长链非编码RNA-ROR介导上皮-间质转化对鼻咽癌细胞放疗抵抗作用的体外研究

目的 探讨lncRNA-ROR介导上皮-间质转化在鼻咽癌细胞放疗抵抗中的作用。方法 将鼻咽癌细胞CNE2分为空白组、阴性对照组、lncRNA-ROR沉默组,进行相应的处理。将CNE2细胞分为空白组、放疗组、放疗+阴性对照组、放疗+lncRNA-ROR过表达组(放疗处理为6 Gy射线照射24 h),进行相应的处理。用CCK-8法检测CNE2增殖能力,通过细胞划痕实验和Transwell 细胞迁移实验检测细胞迁移能力,用流式细胞术检测细胞凋亡的情况,用蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白和上皮-间质转化相关蛋白的表达。结果 与空白组、阴性对照组相比,抑制lncRNA-ROR表达48、72 h后鼻咽癌细胞CNE2的增殖能力均减弱(均P<0.05)。抑制lncRNA-ROR表达后鼻咽癌细胞CNE2的迁移率低于阴性对照组(P<0.05),而放疗+lncRNA-ROR过表达组CNE2细胞的迁移能力高于放疗组与放疗+阴性对照组(均P<0.05)。与放疗组、放疗+阴性对照组相比,放疗+lncRNA-ROR过表达组CNE2细胞的凋亡率均降低(均P<0.05)。抑制lncRNA-ROR后,活化的caspase 3、caspase 9蛋白表达均较空白组和阴性对照组升高(均P<0.05);而放疗+lncRNA-ROR过表达组活化的caspase 3、caspase 9蛋白表达均较放疗组和放疗+阴性对照组下降(均P<0.05)。抑制lncRNA-ROR可导致上皮标志蛋白(E-钙黏蛋白、β-联蛋白)表达升高,间质标志蛋白(N-钙黏蛋白、波形蛋白)表达下降(均P<0.05);而与放疗组和放疗+阴性对照组相比,放疗+lncRNA-ROR过表达组CNE2细胞的上皮标志蛋白表达下降、间质标志蛋白表达升高(均P<0.05)。结论 lncRNA-ROR可通过调控鼻咽癌细胞增殖、迁移、凋亡及上皮-间质转化影响其放疗抵抗,是逆转鼻咽癌细胞放疗抵抗的潜在靶点。

长链非编码RNA-ROR在乳腺癌患者血清、癌组织中的表达变化及其临床意义

目的观察长链非编码RNA-ROR(lincRNA-ROR)在乳腺癌患者血清及癌组织中的表达变化,并探讨其临床意义。方法选择行手术切除治疗的乳腺癌患者120例作为观察组,其中早期55例、中晚期65例;90例体检健康女性作为对照组。收集观察组手术前后及对照组空腹静脉血,观察组手术切除的新鲜癌组织及其配对癌旁正常组织(各24例份)。采用实时荧光定量PCR法检测两组血清及组织lincRNA-ROR表达,电化学发光免疫分析法检测观察组早期乳腺癌患者和对照组血清糖类抗原153(CA153)、癌胚抗原(CEA)水平。采用受试者工作特征曲线分析血清lincRNA-ROR、CA153、CEA单独或联合检测对早期乳腺癌的诊断价值。结果观察组手术前后血清lincRNA-ROR相对表达量分别为1.88±0.74、1.01±0.52,对照组为1.31±0.62,两两比较P<0.05或<0.01。乳腺癌组织lincRNA-ROR相对表达量为2.19±0.97,癌旁正常组织为0.79±0.35,二者比较P<0.01。血清lincRNA-ROR诊断早期乳腺癌的曲线下面积(AUC)大于CA153和CEA,敏感性及特异性均高于CA153和CEA;血清lincRNA-ROR、CA153、CEA联合检测诊断早期乳腺癌的AUC均大于上述指标单独检测,敏感性及特异性均高于上述指标单独检测。结论乳腺癌患者血清和癌组织中lincRNA-ROR表达均升高;血清lincRNA-ROR表达检测有助于乳腺癌的早期诊断及疗效判断。

长链非编码RNA-ROR在乳腺癌诊断中的潜在应用研究

目的 探讨长链非编码RNA-ROR(lincRNA-ROR)在乳腺癌早期诊断中的潜在价值。方法 采用q-PCR检测乳腺癌组织和血清中lincRNA-ROR的表达水平;使用电化学发光法检测样本中癌抗原153(CA153)和癌胚抗原(CAE)的水平。通过建立多元Logistc回归模型绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清中lincRNA-ROR对早期乳腺癌的潜在诊断价值。结果 LincRNA-ROR在乳腺癌患者组织和外周血清中高表达,对血清中高表达的lincRNA-ROR、CA153及CEA绘制ROC曲线,发现lincRNA-ROR曲线下面积(AUC)为0.76,对乳腺癌诊断价值优于CA153(AUC=0.66)和CEA(AUC=0.52),差异有统计学意义(P<0.0001),且lincRNA-ROR、CA153和CEA联合检测诊断价值(AUC=0.85)高于lincRNA-ROR单独检测。结论 LincRNA-ROR在乳腺癌患者组织和血清中表达上调,并具有良好的灵敏度和特异度,是乳腺癌诊治及其预后监控的潜在生物标志物。

长链非编码RNA-ROR在慢性心力衰竭患者血清中的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA-ROR(lncRNA-ROR)在慢性心力衰竭(CHF)患者血清中的表达水平及临床意义。方法收集25名正常人(对照组)及109例CHF患者,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测两组血清中lncRNA-ROR的表达,分析lncRNA-ROR的表达与N-末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、左室舒张末期内径及左心室射血分数的相关性。结果对照组中lncRNA-ROR的表达水平相对较低,CHF患者中lncRNA-ROR的表达水平明显升高,差异有统计学意义(P <0.05)。相关分析发现lncRNA-ROR的表达水平与CHF心功能分级、左室舒张末期内径及NT-proBNP呈正相关,与左心室射血分数呈负相关(P <0.05)。结论lncRNA-ROR的表达水平与心力衰竭严重程度相关,有望成为早期诊断CHF的生物学标志物。

长链非编码RNA-ROR功能的研究进展

在人类基因组中,存在大量的非编码RNA(non-coding RNAs,ncRNAs).近年来随着研究的发展,这些ncRNA已成为继microRNAs和siRNAs之后又一研究热点.长链ncRNA-ROR(large intergenic ncRNA-regulator of reprogramming,lincRNA-ROR),是最新发现对细胞重编程过程具有重要调控作用的长链非编码RNA.现有的研究表明,ROR在诱导多能性干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)形成、DNA损伤、氧化应激等过程中发挥重要的作用;此外,在肿瘤中,目前发现ROR与乳腺癌、肝癌的发生、转移等密切相关.ROR拥有丰富的生物学功能,但其具体的作用机制尚不明确.本文就ROR的研究背景、发现过程、功能及特点做一概述,对其在肿瘤上的作用及相关调控机制的进行探讨.

长链非编码RNA-ROR在骨肉瘤组织中表达及对预后的影响

目的探讨长链非编码-重编程调节器(LncRNA-ROR)在骨肉瘤组织中表达及对病人预后的影响。方法选取南阳市第二人民医院2008年2月至2014年5月行手术切除的原发性骨肉瘤病人96例,采用实时荧光定量PCR术分析骨肉瘤和正常骨组织中LncRNA-ROR表达水平,所有病人术后随访,随访时间范围7~60个月,记录病人生存时间,获得病人5年生存率。使用Kaplan-Meier法开展生存分析,使用Cox回归模型分析生存时间的相关影响因素。结果LncRNA-ROR在骨肉瘤组织中表达量为(2.31±0.20),高于正常骨组织的(1.03±0.11)(t=39.94,P<0.001);LncRNA-ROR在不同Enneking分期、KPS评分及是否发生远处转移间的表达量差异有统计学意义(P<0.05);生存分析显示,低表达组病人中位生存时间51.00个月,生存时间(45.42±3.26)个月,5年生存率50.00%,均高于高表达组病人,分别为21.00个月、(27.31±2.04)个月和18.57%,差异有统计学意义(χ^(2)=13.20,P<0.001);Enneking分期、远处转移和LncRNA-ROR表达是影响骨肉瘤病人5年生存率的独立风险因素(HR=2.15、2.83和2.09,P<0.05)。结论LncRNA-ROR在骨肉瘤组织中表达量升高,且与不良预后有关,是病人生存时间的独立影响因素。

长链非编码RNA与骨性关节炎

背景:骨性关节炎作为中老年常见疾病,发病机制尚不清晰。长链非编码RNA通过多种途径参与骨性关节炎发病过程,如调控翻译、促进或者抑制mRNA表达、吸附miRNA等。目的:综述多种长链非编码RNA在骨性关节炎中的作用机制及研究进展。方法:检索中国知网、万方数据库、维普数据库、PubMed、Web of Science和Sciencedirect数据库,以“osteoarthritis,degenerative joint disease,degenerative arthritis,OA,LncRNA,long non-coding RNA,long noncoding RNA,long intergenic non-coding RNA”为英文检索词,以“骨性关节炎,骨关节炎,OA,长链非编码RNA,长链非编码核糖核酸,LncRNA”为中文检索词,检索1976年至2024年5月发表的所有相关文献,并对其进行筛选、归纳、分析、总结,最后纳入93篇文献进行综述。结果与结论:①收集了目前与骨性关节炎关系研究较多且较深入的25种长链非编码RNA;②长链非编码RNA可以充当miRNA的分子海绵,作为竞争性内源性RNA竞争性吸附miRNA,进而影响下游靶点;③长链非编码RNA可以调控软骨细胞的凋亡与增殖、软骨细胞外基质降解以及炎症反应等生理病理进程;④长链非编码RNA有望成为骨性关节炎临床诊断及治疗预后的生物标志物和潜在治疗靶点,未来可能会成为骨性关节炎临床治疗的新策略。

长链非编码RNA核富集转录本1对瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡和迁移的影响

背景:已有研究阐明核富集转录本1(nuclear enriched abundant transcript 1,NEAT1)下调抑制了瘢痕成纤维细胞的进展,但具体机制尚不完全清楚。目的:探讨长链非编码RNA NEAT1调节miR-136-5p/泛素特异性蛋白酶4(ubiquitin specific protease 4,USP4)轴对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响。方法:将瘢痕成纤维细胞分为5组:si-NC组、空白对照组、si-NEAT1组、si-NEAT1+miR-136-5p inhibitor组、si-NEAT1+inhibitor-NC组,qRT-PCR检测NEAT1、miR-136-5p表达;CCK-8法及EDU染色检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;划痕愈合实验检测细胞迁移情况;Western blot检测USP4、p27、Bax、基质金属蛋白酶9、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白α1链蛋白表达;双荧光素酶实验检测NEAT1与miR-136-5p、miR-136-5p与USP4的关系。结果与结论:①与si-NC组比较,si-NEAT1组NEAT1表达、A450值、EDU阳性细胞百分比、划痕愈合率以及USP4、基质金属蛋白酶9、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白α1链蛋白表达降低(P<0.05),miR-136-5p表达、细胞凋亡率及p27、Bax蛋白表达升高(P<0.05);②miR-136-5p inhibitor逆转了沉默NEAT1对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响;③miR-136-5p与NEAT1、miR-136-5p与USP4存在靶向调控关系。结果表明,沉默NEAT1可能通过调控miR-136-5p/USP4轴抑制瘢痕成纤维细胞的增殖和迁移,诱导其凋亡。

长链非编码RNA通过p38MAPK信号通路直接或间接影响骨质疏松症

背景:近年来大量的研究发现长链非编码RNA参与骨质疏松症的发生和发展。p38MAPK信号通路参与骨髓间充质干细胞、成骨细胞以及破骨细胞的分化等过程而参与骨质疏松症的发展,而长链非编码RNA可通过影响p38MAPK信号通路,直接或间接参与骨质疏松症的发生及发展过程。目的:综述长链非编码RNA通过p38MAPK信号通路,直接或间接影响骨质疏松症的进展,为长链非编码RNA在骨质疏松症中预防和治疗提供一个新思路。方法:检索PubMed、中国知网和万方数据库的相关文献,以“长链非编码RNA,骨质疏松,间充质干细胞,成骨细胞,破骨细胞,p38信号通路”为中文检索词,以“long non-coding RNA,osteoporosis,mesenchymal stem cells,osteoblasts,osteoclast,p38 signaling pathway”为英文检索词,排除陈旧、重复以及可信度低的观点,将检索到的文献进行归纳、总结和分析,选取76篇具有代表性的文章。结果与结论:(1)长链非编码RNA通过多种途径参与骨质疏松症的防治,包括促进骨髓间充质干细胞的成骨分化、促进成骨细胞分化和成骨细胞分泌活性、抑制破骨细胞增殖和对骨的吸收作用,以及调节成骨相关细胞通路的激活或抑制,激活p38MAPK信号通路延缓骨质疏松症进展,抑制该信号通路抑制破骨细胞的吸收作用,从而影响骨质疏松的发生和发展。(2)相应长链非编码RNA的过表达或低表达会通过p38MAPK信号通路来影响成骨细胞和破骨细胞的增殖或分化,调节骨重塑过程,进而影响骨质疏松症的发生和发展。大量的基础研究结果显示,长链非编码RNA和p38MAPK信号通路或许可以成为骨质疏松症治疗中的潜在应用和临床转化价值;且相应的长链非编码RNA过表达或低表达慢病毒、转染质粒,相应的p38MAPK信号通路抑制剂等在体外细胞实验及动物模型中都被证实有靶向调控作用。(3)因此,通过靶向调控长链非编码RNA和p38MAPK信号通路来调节骨髓间充质干细胞的分化和功能,或通过长链非编码RNA和p38MAPK信号通路来抑制破骨细胞的增殖分化,或许能提供一种创新的治疗策略,可以延缓骨质疏松症的进展。

KRT18与mRNA及长链非编码RNA互作调控椎间盘髓核细胞损伤的机制

背景:椎间盘中差异表达的RNA结合蛋白在椎间盘退变中发挥着关键作用,其中RNA结合蛋白KRT18水平的降低与椎间盘退行性病变相关,但其在椎间盘髓核细胞中的具体作用尚未完全确定。目的:探讨KRT18与mRNA及长链非编码RNA结合互作对椎间盘髓核细胞的影响及机制。方法:对因腰部骨折或椎间盘退行性病变而接受椎间融合术的患者进行人体髓核组织取样获得正常髓核细胞和退变髓核细胞,并进行iRIP-seq、功能富集分析以及DNA微阵列分析,随后根据分析结果在髓核细胞中敲低KRT18,通过蛋白免疫印迹及qRt-PCR在蛋白和RNA水平检测相关基因水平的表达。结果与结论:通过iRIP-seq分析发现GUAAUC和AGCCUC序列中存在大量的KRT18结合位点,表明KRT18可参与调控RNA的转录、翻译、稳定性或在细胞信号传导途径中发挥作用。其能够与成熟的mRNA稳定结合,其中表达较高的基因包括CRLF1及IGFBP4等,同时与其结合的长链非编码RNA的峰值基因包括SNHG25、SNHG12、NEAT1、USP32、EIF4A2和CDH4,这些基因多涉及细胞凋亡、炎症等多种生物过程,并且能介导细胞外基质代谢的相关通路,KRT18能够调控它们的稳定性、转运、翻译、剪接等多个方面的功能,进而影响基因的表达和细胞功能。实验结果验证了在髓核细胞中敲低KRT18,细胞外基质代谢水平被抑制出现失衡,导致体外椎间盘退变。该研究首次从KRT18与mRNA及长链非编码RNA结合的角度探讨其调控机制,并推测了KRT18在椎间盘退变发病机制中的潜在功能,为今后KRT18关键功能的研究奠定了基础。

长链非编码RNA在脑缺血再灌注损伤炎症反应中研究进展

脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia/reperfusion injury,CIRI)是指脑缺血后再恢复血流时导致神经功能缺损症状进一步加重的现象,严重影响患者的预后。近年来研究发现长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)与CIRI后的炎症反应密切相关。从CIRI的机制出发,对近年来发现的影响CIRI炎症反应中LncRNA的表达及其作用机制做一总结,旨在为CIRI的治疗提供新的治疗靶点和研究思路。

长链非编码RNA母源表达基因3减轻去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制

目的研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)母源表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)通过吸附微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)减轻卵巢切除术(ovariectomy,OVX)大鼠心肌缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)损伤的作用及机制。方法选择雌性SD大鼠108只,其中48只随机分为假手术组、OVX组、IR组、联合1组(OVX+IR),每组12只;其余60只OVX及心肌IR造模前尾静脉注射阴性对照、lncRNA MEG3、miR-21腺相关病毒,根据造模及腺相关病毒注射情况分为阴性假手术组、阴性模型组、lncRNA MEG3组、miR-21组、联合2组(lncRNA MEG3+miR-21),每组12只。检测心肌梗死面积、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)、血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)、心肌细胞凋亡率及裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)表达。培养心肌H9c2细胞,采用双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA MEG3靶向miR-21。结果与假手术组比较,OVX组、IR组和联合1组心肌lncRNA MEG3表达明显降低,miR-21表达明显升高(P<0.05);与OVX组及IR组比较,联合1组lncRNA MEG3表达明显降低,miR-21表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与阴性模型组比较,lncRNA MEG3组心肌梗死面积、血清LDH、CK、CK-MB、心肌细胞凋亡率、裂解型Caspase-3表达明显降低,LVFS、LVEF明显升高(P<0.05);与lncRNA MEG3组比较,联合2组心肌梗死面积、血清LDH、CK、CK-MB、心肌凋亡率、裂解型Caspase-3表达明显升高,LVFS、LVEF明显降低[(43.58±3.32)%vs(50.37±4.29)%,(57.12±4.28)%vs(68.47±5.61)%,P<0.05]。结论过表达lncRNA MEG3通过吸附miR-21减轻OVX大鼠心肌IR损伤。

转录因子ETS1激活长链非编码RNA XIST促进胶质瘤细胞增殖

目的探讨ETS原癌基因1(ETS1)在胶质瘤中的生物学功能及其下游机制。方法生物信息学和免疫组织化学分析ETS1在胶质瘤组织中的表达;实时定量PCR(qRT-PCR)检测ETS1 mRNA和长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异转录本(XIST)的表达水平。CCK-8和5-乙炔基-2'-脱氧尿苷摄入实验检测细胞增殖。Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Bak、Bcl-2)的表达。PROMO数据库预测ETS1与XIST启动子的结合位点。双荧光素酶报告基因实验和染色质免疫共沉淀-PCR用于验证ETS1与XIST启动子区域的结合关系。cBioPortal数据库分析ETS1 mRNA与lncRNA XIST在胶质瘤组织中表达的相关性。结果ETS1 mRNA和蛋白的表达水平在胶质瘤中显著上调(P<0.05)。敲低ETS1可显著抑制胶质瘤细胞增殖(P<0.05)并促进细胞凋亡(P<0.05)。ETS1可靶向结合XIST并促进XIST的表达(P<0.05),过表达XIST可逆转敲低ETS1对胶质瘤细胞增殖的抑制作用(P<0.05)以及对细胞凋亡的促进作用(P<0.05)。结论ETS1在胶质瘤组织中高表达,其可能通过促进lncRNA XIST高表达而减少细胞凋亡和促进胶质瘤细胞增殖。

长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1在急性冠状动脉综合征患者外周血中的表达及临床意义

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)在急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血中的表达及临床意义。方法:连续选取2015年1月至2018年12月就诊于新疆医科大学第一附属医院心脏中心并确诊为ACS的患者159例为ACS组,另选取本院体检中心同时期进行健康体检、冠状动脉增强CT检查证实无冠心病的患者148例为对照组。提取两组患者的外周血单个核细胞,采用实时荧光定量多聚酶链式反应(qRT-PCR)法检测MALAT1的表达水平,并分析MALAT1表达水平与ACS的相关性及其对ACS的诊断预后预测价值。结果:与对照组相比,ACS组患者外周血MALAT1表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,外周血MALAT1表达水平与ACS独立相关(OR=1.193,95%CI:1.037~1.372,P=0.014)。ROC曲线分析显示,外周血MALAT1表达水平对于ACS的诊断具有一定的价值(AUC=0.664,95%CI:0.600~0.720)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,平均随访(558±223)d期间,外周血MALAT1高表达水平(≥0.816)ACS患者的MACE累积发生率高于外周血MALAT1低表达水平(<0.816)ACS患者(39.05%vs.30.61%,P<0.05)。结论:ACS患者外周血中MALAT1的表达水平显著升高,外周血MALAT1表达水平对于ACS的诊断及预后预测具有潜在的临床价值。

长链非编码RNALINC00184调控老年高血压血管内皮细胞的增殖与迁移

目的高血压是老年人动脉粥样硬化发生和发展的重要致病因素。血管内皮细胞的损伤和衰老加速动脉粥样硬化的发生和发展。作为基因转录和翻译的重要调控元件,长链非编码RNA(lncRNA)已经被证实在多种生物学过程中发挥重要作用,但其在高血压引起动脉粥样硬化以及血管内皮损伤中的作用和分子机制远未了解清楚。方法回顾性收集上海交通大学医学院附属仁济医院2019年5月—2020年12月老年医学科门诊具备完整病史资料的老年患者(≥60岁)共51例,根据血压及颈动脉内膜中层厚度(CIMT)分为3组:高血压伴动脉粥样硬化组、高血压不伴动脉粥样硬化组和无高血压的动脉粥样硬化组。通过荧光定量PCR检测高血压以及高血压伴动脉粥样硬化患者血液中的lncRNA的表达。在人血管内皮细胞中,通过转染siRNA的方式敲减LINC00184,通过免疫荧光等形态学方法检测内皮细胞的增殖与迁移是否受到影响。利用荧光素酶报告基因、免疫印迹等方法,明确LINC00184参与调控血管内皮细胞的作用机制。结果3组间的CIMT、收缩压和舒张压有显著差异(P<0.05);LINC00184在老年高血压患者的血浆中高表达;LINC00184在人血管内皮细胞中高表达,且主要分布于细胞质中;敲减LINC00184导致血管内皮细胞增殖和迁移能力增强;LINC00184通过影响miR-17调控PTEN的表达参与血管内皮细胞的功能。结论老年高血压相关LINC00184参与调控血管内皮细胞的增殖和迁移,为进一步探究高血压导致的靶器官损伤的分子机制提供理论依据。

长链非编码RNA POT1-AS1在宫颈癌顺铂耐药中的作用研究

背景同步放化疗是晚期宫颈癌(cervical cancer,CC)的治疗方法,顺铂(cisplatin,CDDP)是目前临床化疗使用的主要药物之一,CDDP耐药的发生严重制约了其临床应用,因此针对CDDP耐药发生机制的研究对CC的治疗至关重要。目的探索长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)POT1-AS1在宫颈癌CDDP耐药中的作用。方法基于TCGA数据库,分析POT1-AS1在CC组织及正常组织中的表达情况,并分析POT1-AS1的表达量与预后的关系。采用CCK-8实验评估CDDP处理后的耐药细胞系和亲本细胞系、siPOT1-AS1组和siNC组的活力并测定相应的半抑制浓度(the half maximal inhibitory concentration,IC50)。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测POT1-AS1在耐药细胞系及相应亲本细胞系中的表达以及POT1-AS1表达与CDDP作用时间的相关性。克隆形成实验检测POT1-AS1对CDDP耐药细胞增殖情况的影响。PI/DAPI双染荧光用于评估POT1-AS1与CDDP诱导的细胞死亡的相关性。结果POT1-AS1在CC肿瘤组织中高表达,并与不良预后相关。耐药细胞系的细胞活力及IC50值显著高于亲本细胞系(P<0.001),POT1-AS1沉默组的细胞活力及IC50值显著低于阴性对照(negative control,NC)组(P<0.001),差异均有统计学意义。POT1-AS1在耐药细胞系中的表达显著高于亲本细胞系(P<0.001),且随着CDDP给药时间的延长而增加。沉默POT1-AS1后可显著抑制耐药细胞的增殖能力(P<0.01)。与NC组相比,POT1-AS1沉默组的CC耐药细胞死亡率显著增加(P<0.01),尤其是在加入CDDP作用后(P<0.01)。结论POT1-AS1与宫颈癌CDDP耐药密切相关,并通过抑制CDDP诱导的细胞死亡发挥促癌作用。

长链非编码RNA DLEU2通过miR-30a-5p/CD61对人结肠癌SW1116细胞生长和增殖的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸淋巴细胞白血病缺失基因2(LncRNA DLEU2)通过靶向微小核糖核酸(miR)-30a-5p/整合素β3(CD61)对人结肠癌SW1116细胞生长和增殖的影响。方法取人结肠癌细胞株SW1116培养并随机分为si-NC组、si-LncRNA DLEU2组、模拟物阴性对照(miR-NC)组、miR-30a-5p mimics组、miR-30a-5p抑制剂阴性对照(NC inhibitor)+si-LncRNA DLEU2组及miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组,同时设置未转染细胞为空白组;转染48 h后,采用荧光显微镜检测细胞转染效率,四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞LncRNA DLEU2和miR-30a-5p表达、CD61、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、c-Myc mRNA和蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR检测LncRNA DLEU2与miR-30a-5p的靶向关系、miR-30a-5p与CD61的靶向关系;制作雄性胸腺BALB/c裸鼠异种移植瘤模型评估LncRNA DLEU2对肿瘤生长的影响。结果si-NC组、si-LncRNA DLEU2组、miR-NC组、miR-30a-5p mimics组、NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组、miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组转染效率均>85%;与空白组及si-NC组比较,si-LncRNA DLEU2组、NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组增殖抑制率上升(P<0.05),DLEU2表达下降(P<0.05),miR-30a-5p表达增加(P<0.05),CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达减少(P<0.05);与NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组比较,miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组细胞增殖抑制率下降(P<0.05),miR-30a-5p表达下降,CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达上升(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-30a-5p mimics组miR-30a-5p表达、增殖抑制率增加(P<0.05),CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达下降(P<0.05);LncRNA DLEU2可直接靶向调控miR-30a-5p、miR-30a-5p可直接靶向调控CD61,抑制LncRNA DLEU2表达可降低BALB/c裸鼠移植瘤生长(P<0.05)。结论沉默LncRNA DLEU2可抑制人结肠癌细胞株SW1116生长和增殖,其机制可能与靶向miR-30a-5p抑制CD61表达,抑制CyclinD1、c-Myc表达相关。

长链非编码RNA GC1靶向微小RNA-551b-3p抑制食管癌的作用及分子机制研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)鸟苷酸环化酶1(GC1)对食管癌的影响,并探讨其靶向微小RNA-551b-3p(miR-551b-3p)的分子机制。方法建立食管癌荷瘤裸小鼠模型,随机分为GC1、miR-551b-3p上、下调组及其对应对照组与模型组共9组,每组8只。末次给药次日处死裸小鼠,称取瘤体质量,计算抑瘤率;取肿瘤组织检测LncRNA GC1、miR-551b-3p基因表达水平和细胞周期因子(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x(Bax)基因与蛋白表达水平;观察肿瘤组织病理改变;采用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率;采用双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA GC1与miR-551b-3p的调控关系。另取人食管癌细胞株Eca109分为9组,每组3个复孔,其中基因干扰组命名同上,另设置空白组,培养48h后观察细胞LncRNA GC1、miR-551b-3p基因表达水平、形态学改变、凋亡率、CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax基因与蛋白表达水平。结果动物实验:与模型组和相应对照组比较,GC1上调组与miR-551b-3p下调组瘤体质量、CyclinD1和Bcl-2基因与蛋白表达水平均上升,抑瘤率、细胞凋亡率、miR-551b-3p基因、p21和Bax基因与蛋白表达水平均下降;GC1下调组与miR-551b-3p上调组瘤体质量、CyclinD1和Bcl-2基因与蛋白表达水平均下降,抑瘤率和细胞凋亡率、miR-551b-3p基因、p21和Bax基因与蛋白表达水平均上升;GC1上调组LncRNA GC1基因表达水平上升,GC1下调组LncRNA GC1基因表达水平下降(P<0.05)。与转染野生型GC1的腺病毒载体相比,转染突变型GC1的腺病毒载体的miR-551b-3p荧光素酶相对活性上升(P<0.05)。细胞实验:LncRNA GC1和miR-551b-3p基因表达水平、细胞形态学改变与凋亡率、CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax基因与蛋白表达水平变化趋势均与动物实验相同。结论下调LncRNA GC1、上调miR-551b-3p表达水平均可抑制食管癌进展,且下调LncRNA GC1可靶向上调miR-551b-3p,并降低CyclinD1和Bcl-2活性、上升p21和Bax活性。

下调长链非编码RNA XIST靶向miR-124/NF-κB轴缓解IL-1β诱导的软骨细胞凋亡

目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)X染色体失活特异性转录本基因(X inactive specific transcript,XIST)对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的软骨细胞凋亡的影响及其作用机制。方法生物信息学预测XIST和miR-124靶向关系并通过双荧光素酶法进行验证;实验设置正常组、IL-1β组、si-NC组、si-XIST组、miR-124-NC组、miR-124 mimics组、si-NC+inhibitor-NC组、si-XIST+inhibitor-NC组、si-NC+miR-124 inhibitor组、si-XIST+miR-124 inhibitor组。qRT-PCR检测细胞中XIST和miR-124表达;蛋白质印迹检测核因子κB P65(nuclear factor kappa B P65,NF-κB P65)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡。结果lncRNA XIST和miR-124间存在靶向关系;相较于正常组,IL-1β诱导的软骨细胞中lncRNA XIST表达水平、NF-κB P65蛋白表达和细胞凋亡率显著升高,miR-124表达水平显著降低(P<0.05);相较于IL-1β组,si-XIST组和miR-124 mimics组NF-κB P65蛋白表达和细胞凋亡率显著降低(P<0.05);相较于si-NC+inhibitor-NC组,si-XIST+inhibitor-NC组NF-κB P65蛋白表达和细胞凋亡率显著降低,与si-NC+miR-124 inhibitor组比较,si-XIST+miR-124 inhibitor组NF-κB P65蛋白表达和细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论下调lncRNA XIST可靶向调节miR-124/NF-κB轴,从而缓解IL-1β诱导的软骨细胞凋亡。

胃癌组蛋白H3第4位赖氨酸的三甲基化修饰相关长链非编码RNA预后模型的构建与验证

目的 探索胃癌组蛋白H3第4位赖氨酸的三甲基化(trimethylation of lysine 4 on histone H3,H3K4me3)修饰相关长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)特征,构建相关预后模型并预测胃癌免疫治疗疗效。方法 从癌症基因组图谱数据库下载胃癌相关转录组测序数据和对应的患者临床资料,通过构建H3K4me3相关调节因子基因与LncRNA的共表达网络识别H3K4me3修饰相关LncRNA,并将癌症基因组图谱数据库中370例符合筛选标准的胃癌患者样本(整体组)按1:1随机抽样划分为训练组(n=185)和验证组(n=185)。随后基于单因素Cox回归、Lasoo回归分析构建H3K4me3相关LncRNA预后风险评分模型并进行内部验证。Kaplan-Meier生存分析和受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)被用于验证模型的预测性能。通过单因素和多因素Cox回归分析评估风险评分等临床指标的预后预测价值。结合风险评分、年龄和肿瘤TNM分期构建预测胃癌患者总生存率的列线图模型,ROC曲线与校准图被用于评估列线图的预测准确性。借助共识聚类识别异质性聚类亚群并进行免疫治疗疗效预测。结果 基于共表达网络关系识别了14个具有预后价值的H3K4me3相关LncRNA并构建了相关风险模型及评价体系。根据训练组预后风险评分模型获得的中位风险评分将训练组、验证组和整体组胃癌患者划分为高、低风险,Kaplan-Meier生存曲线显示低风险患者的总体生存情况要优于高风险患者(P<0.05)。此外,该模型在训练组中预测胃癌患者1、3、5年总生存率的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.708、0.730、0.770,在验证组中分别为0.690、0.648、0.713,而在整体组中分别为0.697、0.670、0.724。多因素Cox回归分析显示基于H3K4me3相关LncRNA构建的风险评分模型是预测胃癌患者预后的独立因素(P<0.001)。构建的列线图预测胃癌患者1、2、3年总生存率的AUC分别为0.727、0.780、0.717,且其校准曲线与理想曲线相接近。基于共识聚类算法进一步识别了2种具有异质性免疫特征的H3K4me3-LncRNA亚群,其中亚组Ⅱ具有更高的免疫细胞浸润水平和更强的免疫应答潜力,并对5-氟尿嘧啶、奥沙利铂等显示出更高的药物敏感性,而亚组Ⅰ则可能对磷脂酰肌醇3-激酶特异性抑制剂具有更高的敏感性。结论 本研究构建了一个H3K4me3-LncRNA风险评分模型以预测胃癌患者的预后,并揭示了其异质性微观特征及在预测免疫治疗疗效方面的潜在价值。