转基因番茄防龋疫苗急性和亚慢性毒性试验

为评价表达致龋变异链球菌表面蛋白和霍乱毒素B亚单位的转基因番茄防龋疫苗的安全性,进行了大鼠经口灌胃染毒试验。结果表明,急性毒性试验中大鼠均未见毒性症状,急性毒性LD50>20 g/kg;亚慢性毒性试验中大鼠均未见毒性症状,在血液学和生化、脏器系数和组织病理学检查中,试验组大鼠与阴性对照组间均无显著差异(P>0.05)。说明,表达致龋变异链球菌表面蛋白和霍乱毒素B亚单位嵌合体蛋白的转基因番茄防龋疫苗对大鼠安全。

转基因番茄可食用防龋疫苗免疫BALB/c小鼠的实验研究

目的：观察含PAcA/CTB的转基因番茄可食用防龋疫苗的免疫原性及免疫反应性。方法：将18只6-8周龄的雄性BALB/c小鼠,随机分为3组,每周分别灌胃含有PAcA/CTB嵌合蛋白的转基因番茄果汁（实验组）、非转基因番茄果汁（阴性对照组）、灭活全菌疫苗（阳性对照组）。于首次免疫前和免疫后第1、2、3、4周采集血液、唾液样品。ELISA检测其血清和唾液样本中的抗变异链球菌PAcA的IgG、IgA抗体效价。结果：阳性对照组和实验组小鼠血液和唾液中特异性抗体从免疫后1周开始升高,初始免疫后第4周达高峰,分别与阴性对照组比较存在统计学差异（P〈0.05或P〈0.01）。免疫后第2、3、4周阳性对照组与实验组差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：转基因番茄所表达的外源目的蛋白具有抗原性,能够诱导BALB/c小鼠产生免疫应答。

基因重组鼠伤寒沙门氏菌防龋疫苗的研究

目的 :确认变形链球菌表面蛋白pac基因A区片段重组表达质粒载体pET - 17b -A中的A区片段阅读框正确。方法 :利用ABI 310DNA自动测序仪进行DNA序列测定 ,并利用Internet进行联机检索 ,确定序列的构建正确与否。结果 :测定了重组表达质粒载体pET - 17b -A中的 35 0个碱基序列 ,联机检索序列的构建正确。结论 :重组表达质粒载体pET - 17b

基因重组乳链球菌防龋疫苗免疫定菌鼠的实验研究

目的为了阐明基因重组乳链球菌防龋疫苗的免疫效能。方法采用携带有变形链球菌表面蛋白（PAc）结构基因pac的重组乳链球菌防龋疫苗HL107通过灌胃、皮下注射、粘膜下注射三种途径对50只定菌Sprague－Dawley大鼠进行免疫，并以酶联免疫吸附试验进行鼠血清和唾液中抗PAc－IgG、IgA测定。结果通过灌胃进行免疫接种HL107的大白鼠血清中抗PAc－IgG、IgA抗体滴度和唾液中抗PAc－IgA抗体滴度明显高于乳链球菌LM0230免疫组和空白免疫组（P＜0.01）。结论基因重组乳链球菌具有变形链球菌表面蛋白的免疫原性，能够刺激定菌鼠产生特异性免疫反应和免疫表达产物。

基因工程变链菌防龋疫苗的研制

本文采用我们自己构建的基因工程龋齿疫苗菌株，大罐发酵培养３批、菌体收量平均湿重为２．６７ｇ／Ｌ，表达率为４４．２７％。菌体经超声裂解，硫酸铵和链霉素粗提，再经吸附层检，凝胶过滤和离子交换柱层析等步骤纯化精提ＧＴＦ抗原３批。提纯的ＧＴＦ抗原，平均比活，提纯倍数和收率，分别为５８．３４ｕ／ｍｇ、６．０８倍和１９．２５％。此抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，分子量为５５ＫＤ，纯度达到９６．７％，并对湿度具有较好的稳定性能。

基因重组乳链球菌防龋疫苗的研究Ⅶ.基因重组乳链球菌免疫BALB/c鼠的实验研究

目的：观察基因重组乳链球菌的免疫原性和免疫反应性。方法：对实验动物ＢＡＬＢ／ｃ鼠进行基因重组乳链球菌防龋疫苗的灌胃免疫，并以酶联免疫吸附实验进行鼠血清和唾液中抗特异性ＰＡｃ－ＩｇＧ测定。结果：接种重组乳链球菌ＨＬ１０２、ＨＬ１０７组血清中抗ＰＡｃ－ＩｇＧ明显高于乳链球菌免疫组（Ｐ＜０．０１），与接种变形乳链球菌组产生同样的ＩｇＧ反应（Ｐ＞０．０１）。结论：基因重组乳链球菌具有变形乳链球菌表面蛋白抗原的免疫原性，能够在ＢＡＬＢ／ｃ鼠中产生特异性免疫反应和免疫表达产物抗特异性ＰＡｃ－ＩｇＧ。

表达嵌合体蛋白PAcP/CTB的转基因番茄防龋疫苗口服免疫大白兔的研究

目的观察表达嵌合体蛋白PAcP/CTB转基因番茄防龋疫苗的免疫原性和免疫反应性。方法用PAc标准蛋白制作标准曲线,ELISA法检测番茄果实PAcP/CTB蛋白的浓度。实验动物按完全随机分组法分为3组,实验组喂食3个剂量(PAcP/CTB蛋白量相差1.5倍)的转基因番茄汁,阴性对照组喂食非转基因番茄汁,阳性对照组喂食变异链球菌灭活全菌疫苗。每周免疫1次,免疫4周,ELISA法检测大白兔唾液和血液样品中抗变异链球菌PAc的IgA、IgG抗体效价水平。结果转基因番茄中PAcP/CTB嵌合蛋白的浓度为9.37μg/mL。疫苗免疫动物后实验组与阳性对照组大白兔唾液和血液中的特异性抗PAc抗体升高,抗体水平可维持数周,而阴性对照组抗体水平变化不明显。结论表达嵌合体蛋白PAcP/CTB的转基因番茄免疫新西兰大白兔后,能有效的诱导唾液和血液中特异性抗体的产生,其具有较好的免疫原性。

转基因番茄防龋疫苗中外源目的基因鉴定及表达检测

背景:转基因植物可食性疫苗是以植物作为载体,将外源性基因整合到植物基因组当中,进一步激活动物或人体免疫系统以获得特异性免疫能力。但外源性基因的持续低表达量一直无法达到满意的免疫效果。目的:用分子生物学技术检测转基因番茄植株中pacA-ctxB融合基因表达及目的蛋白的表达量,为进一步观察可食用防龋疫苗的防龋效果提供研究基础。方法:(1)提取转基因番茄叶片总DNA,PCR检测外源性融合基因pacA-ctxB,实验分组3组:阳性对照组为质粒p2355-EPC10;空白对照组为普通番茄1株(红抗219);转基因组为转基因番茄9株;(2)BCA法检测转基因番茄果肉中总蛋白的水平;Western blot证实转基因番茄果实中PAcA/CTB目的蛋白的表达,目的蛋白检测分组2组:转基因组为表达外源性嵌合基因的转基因番茄5株(PCR检测阳性);空白对照组为普通番茄1株;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测转基因番茄果实中PAcA/CTB目的蛋白浓度。结果与结论:(1)PCR扩增结果可见9株转基因番茄中有5株出现约1.7 kb特异性扩增条带,占总检测植株的55%;(2)转基因番茄总蛋白为3.15 g/L;Western blot可见PCR检测为阳性的转基因番茄蛋白提取样本在分子质量约为58 kD处均出现了高密度条带,非转基因番茄蛋白样本未见特异条带;ELISA测得目的蛋白表达量约4.12 mg/L,占番茄可溶性总蛋白的0.13%;(3)结果说明,外源性融合基因pacA-ctxB能够在番茄植株中表达及产生目的蛋白。

葡糖基转移酶防龋疫苗研究进展

葡糖基转移酶是变链球菌组细菌致龋的主要毒力因子,因此针对GTFs的防龋疫苗具有广阔的发展前景。本文概述了GTFs防龋疫苗研究的新进展。

防龋疫苗的研究进展

龋病是一种极为常见的细菌感染。在巴西和中国等众多国家该病甚至呈流行趋势。由于严重受累的人群多为儿童,因此亟需一种有效并可普及的抑制龋病流行的方法。研究发现,口腔中的一组微生物-变异链球菌属(MS)与龋病密切相关,临床前研究也证实了用免疫的方法干预此病的可行性。可用于防龋疫苗的合适抗原、适宜的目标人群以及合理的给药时间等问题已逐渐清晰。本文就防龋疫苗研究的必要性及进展作一综述,以期为防龋疫苗的后续研究提供参考。

防龋疫苗的研究进展

防龋疫苗的研究进展李富明综述罗宗莲岳松龄审校对ＳＩｇＡ抗体产生机理的研究，为防龋疫苗的研制提供了新的思路和理论基础。随着不同剂型、佐剂和免疫途径的进一步研究，粘膜免疫系统的抗体产生也出现了新的看法［１］。但是，疫苗的更新，总是向着增加疫苗的免疫效果的...

基因重组乳链球菌防龋疫苗主动免疫防龋研究 Ⅲ.静脉内注射免疫孕兔的实验研究

利用ＥＬＩＳＡ法观察携带有变形链球菌表面蛋白基因的重组乳链球菌ＨＬ１０７经静脉内注射免疫孕兔后诱导机体免疫应答情况。结果表明，免疫１周后，血清和乳清中特异性ＩｇＧ型抗体明显升高，并持续数周。提示重组乳链球菌ＨＬ１０７具有变形链球菌表面蛋白抗原ＰＡｃ的免疫原性。

放免法用于检测基因工程防龋疫苗抗体的研究

用国产12 5I同位素 ,以氯胺T氧化法 ,标记变链菌GTF抗原 ,其放射碘利用率 >40 % ,放化纯度 >95 % ,所得标记物置 - 2 0℃ 12 0d或 4℃ 6 0d仍可使用。采用放免法检测基因工程防龋疫苗免疫的家兔、鸡血清抗GTF抗体和卵黄抗GTF抗体 ,结果提示 ,该法是一种特异性强 ,灵敏度高 。

基因工程重组防龋疫苗的研究进展

防龋疫苗的研究经历了三个阶段,目前国外仍将变链菌细胞表面蛋白抗原Ⅰ/Ⅱ和葡糖基转移酶蛋白抗原基因工程重组疫苗作为研究的重点。本文对基因重组防龋疫苗的研究近况进行了综述。

基因重组乳链球菌防龋疫苗的研究──Ⅵ．乳链球菌重组质粒pLF稳定性的实验观察

本研究从分析乳链球菌转化子ＨＬ４５、ＨＬ１０２、ＨＬ１０７中质粒的稳定性入手，了解所用质粒载体对克隆基因表达的影响。质粒稳定性实验结果发现在含有５μｇ／ｍｌ红霉素培养环境下，未出现失去红霉素抗性的红霉素敏感菌株；在红霉素缺失的条件下仅有１％～２％菌落失去抗性，成为红霉素敏感菌株。提示质粒稳定地存在于重组乳链球菌ＨＬ４５、ＨＬ１０２、ＨＬ１０７中，ｒＰＡｃ的低产生水平与在红霉素培养条件下质粒的丧失无关。基因表达的影响因素有待于今后不断深入分析研究。

基因重组乳链球菌防龋疫苗的研究 Ⅴ.重组乳链球菌中RNA的提取纯化及RNA点印迹杂交

对参与蛋白质生物合成的转录产物ＲＮＡ进行异硫氰酸胍提取，氯化铯超速离心纯化以及ＲＮＡ点印迹杂交，测定重组乳链球菌中特定的ＲＮＡ，分析影响重组基因表达的因素。紫外分光法测定获得高浓度（５～８ｍｇ／ｍｌ）、纯度（ＯＤ２６０／ＯＤ２８０＞２．０）ＲＮＡ。以切口平移生物素标记ＤＮＡ探针并进行ＤＮＡ－ＲＮＡ点印迹杂交，光基因核酸系统检测结果提示，乳链球菌ＨＬ１０７，ＨＬ４５均含有与变形链球菌相同的特定ＰＡｃ－ｍＲＮＡ靶序列及密度扫描影像。提示ＰＡｃ－ｍＲＮＡ作为指导蛋白质合成的中介物存在于重组乳链球菌中，使重组乳链球菌完成了克隆ｐａｃ基因的表达。

嵌合体防龋疫苗的研究进展

嵌合体防龋疫苗是将变链球菌的毒力因子葡糖基转移酶和表面蛋白,或分别与霍乱毒素亚单位相嵌合,依据嵌合方式不同,分化学嵌合、基因工程嵌合、直接嵌合基因免疫。对不同方式嵌合防龋疫苗的研究,有助于比较疫苗的有效性,为免疫防龋提供理论依据。

DNA防龋疫苗经TSG途径免疫BALB/c小鼠实验研究

目的观察编码PAc结构基因A-P片段的重组质粒pCIA-P以经肌肉和颌下腺周围区域皮下注射(TSG)两种途径免疫BALB/c小鼠后的特异性免疫反应,并观察表面蛋白抗原PAc在小鼠颌下腺中的表达。方法将25只BALB/c小鼠随机分为4组,分别以重组质粒pCIA-P经肌肉、颌下腺区周围区域皮下注射两种途径免疫小鼠及pCI质粒和生理盐水肌肉免疫小鼠,ELISA法检测血清和唾液中特异性抗体水平动态变化。将pCIA-P经颌下腺区周围区域皮下注射以免疫组化技术观察表面蛋白抗原PAc。结果颌下腺区皮下注射法免疫后唾液IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体均明显升高,并持续数周。肌肉注射法后血清IgG型特异性抗体明显升高,但未有效诱导产生唾液IgA型特异性抗体。在小鼠颌下腺中检测到PAc蛋白的表达。结论重组质粒pCIA-P是一种有效的免疫原,该DNA防龋疫苗经颌下腺周围区域皮下注射免疫是可诱导长期粘膜免疫的有效途径。