NLRP3炎症小体在大鼠单侧输尿管梗阻引起肾间质纤维化中的作用及其机制

目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体在大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化中的作用,并阐明其可能的作用机制。方法:健康雄性Wistar大鼠30只随机分为假手术组(n=6)和UUO组(n=24),假手术组大鼠仅分离输尿管不结扎,UUO组分别于术后3、7和14 d处死大鼠,并按照处理时间分为UUO 3 d组(n=8)、UUO 7 d组(n=8)和UUO 14 d组(n=8)。HE染色和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理形态表现,试剂盒检测各组大鼠肾组织中丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性和羟脯氨酸(HYP)水平,免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达水平,Western blotting法检测各组大鼠肾组织中NLRP3蛋白表达水平。结果:HE染色,UUO组大鼠出现明显肾小管扩张,肾间质水肿和增宽,可见较多炎症细胞浸润,部分肾小管腔内可见脱落的上皮细胞。与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠HE染色肾间质纤维化评分均明显升高(P<0.05);与UUO 3 d组和UUO 7 d组比较,UUO 14 d组大鼠HE染色肾间质纤维化评分明显升高(P<0.05)。Masson染色,UUO组大鼠肾间质炎症细胞浸润明显,可见明显纤维组织增生;随UUO作用时间增加,大鼠部分肾小管消失,肾间质明显增宽,胶原沉积逐渐增多,皮髓交界处胶原沉积程度更加明显。与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠Masson染色肾间质纤维化评分均明显升高(P<0.05);与UUO 3 d组和UUO 7 d组比较,UUO 14 d组大鼠Masson染色肾间质纤维化评分明显升高(P<0.05)。与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠梗阻侧肾组织中MDA水平均明显升高(P<0.05),SOD活性明显降低(P<0.05)。与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠梗阻侧肾组织中HYP水平均明显升高(P<0.05);与UUO 3 d组比较,UUO 14 d组大鼠梗阻侧肾组织中HYP水平明显升高(P<0.05)。免疫组织化学法,与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠肾组织中α-SMA蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与UUO 3 d组和UUO 7 d组比较,UUO 14 d组大鼠肾组织中α-SMA蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠肾小管上皮细胞和肾小管间质组织中TGF-β1蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与UUO 3 d组比较,UUO 14 d组大鼠肾小管上皮细胞和肾小管间质组织中TGF-β1蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。Western blotting法,与假手术组比较,UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠肾组织中NLRP3蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:NLRP3炎症小体在UUO大鼠肾纤维化过程中发挥重要作用,其作用机制与氧化应激增加和TGF-β1蛋白表达水平升高有关。

六味地黄汤调控TGF-β及Smad家族蛋白表达对肾间质纤维化的影响研究

目的探究六味地黄汤抑制肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的干预作用及机制。方法将30只SPF级SD大鼠随机均分为假手术组、模型组、阳性药物组、中药高剂量组和中药低剂量组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用左侧输尿管结扎术制备RIF模型。造模结束后,假手术组和模型组予以蒸馏水灌胃,阳性药物组予以醋酸泼尼松片0.2 mg/kg灌胃,中药低、高剂量组分别予以六味地黄汤0.5、1 mg/kg灌胃,疗程为21 d。治疗结束后,采用HE染色法评估肾间质损伤,Masson染色法检测肾间质胶原蛋白沉积和纤维化,RT-PCR测定肾间质转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、针对半身不遂同源物2的重组母体(recombinant mothers against decapentaplegic homolog 2,Smad2)、Smad3、Smad7的mRNA表达,Western blot测定肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组的病理呈现系膜增生、间质增宽、胶原蛋白大面积沉积和明显纤维化,且TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05)。与模型组相比,阳性药物组和中药低、高剂量组的病理表现均减轻,且TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。与中药低剂量组相比,阳性药物组和中药高剂量组的TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。结论六味地黄汤能够减轻RIF大鼠的肾间质纤维化程度,且高剂量效果更佳,其机制可能与调控TGF-β及Smad家族蛋白表达有关。

吡非尼酮联合甲泼尼龙治疗特发性肺间质纤维化的效果及安全性分析

目的探讨吡非尼酮联合甲泼尼龙治疗特发性肺间质纤维化(IPF)的效果及安全性。方法前瞻性纳入2020年1月至2022年12月郑州大学第一附属医院收治的110例IPF患者,采用随机数字表法分为对照组和观察组,各55例,对照组应用甲泼尼龙治疗,观察组应用吡非尼酮联合甲泼尼龙治疗,两组均治疗3个月。比较治疗前、治疗3个月时,两组炎症因子指标[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、肺纤维化指标[Ⅲ型胶原(Ⅲ-C)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、透明质酸(HA)]、肺通气功能指标[呼气流量峰值(PEF)、第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV_(1)%pred)及第1秒用力呼气容积占用力肺活量的比值(FEV_(1)/FVC)],治疗期间记录患者不良反应发生情况。结果治疗3个月时,两组血清IL-6、TNF-α水平均降低,且观察组低于对照组(P<0.05);两组血清Ⅲ-C、Ⅳ-C、HA水平均降低,且观察组低于对照组(P<0.05);两组PEF、FEV_(1)%pred、FEV_(1)/FVC均提高,且观察组高于对照组(P<0.05)。两组患者不良反应发生率比较无统计学意义(P>0.05)。结论吡非尼酮联合甲泼尼龙可有效减轻IPF患者炎症反应,抑制纤维化进程,改善患者肺通气功能,且安全性良好。

CC类趋化因子受体2、Th1/Th2细胞在IgA肾病大鼠肾间质纤维化中的表达及意义

目的检测IgA肾病大鼠肾间质纤维化中CC类趋化因子受体2(C-C motif chemokine receptor 2,CCR2)的表达和辅助性T细胞1/2(helper T cell 1/2,Th1/Th2)的含量,并观察其在肾脏纤维化中的作用。方法40只SD雄性大鼠,随机分为模型组和对照组,每组20只。采用脂多糖+改良牛血清白蛋白+四氯化碳法构建免疫球蛋白A(IgA)肾病模型。观察大鼠肾组织病理改变和IgA沉淀,计算胶原纤维占肾组织百分比,采用Katafuchi评分标准评估肾小管间质损伤程度。蛋白质印迹测定肾组织CCR2水平。双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清白细胞介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)水平。流式细胞术检测Th1/Th2细胞比例。结果模型组大鼠肾组织胶原纤维面积百分比和Katafuchi评分显著高于对照组(P<0.05);模型组大鼠肾组织CCR2、血清IL-4水平、Th2细胞含量及IL-4/IFN-γ比值显著高于对照组,血清IFN-γ水平、Th1细胞含量显著低于对照组(P<0.05);CCR2和IL-4水平及IL-4/IFN-γ比值与胶原纤维面积百分比、Katafuchi评分呈正相关(P<0.05);IFN-γ水平与胶原纤维面积百分比、Katafuchi评分呈负相关(P<0.05)。结论CCR2和Th1/Th2失衡参与IgA肾病大鼠肾间质纤维化发生和发展,拮抗CCR2和调节Th1/Th2平衡有可能减轻IgA肾病大鼠肾脏纤维化改变。

保真汤治疗气阴两虚型肺间质纤维化的临床效果

目的分析气阴两虚型肺间质纤维化患者采用保真汤治疗的效果.方法选取2018年9月—2020年12月潍坊市中医院收治的80例气阴两虚型肺间质纤维化患者为研究对象,以随机抽签法将其分为对照组及观察组,每组40例.对照组采用常规西药治疗,观察组采用保真汤治疗.比较两组的治疗效果.结果观察组的治疗总有效率为95.00%,高于对照组的77.50%,差异有统计学意义(P﹤0.05).治疗后,观察组的用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV_(1))及FEV_(1)/FVC水平均高于对照组,组间差异有统计学意义(P﹤0.05);观察组的各项中医证候积分均低于对照组,组间差异有统计学意义(P﹤0.05);观察组的生活质量综合评定问卷中各项评分均高于对照组,组间差异有统计学意义(P﹤0.05).结论气阴两虚型肺间质纤维化患者采用保真汤治疗的效果显著,可改善其肺功能,减轻症状,提高生活质量,值得临床推广使用.

芪术肺纤汤治疗特发性肺间质纤维化的临床疗效观察

目的探索芪术肺纤汤治疗特发性肺间质纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)患者的临床疗效。方法纳入40例2019年10月1日至2021年12月31日于中国中医科学院广安门医院就诊及住院的IPF患者,随机分为试验组和对照组各20例,对照组患者口服乙酰半胱氨酸胶囊加百令胶囊,试验组患者在此基础上加用芪术肺纤汤,治疗3个月后观察2组患者肺功能、6分钟步行距离(six-minute walk distance,6MWD)、静息状态血氧饱和度(oxygen saturation,SpO_(2))、圣乔治呼吸问卷(the Saint George's respiratory questionnaire,SGRQ)评分、血清涎液化糖链抗原6(krebs von den lungen-6,KL-6)水平、高分辨CT(high-resolution ct,HRCT)半定量评分变化。结果治疗后试验组患者一氧化碳弥散量占预计值的百分比(carbon monoxide diffusing capacity/predict value,DLCO%)明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);治疗后试验组SGRQ总分、症状评分、疾病影响评分、血清KL-6和HRCT半定量评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);肺功能分级和HRCT半定量评分呈正相关性(r=0.849,P<0.01)。结论芪术肺纤汤能够延缓IPF患者的肺纤维化进展,值得临床推广应用。

心肌间质纤维化相关生物标志物的研究进展

全球目前约有1.25亿冠状动脉疾病(coronary artery disease, CAD)患者,心肌梗死(myocardial infarction,MI)导致的缺血性心肌病(ischemic cardiomyopathy,ICM)和心力衰竭(heart failure, HF)是死亡、反复住院的主要原因^([1])。尽管造成心力衰竭的根本原因通常是多因素且相互重叠的,缺血性心肌病仍是心力衰竭的最大单一因素^([1])。

基于网络药理学探讨白芍总苷治疗类风湿关节炎肺间质纤维化的机制研究

[目的]通过网络药理学结合动物试验探究白芍总苷(TGP)主要药物成分与类风湿关节炎(RA)肺间质纤维化之间的作用靶点,揭示白芍总苷治疗RA肺间质纤维化的分子机制。[方法]通过检索多个数据库,根据2个ADEM参数口服生物利用度(oral bioavailability, OB)>30%、类药性(drug likeness, DL)>0.18,筛选出白芍总苷中的主要活性成分及作用的基因靶点;检索DrugBank、GeneCards、OMIM、TTD、DisGenet等数据库筛选RA和肺间质纤维化的基因靶点,通过UniProt数据库进行靶点蛋白的基因名转换,收集白芍总苷治疗RA和肺间质纤维化的作用靶点。获取化合物和疾病靶点取交集,制作韦恩图;将靶点交集导入到STRING数据库绘制PPI网络图,利用DAVID数据库进行GO功能和KEGG信号通路富集分析,深入分析其治疗类风湿关节炎合并肺间质纤维化的机制。将Wistar大鼠分为空白组、模型组、白芍总苷组和托法替布组,通过测定肺脏指数反映肺脏组织的水肿炎症反应,HE染色观察各组肺组织和踝关节滑膜租住的炎症反应,Masson染色观察肺脏组织的胶原沉积状况。[结果]检索TCMSP数据库,筛选得到85种白芍总苷的药物成分,根据OB>30%、类药性>0.18,共筛选9种主要成分;从DrugBank、DisGenet、OMIM、TTD和GeneCards等数据库筛选RA疾病靶点1 625个,肺间质纤维化的疾病靶点1 930个。通过GO功能和KEGG信号通路富集分析共获得分子功能65条目,细胞组分37条目,生物过程350条目和141个富集通路。通过中药-靶点-通路网络图,将Degree排名前十的肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-6(IL6)、AKT丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、基质金属蛋白酶9 (MMP9)、转录因子Jun(JUN)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)、胱天蛋白酶3(CASP3)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、细胞间黏附分子-1(ICAM1)作为白芍总苷治疗RA肺间质纤维化的关键作用靶点。动物试验结果显示,与模型组相比,治疗组的关节炎评分和肺脏指数降低;HE染色发现,白芍总苷组的关节和肺脏组织炎性细胞的浸润减少;Masson染色发现,白芍总苷可减少条索状的纤维化灶,表明白芍总苷不但可治疗RA,还能延缓肺间质纤维化的胶原沉积和减少炎症反应。[结论]白芍总苷通过多种成分作用于炎症反应、免疫调节和细胞分化增殖等方面的多靶点和多通路,通过靶点和通路间的协同相互作用来延缓RA肺间质纤维化疾病的发展进程。

基于网络药理学和分子对接技术探讨冬虫夏草治疗特发性肺间质纤维化的作用机制

目的:运用网络药理学和分子对接技术探究冬虫夏草治疗特发性肺间质纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)筛选出冬虫夏草的主要活性成分及其对应靶点;通过人类基因数据库(the human gene database,GeneCards)、在线人类孟德尔遗传数据库(online mendelian inheritance in man,OMIM)、DrugBank数据库检索获得IPF疾病相关靶点,取二者交集靶点作为冬虫夏草治疗IPF的关键作用靶点;将交集靶点上传至STRING数据库,构建冬虫夏草活性成分与IPF疾病的共同靶点蛋白-蛋白互作网络(protein-protein interactions,PPI),根据度值筛选出核心靶点;将交集靶点基因导入DAVID分析平台,进行基因本体(gene ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。结果:共获得冬虫夏草活性成分7个,作用于IPF的关键靶点84个;关键活性成分有乙酸亚油酯、花生四烯酸、胆固醇、β-谷甾醇,核心靶点有J原癌基因、过氧化物酶体增殖物激活受体γ、丝裂原活化蛋白激酶14等,GO和KEGG富集分析显示主要通路有TNF、VEGF、p53、cAMP、MARK、鞘脂等信号通路,涉及癌症、细胞凋亡、炎症反应等多个生物进程。冬虫夏草活性成分与靶点蛋白可以形成稳定的复合物。结论:冬虫夏草对IPF的治疗作用具有多成分、多靶点、多通路的特点。

祛痹化纤方治疗特发性肺间质纤维化临床疗效观察

目的探讨祛痹化纤方治疗特发性肺间质纤维化(IPF)患者的临床疗效。方法收集2016年6月—2020年12月就诊于北京中医药大学东方医院呼吸科的气虚血瘀痰阻证型的IPF患者共80例,随机分为试验组(40例)和对照组(40例),其中对照组给予基础的西医治疗,试验组在西医治疗的基础上给予补气活血通络配方颗粒,疗程为12周。观察两组患者治疗前后血气分析指标、肺功能检测、6分钟步行距离(6MWD)、胸部CT评分、圣乔治问卷评分及中医证候评分的变化。结果①试验组在改善动脉血氧分压(PaO_(2))、肺总量(TLC)、一氧化碳弥散量(DLCO)、6MWD、胸部CT评分、圣乔治问卷评分及中医证候评分方面显著优于对照组(P<0.05);②治疗后,两组间在动脉二氧化碳分压(PaCO_(2))方面差异无统计学意义(P>0.05)。结论祛痹化纤方能够改善IPF患者的低氧血症,延缓肺功能恶化,提高活动耐力,缓解中医临床症状,值得进一步临床推广应用。

基于网络药理学和分子对接技术探讨芪术肺纤汤治疗特发性肺间质纤维化的作用机制

目的:采用网络药理学方法和分子对接技术,探讨芪术肺纤汤治疗特发性肺间质纤维化(IPF)的作用机理。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台、中医药百科全书数据库和本草组鉴数据库等检索芪术肺纤汤各个药物的活性成分及靶点;在GeneCards、Drugbank、人类孟德尔遗传综合数据库和DisGeNET数据库中检索IPF的疾病靶点;利用Venny 2.1.0在线软件获取交集靶点,使用STRING数据库和Cytoscape软件绘制芪术肺纤汤治疗IPF的核心靶点蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)图;运用DAVID数据库和Metascape数据库对交集靶点进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;通过Cytoscape软件构建中药-成分-靶点-疾病图和中药-成分-靶点-疾病-通路图;最后将活性成分及核心靶点进行分子对接。结果:共获取芪术肺纤汤活性成分445个,靶点4 705个,IPF疾病靶点4 509个,两者交集靶点456个。利用PPI网络筛选到101个核心靶点;GO、KEGG富集分析分别得到1 148、196个富集结果;熊果酸、芹菜素、木犀草素和槲皮素等成分与核心靶点肿瘤蛋白p53(TP53)、肿瘤坏死因子(TNF)、蛋白激酶B(Akt)1、白细胞介素(1L)1β、IL-6和血管内皮生长因子A(VEGFA)等结合能力较强。结论:芪术肺纤汤可能通过熊果酸、芹菜素、木犀草素和槲皮素等成分与TP53、TNF、Akt1、1L-1β、IL-6和VEGFA等靶点结合,调控磷脂酰肌醇3激酶-Akt等信号通路,发挥治疗IPF的作用,为中医药治疗IPF提供了支持和参考。

保肾通络方对糖尿病肾病小鼠肾小管间质纤维化及上皮细胞间充质转分化的影响

目的:观察保肾通络方对糖尿病肾病(DN)小鼠肾小管间质纤维化及上皮细胞间充质转分化(EMT)的影响。方法:选用KK-Ay小鼠作为DN模型小鼠,随机分为模型组、保肾通络方组及缬沙坦组,正常对照组小鼠选用C57BL/6J小鼠。保肾通络方组小鼠给予保肾通络方灌胃治疗,缬沙坦组小鼠给予缬沙坦灌胃治疗,模型组、正常对照组小鼠给予剂量相同的蒸馏水灌胃治疗;灌胃给药12周后检测各组血清肌酐、尿素氮水平,HE、PAS、Masson染色观察肾组织病理改变,同时进行细胞外基质蛋白CollagenⅠ、FN及肾小管EMT标志蛋白α-SMA、E-cadherin表达检测。结果:模型组小鼠血清肌酐、尿素氮水平较正常对照组明显升高(均P<0.05),保肾通络方组及缬沙坦组小鼠血清肌酐、尿素氮水平较模型组明显降低(均P<0.05)。与正常对照组相比,模型组小鼠肾小管出现明显的间质纤维化及上皮细胞脱落、空泡变性,而保肾通络方组及缬沙坦组小鼠上述病理改变均明显减轻。模型组小鼠肾小管CollagenⅠ、FN蛋白及mRNA表达较正常对照组明显上调(均P<0.05),保肾通络方组及缬沙坦组小鼠肾小管CollagenⅠ、FN蛋白及mRNA表达较模型组明显下调(均P<0.05)。与正常对照组相比,模型组小鼠肾小管上皮细胞α-SMA蛋白及mRNA表达明显上调,E-cadherin蛋白及mRNA表达明显下调(均P<0.05);与模型组相比,保肾通络方组及缬沙坦组小鼠α-SMA蛋白及mRNA表达明显下调,E-cadherin蛋白及mRNA表达明显上调(均P<0.05)。结论:保肾通络方能够改善DN小鼠肾小管间质纤维化,减轻肾小管EMT。

基于Wnt/β-catenin信号通路探索芪蛭通络方对糖尿病肾病大鼠肾间质纤维化的作用机制

目的:基于Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路探讨芪蛭通络方对糖尿病肾病(DKD)大鼠肾间质纤维化的作用机制。方法:SD大鼠予高糖高脂饲料及腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作DKD模型,取50只造模成功的大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组(每日14 mg/kg)和芪蛭通络方低、中、高剂量组(每日1.215 g/kg、2.430 g/kg、4.860 g/kg),每组10只。同时取10只SD大鼠予普通饲料和腹腔注射柠檬酸缓冲液,作为正常组。造模成功后,各给药组每日予相应药物灌胃,正常组和模型组每日灌胃等体积蒸馏水,各组均连续灌胃8周。收集处死前1 d各组大鼠24 h尿液,检测24 h尿蛋白定量(24 h-UTP);处死前尾静脉取血,测血糖(GLU);末次给药后5 h,各组大鼠予异氟烷吸入麻醉,腹主动脉取血,分离血清测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);取双肾,采用苏木素-伊红(HE)染色法、马松(Masson)染色法观察各组大鼠肾脏组织病理变化;分别采用免疫组化(IHC)法、蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测各组大鼠肾组织Wnt1、β-catenin、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达。结果:模型组大鼠GLU、Scr、BUN、24 h-UTP水平均明显高于正常组(P<0.01),各给药组大鼠上述指标均明显低于模型组(P<0.01),芪蛭通络方高剂量组上述指标均明显低于厄贝沙坦组(P<0.01),芪蛭通络方对上述指标的改善作用表现出一定的剂量依赖性。病理图片显示,模型组大鼠肾小球结构遭到破坏,炎性改变明显,肾小管扩张,肾间质纤维化明显,肾组织蓝色胶原分泌增多且伴病理损伤;各给药组大鼠肾组织病理改变均有不同程度的改善,以芪蛭通络方高剂量组改善最为显著。免疫组化法及蛋白免疫印迹法结果显示,模型组大鼠Wnt1、β-catenin、CTGF、GSK-3β蛋白表达均明显高于正常组(P<0.01);各给药组大鼠上述蛋白表达均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。免疫组化法结果显示,芪蛭通络方高剂量组上述蛋白表达均明显低于厄贝沙坦组(P<0.05,P<0.01);蛋白免疫印迹法结果显示,芪蛭通络方高剂量组Wnt1、GSK-3β蛋白表达明显低于厄贝沙坦组(P<0.05,P<0.01),β-catenin、CTGF蛋白表达与厄贝沙坦组比较差异无统计学意义(P>0.05)。芪蛭通络方对上述蛋白的表达表现出一定的剂量依赖性。结论:芪蛭通络方可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活,在一定程度上延缓肾间质纤维化,从而起到保护肾功能的作用。

驱动肾小管间质纤维化的新机制

肾纤维化,尤其是肾小管间质纤维化,是所有慢性肾脏疾病进展为终末期肾病的最常见途径。肾小管上皮细胞在受到慢性损伤后会发生糖脂代谢改变、未折叠蛋白反应、自噬和衰老、上皮细胞-间充质转化和细胞周期G2/M期停滞等几种适应性反应。修复机制适应不良,会诱导产生肾小管间质纤维化。本文将讨论肾小管上皮细胞的这些适应性反应驱动肾小管间质纤维化的分子机制,为探寻肾小管间质纤维化新的药物作用靶点提供参考。

尿酸盐在慢性肾病并发肾间质纤维化中的作用及机制

目的探讨尿酸盐在慢性肾病并发肾间质纤维化过程中的作用及机制。方法利用0.2%腺嘌呤的饲料喂养小鼠9周,构建慢性肾病小鼠模型。造模结束后,小鼠眼眶后静脉丛采血,检测肾功能和血尿酸含量;HE染色和PAS染色分析肾脏组织病理变化;Masson染色观察肾脏纤维化程度;尿酸盐染色观察肾组织中尿酸盐沉积;Western blot和免疫组化检测目标分子的表达变化。利用不同浓度尿酸刺激原代培养小鼠肾小管上皮细胞(mRTECs)及人肾小管上皮细胞系(HKC);划痕实验观察尿酸对细胞迁移的影响。结果动物水平上,生化分析检测结果显示,模型组小鼠血清尿素氮(P=0.0064)、肌酐(P=0.0080)、血尿酸(P=0.0007)水平较对照组明显增加;HE和PAS染色结果显示,模型组小鼠出现严重肾小管损伤及炎症细胞浸润;Masson染色结果显示,模型组胶原沉积明显增加;尿酸盐染色结果显示,与对照组比较,模型组小鼠肾组织出现大量尿酸盐结晶;Western blot和免疫组化结果显示,模型组小鼠波形蛋白、平滑肌肌动蛋白和转化生长因子β1(TGF-β1)水平较对照组升高,E钙黏蛋白水平较对照组降低。细胞水平上,划痕结果显示,尿酸刺激促进肾小管上皮细胞迁移;Western blot检测结果与免疫组化一致。结论尿酸可通过促进肾小管上皮细胞分泌TGF-β1,进而促进上皮-间质细胞转分化,加速肾间质纤维化的发生。

丹龙口服液对肺间质纤维化小鼠肺组织病变的影响

[目的]观察中成药丹龙口服液对小鼠肺间质纤维化的影响,并对比其与西药吡非尼酮作用效果的差异,探讨丹龙口服液干预肺间质纤维化疗效及可能存在的机制。[方法]通过博来霉素鼻腔滴入法建立肺间质纤维化昆明小鼠模型,造模14 d后开始灌胃给药,治疗28 d。观察小鼠一般情况、肺功能、肺组织形态学染色、羟脯氨酸(HYP)及促纤维化因子水平等。[结果]丹龙口服液在各指标中均可与吡非尼酮治疗肺间质纤维化呈现相似或更佳水平。在体质量变化及一般情况中中成药较西药治疗更佳,肺功能水平中成药与西药改善情况相似;苏木精-伊红(HE)染色结果显示中成药与西药减轻肺泡炎症结果相似;Masson染色显示西药较中成药更佳;在肺组织HYP及血清、肺泡灌洗液中促纤维化因子表达水平中,两组呈现相似水平。[结论]丹龙口服液可以对防治小鼠肺间质纤维化中起到一定的作用,其作用与抑制肺组织炎症及降低促纤维化因子水平相关。

线粒体质量控制失衡导致糖尿病肾病肾间质纤维化的研究进展

肾间质纤维化是糖尿病肾病(diabetickidneydisease,DKD)的重要病理特征,也是促使其发展为终末期肾病的重要因素,严重威胁糖尿病肾病患者的生命安全。目前,糖尿病肾病的研究已取得较大进展,但线粒体质量控制在其发生、发展过程中的具体机制尚不清楚。真核细胞功能的维持离不开线粒体,而线粒体稳态的维持依赖于线粒体质量控制,包括线粒体生物发生、线粒体动力学、线粒体蛋白稳态以及线粒体自噬等机制。这些机制的缺失可能导致线粒体结构损伤和功能障碍,进而造成细胞死亡与组织损伤。越来越多的证据表明,线粒体质量控制失衡在肾间质纤维化的发生与进展中起到了关键作用。综述了在糖尿病肾病肾间质纤维化中线粒体质量控制的研究进展,以期为糖尿病肾病的治疗提供新的思路,从而提高糖尿病肾病患者的存活率和生活质量。

沉默信息调节因子3调节肾间质纤维化过程中的细胞凋亡和有氧糖酵解

目的观察肾纤维化模型中沉默信息调节因子3(silent information regulator 3,Sirt3)的表达变化及有氧糖酵解水平变化,探讨Sirt3在肾间质纤维化中的作用及机制。方法野生型小鼠及Sirt3基因敲除小鼠分别构建单侧输尿管梗阻肾纤维化模型,对侧肾脏为假手术对照组。HE染色及Masson染色观察肾脏病理变化,蛋白质印迹法检测Sirt3、纤维化相关标志性蛋白(纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白)、有氧糖酵解关键酶(己糖激酶2、M2型丙酮酸激酶)及凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达,脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测肾小管上皮细胞凋亡;体外培养人肾小管上皮细胞,分为对照组和si-Sirt3组,转化生长因子β1处理细胞,蛋白质印迹法检测上述纤维化相关蛋白及有氧糖酵解关键酶的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡。结果在体内外纤维化反应中,肾小管上皮细胞凋亡和有氧糖酵解水平明显增加,Sirt3表达显著下调。而Sirt3基因敲除进一步加重了肾小管上皮细胞凋亡和异常的有氧糖酵解,促进了肾间质纤维化。结论Sirt3可能通过抑制肾小管上皮细胞有氧糖酵解减轻肾间质纤维化,在慢性肾脏病中发挥保护作用。

通络益肾方对UUO大鼠肾间质纤维化及piezo1的影响

目的探讨通络益肾方对单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾脏纤维化及压电式机械敏感离子通道组件1(piezo-type mechanosensitive ion channel component 1,piezo1)的影响。方法以UUO大鼠为模型,以通络益肾方为干预手段,以缬沙坦为阳性药,连续给药14天。观察大鼠血肌酐和尿素氮变化。采用苏木素—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,观察大鼠肾脏病理形态学变化。采用Ⅲ型胶原免疫组化评估大鼠肾间质纤维化程度。采用CD34免疫荧光观察大鼠肾脏肾小管周毛细血管(peritubular capillary,PTC)变化。采用免疫组化、免疫蛋白印记法和转录PCR观察大鼠肾脏piezo1及其下游分子mRNA以及蛋白表达改变。结果与假手术组相比,模型组血清肌酐和尿素氮水平升高(P<0.05),与模型组相比,缬沙坦组和通络益肾方组血清肌酐(P<0.05)和尿素氮(P>0.05)较低。与假手术组相比,模型组镜下观察肾间质纤维化改变明显,PTC明显减少,piezo1表达增加,经通络益肾方和缬沙坦干预后UUO大鼠肾脏间质纤维化程度改善,PTC增多,piezo1表达减少。与假手术组相比,模型组piezo1蛋白表达显著增加(P<0.05),通络益肾方和缬沙坦干预均能降低piezo1蛋白表达(P<0.05);与假手术组相比,模型组大鼠肾组织胎盘生长因子(placental growth factor,PlGF)表达增多(P<0.05);与模型组相比,缬沙坦组和通络益肾方组PlGF表达增多(P<0.05);模型组PlGF的受体血管内皮生长因子受体1(FMS-like tyrosine kinase 1,flt1)表达较假手术组减少(P<0.05),缬沙坦组与通络益肾方组与模型组相比flt1表达水平的升高。结论通络益肾方能明显改善UUO大鼠肾间质纤维化进展,其机制可能是通过下调piezo1蛋白表达,上调ADM、PlGF及其受体flt1表达,减轻PTC损伤,起到拮抗肾间质纤维化的作用。

血红蛋白、基质金属蛋白酶-7水平与老年糖尿病肾病患者肾间质纤维化以及预后的关系分析

目的探讨血红蛋白(Hb)、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)水平与老年糖尿病肾病患者肾间质纤维化(RIF)以及进展为终末期肾病(ESRD)的关系。方法选择2014年4月至2020年4月石家庄市第三医院肾内科收治的103例老年糖尿病肾病患者(肾病组),95例单纯糖尿病患者(糖尿病组),59例体检志愿者为对照组。所有患者均接受Hb、MMP-7、肾功能、RIF血清学指标检测,出院后随访至2022年4月,统计ESRD发生情况。Pearson分析Hb、MMP-7与肾功能、RIF血清学指标的相关性。Kaplan-Meier生存曲线分析不同Hb、MMP-7水平下糖尿病肾病患者肾脏累积存活率。单因素或多因素COX风险比例回归分析老年糖尿病肾病患者ESRD的危险因素。结果肾病组Hb、估算肾小球滤过率(eGFR)低于对照组(P<0.05),MMP-7、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、转化生长因子(TGF)-β1、TGF-α水平高于对照组(P<0.05)。肾病组Hb与eGFR呈正相关(P<0.05),与Scr、BUN、TGF-β1、TGF-α呈负相关(P<0.05),MMP-7与eGFR呈负相关,与Scr、BUN、TGF-β1、TGF-α呈正相关(P<0.05)。低Hb水平组无ESRD累积存活率低于高Hb水平组(P<0.05),高MMP-7水平组无ESRD累积存活率低于低MMP-7水平组(P<0.05)。多因素COX回归分析结果显示TGF-β1、TGF-α、MMP-7是糖尿病肾病患者ESRD的危险因素(P<0.05),Hb、eGFR是糖尿病肾病患者ESRD保护因素(P<0.05)。结论老年糖尿病肾病患者Hb水平降低,血清MMP-7水平增高,且与肾功能下降、RIF以及ESRD发生有关。