间隙连接蛋白在肺腺癌细胞中的表达及其意义

目的探讨间隙连接蛋白B3(GJB3)对肺腺癌细胞H1299增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法利用RT-qPCR和Western blot实验分别检测人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)和肺腺癌细胞系(H441、A549、H1299)中GJB3的mRNA和蛋白水平的表达;筛选出GJB3表达量最高的H1299细胞系作为后续实验研究对象;对H1299细胞进行小干扰RNA(siRNA)转染,分为对照组(si-NC)和实验组(si-GJB3),在孵育0、24、48、72、96 h后采用CCK-8法检测H1299细胞活力,使用平板克隆检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞的侵袭能力。结果与人正常肺上皮细胞相比,在肺腺癌细胞中GJB3的mRNA和蛋白的表达量均较高(P<0.05),其中H1299细胞的表达量最为显著(P<0.05);在H1299细胞中敲低GJB3后,明显抑制了该细胞的活力、增殖能力和迁移及侵袭能力(P<0.05)。结论GJB3在肺腺癌细胞中高表达,可能促进肺腺癌细胞的发生和发展。

表皮生长因子通过间隙连接蛋白调控小鼠卵母细胞成熟的研究

目的探讨表皮生长因子(EGF)促进卵母细胞成熟的作用机制。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测性未成熟昆明白实验小鼠未成熟卵母细胞复合体(COCs)和成熟COCs中11种间隙连接蛋白(Cx)基因的表达情况;采用细胞免疫荧光实验,确定Cx43在未成熟/成熟COCs及卵母细胞中的表达部位;将未成熟COCs培养于0μg/L、1μg/L、10μg/L、50μg/L EGF培养基中观察其成熟率;将未成熟COCs培养于10μg/L EGF培养基中,观察0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h和24 h时间点的成熟率;将未成熟COCs和去颗粒细胞未成熟COCs分别培养于10μg/L EGF培养基中24 h,观察其成熟率;将未成熟COCs培养于10μg/L EGF培养基并分别加入0μg/L、0.1μg/L、1μg/L、10μg/L EGF受体(EGFR)抑制剂(AG),培养22~24 h后观察EGFR对EGF的作用;采用Western blot法检测未成熟COCs培养于10μg/L EGF培养基10 min、30 min、1 h和2 h后Cx43的磷酸化水平。结果RT-PCR结果显示,在小鼠未成熟/成熟COCs中Cx43和Cx45高表达。细胞免疫荧光实验结果显示,Cx43在未成熟COCs中表达于颗粒细胞的细胞膜上,在未成熟卵母细胞的细胞膜和透明带上也有高表达,且呈簇状分布;在成熟的COCs中Cx43在颗粒细胞膜上的表达量降低,在成熟卵母细胞中Cx43的表达量减少,且为均匀分布于细胞膜上,在透明带上不表达。培养于10μg/L EGF中的小鼠未成熟COCs的卵母细胞成熟率最高,达86.9%,显著高于其他不同浓度组(P<0.05)。在10μg/L EGF中培养24 h对小鼠未成熟COCs促进成熟的作用最显著,卵母细胞成熟率达86.2%,显著高于其他不同时长组(P<0.05)。将未成熟COCs去颗粒细胞后,培养于10μg/L EGF培养基中24 h后,未成熟COCs的卵母细胞成熟率没有显著变化(P>0.05)。EGFR特异性抑制剂AG能有效逆转EGF促进小鼠卵母细胞减数分裂恢复的作用,即抑制卵母细胞成熟,且1μg/L AG对EGF作用的逆转效果最显著(P<0.05)。Western blot结果显示,在未成熟COCs中,Cx43以非磷酸化形式为主;添加10μg/L EGF,培养10 min后,Cx43以磷酸化形式为主,持续至2 h时,Cx43又以磷酸化和非磷酸化两种形式存在。结论在小鼠未成熟COCs中,EGF可能通过与颗粒细胞上的EGFR结合,使Cx43快速磷酸化,促进卵母细胞减数分裂恢复和卵母细胞成熟。

间隙连接蛋白43与呼吸系统疾病相关性的研究进展

间隙连接蛋白43(Cx43)与各系统性疾病的相关性已成为近年研究的热点。Cx43一直是多学科交叉研究的核心,广泛参与疾病的病理生理过程。Cx43通过与不同通路中的不同受体产生关联影响疾病的发生、进展及结局。目前的研究主要集中于完善单个疾病中Cx43的具体作用机制,但其与呼吸系统疾病的相关性仍需进一步研究阐明。未来明确Cx43与新型冠状病毒肺炎、肺癌等呼吸系统疾病的关系,可以为相关疾病的治疗提供新思路。

胃癌组织中间隙连接超微结构改变及间隙连接蛋白-43的表达及其意义

目的观察胃癌组织中间隙连接结构的改变,并检测Cx43蛋白及m RNA在组织中的表达,为胃癌的发病机制研究提供新的思路,同时也为药物治疗提供潜在的作用靶点。方法通过透射电子显微镜技术观察正常胃与胃癌组织中间隙连接的变化;利用Western blot和RT-PCR技术检测Cx43在正常胃与胃癌组织中的表达水平。结果胃癌组织超微结构中细胞间隙连接破坏,分化越差破坏越严重,在正常胃组织中Cx43蛋白及m RNA的表达高于胃癌组织中的表达(P<0.05),在胃癌组织中高-中分化者Cx43蛋白及m RNA表达高于低分化者(P<0.05),胃癌组织中TNM分期Ⅰ/ⅡCx43蛋白及m RNA表达高于Ⅲ/Ⅳ期的表达(P<0.05),胃癌组织中浸润深度未侵及浆膜层者Cx43蛋白及m RNA的表达高于侵及浆膜层者(P<0.05),胃癌组织中无淋巴结转移者Cx43蛋白及m RNA的表达高于有淋巴结转移者(P<0.05),Cx43蛋白及m RNA在不同年龄和性别组中的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论间隙连接超微结构的改变同Cx43蛋白及m RNA的异常表达与胃癌的发生、发展有关,这为胃癌的发病及靶向治疗提供了新的方向。

间隙连接蛋白家族中Cx26、Cx32、Cx43在前列腺癌组织中的表达

目的:研究间隙连接蛋白家族中Cx26、Cx32、Cx43在前列腺癌(PCa)及良性前列腺增生(BPH)组织中的表达情况,分析三者与PCa生物学行为关系,探索其在PCa发生、发展中的作用机制,为PCa的诊断及治疗提供新的实验依据。方法:随机收集我院近4年存档的PCa石蜡标本31例、BPH 23例,采用免疫组化染色SABC法回顾性研究Cx26、Cx32、Cx43在PCa和BPH组织中的表达情况,半定量研究Cx26、Cx32、Cx43的表达与PCa、BPH的临床和病理参数的关系。结果:①Cx26、Cx32、Cx43在BPH、PCa组织中的阳性表达率分别为82.6%与74.2%(χ2=0.541,P>0.05)、78.3%与61.3%(χ2=1.763,P>0.05)和87.0%与38.7%(χ2=12.730,P<0.01),Cx43在PCa组织中的阳性表达率较BPH中显著降低。②Cx26、Cx43在PCa组织中的阳性表达强度与肿瘤的恶性程度呈负相关(r Cx26=-0.476,P<0.01;r Cx43=-0.484,P<0.01);Cx32的表达与肿瘤恶性程度无相关性(r=-0.242,P>0.05)。③3种Cx表达与年龄、血清PSA浓度及组织中PSA表达强度无相关性,且3种Cx间的表达亦无相关性。结论:Cx26、Cx32、Cx43在BPH和PCa组织中均有不同程度表达,其中Cx43在PCa的发生、发展中可能起到一定的作用,其也许可作为PCa除PSA外的另一标志物以及PCa生物治疗的新靶点,Cx26在PCa进展过程中可能起一定的作用,但其机制尚需进一步研究。

北京市大气PM_(10)和PM_(2．5)对人肺成纤维细胞间隙连接通讯及连接蛋白的影响

[目的]探讨北京市大气颗粒物PM_(10)和PM_(2.5)对人肺成纤维细胞(HLF)间隙连接通讯(GJIC)及间隙连接蛋白(Cx43)的影响。[方法]颗粒物样品采自北京市城区采暖期,实验细胞为HLF。采用划痕染料标记示踪法(SLDT)测定HLF的GJIC的水平;蛋白免疫印迹(weslen bloting)法观察HLF细胞膜上Cx43的表达。[结果]细胞划痕实验结果显示,PM_(10)和PM_(2.5)均可抑制细胞间荧光扩散,抑制作用随剂量增高而增强;蛋白免疫印迹结果显示,PM_(10)和PM_(2.5)可使细胞膜Cx43表达减少,减少量随浓度的增高而增加。[结论]北京市大气颗粒物PM_(10)和PM_(2.5)能抑制HLF的GJIC,抑制的机制可能与Cx43表达抑制有关。

卡维地洛对大鼠缺血再灌注心肌间隙连接结构影响的研究

目的:研究卡维地洛(CV D)对大鼠缺血再灌注损伤心肌间隙连接(GJ)结构的保护作用。方法:将24只大鼠随机分为假手术(SH AM)组、缺血再灌注(IRI)组和CV D组。CVD组以卡维地洛2m g/kg/d灌胃给药7d,SH AM组和IRI组以等量生理盐水灌胃7d。IRI组和CVD组结扎左冠状动脉前降支致大鼠心肌缺血30m in后复灌4h,制作成心肌缺血再灌注损伤模型。SH AM组只穿线不结扎。再灌4h末用免疫荧光和共聚焦显微镜扫描技术观察3组心肌GJ蛋白43(CX43)的分布及组成变化。结果:与SH AM组相比,IR I组CX43-GJ结构明显异常;与IRI组比较,CV D组CX43-G J结构基本正常。结论:卡维地洛具有保护心肌间隙连接结构的作用。

间隙连接基因Cx32在肝细胞癌中的表达意义

目的:探讨肝细胞癌(HCC)、癌旁组织及正常肝组织中细胞间隙连接Cx32mRNA与Cx32蛋白的表达及其在HCC发生中的意义和机制。方法:应用Western blot和RT-PCR分别检测Cx32蛋白和Cx32mRNA在26例HCC组织、22例癌旁组织和9例正常肝组织中的表达。结果:Cx32蛋白在HCC中的表达明显低于正常肝组织和癌旁肝组织(P<0.01);Cx32mRNA在HCC、癌旁肝组织和正常肝组织均有一定水平,但三者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Cx32蛋白在肝癌中的表达下调可能是肝癌发生的重要环节,Cx32蛋白的减少与该基因在翻译或蛋白质的加工修饰过程中调控异常有关。

间隙连接及其磷酸化调节

间隙连接细胞间通讯(gap junction intercellu lar commun ication,G JIC)是细胞对自身的代谢、增殖、分化等生理过程进行调节的一种重要途径。G JIC的基本组成单位间隙连接蛋白的磷酸化调节是影响G JIC功能的重要因素。蛋白激酶和蛋白磷酸酶通过使间隙连接蛋白磷酸化或脱磷酸化来调节G JIC功能。间隙连接蛋白的适度磷酸化促进G JIC功能的发挥,脱磷酸化或过磷酸化都可抑制G JIC功能,进而影响细胞的正常生理功能。

细胞间隙连接与肿瘤

介绍细胞间隙连接的结构、功能和调节,着重阐述间隙连接介导的细胞间通讯在肿瘤中的变化、影响因素以及在肿瘤治疗中的作用。

肿瘤细胞的间隙连接

间隙连接是细胞信号传导的重要途径 ,在细胞的协调生长步伐等方面的作用不容忽视。肿瘤细胞的形成和癌症的治疗都与其有关 ,特别是癌症基因治疗中的旁观者效应 (bystandereffect)与间隙连接胞间通讯 (GJIC)密切相关。现综述近年来有关间隙连接在肿瘤细胞的形成和治疗等方面的研究进展。

全反式维甲酸对大肠癌细胞间隙连接蛋白Cx32与Cx43表达及增殖和迁移能力的影响

目的:检测全反式维甲酸(ATRA)对大肠癌细胞Caco-2及SW480增殖、迁移及间隙连接蛋白Cx32与Cx43胞膜表达的影响,分析其对大肠癌效应作用机制。方法:取对数生长期大肠癌细胞分为ATRA处理组及阴性对照组,以1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5及1×10-4 mol·L-1 ATRA处理Caco-2及SW480细胞,应用MTT法测定其生长抑制率;以1×10-5及1×10-4 mol·L-1 ATRA处理SW480细胞,应用划痕法测定其迁移率,流式细胞术测定Cx32及Cx43胞膜阳性率。结果:与阴性对照组比较,ATRA处理组Caco-2及SW480细胞经1×10-4 mol·L-1 ATRA作用24、48及72h后,生长抑制率明显提高(P<0.01);ATRA处理组SW480细胞经1×10-5 mol·L-1 ATRA作用24和48h后,平均迁移率明显低于阴性对照组(P<0.05)。ATRA处理组SW480细胞经1×10-5及1×10-4 mol·L-1 ATRA作用24和48h后,胞膜Cx32及Cx43表达阳性率明显高于阴性对照组(P<0.05)。结论:ATRA可增加大肠癌细胞Cx43及Cx32膜表达,并抑制其增殖及迁移能力,其效应机制可能涉及间隙连接蛋白的胞内蛋白相互作用及细胞间通讯联系功能改变。

激光扫描共聚焦显微镜在细胞间隙连接研究中的应用

激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)是当今世界上最先进的分子细胞生物学分析仪器之一。旨就LSCM在细胞间隙连接蛋白的定位、定量、分布及细胞间分子迁移、胞间通讯等方面的应用进行综述,并对其在GJIC的研究进行展望。

妊娠滋养细胞疾病间隙连接蛋白CX43的表达

目的 :研究间隙连接蛋白 (CX43)在妊娠滋养细胞疾病中的组织定位和表达 ,探讨CX43与妊娠滋养细胞疾病的关系。方法 :采用单克隆抗体SP免疫组化技术和核酸原位杂交技术测定 1 1 0例妊娠滋养细胞疾病中CX43的表达情况。结果 :正常早孕绒毛中CX43阳性颗粒定位于细胞滋养层细胞的胞浆和胞膜中 ,胞核也有表达 ;合体滋养细胞和间质细胞几乎不表达。GTD中CX43表达明显减弱 ,有表达也仅局限于细胞膜上 ,胞核和胞浆中几乎不表达。正常早孕绒毛与妊娠滋养细胞疾病中CX43的表达有显著性意义 (P <0 .0 1 ) ,而滋养细胞疾病间则无显著性意义 (P >0 .0 5)。结论 :CX43表达降低及GJIC功能减弱 。

间隙连接研究进展

间隙连接通道是细胞间直接进行物质交流的惟一的膜通道结构。它在细胞间信号传递,物质交流等方面都起着重要的作用。构成间隙连接通道的蛋白亚基为间隙连接蛋白(connexin)。本文就目前已检测到的间隙连接蛋白的种类,间隙连接蛋白的基因突变与疾病的关系,检测间隙连接通讯的常用方法,间隙连接通道的调控机制及间隙连接对肿瘤细胞的影响作一综述。

细胞间隙连接通讯与糖尿病及血管并发症的关系

细胞间隙连接，又称缝隙连接（gap junction），是普遍存在于动物组织中的一种细胞连接形式，是由间隙连接蛋白（connexin）所构成的六聚体跨膜蛋白通道结构，通过它所介导的细胞间隙连接通讯（gap junctional intercellular communication GJIC），进行细胞间信息和能力传递，调控细胞的新陈代谢，增殖和分化等生理过程，对机体的代谢平衡和生长发育起重要的作用。近年来一系列研究表明间隙连接蛋白家族的一些成员所介导的GJIC与糖尿病及其血管并发症的关系密切，故本文对此作一综述。

不同恶化程度胃癌细胞系的细胞间隙连接通讯功能及Cx43表达的差异

以人正常胃黏膜上皮细胞系GES-1和不同恶化程度的人胃癌细胞系(低恶化AGS细胞系、中恶化SGC-7901细胞系、高恶化BGC-823细胞系)为研究对象,采用激光共聚焦显微镜的荧光漂白恢复技术及划痕标记荧光染料示踪技术研究不同恶化程度的胃癌细胞系细胞间隙连接通讯(Gap junctional intercellular communication,GJIC)功能的差异;采用荧光定量PCR技术和间接免疫荧光技术检测间隙连接蛋白(Connexin43,Cx43)基因在mRNA和蛋白水平的表达差异,探求其与胃癌恶性程度的相关性.结果表明,在正常胃细胞系和低、中及高恶化胃腺癌细胞系中,细胞间的GJIC功能随着恶性程度的升高而减弱(AGS、SGC-7901)或消失(BGC-823),且Cx43蛋白及mRNA的表达量随着恶性程度的升高而下调(AGS、SGC-7901)或缺失(BGC-823).这提示胃癌恶性程度与胃癌细胞的GJIC功能显著相关(P<0.05),GJIC在胃癌发生中起重要作用.