、人类疾病中的癌症通路、新陈代谢中的代谢途径、有机系统中的补体和凝血级联反应)存在相关性。结论LncRNA FOXD2-AS1在胶质瘤细胞迁移、侵袭中发挥作用,其可能的作用机制可还有待后续进一步研究。

长链非编码RNA-浆细胞瘤转化迁移基因在糖尿病肾脏疾病中的表达及其临床意义的研究

目的 探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)-浆细胞瘤转化迁移基因1(plasmacytoma variant translocation 1,PVT1)在糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease, DKD)表达变化并分析其临床意义。方法 选取2019年5月至2021年5月收治的DKD患者76例(DKD组)和2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)患者81例(T2DM组)为研究对象,另选取健康志愿者79名为对照组,使用实时荧光定量PCR法检测纳入对象外周血LncRNA-PVT1表达水平,比较各组纳入对象LncRNA-PVT1表达、肾功能、血糖水平的变化,Spearman相关性分析血LncRNA-PVT1表达与肾功能指标和血糖指标水平关系,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve, ROC)分析LncRNA-PVT1表达对DKD发生的预测效能。结果 与对照组相比,DKD组、T2DM组患者的体重指数(body mass index, BMI)、LncRNA-PVT1表达、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin, HbA1c)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)、尿β2-微球蛋白(microglobulin, MG)、尿α1-MG、尿微量白蛋白/尿肌酐比值(albumin-creatinine ratio, ACR)、尿素氮(urea nitrogen, BUN)、血肌酐(serum creatinine, Scr)、胱抑素C(cystatin C,Cys C)水平均升高(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)水平降低(P<0.05)。与T2DM组相比,DKD组患者的LncRNA-PVT1表达、HbA1c、LDL-C、尿β2-MG、尿α1-MG、ACR、BUN、Scr、Cys C水平均升高(P<0.05),HDL-C水平降低(P<0.05)。LncRNA-PVT1表达与HbA1c、LDL-C、尿β2-MG、尿α1-MG、ACR、BUN、Scr、Cys C水平呈正相关(P<0.001),而与HDL-C水平呈负相关(P<0.001)。LncRNA-PVT1表达对DKD发生预测的曲线下面积为0.907(95%CI:0.862~0.953,P<0.001),截断值为1.830。结论 LncRNA-PVT 1表达在DKD中呈升高趋势且与肾功能、血糖水平存在相关性,还对DKD发生有较高的预测价值。

敲低长链非编码RNA AFAP1-AS1抑制TPC-1甲状腺乳头状癌细胞上皮间质转化及其侵袭和迁移

目的检测甲状腺乳头状癌组织长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白丝相关蛋白1反义RNA1(AFAP1-AS1)的表达,敲低TPC-1甲状腺乳头状癌细胞AFAP1-AS1,研究其对TPC-1细胞上皮间质转化(EMT)的影响及相关分子机制。方法采用实时定量PCR检测60例甲状腺乳头状癌组织lncRNA AFAP1-AS1表达;利用RNA干扰技术(RNAi)敲低TPC-1甲状腺乳头状癌细胞AFAP1-AS1,设置AFAP1-AS1敲低(shAFAP1-AS1)组和阴性对照RNA(shNC)组及未转染的TPC-1细胞为对照组。通过集落形成实验检测TPC-1细胞集落形成能力、 TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;通过实时定量PCR检测敲低AFAP1-AS1后,细胞上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、β联蛋白(β-catenin)、锌指转录因子snail2的mRNA水平, Western blot法检测其蛋白水平。结果与癌旁组比较,甲状腺乳头状癌组中AFAP1-AS1 mRNA表达水平显著增加;敲低AFAP1-AS1后, TPC-1细胞的集落形成能力、侵袭和迁移能力均显著降低;与shNC组和对照组相比,敲低AFAP1-AS1后,细胞snail2、 vimentin和β-catenin的mRNA和蛋白表达显著降低,而E-cadherin的mRNA和蛋白表达显著增加。结论 lncRNA AFAP1-AS1在甲状腺乳头状癌组织高表达,敲低TPC-1细胞AFAP1-AS1后,癌细胞的集落形成能力、侵袭和迁移能力显著下调,可能与抑制细胞EMT过程有关。

长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1参与盆腔器官脱垂的机制

背景:作者所在课题组前期通过高通量测序结果发现长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1在盆腔器官脱垂患者子宫主韧带中表达明显降低,转化生长因子β1信号通路也是相关通路之一。目的:观察长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1对盆底韧带成纤维细胞的影响,探讨其在盆腔器官脱垂疾病发病机制中的可能作用。方法:提取大鼠盆底韧带组织标本,分离成纤维细胞,进行原代培养。慢病毒构建长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1干扰和过表达载体加入成纤维细胞中。通过免疫荧光、MTT、细胞划痕实验、流式细胞术来检测成纤维细胞的形态、增殖、迁移和凋亡情况;RT-PCR和Western-blot检测转化生长因子β1、smad2/3、c-Myc的mRNA及蛋白表达情况。结果与结论:①长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1过表达时可显著促进成纤维细胞的增殖,提高细胞的迁移能力,抑制成纤维细胞凋亡;长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1干扰时结果相反;②此外,长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1过表达时细胞中的c-Myc、转化生长因子β1、smad2/3的mRNA和蛋白相对表达量均明显增加,其干扰时则显著抑制c-Myc和转化生长因子β1的表达;③提示长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1能够影响成纤维细胞的形态和生物学功能,可能与转化生长因子β1/smad2/3/c-Myc通路有关;该研究可为盆腔器官脱垂患者的临床诊断和治疗提供新思路。

长链非编码RNA HOXC-AS1对胃癌细胞增殖、迁移、成瘤的调节作用

目的观察长链非编码RNA(lncRNA)HOXC-AS1对胃癌细胞增殖、迁移、成瘤能力的调节作用。方法(1)采用实时定量PCR方法检测胃癌细胞株BGC823、SGC7901细胞和正常胃黏膜细胞株GES-1细胞中的HOXCAS1。(2)将胃癌BGC823、SGC7901细胞分别分为HOXC-AS1小干扰RNA(siRNA)组、siRNA对照序列组、HOXCAS1过表达组、空质粒组。HOXC-AS1干扰组转染HOXC-AS1小干扰RNA(siRNA),siRNA对照序列组转染siRNA对照序列,HOXC-AS1过表达组转染HOXC-AS1过表达质粒,空质粒组转染空质粒。继续培养24 h,采用MTT法和克隆形成实验观察各组细胞增殖能力,采用Transwell小室实验和细胞划痕实验观察各组细胞迁移能力(结果以穿膜细胞数和划痕愈合率表示)。(3)取5周龄雌性裸鼠20只,随机分为移植瘤组和对照组,各10只,背部皮下分别注射转染后24 h的HOXC-AS1 siRNA组和siRNA对照序列组BGC823细胞约1.5×10~6个,16 d后处死小鼠测肿瘤体积。结果 (1)BGC823、SGC7901细胞中HOXC-AS1的表达量相对于GES-1细胞分别为4.58±0.62、2.89±0.25倍。BGC823、SGC7901细胞HOXC-AS1相对表达量均高于GES-1细胞(P均<0.05)。(2)BGC823、SGC7901细胞HOXC-AS1 siRNA组的OD490值、形成的克隆数、穿膜细胞数、划痕愈合率均低于siRNA对照序列组(P均<0.05);HOXC-AS1过表达组的OD490值、形成的克隆数、穿膜细胞数、划痕愈合率均高于空质粒组(P均<0.05)。(3)移植瘤组、对照组裸鼠肿瘤体积分别为(353.93±147.85)、(706.24±253.25)mm3;质量分别为(0.30±0.13)、(0.75±0.11)mg。移植瘤组裸鼠肿瘤体积和质量均大于对照组,P均<0.05。结论胃癌细胞中HOXC-AS1表达升高。lncRNA HOXC-AS1可促进胃癌细胞增殖、迁移和成瘤。

长链非编码RNA SNHG1对结直肠癌增殖、迁移的影响及调控机制

目的:探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(SNHG1)对结直肠癌(CRC)增殖、迁移的影响及其调控机制。方法:采用实时荧光定量PCR检测人正常结直肠上皮细胞(FHC)、结直肠腺癌细胞系(HT29)细胞中IncRNA SNHG1的表达水平。将HT29细胞分为干扰组(si-SNHG1)和对照组(si-NC),分别转染SNHG1 siRNA和NC siRNA,采用MTT检测细胞增殖活力,Transwell实验检测细胞迁移能力,Western blot检测JAK-STAT信号通路相关蛋白表达。结果:HT29细胞中SNHG1的表达明显高于FHC细胞,差异有统计学意义(t=17.045,P<0.05);si-SNHGI组细胞增殖活性、迁移细胞数均降低,差异有统计学意义(t=16.317、12.714,P<0.05),STAT3蛋白表达差异无统计学意义(t=1.063,P>0.05),P-STAT3蛋白表达减少(t=15.473,P<0.05)。结论:SNHG1在CRC细胞中呈高表达,可促进CRC细胞增殖、迁移,其机制可能与SNHG1上调P-STAT3蛋白的表达促进JAK-STAT信号通路活化有关。

甲状腺癌组织中长链非编码RNA浆细胞瘤变体易位1和微小RNA-195-5p表达及临床意义

目的探究甲状腺癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)浆细胞瘤变体易位1(PVT1)和微小RNA(miRNA)-195-5p表达及临床意义。方法荧光实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测江苏省常州市中医医院2017年4月至2020年1月收治的82例甲状腺癌组织、癌旁正常组织及82例甲状腺良性肿瘤组织中lncRNA PVT1和miR-195-5p的表达,分析这两个指标与甲状腺癌患者临床病理参数的关系及其相关性。结果甲状腺癌组织中lncRNA PVT1相对表达量高于甲状腺良性肿瘤组织及癌旁正常组织、而miR-195-5p相对表达量低于甲状腺良性肿瘤组织及癌旁正常组织(均P <0.05)。甲状腺癌组织中,有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期的lncRNA PVT1相对表达量高于无淋巴结转移及Ⅰ~Ⅱ期;有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期的miR-195-5p相对表达量低于无淋巴结转移及Ⅰ~Ⅱ期(均P <0.05);甲状腺癌组织中lncRNA PVT1表达与miR-195-5p表达呈负相关(r=-0.731,P <0.01)。结论甲状腺癌组织中lncRNA PVT1表达上调,而miR-195-5p表达下调,二者均与淋巴结转移和TNM分期有关,对评估患者病情及确定治疗靶点具有潜在的应用价值。

长链非编码RNA SPRY4-IT1对髓母细胞瘤增殖及侵袭转移的影响

目的:探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1(Lnc RNA)对髓母细胞瘤增殖及侵袭转移的影响。方法:髓母细胞瘤Daoy细胞分为对照组和si-SPRY4-IT1组,分别利用脂质体Lipofectamine 2000将阴性对照荧光序列和SPRY4-IT1-si RNA转入细胞中,采用Real-time PCR检测转染后各组细胞中SPRY4-IT1的表达情况,CCK-8实验及平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化,以细胞体外侵袭、迁移实验分别检测细胞侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测SPRY4-IT1对基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白的影响。结果:si-SPRY4-IT1组SPRY4-IT1 m RNA表达水平、细胞体外增殖能力、细胞侵袭、迁移能力、细胞MMP-2蛋白表达均较对照组明显降低(P<0.05),而MMP-9蛋白表达未见明显变化。结论:干扰长链非编码RNA SPRY4-IT1在髓母细胞瘤Daoy细胞中的表达能显著抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力。

长链非编码RNA RUNX1-IT1对口腔鳞状细胞癌增殖、迁移的影响及其作用机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)RUNX1-IT1对口腔鳞状细胞癌(OSCC)增殖、迁移的影响及其作用机制。方法利用实时qPCR检测lncRNA RUNX1-IT1在OSCC组织和细胞系中的表达水平。采用CCK8、流式细胞术以及Transwell实验检测OSCC细胞生物学行为。利用Western blotting检测上皮-间质转化(EMT)过程相关的蛋白表达。结果lncRNA RUNX1-IT1在OSCC组织和细胞系中表达水平与癌旁正常组织(P<0.001)和正常角质细胞(P<0.01)比较显著增高。lncRNA RUNX1-IT1表达水平和淋巴结转移相关(P<0.05)。过表达或沉默lncRNA RUNX1-IT1后可以调节E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Vimentin蛋白水平;也显著上调或下调细胞增殖迁移相关的蛋白(PCNA、Cyclin D1、MMP2)水平。结论lncRNA RUNX1-IT1在OSCC中高表达,且可能通过EMT过程调控OSCC细胞增殖、迁移。

长链非编码RNA CCAT1对子宫内膜癌细胞迁移侵袭及上皮-间质转化的影响

目的:探讨CCAT1对子宫内膜癌细胞迁移侵袭及上皮-间质转化的影响。方法:q PCR检测CCAT1在癌组织中的表达水平,分析其与子宫内膜癌的发生及癌恶性程度的关系;靶向沉默CCAT1,划痕愈合试验和Transwell侵袭试验检测细胞迁移及侵袭能力;q PCR及Western blot检测相关分子的表达水平。结果:CCAT1的表达水平在子宫内膜癌组织中显著增高(P<0.001),且与肿瘤的恶性程度呈正相关;沉默CCAT1后,子宫内膜癌细胞的迁移距离及穿膜数目均显著减少;沉默CCAT1抑制转移相关基因(MMP2和MMP9)及间质标志分子(Snail,Zeb1和Twist1)的表达水平,增强上皮标志分子(E-cadherin和ZO-1)的表达水平。结论:CCAT1在子宫内膜癌中表达上调,且其表达水平与肿瘤的恶性程度呈正相关;沉默表达CCAT1抑制子宫内膜癌细胞的迁移侵袭及上皮-间质转化功能。

人参皂苷Rh2调节转化生长因子β活化的长链非编码RNA对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨人参皂苷Rh2(G-Rh2)调控转化生长因子β活化的长链非编码RNA(LncRNA-ATB)对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人星形胶质细胞NHA和胶质瘤细胞(SHG-44、A172、Ln229、U87、U251)的LncRNA-ATB水平。培养U251细胞,将细胞分为si-NC组(阴性对照)和si-ATB组(干扰LncRNA-ATB),采用CCK-8、Transwell小室实验和划痕实验分别评价细胞增殖、迁移和侵袭能力。不同浓度G-Rh2处理U251细胞以计算G-Rh2的半数抑制浓度(IC_(50))值。将细胞分为对照组、G-Rh2组(20μg/ml G-Rh2)和G-Rh2+ATB组(20μg/ml G-Rh2+过表达LncRNA-ATB),检测细胞增殖、迁移和侵袭情况,qPCR和Western blotting检测基质金属蛋白酶(MMP)-9和Snail的水平。结果LncRNA-ATB在胶质瘤细胞的水平低于NHA细胞(P<0.05)。与si-NC组相比,si-ATB组U251细胞增殖、迁移和侵袭能力均受抑制(P<0.05)。G-Rh2的IC_(50)值为20.992μg/ml,并能够抑制U251细胞中LncRNA-ATB的表达(P<0.05)。G-Rh2组U251细胞增殖活力、迁移和侵袭能力低于对照组;G-Rh2+ATB组U251细胞增殖活力、迁移和侵袭能力明显高于G-Rh2组。G-Rh2组MMP-9和Snail的水平低于对照组(P<0.05),G-Rh2+ATB组MMP-9和Snai水平高于G-Rh2组(P<0.05)。结论干扰LncRNA-ATB表达抑制U251细胞的增殖、迁移和侵袭过程,G-Rh2可能下调LncRNA-ATB表达来抑制U251细胞的增殖、迁移和侵袭,发挥抗肿瘤功效。

长链非编码RNA变异性浆细胞瘤异位1通过调控微小RNA-214-3p/人凋亡抑制蛋白X轴影响皮肤黑色素瘤细胞的顺铂耐药性

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)变异性浆细胞瘤异位1(PVT1)调控微小RNA(miR)-214-3p/人凋亡抑制蛋白X(XIAP)对皮肤黑色素瘤(CMM)细胞的顺铂(DDP)耐药性的影响。方法该研究起止时间为2020年3—9月。体外培养人皮肤黑色素瘤SK-MEL-1/DDP细胞,将细胞分为空白对照组(NG组,不做处理)、阴性转染组(NC组,转染PVT1-inhibitor阴性对照)、抑制PVT1表达组(PVT1-inhibitor组,转染PVT1-inhibitor)、共转染组(PVT1-inhibitor-miR-214-3p-inhibitor组,转染PVT1-inhibitor同时转染miR-214-3p-inhibitor)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SK-MEL-1/DDP细胞PVT1、miR-214-3p水平;MTT法检测四组SK-MEL-1/DDP细胞增殖能力及对DDP的耐药性;流式细胞仪检测四组SK-MEL-1/DDP细胞凋亡率;蛋白质印迹法(Western blotting)检测四组SK-MEL-1/DDP细胞XIAP、细胞增殖相关核抗原Ki-67、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。应用TargetScan数据库预测PVT1与miR-214-3p的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验验证。结果与NG组、NC组比较,PVT1-inhibitor组SK-MEL-1/DDP细胞增殖抑制率[(22.87±3.43)%比(0.00±0.00)%、(0.08±0.01)%]、凋亡率[(40.05±6.06)%比(15.69±2.35)%、(17.01±2.55)%]、miR-214-3p及Bax表达均显著升高(P<0.05),PVT1、药物半数抑制浓度(IC_(50))值[(15.13±0.45)µg/L比(45.03±1.35)µg/L、(47.81±1.33)µg/L]、Ki-67、Bcl-2蛋白、XIAP mRNA及其蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与PVT1-inhibitor组比较,PVT1-inhibitor+miR-214-3p-inhibitor组SK-MEL-1/DDP细胞增殖抑制率[(15.12±2.27)%比(22.87±3.43)%]、凋亡率[(27.88±4.19)%比(40.05±6.06)%]、miR-214-3p及Bax表达均显著降低(P<0.05),IC_(50)值[(23.98±0.72)µg/L比(15.13±0.45)µg/L]、Ki-67、Bcl-2蛋白、XIAP mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示miR-214-3p是PVT1的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系。结论下调lncRNA PVT1可靶向上调miR-214-3p表达,抑制XIAP表达,减弱CMM SK-MEL-1/DDP细胞对DPP耐药性。

长链非编码RNA尿路上皮癌相关基因1对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)尿路上皮癌相关基因1(UCA1)在乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测UCA1在正常乳腺上皮细胞株MCF-10A和乳腺癌细胞株MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231中的表达.通过小干扰RNA(siRNA)构建UCA1低表达细胞株,质粒构建UCA1过表达细胞株,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、平板克隆法检测细胞增殖能力,qRT-PCR和蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)基因和蛋白表达量以及基质金属蛋白酶2(MMP2)蛋白表达情况,细胞划痕和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力.结果 与正常乳腺上皮细胞株MCF-10A相比,UCA1在乳腺癌细胞株中的表达均升高,以MCF-7细胞株最高;敲低UCA1可抑制MCF-7细胞的增殖、集落形成、细胞划痕愈合、迁移和侵袭(P﹤0.05),且cyclin D1基因和蛋白水平以及MMP2蛋白表达量均下调.过表达UCA1可促进MCF-7细胞的增殖、集落形成、细胞划痕愈合、迁移和侵袭(P﹤0.05),且cyclin D1基因和蛋白水平以及MMP2蛋白表达量均上调.结论 UCA1在乳腺癌细胞中表达升高,可能是通过调控cyclin D1和MMP2促进乳腺癌的增殖、迁移和侵袭.