长链非编码RNA-P21在过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞损伤中的表达

目的检测过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞HLE-B3生物活性及长链非编码RNA-p21(lncRNA-p21)的表达变化。方法将HLE-B3细胞分为正常对照组和过氧化氢组,分别用正常培养液和含200μmol/L过氧化氢的培养液培养24 h。采用MTS比色法检测细胞活力;采用活性氧试剂盒检测细胞活性氧簇(ROS)的水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Caspase-3活性试剂盒法检测细胞Caspase-3活性;采用Western Blot方法检测细胞凋亡相关Bax,Bcl-2蛋白表达;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用EDU增殖试剂盒检测细胞增殖能力;采用实时荧光定量PCR法检测细胞中lncRNA-p21的表达;采用荧光原位杂交实验法检测细胞中lncRNA-p21的定位。结果过氧化氢组细胞ROS水平为4.65±0.38,明显高于正常对照组的1.00±0.01,差异具有统计学意义(t=16.66,P<0.05)。与正常对照组相比,过氧化氢组细胞凋亡率显著上升,Caspase-3活性增强,凋亡蛋白Bax相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(t=20.69、39.80、12.73,均P<0.05)。与正常对照组相比,过氧化氢组G2期细胞比例明显增多,差异有统计学意义(t=23.10,P<0.05)。过氧化氢组EDU阳性细胞比例为(25.41±6.99)%,明显低于正常对照组的(50.58±9.15)%,差异具有统计学意义(t=6.559,P<0.05)。过氧化氢组lncRNA-p21相对表达量为2.36±0.29,明显高于正常对照组的1.02±0.02,差异具有统计学意义(t=7.893,P<0.05)。荧光原位杂交实验结果显示,lncRNA-p21定位于细胞质中。结论过氧化氢诱导的氧化应激模型中晶状体上皮细胞增殖能力显著降低、凋亡水平显著上升,ROS和lncRNA-p21表达水平升高。lncRNA-p21可能参与晶状体上皮细胞的氧化应激损伤过程。

三阴性乳腺癌组织长链非编码RNA-P21、microRNA-17-3p的表达及其临床意义

目的探讨三阴性乳腺癌组织中长链非编码RNA-P21(LncRNA-P21)、microRNA-17-3p(miR-17-3p)的表达,分析其与三阴性乳腺癌患者的临床病理特征及预后的关系。方法选取2016年1月—2017年5月南通大学附属医院收治的106例三阴性乳腺癌患者经手术切除的癌组织和癌旁组织(距离癌组织至少5 cm)标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织中LncRNA-P21和miR-17-3p的表达;收集患者的临床病理特征资料,分析LncRNA-P21、miR-17-3p表达与临床病理特征的关系;术后随访5年,采用Kaplan-Meier法绘制不同LncRNA-P21、miR-17-3p表达三阴性乳腺癌患者的生存曲线;Cox回归分析影响三阴性乳腺癌患者预后的因素。结果癌组织LncRNA-P21 mRNA相对表达量低于癌旁组织(P<0.05);癌组织miR-17-3p mRNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05)。临床Ⅲ期、腋窝淋巴结转移、Ki-67≥30%三阴性乳腺癌组织中LncRNA-P21 mRNA相对表达量低于临床Ⅰ、Ⅱ期,无腋窝淋巴结转移和Ki-67<30%(P<0.05);临床Ⅲ期、腋窝淋巴结转移、Ki-67≥30%三阴乳腺癌组织中miR-17-3p mRNA相对表达量高于临床Ⅰ、Ⅱ期,无腋窝淋巴结转移和Ki-67阴性表达(P<0.05)。不同年龄、肿瘤直径、分化程度、绝经状态的三阴性乳腺癌患者LncRNA-P21、miR-17-3p mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。三阴性乳腺癌组织中LncRNA-P21表达与miR-17-3p表达呈负相关(r=-0.570,P<0.05)。LncRNA-P21低表达组5年无病生存期(DFS)和总生存期(OS)生存率低于LncRNA-P21高表达组(P<0.05),miR-17-3p高表达组5年DFS、OS生存率低于miR-17-3p低表达组(P<0.05)。单因素Cox回归分析结果显示,分化程度、TNM分期、腋窝淋巴结转移、LncRNA-P21、miR-17-3p是三阴性乳腺癌患者预后的影响因素(P<0.05);多因素Cox风险比例回归分析结果显示,腋窝淋巴结转移、miR-17-3p是三阴性乳腺癌患者预后不良的危险因素(P<0.05),LncRNA-P21是保护因素(P<0.05)。结论三阴性乳腺癌组织LncRNA-P21表达下调,miR-17-3p表达上调,且与乳腺癌Ki-67≥30%、临床Ⅲ期、腋窝淋巴结转移及预后不良有关。

长链非编码RNA-p21调控微小RNA-9/去乙酰化酶1信号通路逆转结直肠癌细胞奥沙利铂耐药性

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)-p21调控微小RNA-9(miR-9)/去乙酰化酶1(SIRT1)信号通路逆转结直肠癌(CRC)奥沙利铂相关的细胞自噬及耐药性的分子机制。方法采用qPCR方法LncRNA-p21的表达检测,Westbloting blotting法检测细胞自噬相关蛋白(微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ((LC3-I)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)),自噬底物(P62)、去乙酰化酶1(Sirtuin-1,SIRT1)、miR-9的表达水平;克隆形成实验检测细胞活性。结果(1)LncRNA-p21在奥沙利铂耐药的结直肠肿瘤细胞HCT116,SW620中高表达,差异有统计学意义(P<0.001);(2)敲降LncRNA-p21可抑制细胞自噬,改善HCT116细胞对奥沙利铂的化疗敏感性;(3)敲降LncRNA-p21后miR-9表达上调,而miR-9过表达可增强HCT116细胞对奥沙利铂的化疗敏感性,差异有统计学意义(P<0.001);(4)同时,SIRT1的表达受到LncRNA-p21和miR-9的调控。结论结直肠肿瘤对于化疗药奥沙利铂抵抗可能由LncRNA-p21诱导细胞自噬增强而引起,其过程可能通过LncRNA-p21调控miR-9/SIRT1信号通路而实现。

长链非编码RNA与骨性关节炎

背景:骨性关节炎作为中老年常见疾病,发病机制尚不清晰。长链非编码RNA通过多种途径参与骨性关节炎发病过程,如调控翻译、促进或者抑制mRNA表达、吸附miRNA等。目的:综述多种长链非编码RNA在骨性关节炎中的作用机制及研究进展。方法:检索中国知网、万方数据库、维普数据库、PubMed、Web of Science和Sciencedirect数据库,以“osteoarthritis,degenerative joint disease,degenerative arthritis,OA,LncRNA,long non-coding RNA,long noncoding RNA,long intergenic non-coding RNA”为英文检索词,以“骨性关节炎,骨关节炎,OA,长链非编码RNA,长链非编码核糖核酸,LncRNA”为中文检索词,检索1976年至2024年5月发表的所有相关文献,并对其进行筛选、归纳、分析、总结,最后纳入93篇文献进行综述。结果与结论:①收集了目前与骨性关节炎关系研究较多且较深入的25种长链非编码RNA;②长链非编码RNA可以充当miRNA的分子海绵,作为竞争性内源性RNA竞争性吸附miRNA,进而影响下游靶点;③长链非编码RNA可以调控软骨细胞的凋亡与增殖、软骨细胞外基质降解以及炎症反应等生理病理进程;④长链非编码RNA有望成为骨性关节炎临床诊断及治疗预后的生物标志物和潜在治疗靶点,未来可能会成为骨性关节炎临床治疗的新策略。

长链非编码RNA核富集转录本1对瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡和迁移的影响

背景:已有研究阐明核富集转录本1(nuclear enriched abundant transcript 1,NEAT1)下调抑制了瘢痕成纤维细胞的进展,但具体机制尚不完全清楚。目的:探讨长链非编码RNA NEAT1调节miR-136-5p/泛素特异性蛋白酶4(ubiquitin specific protease 4,USP4)轴对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响。方法:将瘢痕成纤维细胞分为5组:si-NC组、空白对照组、si-NEAT1组、si-NEAT1+miR-136-5p inhibitor组、si-NEAT1+inhibitor-NC组,qRT-PCR检测NEAT1、miR-136-5p表达;CCK-8法及EDU染色检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;划痕愈合实验检测细胞迁移情况;Western blot检测USP4、p27、Bax、基质金属蛋白酶9、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白α1链蛋白表达;双荧光素酶实验检测NEAT1与miR-136-5p、miR-136-5p与USP4的关系。结果与结论:①与si-NC组比较,si-NEAT1组NEAT1表达、A450值、EDU阳性细胞百分比、划痕愈合率以及USP4、基质金属蛋白酶9、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白α1链蛋白表达降低(P<0.05),miR-136-5p表达、细胞凋亡率及p27、Bax蛋白表达升高(P<0.05);②miR-136-5p inhibitor逆转了沉默NEAT1对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响;③miR-136-5p与NEAT1、miR-136-5p与USP4存在靶向调控关系。结果表明,沉默NEAT1可能通过调控miR-136-5p/USP4轴抑制瘢痕成纤维细胞的增殖和迁移,诱导其凋亡。

长链非编码RNA通过p38MAPK信号通路直接或间接影响骨质疏松症

背景:近年来大量的研究发现长链非编码RNA参与骨质疏松症的发生和发展。p38MAPK信号通路参与骨髓间充质干细胞、成骨细胞以及破骨细胞的分化等过程而参与骨质疏松症的发展,而长链非编码RNA可通过影响p38MAPK信号通路,直接或间接参与骨质疏松症的发生及发展过程。目的:综述长链非编码RNA通过p38MAPK信号通路,直接或间接影响骨质疏松症的进展,为长链非编码RNA在骨质疏松症中预防和治疗提供一个新思路。方法:检索PubMed、中国知网和万方数据库的相关文献,以“长链非编码RNA,骨质疏松,间充质干细胞,成骨细胞,破骨细胞,p38信号通路”为中文检索词,以“long non-coding RNA,osteoporosis,mesenchymal stem cells,osteoblasts,osteoclast,p38 signaling pathway”为英文检索词,排除陈旧、重复以及可信度低的观点,将检索到的文献进行归纳、总结和分析,选取76篇具有代表性的文章。结果与结论:(1)长链非编码RNA通过多种途径参与骨质疏松症的防治,包括促进骨髓间充质干细胞的成骨分化、促进成骨细胞分化和成骨细胞分泌活性、抑制破骨细胞增殖和对骨的吸收作用,以及调节成骨相关细胞通路的激活或抑制,激活p38MAPK信号通路延缓骨质疏松症进展,抑制该信号通路抑制破骨细胞的吸收作用,从而影响骨质疏松的发生和发展。(2)相应长链非编码RNA的过表达或低表达会通过p38MAPK信号通路来影响成骨细胞和破骨细胞的增殖或分化,调节骨重塑过程,进而影响骨质疏松症的发生和发展。大量的基础研究结果显示,长链非编码RNA和p38MAPK信号通路或许可以成为骨质疏松症治疗中的潜在应用和临床转化价值;且相应的长链非编码RNA过表达或低表达慢病毒、转染质粒,相应的p38MAPK信号通路抑制剂等在体外细胞实验及动物模型中都被证实有靶向调控作用。(3)因此,通过靶向调控长链非编码RNA和p38MAPK信号通路来调节骨髓间充质干细胞的分化和功能,或通过长链非编码RNA和p38MAPK信号通路来抑制破骨细胞的增殖分化,或许能提供一种创新的治疗策略,可以延缓骨质疏松症的进展。

KRT18与mRNA及长链非编码RNA互作调控椎间盘髓核细胞损伤的机制

背景:椎间盘中差异表达的RNA结合蛋白在椎间盘退变中发挥着关键作用,其中RNA结合蛋白KRT18水平的降低与椎间盘退行性病变相关,但其在椎间盘髓核细胞中的具体作用尚未完全确定。目的:探讨KRT18与mRNA及长链非编码RNA结合互作对椎间盘髓核细胞的影响及机制。方法:对因腰部骨折或椎间盘退行性病变而接受椎间融合术的患者进行人体髓核组织取样获得正常髓核细胞和退变髓核细胞,并进行iRIP-seq、功能富集分析以及DNA微阵列分析,随后根据分析结果在髓核细胞中敲低KRT18,通过蛋白免疫印迹及qRt-PCR在蛋白和RNA水平检测相关基因水平的表达。结果与结论:通过iRIP-seq分析发现GUAAUC和AGCCUC序列中存在大量的KRT18结合位点,表明KRT18可参与调控RNA的转录、翻译、稳定性或在细胞信号传导途径中发挥作用。其能够与成熟的mRNA稳定结合,其中表达较高的基因包括CRLF1及IGFBP4等,同时与其结合的长链非编码RNA的峰值基因包括SNHG25、SNHG12、NEAT1、USP32、EIF4A2和CDH4,这些基因多涉及细胞凋亡、炎症等多种生物过程,并且能介导细胞外基质代谢的相关通路,KRT18能够调控它们的稳定性、转运、翻译、剪接等多个方面的功能,进而影响基因的表达和细胞功能。实验结果验证了在髓核细胞中敲低KRT18,细胞外基质代谢水平被抑制出现失衡,导致体外椎间盘退变。该研究首次从KRT18与mRNA及长链非编码RNA结合的角度探讨其调控机制,并推测了KRT18在椎间盘退变发病机制中的潜在功能,为今后KRT18关键功能的研究奠定了基础。

长链非编码RNA P53、P21在大鼠模型动脉粥样硬化中的应用

本研究旨在深度剖析长链非编码RNA P53和P21在大鼠动脉粥样硬化模型中的作用及应用潜能。择取60只大鼠,随机平均划分为正常组与粥样硬化组,借由构建大鼠动脉粥样硬化模型,综合运用多种实验技术(如免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法、酶联免疫分析等)及仪器(如彩色多普勒超声诊断仪),对两组中P53和P21的表达状况、调控机制及其与疾病演进的关联予以系统性且全方位的解析。研究成果有望为动脉粥样硬化的诊断与治疗提供新颖且极具价值的靶点与策略。This study aims to deeply analyze the role and application potential of long non-coding RNA P53 and P21 in rat atherosclerosis model. 60 rats were selected and randomly divided into normal group and atherosclerosis group. By constructing rat atherosclerosis model, a variety of experimental techniques (such as immunohistochemistry staining, real-time fluorescence quantitative PCR, protein blotting, enzyme-linked immunosorbent assay, etc.) and instruments (such as color Doppler ultrasound diagnostic instrument) were used to systematically and comprehensively analyze the expression status, regulatory mechanism and relationship between P53 and P21 and disease progression in the two groups. The research results are expected to provide novel and valuable targets and strategies for the diagnosis and treatment of atherosclerosis.

长链非编码RNA-p21与肿瘤相关性研究进展

长链非编码RNA-p21在食管癌、肝细胞癌、胃癌、结直肠癌、非小细胞肺癌、肾细胞癌、前列腺癌、皮肤癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤等恶性肿瘤中呈特异性表达,且参与肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移和凋亡过程,有望成为新的肿瘤标志物和肿瘤临床治疗的新靶点,可用于肿瘤早期诊断、治疗及监测预后。本文就长链非编码RNA-p21在诊断与治疗相关恶性肿瘤中作用的研究进展作一综述。

长链基因间非编码RNA-p21通过调控YAP表达促进胃癌细胞凋亡

目的:探讨lincRNA-p21在胃癌细胞凋亡中的作用及其潜在机制。方法:在胃癌MGC-803细胞系中分别转染siRNA以及过表达质粒实现下调/上调lincRNA-p21表达。lincRNA-p21和YAP的mRNA水平由qRT-PCR方法测定。之后通过流式细胞术和TUNEL测定对细胞凋亡进行检测,并用Western blot检测细胞凋亡相关蛋白。结果:上调lincRNA-p21促进胃癌细胞凋亡,反之亦然。研究还发现下调lincRNA-p21会引起YAP mRNA及蛋白表达量升高。最重要的是,由lincRNA-p21下调引起的抑制凋亡作用可以通过敲低YAP表达来解除。结论:lincRNA-p21可以通过调控YAP表达促进胃癌细胞凋亡,这可能为胃癌治疗提供新思路。

血清长链非编码RNA核仁小RNA宿主基因8与微小RNA-21水平在高危型人乳头瘤病毒阳性患者中的表达及对宫颈癌的诊断价值

目的探析血清长链非编码RNA核仁小RNA宿主基因8(lncRNA SNHG8)、微小RNA-21(miR-21)在高危型人乳头瘤病毒(HPV)阳性患者对宫颈癌的诊断价值及经扶正清毒颗粒治疗后的表达变化。方法回顾性分析2021年1月至2022年11月枣庄市妇幼保健院收治的160例高危型HPV阳性患者病历资料,收集患者临床资料,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测血清lncRNA SNHG8、miR-21表达水平。所有患者均接受扶正清毒颗粒治疗,停药6月后随访,根据预后结局分为宫颈癌组(34例)、非宫颈癌组(126例)。对比高危型HPV阳性患者治疗前后血清lncRNA SNHG8、miR-21水平和不同预后结局高危型HPV阳性患者临床特征;多因素logistic分析高危型HPV阳性患者治疗后发生宫颈癌的独立影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA SNHG8、miR-21对高危型HPV阳性患者发生宫颈癌的预测价值。结果治疗后高危型HPV阳性患者血清lncRNA SNHG8、miR-21水平均低于治疗前(P<0.05)。对比不同预后结局患者高危型HPV阳性患者的绝经情况、分娩史、HPV分型资料,差异无统计学意义(P>0.05);而年龄、血清lncRNA SNHG8、miR-21表达,差异有统计学意义(P<0.05)。logistic回归分析结果显示年龄、血清lncRNA SNHG8、miR-21均为高危型HPV阳性患者治疗后发生宫颈癌的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清lncRNA SNHG8、miR-21联合预测高危型HPV阳性患者发生宫颈癌的曲线下面积为0.847,高于单一生物标志物(lncRNA SNHG8、miR-21),P<0.05,其灵敏度、特异度分别为83.52%、86.41%。结论血清lncRNA SNHG8、miR-21为高危型HPV阳性患者宫颈癌独立影响因素,可用于高危型HPV阳性患者疗效及宫颈癌发病风险的评估,且联合应用效能更高。

长链非编码RNA LINC02321在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的基于生物信息学分析长链非编码RNA(lncRNA)LINC02321在子宫内膜癌(UCEC)中的表达及其临床意义。方法从TCGA数据库下载552例UCEC组织样本和35例癌旁组织样本(其中23例样本为配对组织)的基因表达谱数据及相关临床资料,基于R语言进行相关生物信息学分析,以解析LINC02321在UCEC中的表达及其与临床病理特征、预后及免疫细胞浸润的相关性,并评估其在UCEC中的诊断价值。采用Spearman相关对LINC02321表达水平与肿瘤组织免疫细胞浸润的相关性进行评估。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,通过计算曲线下面积(AUC)评价LINC02321对UCEC的诊断效能。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LINC02321在UCEC组织及癌旁组织中的表达水平。结果对552例UCEC组织和35例癌旁组织的表达谱数据分析发现,UCEC组织LINC02321表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.001)。进一步对23例配对UCEC组织的表达谱数据进行分析发现,相较于癌旁组织,LINC02321在肿瘤组织中的表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.001)。UCEC患者不同年龄、临床分期、组织学类型、组织学分级、肿瘤浸润程度及激素治疗的LINC02321低表达及高表达情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05),而初始治疗结局、残瘤分级、绝经状态比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。LINC02321高表达患者的总生存期(OS)、疾病相关生存期(DSS)和无进展间隔期(PFI)均明显短于低表达患者,差异均有统计学意义(P<0.05),单因素Cox回归分析结果显示,年龄、临床分期、初始治疗结局、组织学类型、组织学分级、残瘤分级、肿瘤浸润程度及LINC02321表达水平是影响UCEC患者OS的因素(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,LINC02321高表达水平、临床分期Ⅲ和Ⅳ、疾病进展和疾病稳定是影响UCEC患者OS的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,LINC02321表达水平对于评估UCEC、临床分期Ⅰ、组织学分级G1期和肿瘤浸润程度均具有一定的诊断价值。LINC02321表达水平对于评估1、3、5年OS(AUC分别为0.659、0.629和0.623)、DSS(AUC分别为0.690、0.645和0.608)和PFI(AUC分别为0.633、0.602和0.612)同样具有诊断价值。LINC02321表达水平与辅助性T淋巴细胞2的浸润呈正相关,而与CD56bright NK细胞、未成熟树突状细胞、嗜酸粒细胞的浸润均呈负相关(P<0.001)。LINC02321在UCEC组织中的表达验证结果显示,LINC02321在UCEC组织中的表达水平明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA LINC02321高表达是UCEC患者预后不良的独立危险因素,具有成为UCEC诊断、预后判断及肿瘤免疫微环境评估生物标志物的潜在应用价值。

长链非编码RNA DNAJC3-AS1、微RNA-214-3p在结肠癌组织、结肠腺瘤性息肉中的表达水平及临床意义

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)DNAJC3-AS1、微RNA-214-3p(miR-214-3p)在结肠癌组织、结肠腺瘤性息肉中的表达水平及临床意义。方法 lnCAR数据库检索结肠癌组织、正常结肠组织中LncRNA DNAJC3-AS1表达情况;选取2016年5月至2019年1月北京市丰台中西医结合医院收治的86例结肠癌病人、53例结肠腺瘤性息肉病人为研究对象,收集结肠癌病人的结肠癌组织、对应癌旁组织及结肠腺瘤性息肉病人的结肠腺瘤性息肉,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定组织中lncRNA DNAJC3-AS1、miR-214-3p表达水平;分析结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1、miR-214-3p表达水平与结肠癌病人临床病理特征、预后关系;分析结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达水平与miR-214-3p相关性,生物信息学预测lncRNA DNAJC3-AS1与miR-214-3p的关系。结果 lnCAR数据库分析显示,结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1表达水平(4.40±0.49)高于正常结肠组织(4.00±0.36)(P<0.05)。qRT-PCR检测显示,与结肠腺瘤性息肉(1.71±0.57、0.67±0.22)相比,结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1表达水平(2.63±0.88)升高(P<0.05),miR-214-3p表达水平(0.31±0.10)降低(P<0.05);与癌旁组织(1.04±0.35、1.01±0.34)相比,结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1表达水平升高(P<0.05),miR-214-3p表达水平降低(P<0.05)。结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1、miR-214-3p表达水平在不同分化程度、淋巴结转移、血管浸润、TNM分期方面,分布差异有统计学意义(P<0.05);结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达水平与miR-214-3p呈负相关(r=-0.58,P<0.05),且lncRNA DNAJC3-AS1与miR-214-3p存在结合位点;lncRNA DNAJC3-AS1高表达组29.75个月、miR-214-3p低表达组30.16个月结肠癌病人累积生存率低于lncRNA DNAJC3-AS1低表达组34.69个月、miR-214-3p高表达组34.37个月(P<0.05)。结论 癌旁组织、结肠腺瘤性息肉、结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达依次升高,miR-214-3p表达依次降低,且结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达水平与miR-214-3p、临床病理特征、预后有关。

长链非编码RNA XIST、微小RNA-212-3p对人卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)XIST与微小RNA-212-3p(miR-212-3p)对人卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测LncRNAXIST与miR-212-3p在人正常卵巢上皮细胞IOSE80和KGN细胞株中的表达水平;通过Starbase靶基因数据库预测LncRNAXIST靶向miR-212-3p,并采用双萤光素酶报告实验进行验证;分别将XIST-plasmid和miR-212-3pmimic转染至KGN细胞,通过CCK-8实验、流式细胞术和蛋白质印迹法(Westernblot)实验分析LncRNAXIST与miR-212-3p对KGN细胞增殖和凋亡的影响。结果与IOSE80细胞系比较,在KGN细胞中LncRNAXIST呈低表达,miR-212-3p呈高表达(P<0.001);StarBase靶基因数据库预测显示,XIST与miR-212-3p存在结合位点;miR-212-3p mimic可降低XIST-WT的萤光素酶活性(P<0.01);CCK-8实验和流式细胞术实验结果显示,LncRNAXIST能够抑制KGN细胞增殖,促进细胞凋亡,转染miR-212-3pmimic能够部分抑制LncRNAXIST(P<0.001);Western blot实验结果显示,LncRNA XIST能够抑制B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)表达,促进Bax蛋白的表达,转染miR-212-3p mimic能够部分抑制Bax蛋白表达,促进Bcl-2蛋白的表达(P<0.001)。结论LncRNA XIST过表达能够抑制KGN细胞的增殖并促进其凋亡,其机制作用可能是通过靶向miR-212-3p实现的。

长链非编码RNA母源表达基因3减轻去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制

目的研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)母源表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)通过吸附微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)减轻卵巢切除术(ovariectomy,OVX)大鼠心肌缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)损伤的作用及机制。方法选择雌性SD大鼠108只,其中48只随机分为假手术组、OVX组、IR组、联合1组(OVX+IR),每组12只;其余60只OVX及心肌IR造模前尾静脉注射阴性对照、lncRNA MEG3、miR-21腺相关病毒,根据造模及腺相关病毒注射情况分为阴性假手术组、阴性模型组、lncRNA MEG3组、miR-21组、联合2组(lncRNA MEG3+miR-21),每组12只。检测心肌梗死面积、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)、血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)、心肌细胞凋亡率及裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)表达。培养心肌H9c2细胞,采用双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA MEG3靶向miR-21。结果与假手术组比较,OVX组、IR组和联合1组心肌lncRNA MEG3表达明显降低,miR-21表达明显升高(P<0.05);与OVX组及IR组比较,联合1组lncRNA MEG3表达明显降低,miR-21表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与阴性模型组比较,lncRNA MEG3组心肌梗死面积、血清LDH、CK、CK-MB、心肌细胞凋亡率、裂解型Caspase-3表达明显降低,LVFS、LVEF明显升高(P<0.05);与lncRNA MEG3组比较,联合2组心肌梗死面积、血清LDH、CK、CK-MB、心肌凋亡率、裂解型Caspase-3表达明显升高,LVFS、LVEF明显降低[(43.58±3.32)%vs(50.37±4.29)%,(57.12±4.28)%vs(68.47±5.61)%,P<0.05]。结论过表达lncRNA MEG3通过吸附miR-21减轻OVX大鼠心肌IR损伤。

长链非编码RNA在脑缺血再灌注损伤炎症反应中研究进展

脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia/reperfusion injury,CIRI)是指脑缺血后再恢复血流时导致神经功能缺损症状进一步加重的现象,严重影响患者的预后。近年来研究发现长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)与CIRI后的炎症反应密切相关。从CIRI的机制出发,对近年来发现的影响CIRI炎症反应中LncRNA的表达及其作用机制做一总结,旨在为CIRI的治疗提供新的治疗靶点和研究思路。

长链非编码RNA-ROR介导上皮-间质转化对鼻咽癌细胞放疗抵抗作用的体外研究

目的 探讨lncRNA-ROR介导上皮-间质转化在鼻咽癌细胞放疗抵抗中的作用。方法 将鼻咽癌细胞CNE2分为空白组、阴性对照组、lncRNA-ROR沉默组,进行相应的处理。将CNE2细胞分为空白组、放疗组、放疗+阴性对照组、放疗+lncRNA-ROR过表达组(放疗处理为6 Gy射线照射24 h),进行相应的处理。用CCK-8法检测CNE2增殖能力,通过细胞划痕实验和Transwell 细胞迁移实验检测细胞迁移能力,用流式细胞术检测细胞凋亡的情况,用蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白和上皮-间质转化相关蛋白的表达。结果 与空白组、阴性对照组相比,抑制lncRNA-ROR表达48、72 h后鼻咽癌细胞CNE2的增殖能力均减弱(均P<0.05)。抑制lncRNA-ROR表达后鼻咽癌细胞CNE2的迁移率低于阴性对照组(P<0.05),而放疗+lncRNA-ROR过表达组CNE2细胞的迁移能力高于放疗组与放疗+阴性对照组(均P<0.05)。与放疗组、放疗+阴性对照组相比,放疗+lncRNA-ROR过表达组CNE2细胞的凋亡率均降低(均P<0.05)。抑制lncRNA-ROR后,活化的caspase 3、caspase 9蛋白表达均较空白组和阴性对照组升高(均P<0.05);而放疗+lncRNA-ROR过表达组活化的caspase 3、caspase 9蛋白表达均较放疗组和放疗+阴性对照组下降(均P<0.05)。抑制lncRNA-ROR可导致上皮标志蛋白(E-钙黏蛋白、β-联蛋白)表达升高,间质标志蛋白(N-钙黏蛋白、波形蛋白)表达下降(均P<0.05);而与放疗组和放疗+阴性对照组相比,放疗+lncRNA-ROR过表达组CNE2细胞的上皮标志蛋白表达下降、间质标志蛋白表达升高(均P<0.05)。结论 lncRNA-ROR可通过调控鼻咽癌细胞增殖、迁移、凋亡及上皮-间质转化影响其放疗抵抗,是逆转鼻咽癌细胞放疗抵抗的潜在靶点。

转录因子ETS1激活长链非编码RNA XIST促进胶质瘤细胞增殖

目的探讨ETS原癌基因1(ETS1)在胶质瘤中的生物学功能及其下游机制。方法生物信息学和免疫组织化学分析ETS1在胶质瘤组织中的表达;实时定量PCR(qRT-PCR)检测ETS1 mRNA和长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异转录本(XIST)的表达水平。CCK-8和5-乙炔基-2'-脱氧尿苷摄入实验检测细胞增殖。Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Bak、Bcl-2)的表达。PROMO数据库预测ETS1与XIST启动子的结合位点。双荧光素酶报告基因实验和染色质免疫共沉淀-PCR用于验证ETS1与XIST启动子区域的结合关系。cBioPortal数据库分析ETS1 mRNA与lncRNA XIST在胶质瘤组织中表达的相关性。结果ETS1 mRNA和蛋白的表达水平在胶质瘤中显著上调(P<0.05)。敲低ETS1可显著抑制胶质瘤细胞增殖(P<0.05)并促进细胞凋亡(P<0.05)。ETS1可靶向结合XIST并促进XIST的表达(P<0.05),过表达XIST可逆转敲低ETS1对胶质瘤细胞增殖的抑制作用(P<0.05)以及对细胞凋亡的促进作用(P<0.05)。结论ETS1在胶质瘤组织中高表达,其可能通过促进lncRNA XIST高表达而减少细胞凋亡和促进胶质瘤细胞增殖。

长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1在急性冠状动脉综合征患者外周血中的表达及临床意义

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)在急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血中的表达及临床意义。方法:连续选取2015年1月至2018年12月就诊于新疆医科大学第一附属医院心脏中心并确诊为ACS的患者159例为ACS组,另选取本院体检中心同时期进行健康体检、冠状动脉增强CT检查证实无冠心病的患者148例为对照组。提取两组患者的外周血单个核细胞,采用实时荧光定量多聚酶链式反应(qRT-PCR)法检测MALAT1的表达水平,并分析MALAT1表达水平与ACS的相关性及其对ACS的诊断预后预测价值。结果:与对照组相比,ACS组患者外周血MALAT1表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,外周血MALAT1表达水平与ACS独立相关(OR=1.193,95%CI:1.037~1.372,P=0.014)。ROC曲线分析显示,外周血MALAT1表达水平对于ACS的诊断具有一定的价值(AUC=0.664,95%CI:0.600~0.720)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,平均随访(558±223)d期间,外周血MALAT1高表达水平(≥0.816)ACS患者的MACE累积发生率高于外周血MALAT1低表达水平(<0.816)ACS患者(39.05%vs.30.61%,P<0.05)。结论:ACS患者外周血中MALAT1的表达水平显著升高,外周血MALAT1表达水平对于ACS的诊断及预后预测具有潜在的临床价值。

长链非编码RNALINC00184调控老年高血压血管内皮细胞的增殖与迁移

目的高血压是老年人动脉粥样硬化发生和发展的重要致病因素。血管内皮细胞的损伤和衰老加速动脉粥样硬化的发生和发展。作为基因转录和翻译的重要调控元件,长链非编码RNA(lncRNA)已经被证实在多种生物学过程中发挥重要作用,但其在高血压引起动脉粥样硬化以及血管内皮损伤中的作用和分子机制远未了解清楚。方法回顾性收集上海交通大学医学院附属仁济医院2019年5月—2020年12月老年医学科门诊具备完整病史资料的老年患者(≥60岁)共51例,根据血压及颈动脉内膜中层厚度(CIMT)分为3组:高血压伴动脉粥样硬化组、高血压不伴动脉粥样硬化组和无高血压的动脉粥样硬化组。通过荧光定量PCR检测高血压以及高血压伴动脉粥样硬化患者血液中的lncRNA的表达。在人血管内皮细胞中,通过转染siRNA的方式敲减LINC00184,通过免疫荧光等形态学方法检测内皮细胞的增殖与迁移是否受到影响。利用荧光素酶报告基因、免疫印迹等方法,明确LINC00184参与调控血管内皮细胞的作用机制。结果3组间的CIMT、收缩压和舒张压有显著差异(P<0.05);LINC00184在老年高血压患者的血浆中高表达;LINC00184在人血管内皮细胞中高表达,且主要分布于细胞质中;敲减LINC00184导致血管内皮细胞增殖和迁移能力增强;LINC00184通过影响miR-17调控PTEN的表达参与血管内皮细胞的功能。结论老年高血压相关LINC00184参与调控血管内皮细胞的增殖和迁移,为进一步探究高血压导致的靶器官损伤的分子机制提供理论依据。