LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT在糖尿病肾病患者中的表达及与肾功能的相关性研究

目的探究长链非编码RNA锌指E盒结合同源盒蛋白1反义链1(LncRNA ZEB1-AS1)和长链非编码RNA性别决定相关基因簇2重叠转录本(LncRNA SOX2OT)在糖尿病肾病(DN)患者中的表达及与肾功能的相关性。方法选取于2021年11月—2023年12月在武汉大学人民医院肾内科收治的DN患者106例为DN组,并根据24 h尿蛋白定量(24 h Upro)水平分为正常蛋白尿亚组43例(<30 mg)、微量蛋白尿亚组39例(30~<300 mg)、大量蛋白尿亚组24例(≥300 mg),另选取同期医院单纯糖尿病患者106例作对照组,检测患者血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平;Pearson法分析LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT与肾功能指标的相关性;Logistic分析影响DN患者肾功能损伤的因素。结果DN组血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平低于对照组(t=11.471、10.257,P均<0.001)。血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT比较,正常尿蛋白亚组>微量尿蛋白亚组>大量尿蛋白亚组(F=58.720、117.722,P均<0.001),BUN、SCr、UA水平比较,正常尿蛋白亚组<微量尿蛋白亚组<大量尿蛋白亚组,差异均有统计学意义(F=122.493、595.589、53.178,P均<0.001);LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT分别与BUN、SCr、UA呈负相关(r=-0.487、-0.498、-0.521,-0.527、-0.515、-0.534,P均<0.001);Logistic回归分析显示,糖尿病病程长及高BUN、SCr、UA水平是影响DN患者肾功能损伤的危险因素[OR(95%CI)=1.672(1.128~2.479)、2.839(1.534~5.253)、2.754(1.512~5.017)、2.693(1.464~4.954)],高LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT是保护因素[OR(95%CI)=0.875(0.798~0.959)、0.898(0.832~0.969)]。结论血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平与DN患者肾功能有关,可能是评估DN患者肾功能的潜在指标。

长链非编码RNA ZEB2-AS1在非小细胞肺癌中的表达及临床病理特征与预后的关系

目的探讨长链非编码核糖核酸(lncRNA)锌指E盒结合同源盒蛋白2-AS1(lncRNA ZEB2-AS1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达水平,并分析其与患者临床病理特征及预后的关系。方法选取笔者医院2013年1月~2018年3月行手术治疗的NSCLC患者129例,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺癌组织和癌旁正常肺组织中lncRNA ZEB2-AS1表达,并收集患者临床病理资料,分析其与患者临床病理特征关系。对肺癌患者预后进行随访,采用Kaplan-Meier法分析lncRNA ZEB2-AS1表达与患者预后关系。采用COX比例风险模型分析影响肺癌患者预后的相关因素。结果与癌旁正常肺组织比较,NSCLC组织中lncRNA ZEB2-AS1的表达水平显著升高(P<0.001)。lncRNA ZEB2-AS1的表达水平与NSCLC患者是否发生淋巴结转移、肿瘤分化程度、TNM分期显著相关(P<0.001)。lncRNA ZEB2-AS1高表达组总生存期显著低于低表达组(34.5%vs 70.2%,P=0.013)。COX多因素分析显示分化程度、淋巴转移、TNM分期、lncRNA ZEB2-AS1表达均是影响NSCLC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论lncRNA ZEB2-AS1在NSCLC组织中呈高表达,与淋巴结转移、肿瘤分化程度、TNM分期显著相关,是影响患者预后的独立危险因素,可将其作为NSCLC患者早期诊断的标志物及治疗靶点。

长链非编码RNA SNHG16对人宫颈癌细胞SiHa迁移侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)SNHG16通过调控微RNA(miR)-216-5p/锌指E盒结合同源框1(ZEB1)轴对人宫颈癌细胞SiHa迁移、侵袭的影响及机制。方法将对数生长期人宫颈癌细胞SiHa随机分为干扰小RNA(siRNA)组、阴性对照组和空白组。siRNA组、阴性对照组SiHa细胞应用脂质体转染法分别进行lncRNA SNHG16-siRNA、阴性对照-siRNA质粒转染,空白组细胞不作处理。转染后48 h,采用倒置荧光显微镜观察转染效率,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定各组SiHa细胞lncRNA SNHG16 mRNA相对表达量,生物信息学软件靶向预测和双荧光素酶实验验证lncRNA SNHG16与miR-216-5p的靶向关系,划痕实验测定各组细胞迁移能力,Transwell小室实验测定各组细胞侵袭能力,qRT-PCR测定各组细胞miR-216-5p、ZEB1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA相对表达量,Western blot法测定各组细胞ZEB1、E-cadherin相对表达量。结果转染48 h后,各组细胞转染效率均>80%;siRNA组SiHa细胞lncRNA SNHG16 mRNA相对表达量显著低于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组lncRNA SNHG16 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。LncRNA SNHG16与miR-216-5p基因3′UTR存在互补结合位点;siRNA组野生型荧光素酶报告质粒相对活性值显著高于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组野生型荧光素酶报告质粒相对活性值比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA组SiHa细胞迁移率显著低于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组细胞迁移率比较差异无统计学意义(P>0.05);siRNA组每个视野平均穿膜细胞数显著少于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组每个视野平均穿膜细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA组SiHa细胞miR-216-5p mRNA相对表达量、E-cadherin mRNA及蛋白相对表达量均高于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组miR-216-5p mRNA相对表达量、E-cadherin mRNA及蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);siRNA组SiHa细胞ZEB1 mRNA及蛋白相对表达量均显著低于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组ZEB1 mRNA及蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论沉默lncRNA SNHG16可抑制人宫颈癌细胞SiHa的迁移与侵袭能力,其作用机制可能与调控miR-216-5p/ZEB1轴相关基因和蛋白表达有关。

敲低锌指E盒增强子结合蛋白1(ZEB1)抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的通过RNA靶向干扰降低人胃癌BGC823细胞中锌指E盒增强子结合蛋白1(ZEB1)基因表达,观察ZEB1低表达对胃癌BGC823细胞的侵袭、迁移及增殖能力的影响,并检测相关基因lncRNA HOTAIR、上皮钙黏素(E-cadherin)表达情况。方法用载体构建针对人ZEB1基因表达的干扰质粒sh ZEB1,脂质体转染胃癌BGC823细胞后,经G418及有限稀释法筛选稳定转染细胞株。通过实时定量PCR和Western blot法检测BGC823细胞ZEB1 mRNA和蛋白水平,MTT法检测其增殖能力,TranswellTM小室侵袭试验检测转染细胞侵袭能力、划痕试验检测细胞迁移能力,实时定量PCR检测lncRNA HOTAIR、E-cadherinmRNA水平。结果成功构建干扰质粒sh ZEB1,敲低BGC823细胞ZEB1水平后,BGC823细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低、lncRNA HOTAIR水平降低、而E-cadherin表达增高。结论靶向降低BGC823胃癌细胞ZEB1的水平,可降低lncRNA HOTAIR水平及细胞增殖、侵袭、迁移力。

长链非编码RNA结肠癌相关转录因子1对肺腺癌细胞增殖和凋亡的调控作用及其机制

目的分析长链非编码RNA(LncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并基于锌指E盒同源结合蛋白1(ZEB1)探讨其潜在作用机制。方法取对数生长期的肺腺癌A549细胞,分为对照组、si-NC组、si-CCAT1组、CCAT1-NC组和CCAT1组。除对照组外,其余组分别转染si-NC、si-CCAT1、CCAT1 mimic NC以及CCAT1 mimic,转染48 h后,检测细胞中LncRNA CCAT1表达量、细胞存活率、细胞凋亡率,以及ZEB1、上皮钙黏蛋白(E-cad)和神经钙黏蛋白(N-cad)表达量。通过Starbase软件预测LncRNA CCAT1与ZEB1之间的靶向关系,并应用双荧光素酶报告基因法验证LncRNA CCAT1与ZEB1的靶向关系。结果(1)与对照组和si-NC组比较,si-CCAT1组LncRNA CCAT1表达量、细胞存活率、ZEB1和N-cad蛋白表达量降低,细胞凋亡率、E-cad蛋白表达量升高(均P<0.05)。与对照组、CCAT1-NC组、si-CCAT1组比较,CCAT1组LncRNA CCAT1表达量、ZEB1和N-cad蛋白表达量升高,细胞凋亡率、E-cad蛋白表达量降低(均P<0.05);此外,CCAT1组细胞存活率高于si-CCAT1组(P<0.05)。(2)ZEB1与CCAT1存在高度互补序列;转染CCAT1 mimic可明显降低ZEB1野生型质粒的相对荧光素酶活性,对ZEB1突变型质粒的相对荧光素酶活性无影响。结论LncRNA CCAT1可以促进肺腺癌细胞增殖、抑制细胞凋亡,其可能是通过上调ZEB1蛋白表达发挥作用。

LncRNACRNDE、miR-4262、ZEB1在宫颈癌中的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的探讨宫颈癌患者中长链非编码RNA(LncRNA)CRNDE、微小RNA(miRNA)-4262、锌指E盒结合同源盒1(ZEB1)表达水平变化及与临床病理特征、预后的关系。方法选取2018年6月至2019年6月海南西部中心医院收治的100例宫颈癌患者作为研究对象,通过实时荧光定量聚合酶链反应法检测宫颈癌组织与癌旁组织中LncRNA CRNDE、miR-4262、ZEB1 mRNA的表达。通过在线网站预测LncRNA CRNDE与miR-4262的结合位点,miR-4262与ZEB1的结合位点,分析三者表达的相关性及与临床病理特征的关系。根据宫颈癌组织中LncRNA CRNDE、miR-4262、ZEB1 mRNA表达分为高表达组、低表达组,采用Kaplan-Meier法绘制不同LncRNA CRNDE、miR-4262、ZEB1 mRNA表达宫颈癌患者的生存曲线。结果宫颈癌组织中LncRNA CRNDE、ZEB1 mRNA表达高于癌旁组织,miR-4262表达低于癌旁组织(t=13.198、25.123、11.843,P<0.01)。宫颈癌组织中LncRNA CRNDE与miR-4262表达呈负相关,与ZEB1 mRNA表达呈正相关,miR-4262与ZEB1 mRNA表达呈负相关(r=-0.654、0.701、-0.687,P<0.01)。LncRNA CRNDE、miR-4262、ZEB1 mRNA表达与国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。随访6~36个月,失访9例,死亡13例,100例宫颈癌患者3年累积生存率为86.93%。Kaplan-Meier生存曲线结果显示,LncRNA CRNDE高表达组、miR-4262低表达组及ZEB1 mRNA高表达组3年累积生存率均较低(Log-rankχ^(2)=3.899、4.132、3.891,P<0.05)。结论宫颈癌组织中LncRNA CRNDE、ZEB1 mRNA高表达,miR-4262低表达,三者表达变化与FIGO分期、淋巴结转移和预后有关。

E盒锌指蛋白1反转录本1对人膀胱癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的研究E盒锌指蛋白1反转录本1(ZEB1-AS1)对人膀胱癌细胞5637增殖、迁移、凋亡的影响。方法取适量对数生长期5637细胞分为观察组和对照组,分别用特异性的阳性对照小干扰RNA ZEB1-AS1、特异的阴性对照小干扰RNA转染细胞,采用实时荧光定量qRT-PCR法观察转染48 h两组细胞ZEB1-AS1 mRNA;采用MTT法观察转染24、48、72 h细胞增殖情况,采用细胞划痕实验观察转染48 h细胞迁移情况,采用流式细胞仪检测转染48 h细胞凋亡情况。结果转染48 h观察组和对照组ZEB1-AS1 mRNA的相对表达量分别为0.525 3±0.043 2、1.000 0±0.020 2,P<0.05;观察组转染24、48、72 h细胞增殖的OD值分别为0.316 4±0.007 8、0.595 4±0.032 5、0.770 3±0.030 7,对照组分别为0.452 9±0.016 1、0.732 6±0.037 0、0.920 4±0.018 9,组间比较P均<0.05;转染48 h时观察组和对照组的细胞迁移距离分别为(0.435±0.005)、(0.680±0.020)cm,P<0.05。转染后48 h观察组和对照组的细胞凋亡指数分别为15.70±0.94、14.53±0.69,P<0.05。结论 ZEB1-AS1可促进人膀胱癌细胞增殖、迁移,抑制细胞凋亡,可能在膀胱癌的发生、发展中起重要作用。

LncRNA LBX2-AS1调节miR-873-5p/G6PD轴对胃癌细胞增殖迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)瓢虫同源盒2反义RNA1(LBX2-AS1)调节微小RNA-873-5p(miR-873-5p)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)轴对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:以SGC7901细胞为研究对象,将其随机分为Control组、sh-NC组、sh-LBX2-AS1组、sh-LBX2-AS1+inhibitor-NC组、sh-LBX2-AS1+miR-873-5p inhibitor组;qRT-PCR法检测LncRNA LBX2-AS1、miR-873-5p、G6PD的表达;MTT法和平板克隆实验检测SGC7901细胞增殖;划痕实验检测SGC7901细胞迁移;Transwell实验检测SGC7901细胞的侵袭;Western blot检测SGC7901细胞中MMP-2、PCNA、MMP-9、G6PD蛋白表达;荧光素酶报告基因实验检测LncRNA LBX2-AS1与miR-873-5p,miR-873-5p与G6PD之间的相互作用;小鼠荷瘤实验验证敲除LncRNALBX2-AS1对CC肿瘤生长及G6PD表达的影响。结果:sh-LBX2-AS1组SGC7901细胞中A490值、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、LncRNA LBX2-AS1、G6PD mRNA和PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达低于sh-NC组、Control组,miR-873-5p表达高于sh-NC组、Control组(P<0.05);与sh-LBX2-AS1组、sh-LBX2-AS1+inhibitor-NC组相比,sh-LBX2-AS+miR-873-5p inhibitor组miR-873-5p表达降低,A490值、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、G6PD mRNA和PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P<0.05)。LncRNA LBX2-AS1靶向负调控miR-873-5p,miR-873-5p靶向负调控G6PD。实验组移植瘤质量、体积、Ki-67阳性率、G6PD阳性率低于对照组(P<0.05)。结论:敲除LncRNA LBX2-AS1可能抑制GC细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能是调节miR-873-5p/G6PD轴实现的。

LncRNA ZEB2-AS1调控miR-574-3p/ZEB1轴对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)锌指E盒结合同源盒蛋白2反义RNA(LncRNA ZEB2-AS)1对卵巢癌细胞迁移、侵袭的影响及可能的作用机制。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3、SW626、A2780)和正常人卵巢上皮细胞(HOSEpiC),实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p和锌指E盒结合蛋白(ZEB)1的水平。取对数生长期的SW626细胞,分为对照组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-ZEB2-AS1组、si-NC组、si-ZEB2-AS1组、si-ZEB2-AS1+inhibitor-NC组、si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组。qRT-PCR检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western印迹检测细胞ZEB1和迁移、侵袭相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因检测验证ZEB1与miR-574-3p的靶向关系。结果与正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC相比,人卵巢癌SKOV3、SW626、A2780细胞中ZEB2-AS1、ZEB1水平明显升高,miR-574-3p水平明显降低(P<0.05),且SW626细胞中ZEB2-AS1表达水平最高。转染后,与对照组相比,pcDNA3.1-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(VIM)、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05);si-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显降低,E-cadherin表达明显增加(P<0.05)。与si-ZEB2-AS1组相比,si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05)。双荧光素酶结果显示,高表达miR-574-3p可明显抑制ZEB1 WT的荧光素酶活性(P<0.05)。结论在卵巢癌中,LncRNA ZEB2-AS1过表达可能通过下调miR-574-3p,上调ZEB1的表达,进而诱导上皮-间质转化(EMT),促进卵巢癌细胞的迁移与侵袭。

SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化的机制研究

目的探究SNHG3调控miR-186-5p/E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的机制。方法在HepG2细胞中转染siRNA干扰片段敲除SNHG3、转染pcDNA3.1(+)/SNHG3使SNHG3过表达,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)检测是否转染成功。克隆形成实验检测HepG2细胞增殖,细胞划痕实验检测HepG2细胞迁移率,Transwell小室实验检测HepG2细胞侵袭数量,双荧光素酶活性检测验证SNHG3与miR-186-5p、miR-186-5p与ZEB1的靶向关系,FQ-PCR和Western blot法检测SNHG3、ZEB1、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9、Snail的表达水平。结果肝癌组织中SNHG3表达量高于正常组织,SNHG3表达量低/中的肝癌患者的生存预后优于SNHG3表达量高的肝癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。克隆形成实验结果显示,与pcDNA3.1(+)组相比,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞增殖数量显著增加(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞迁移率显著高于pcDNA3.1(+)组(P<0.05)。Transwell小室实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞侵袭数量显著高于pcDNA3.1(+)组(P<0.05)。双荧光素酶活性检测结果显示,miR-186-5p mimic和pGL6-SNHG3-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,miR-186-5p mimic和pGL6-ZEB1-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。FQ-PCR和Western blot检测结果显示,当SNHG3过表达时,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著下调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著上调;当SNHG3敲除后,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著上调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1可促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,表明SNHG3是肝癌潜在的治疗靶点。

lncRNA FEZF1-AS1和IGF2BP1在肝癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)Fez家族锌指蛋白1反义RNA1(FEZF1-AS1)和胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)在肝癌组织中的表达及临床意义。方法:收集行手术治疗的60例原发性肝癌病人的肝癌组织和癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肝癌组织、癌旁组织中lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1 mRNA表达水平;免疫组织化学染色法检测肝癌组织、癌旁组织中IGF2BP1蛋白表达水平;分析肝癌组织lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1表达水平与临床病理特征的关系;Kaplan-Meier生存分析肝癌组织lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1表达与肝癌病人生存率的关系;Pearson分析肝癌组织lncRNA FEZF1-AS1与IGF2BP1 mRNA表达水平相关性。结果:肝癌组织中lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1 mRNA表达水平及IGF2BP1蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.01);肝癌组织中lncRNA FEZF1-AS1与IGF2BP1 mRNA表达水平呈正相关(r=0.602,P<0.01);不同年龄、性别、肿瘤大小、有无肝硬化、乙肝抗原阴阳性水平间lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1表达差异无统计学意义(P>0.05),临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、低中分化程度和有淋巴结转移的病人lncRNA FEZF1-AS1和IGF2BP1表达水平较高(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示,lncRNA FEZF1-AS1高表达组病人3年累积生存率显著低于lncRNA FEZF1-AS1低表达组(31.45%vs 61.40%,P<0.01),IGF2BP1阳性表达组病人3年累积生存率显著低于IGF2BP1阴性表达组(31.18%vs 58.25%,P<0.01)。结论:肝癌组织中lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1高表达,且二者表达与肝癌病人病理特征和预后有关,可能作为肝癌病人潜在的预后标志物。

lncRNA HAGLR促卵巢癌细胞生长和上皮-间充质转化的机制研究

目的研究长链非编码RNA同源盒D基因簇反义生长相关长链非编码RNA(lncRNA HAGLR)通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体对卵巢癌细胞生长和上皮-间充质转化(EMT)的调控作用。方法培养卵巢正常细胞IOSE-80(IOSE-80组)以及卵巢癌细胞A2780(A2780组)。然后将A2780随机分为lncRNA HAGLR沉默组(siHAGLR组)、沉默阴性对照组(siNC组)、siHAGLR联合NLRP3抑制剂MCC950处理组(siHAGLR+MCC950组)。qRT-PCR法检测lncRNA HAGLR的表达。Western blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、caspase-1、ASC和EMT相关蛋白Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1的表达。CCK-8法检测A2780细胞的增殖活性。Transwell法检测A2780细胞的迁移和侵袭能力。细胞克隆形成实验检测A2780细胞的生长能力。TUNEL染色检测A2780细胞的凋亡。结果与IOSE-80组相比,A2780组lncRNA HAGLR、Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均上调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均下调(P<0.05)。与siNC组相比,siHAGLR组的lncRNA HAGLR、Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均下调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均上调(P<0.05),细胞增殖率、细胞克隆数以及迁移和侵袭数均明显减少(P<0.05),细胞凋亡数则增加(P<0.05)。与siHAGLR组相比,siHAGLR+MCC950组的lncRNA HAGLR表达无明显变化(P>0.05),而Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均上调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均下调(P<0.05),细胞增殖率、细胞克隆数以及迁移和侵袭数均显著增加(P<0.05),细胞凋亡数则减少(P<0.05)。结论lncRNA HAGLR通过抑制NLRP3炎症小体促进卵巢癌细胞的生长和EMT。

LncRNA HCG11通过调控miR-144-3p/ZEB1分子轴影响直肠癌的发生及转移

目的:探究lncRNA HCG11通过调控miR-144-3p上调锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-(1zine finger E box binding homeobox 1, ZEB1)基因的表达促进结直肠癌(colorectal cancer,CRC)发生及转移的分子机制。方法:收集2013年1月至2018年1月云南省肿瘤医院结直肠外科手术切除的78例CRC组织标本及其癌旁组织标本,采用qPCR检测HCG11在CRC癌组织及细胞系中表达情况,以构建的HCG11敲降载体、miR-144-3p模拟物及抑制剂转染CRC细胞株SW480及SW620,CCK-8法及克隆形成实验检测细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭情况。通过Wb及免疫荧光实验检测ZEB1及上皮间质特异蛋白(E-cadherin、Vimentin、ɑ-catenin、Sox2、Nestin、Oct4及Nanog)的表达,通过双荧光素酶报告基因检测HCG11、miR-144-3p及ZEB1的靶向调控关系。建立小鼠移植瘤模型验证敲降HCG11后对小鼠移植瘤生长的抑制作用。结果:HCG11在CRC癌组织的表达显著高于癌旁组织(P<0.01),其在多种CRC细胞系中表达水平明显高于正常肠上皮细胞(均P<0.05);HCG11的表达与CRC患者肿瘤转移、临床分期及预后密切相关(P<0.05或P<0.01)。敲降HCG11后显著抑制CRC细胞的增殖、迁移、侵袭、上皮间质转化及干细胞转化(均P<0.05)。敲降HCG11显著上调miR-144-3p的表达水平(P<0.05),过表达miR-144-3p可显著抑制ZEB1基因的表达(P<0.05)及明显降低双荧光素酶活性(P<0.05)。结论:HCG11通过调控miR-144-3p上调ZEB1的表达,从而促进CRC的发生及转移,HCG11可作为CRC诊断及治疗的靶点。

ZEB1-AS1及其相关基因ZEB1在肿瘤免疫微环境中的作用研究进展

锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链1 (ZEB1-AS1)属于长链非编码RNA (Lnc RNA)家族,是E盒锌指蛋白1基因(ZEB1)的反义蛋白产物,可通过上调ZEB1的活性促进肿瘤浸润、转移,其表达的失调与多种肿瘤的发生、发展密切相关,有望成为肿瘤治疗的重要分子靶点。近年来,大量研究表明ZEB1-AS1及其相关基因ZEB1可通过调节肿瘤免疫微环境影响肿瘤恶性进展及治疗效果。本文主要阐述ZEB1-AS1及ZEB1与肿瘤相关免疫细胞、炎症相关细胞因子、炎性信号通路之间的相互作用,为肿瘤的靶向及免疫治疗提供新思路。

LncRNA ZEB2-AS1在卵巢癌组织中的表达水平及临床病理特征与预后的关系

目的:探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)锌指E盒结合同源盒蛋白2-AS1(LncRNA ZEB2-AS1)在卵巢癌组织中的表达水平,并分析其与患者临床病理特征及预后的关系。方法:收集2015年3月至2016年3月本院收治的卵巢癌患者90例为卵巢癌组,同时选取同期于本院体检的健康志愿者52例为对照组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA ZEB2-AS1表达水平。收集患者临床病理资料,根据LncRNA ZEB2-AS1表达水平检测结果将其分为高表达组(52例)与低表达组(38例),分析其与患者临床病理特征关系。对卵巢癌患者随访3年,采用Kaplan-Meier法分析LncRNA ZEB2-AS1表达与患者预后关系。采用Cox比例风险模型分析影响卵巢癌患者预后的相关因素。结果:卵巢癌患者血清LncRNA ZEB2-AS1表达水平显著高于对照组(P <0.05);LncRNA ZEB2-AS1表达水平与卵巢癌患者是否发生淋巴结转移、FIGO分期、分化程度及CA125水平明显相关(P <0.05);Kaplan-Meier法分析显示LncRNA ZEB2-AS1高表达组患者3年无疾病进展生存率与总生存率分别为25.00%、46.88%,LncRNA ZEB2-AS1低表达组患者PFS与OS均显著低于低表达组(P <0.05);Cox多因素分析显示淋巴结转移、FIGO分期、LncRNA ZEB2-AS1表达均是影响卵巢癌患者预后的独立危险因素(P <0.05)。结论:卵巢癌患者血清LncRNA ZEB2-AS1表达水平明显升高,且与患者临床病理特征及预后密切相关,可能作为卵巢癌早期诊断的标记物及治疗靶点。

lncRNA MALAT1调控miR-144-3p/ZEB1对肺癌放射敏感性的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)调控miR-144-3p/E盒结合锌指蛋白1(zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)对肺癌放射敏感性的影响。方法采用RT-qPCR检测人正常肺HBE细胞和肺癌A549细胞中MALAT1及miR-144-3p的表达情况。将A549细胞分别设置为A549组(不进行处理)、放射组(6MVX线垂直照射)、MALAT1沉默对照组(转染阴性对照慢病毒)、MALAT1沉默组(转染sh-MALAT1慢病毒)、过表达对照组(转染过表达对照慢病毒)、miR-144-3p过表达组(转染miR-144-3p模拟物)、MALAT1沉默+沉默对照组(sh-MALAT1慢病毒与沉默对照慢病毒共转染)和MALAT1沉默+miR-144-3p沉默组(sh-MALAT1慢病毒与miR-144-3p抑制剂共转染),经不同剂量(0、2、4、6和8 Gy)放射处理,培养48 h,集落形成实验测定细胞放射敏感性。以4Gy放射剂量处理各组细胞,培养48h,MTT法检测各组A549细胞增殖情况,流式细胞仪检测A549细胞凋亡情况,双荧光素酶报告基因检测MALAT1、miR-144-3p和ZEB1三者的靶向关系,Westernblot检测ZEB1以及增殖和凋亡相关蛋白表达情况。结果与HBE细胞比较,A549细胞中MALAT1表达水平增加,而miR-144-3p表达水平降低(均P<0.05)。抑制MALAT1或miR-144-3p过表达均增加A549细胞放射敏感性,抑制细胞增殖及c-Myc表达,促进细胞凋亡及caspase-3和Bax表达(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因显示,MALAT1与miR-144-3p存在靶向关系,miR-144-3p与ZEB1存在靶向关系。miR-144-3p抑制剂可逆转sh-MALAT1对细胞增殖、凋亡和放射敏感性的影响(均P<0.05)。结论lncRNA MALAT1沉默通过促进miR-144-3p/ZEB1轴增强肺癌细胞的放射敏感性。

LncRNA DLX6-AS1通过miR-181b/IL-6轴影响食管癌细胞的恶性生物学行为

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)同源盒转录因子6反义RNA1(homeobox transcription factor 6 antisense RNA1,DLX6-AS1)调控miR-181b/白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)轴对食管癌Eca-109细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法选取人食管上皮细胞株HEEC和人食管鳞状细胞癌细胞株Eca-109,采用qRT-PCR检测lncRNA DLX6-AS1、miR-181b及IL-6的表达水平。将si-DLX6-AS1、miR-181b mimics、pcDNA-IL-6、pcDNA-IL-6+miR-181b mimics及其相应阴性对照分别转染至Eca-109细胞,采用qRT-PCR检测转染效果,CCK-8法和EdU染色实验检测细胞的增殖能力,Transwell小室实验检测细胞的迁移与侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA DLX6-AS1与miR-181b、miR-181b与IL-6的靶向关系。结果与HEEC细胞相比,Eca-109细胞中lncRNA DLX6-AS1、IL-6 mRNA的表达水平升高(P=0.005,0.006),但miR-181b表达水平降低(P=0.004)。与相应阴性对照组比较,si-DLX6-AS1组和miR-181b mimics组的细胞增殖活性和EdU阳性细胞率均降低(均P<0.05),细胞迁移数目与侵袭数目均减少(均P<0.05),而pcDNA-IL-6组的细胞增殖活性和EdU阳性细胞率升高(均P<0.05),细胞迁移数目与侵袭数目增加(均P<0.05)。lncRNA DLX6-AS1与miR-181b存在靶向结合关系,miR-181b mimics和野生型DLX6-AS1载体共转染后,细胞内的荧光素酶活性明显降低(P=0.006);下调DLX6-AS1表达后Eca-109细胞中miR-181b表达水平升高(P=0.010)。miR-181b与IL-6存在靶向结合关系,miR-181b mimics和野生型IL-6载体共转染后,细胞内的荧光素酶活性明显降低(P<0.05);过表达miR-181b后Eca-109细胞中IL-6的表达水平降低(P<0.05)。与pcDNA-IL-6组比较,pcDNA-IL-6与miR-181b mimics共转染后,Eca-109细胞中IL-6 mRNA和蛋白表达水平下降,细胞增殖活性和EdU阳性细胞率降低,细胞迁移数目与侵袭数目也减少(均P<0.05)。结论LncRNA DLX6-AS1通过miR-181b靶向负调控IL-6表达而促进食管癌Eca-109细胞增殖、迁移及侵袭。

宫颈癌组织中lncRNA HOXD-AS1、miR-133a-3p的表达变化及其临床意义

目的观察宫颈癌组织中长链非编码RNA同源盒基因D-反义链1(lncRNA HOXD-AS1)、微小RNA-133a-3p(miR-133a-3p)的表达变化,并探讨其临床意义。方法选取手术切除的宫颈癌及其癌旁组织各92例份,采用qRT-PCR法检测上述组织lncRNA HOXD-AS1、miR-133a-3p,分析两指标间及其与宫颈癌临床病理参数的关系,Kaplan-Meier曲线分析不同lncRNA HOXD-AS1、miR-133a-3p表达水平宫颈癌患者术后3年总生存率,Cox回归分析法分析宫颈癌患者预后不良的影响因素。结果宫颈癌组织中lncRNA HOXD-AS1、miR-133a-3p相对表达量分别为2.064±0.644、0.947±0.305,癌旁组织分别为1.044±0.275、1.572±0.563,两者比较,P均<0.05。宫颈癌组织中lncRNA HOXD-AS1与miR-133a-3p表达呈负相关(r=-0.663,P<0.05)。lncRNA HOXD-AS1、miR-133a-3p表达与宫颈癌FIGO分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。lncRNA HOXD-AS1≥2.064患者(40例)和lncRNA HOXD-AS1<2.064患者(52例)术后3年总生存率分别为30.00%(12/40)、67.31%(35/52),两者比较,P<0.05;miR-133a-3p≥0.947患者(45例)和miR-133a-3p<0.947患者(47例)术后3年总生存率分别为68.89%(31/45)、34.04%(16/47),两者比较,P<0.05。多因素分析显示,FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、lncRNA HOXD-AS1≥2.064为宫颈癌患者预后不良独立风险因素,miR-133a-3p≥0.947为独立保护因素(P均<0.05)。结论宫颈癌组织中lncRNA HOXD-AS1表达升高,miR-133a-3p表达降低,两指标可能成为宫颈癌患者预后评估指标,lncRNA HOXD-AS1≥2.064及miR-133a-3p≥0.947时是宫颈癌患者预后不良的影响因素。

lncRNAFOXD2-AS1靶向miR-185/SIX1轴对子宫内膜癌细胞增殖迁移及顺铂敏感性的影响

目的探讨长链非编码RNA FOXD2-AS1是否通过靶向微小RNA-185/SIX1轴影响子宫内膜癌细胞增殖迁移及顺铂敏感性。方法体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-1-B(HEC-1-B组)和正常子宫内膜细胞HESC(HESC组),构建子宫内膜癌顺铂(DDP)耐药细胞(HEC-1-B/DDP组)。qRT-PCR检测细胞中FOXD2-AS1、miR-185和SIX1表达水平,MTT法检测各组细胞活性及子宫内膜癌细胞对顺铂药物的敏感性,Transwell检测各组细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测细胞中SIX1蛋白表达水平。结果与HESC组相比,HEC-1-B组、HEC-1-B/DDP组细胞中FOXD2-AS1表达依次升高(P<0.05);与si-con组相比,si-FOXD2-AS1组HEC-1-B细胞FOXD2-AS1表达、迁移、侵袭显著降低(P<0.05),细胞增殖抑制率显著增加(P<0.05);与si-con组相比,si-FOXD2-AS1组miR-185表达显著升高(P<0.05);与pcDNA组相比,pcDNA-FOXD2-AS1组miR-185表达显著降低(P<0.05);与miR-con组相比,miR-185-5p组HEC-1-B细胞中miR-185表达、细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),细胞迁移、侵袭数、SIX1蛋白表达显著降低(P<0.05);与HEC-1-B/DDP组相比,si-FOXD2-AS1组、miR-185-5p组细胞RI值显著降低(P<0.05)。结论FOXD2-AS1可以通过调控miR-185/SIX1轴促进子宫内膜癌细胞增殖迁移,减弱细胞对顺铂敏感性。

LncRNA Zeb1-AS1和miR-335-5p表达对骨关节炎软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨长链非编码(Lnc)RNA锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链(Zeb1-AS1)和微小RNA(miR)-335-5p在骨关节炎(OA)中的表达及其对软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA Zeb1-AS1和miR-335-5p在OA膝关节软骨组织和正常软骨组织中的表达,并进行Spearman相关分析,双荧光素酶检测LncRNA Zeb1-AS1和miR-335-5p的关系。分别以阴性对照scramble、过表达pcDNA3.1-LncRNA Zeb1-AS1(pcDNA3.1)、pcDNA3.1-LncRNA Zeb1-AS1-miR-335-5p-agomir(pcDNA3.1+agomir)转染OA细胞,同时设立空白OA细胞(Control)。CCK-8法检测细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western印迹检测各组细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。采用右膝接受内侧半月板不稳定(DMM)术制作OA大鼠模型,并将scramble、过表达pcDNA3.1-LncRNA Zeb1-AS1(pcDNA3.1)、pcDNA3.1-LncRNA Zeb1-AS1-miR-335-5p-agomir(pcDNA3.1+agomir)注射至大鼠的膝关节腔内,苏木素-伊红(HE)染色检测各组膝关节的病理损伤。结果与正常组相比,LncRNA Zeb1-AS1在骨性关节炎中表达明显升高,miR-335-5p表达明显下降(均P<0.05);Spearman相关分析结果显示,在OA软骨细胞中LncRNA Zeb1-AS1和miR-335-5p表达呈明显负相关(r=-0.819,P=0.000);双荧光素酶实验结果显示,LncRNA Zeb1-AS1能靶向调控miR-335-5p表达;与Control组细胞相比,pcDNA3.1组、pcDNA3.1+agomir组细胞的增殖活性和PCNA蛋白表达明显升高,细胞凋亡率和caspase-3蛋白表达明显下降(P<0.05);与pcDNA3.1组细胞相比,pcDNA3.1+agomir组细胞增殖活性和PCNA表达明显下降,细胞的凋亡率和caspase-3表达明显升高(P<0.05);动物实验结果显示,与Model组和scramble组相比,pcDNA3.1组膝关节软骨损伤最为严重,pcDNA3.1+agomir组较pcDNA3.1组损伤明显缓解。结论LncRNA Zeb1-AS1靶向调控miR-335-5p的表达影响骨关节炎的进展,过表达LncRNA Zeb1-AS1后,OA细胞增殖活性升高,凋亡率下降,而miR-335-5p激动剂agomir可部分逆转这一作用。