六味地黄汤对阿霉素肾病小鼠尿蛋白及肾小球p-p38 MAPK、α-actinin-4、synaptopodin的影响

目的探讨六味地黄汤对阿霉素肾病(adriamycin nephropaghy,ADRN)小鼠尿蛋白的干预作用及可能机制。方法30只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机选取5只为空白组,余下小鼠以单次尾静脉注射阿霉素(0.01 g·kg^(-1))复制ADRN模型,2周后将造模成功的小鼠随机分为模型组、贝那普利组及低、中、高剂量六味地黄汤组,每组5只。空白组、模型组予等体积注射用水灌胃,贝那普利组予0.0013 g·kg^(-1)贝那普利灌胃,低、中、高剂量六味地黄汤组分别予9.75、19.5、39 g·kg^(-1)六味地黄汤灌胃,每日1次,连续8周。自动生化仪检测小鼠24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清肌酐、血清钾;HE染色法、电镜观察小鼠肾脏病理改变及足突形态;免疫组织化学法、Western bolt检测小鼠肾脏磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK)、α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)、突触孔蛋白(synaptopodin)的表达;RT-PCR检测小鼠肾脏α-actinin-4、synaptopodin mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、24 h尿量、血清白蛋白降低,24 h尿蛋白定量升高(P<0.05);肾小球系膜细胞增生,部分系膜区扩大、肾小管蛋白管型,间质可见炎性细胞浸润,足突广泛融合;α-actinin-4蛋白及mRNA、p-p38 MAPK蛋白表达升高(P<0.05),synaptopodin蛋白及mRNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,各干预组病理改变及足突融合均得到不同程度改善,贝那普利组及中、高剂量六味地黄汤组24 h尿蛋白定量减少,高剂量六味地黄汤组p-p38 MAPK蛋白表达降低(P<0.05),低、中、高剂量六味地黄汤组synaptopodin蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。贝那普利组及低、中、高剂量六味地黄汤组组间比较,各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论六味地黄汤可能通过抑制p38 MAPK通路活化和上调α-actinin-4、synaptopodin蛋白及mRNA表达,改善肾脏病理及足突融合,减轻足细胞损伤,减少ADRN小鼠尿蛋白。

五苓散与麻黄五苓散对阿霉素肾病大鼠肾功能保护效应的比较研究

目的观察并比较五苓散与麻黄五苓散对阿霉素肾病(adriamycin nephropathy,AN)模型大鼠的干预效应,并研究其作用机制。方法50只SD大鼠随机分成5组,即空白对照组、模型组、贝那普利组、五苓散组、麻黄五苓散组。除空白对照组外,所有大鼠采用尾静脉注射盐酸阿霉素方法复制大鼠肾病模型。各给药组分别灌胃相应药物,给药期间监测大鼠每周体质量;5周后检测24 h尿量和尿蛋白;检测血清中肌酐(serum creatinine,SCr)、血尿酸(serum uric acid,SUA)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)含量;Western blot检测肾组织中肾病蛋白(nephrin)、足突蛋白(podocin)表达水平;HE染色观察大鼠肾组织病理变化。结果与空白对照组比较,模型组大鼠平均体质量显著下降(P<0.01),尿量减少(P<0.05),24 h尿蛋白显著增加(P<0.01),SCr、SUA及BUN水平均显著升高(P<0.01),HE染色显示肾组织细胞形态不规则,胞核变形,染色质边集,nephrin、podocin蛋白表达显著下降(P<0.01)。与模型组比较,麻黄五苓散组大鼠平均体质量增加(P<0.01),尿量增加(P<0.05),24 h尿蛋白含量明显降低(P<0.05),SUA和BUN水平显著下降(P<0.01),大鼠肾组织微观病理损伤明显减轻,nephrin、podocin蛋白表达显著升高(P<0.01)。与五苓散组比较,麻黄五苓散组大鼠尿量显著增加(P<0.01),24 h尿蛋白含量明显减少(P<0.05),nephrin蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论麻黄五苓散可有效抑制阿霉素肾病大鼠肾组织损伤,降低尿蛋白,改善肾功能。与五苓散比较,麻黄五苓散具有更明显的利尿和抑制尿蛋白作用。

禾肾丸通过调控ANGPTL3治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿及血脂代谢紊乱的实验研究

目的:探讨禾肾丸通过调控血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿及血脂代谢紊乱的作用机制。方法:50只雄性SD大鼠随机分为5组,每组10只,空白组:不作特殊处理,仅予以每日清晨蒸馏水灌胃;模型组:造模成功后每日清晨蒸馏水灌胃;禾肾丸组:造模成功后每日清晨以禾肾丸灌胃;对照组:造模成功后每日清晨以泼尼松灌胃;联合用药组:造模成功后每日清晨以泼尼松、禾肾丸灌胃,各组均灌胃8周。密切观察各组大鼠造模及研究期间各种行为学改变,检测和比较各组大鼠造模前1 d及造模后第2、4、6、8周末24 h尿蛋白水平,同时检测和比较各组大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等血脂指标及血清ANGPTL3表达水平。分析各组大鼠血清ANGPTL3表达水平与血脂指标及造模后第8周末24 h尿蛋白水平的相关性。结果:禾肾丸组、对照组及联合用药组大鼠造模后第8周各种行为学改变均优于模型组;各组大鼠造模前1 d 24 h尿蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05),造模后第2、4周模型组、禾肾丸组、对照组及联合用药组大鼠24 h尿蛋白水平均明显高于空白组(P<0.05),而组间比较差异无统计学意义(P>0.05),造模后第6、8周禾肾丸组、对照组大鼠24 h尿蛋白水平明显高于联合用药组和低于模型组(P<0.05),而禾肾丸组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);模型组、禾肾丸组、对照组及联合用药组大鼠TC、TG、LDL-C等血脂指标及血清ANGPTL3表达水平均明显高于空白组(P<0.05),而HDL均明显低于空白组(P<0.05),且禾肾丸组、对照组大鼠TC、TG、LDL-C及ANGPTL3均低于模型组和高于联合用药组(P<0.05),HDL-C均高于模型组和低于联合用药组(P<0.05),而禾肾丸组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);各组大鼠血清ANGPTL3表达水平与TC、TG、LDL-C及24 h尿蛋白均呈正相关关系(P<0.05~P<0.01),而与HDL-C呈负相关关系(P<0.05~P<0.01)。结论:禾肾丸可能通过调控ANGPTL3而起到治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿及血脂代谢紊乱的作用。

越婢汤调控肾脏毛细血管通透性对阿霉素肾病大鼠水肿的干预作用

目的观察越婢汤对阿霉素肾病大鼠肾脏毛细血管通透性的影响,阐明其干预肾病综合征大鼠水肿的作用机制。方法采用尾静脉注射阿霉素建立大鼠肾病综合征模型。大鼠随机分为正常组、模型组及越婢汤低、中、高剂量组(6.6、11.1、22.2 g/kg),灌胃给予相应药物14 d。给药结束后,检测肾脏毛细血管通透性、肾脏及皮肤干湿重比例,观察肾脏病理学变化,检测血清Scr、BUN、TC、ALB及尿液24 h UTP水平,ELISA法检测肾组织VEGF水平,免疫组化法检测肾组织VEGF、VEGFA、VEGFR2阳性表达,Western blot法检测肾组织VEGF、VEGFA、VEGFR2、p-ERK1/2、ERK1/2和Rap1蛋白表达。结果与模型组比较,越婢汤高剂量组大鼠肾脏及皮肤干湿重比例升高(P<0.05,P<0.01),VEGF和VEGFA蛋白表达降低(P<0.01);中、高剂量组大鼠肾脏毛细血管通透性,血清Scr、BUN、TC水平,尿液24 h UTP水平,肾组织VEGF水平和VEGFR2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),ALB水平升高(P<0.01),肾组织病理学改善;越婢汤各剂量组大鼠肾组织p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达比值降低(P<0.01),Rap1蛋白表达升高(P<0.01)。结论越婢汤可以减轻阿霉素肾病大鼠皮肤和肾脏水肿,其作用机制和调控VEGF/ERK信号通路,改善肾脏毛细血管通透性有关。

真武汤、越婢汤对阿霉素肾病大鼠肾组织自噬相关基因PTEN/LC3的影响

目的观察真武汤、越婢汤对阿霉素肾病大鼠肾组织磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)及肾脏自噬标志性分子微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)表达的影响。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组、真武汤组(真武组)、越婢汤组(越婢组),每组12只。用阿霉素复制肾病综合征大鼠模型。造模成功后空白组和模型组以生理盐水灌胃,中药两组分别以真武汤和越婢汤颗粒剂灌胃,6周后检测血清白蛋白(ALB)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及24 h尿蛋白定量(24-hour urine total protein quantity,24 h UTP)等,光镜观察肾脏病理,免疫组化观察大鼠肾组织PTEN、LC3的表达。结果与空白组相比,模型组肾脏病理可见部分肾小球肥大、毛细血管腔变窄,肾小管扩张、管腔可见蛋白质管型,间质可见炎性细胞浸润等;24 h UTP及Scr、BUN升高,ALB、LC3及PTEN表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,中药两组肾脏病理改善,24 h UTP、Scr明显下降,ALB升高,肾组织LC3、PTEN表达增强,差异有统计学意义(P<0.05)。而真武组与越婢组比较无明显差异。结论真武汤和越婢汤均能改善阿霉素肾病大鼠的生化指标及肾脏病理,其作用机制可能与升高肾组织PTEN、LC3表达有关。

汉防己甲素联合环孢素干预钙依赖的TRPC6/Calpain-1信号网路改善阿霉素肾病大鼠足细胞损伤的研究

目的通过干预阿霉素肾病模型,探讨汉防己甲素(Tet)是否可以通过干预钙依赖的TRPC6/Calpain-1信号网络起到足细胞保护的作用,与钙调磷酸酶抑制剂环孢素A(CsA)合用是否存在协同效应。方法SD大鼠阿霉素尾静脉注射建立足细胞损伤动物模型,分别给予Tet低、中、高剂量,并予CsA作为对照,并设置Tet联合CsA组,监测各组大鼠肾功能、蛋白尿水平、电镜观察病理组织结构、western blot法检测TRPC6/Calpain-1信号环路蛋白的表达,及测定Calpain及CaN活性。结果模型组大鼠蛋白尿明显增多,肾功能下降,病理上可见足细胞广泛融合,肾组织Calpain-1、CaN表达升高,而synaptopodin和Talin-1表达降低,Calpain和CaN活性显著上调。Tet中、高剂量组及CsA组均能减少蛋白尿,降低血肌酐,改善足细胞病变,Tet联合CsA组作用优于单用CsA组。Tet中、高剂量组能抑制表达升高的TRPC6,Calpain-1,提高synatopodin、Talin-1的表达,但均对CaN活性无抑制作用;CsA显著抑制CaN的表达,可抑制Calpain-1的表达、对TRPC6无抑制作用。Tet联合使用CsA,对TRPC6、CaN蛋白及活性,Calpain-1蛋白及Calpain活性均存在抑制作用,有协同效应。结论Tet能改善阿霉素肾病模型的蛋白尿肾功能及足细胞病理损伤,其机理可能是通过抑制TRPC6过表达引起的Calpain-1活化、减少钙离子的内流,稳定足细胞骨架蛋白,联合使用CsA可实现对CaN等钙信号网络的多靶点抑制,提高疗效及改善病理。

基于阿霉素肾病模型探讨肾康灵胶囊联合泼尼松对慢性肾病的初步疗效

目的研究肾康灵胶囊联合泼尼松对阿霉素肾病(Adriamycin nephropathy,AN)大鼠的肾脏保护作用,初步探索肾康灵胶囊在慢性肾病激素治疗中发挥的药效学作用。方法雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、泼尼松组和联合治疗组(泼尼松+肾康灵胶囊)。大鼠尾静脉注射阿霉素制备AN模型并进行药物治疗,检测大鼠血清ALB、BUN、Cr、CHOL和TG等指标及24 h尿蛋白量水平,HE染色观察肾脏组织形态学变化。结果与模型组相比,泼尼松组和联合治疗组可降低大鼠血清BUN、Cr、CHOL、TG水平,升高ALB水平,HE染色结果显示可减少肾脏组织损伤。与泼尼松组相比,联合治疗组可升高AN大鼠血清ALB水平,显著降低AN大鼠24 h尿蛋白量及血清CHOL、TG水平。结论与单纯泼尼松治疗相比,肾康灵胶囊联合泼尼松可进一步减少AN大鼠的肾脏损伤,显著改善AN大鼠的血脂代谢异常。

黄芪甲苷通过调控Sirt1/PGC-1α信号通路发挥对阿霉素肾病的保护作用

目的研究黄芪甲苷通过调控沉默信息调节因子2同源蛋白1(Sirt1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α)信号通路发挥对阿霉素肾病的保护作用。方法60只6周的雄性SD大鼠中取8只作正常对照组,其余大鼠尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病大鼠模型,采用随机数字法将筛选出的40只模型大鼠分为模型组、西药组、黄芪甲苷低、中、高剂量组,各8只。西药组以每日0.9 mg/kg标准洛丁新混悬液灌胃,黄芪甲苷低、中、高剂量组每日分别以20、40、80 mg/kg剂量进行灌胃,每日1次,持续6周;正常组、模型组给予等容积的0.9%氯化钠溶液。干预后采用生化法检测各组24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酐、尿素氮水平,酶联免疫吸附法检测肾组织白细胞介素1β(IL-1β)含量;采用苏木精-伊红染色法观察大鼠肾脏病理形态。蛋白印迹法检测肾组织中Sirt1、PGC-1α蛋白表达。结果相对于正常组,模型组24 h尿蛋白、肾组织IL-1β水平显著上升,差异均有统计意义(P<0.05);相对于模型组,西药组与黄芪甲苷高剂量组24 h尿蛋白显著下降,黄芪甲苷高剂量组IL-1β水平明显降低,差异均有统计意义(P<0.05);相对于西药组,黄芪甲苷低、中剂量组24 h尿蛋白、IL-1β上升,差异均有统计意义(P<0.05);相对于低剂量组,黄芪甲苷高剂量组24 h尿蛋白、IL-1β显著下降,差异均有统计意义(P<0.05)。相对于正常组,模型组白蛋白水平下降,ALT、肌酐、尿素氮水平上升,差异均有统计意义(P<0.05);与模型组比较,西药组与黄芪甲苷中、高剂量组白蛋白、ALT水平有所改善,且肌酐、尿素氮水平下降,差异均有统计意义(P<0.05)。西药组与黄芪甲苷高剂量组的各指标相当,优于黄芪甲苷低、中剂量组,差异均有统计意义(P<0.05)。正常组肾小球结构正常,无病理变化;模型组肾脏系膜有增生,系膜基质增多,肾小管上皮有肿胀,可见大量炎症细胞浸润;西药组与黄芪甲苷中、高剂量组肾小球系膜细胞增生有不同程度减轻,肾小管上皮细胞水肿得到改善,炎症细胞浸润缓解,效果优于黄芪甲苷低剂量组。与正常组比较,模型组Sirt1、PGC-1α蛋白表达升高,差异均有统计意义(P<0.05);与模型组比较,西药组Sirt1、PGC-1α蛋白抑制表达,差异均有统计意义(P<0.05);黄芪甲苷高剂量组Sirt1、PGC-1α蛋白表达高于低、中剂量组,差异均有统计意义(P<0.05)。结论黄芪甲苷能改善阿霉素诱导的大鼠肾损伤,通过上调肾组织Sirt1、PGC-1α蛋白表达以抑制炎症反应,改善肾功能而延缓病情发展,其中80 mg/kg剂量的效果更佳。

真武汤调节鞘氨醇激酶1-磷酸鞘氨醇信号通路抗阿霉素肾病大鼠肾损伤的作用研究

目的:研究真武汤对阿霉素肾病(Adriamycin Nephropathy,AN)模型大鼠鞘氨醇激酶1(Sphingosine Kinase 1,SphK1)-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)信号分子的影响,探讨真武汤治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿的机制。方法:常规检测各试验组动物血脂、血浆白蛋白、24小时尿蛋白含量;实时聚合酶链反应(Real-time Polymerase Chain Reaction,RTPCR)检测肾组织中SphK1基因表达;免疫印迹法(Western Blot)检测肾组织中SphK1蛋白表达;液相色谱-串联质谱法(Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS)检测SphK1、S1P活性。结果:模型组大鼠血脂水平、24小时尿蛋白含量显著升高,血浆白蛋白水平显著降低(P<0.05),肾脏SphK1酶活性、蛋白表达及S1P含量显著升高(P<0.05);与模型组相比,各给药组血脂水平、24小时尿蛋白含量明显降低,血浆白蛋白水平明显升高(P<0.05),肾脏SphK1酶活性、基因和蛋白表达及S1P含量明显下降(P<0.05),各治疗组之间差异无统计学意义。结论:真武汤可减少AN模型大鼠肾组织的SphK1酶活性、蛋白表达及S1P含量,改善其蛋白尿、血脂及血浆白蛋白水平。其作用可能与抑制SphK1、S1P信号分子的表达有关。

淫羊藿苷对阿霉素肾病大鼠肾损伤的影响及其协同激素增效机制的研究

目的探究淫羊藿苷(ICA)通过炎症-纤维化反应对阿霉素肾病模型大鼠肾损伤的影响及其协同激素增效的作用机制。方法60只SD大鼠随机取12只作为空白组,其余48只复制阿霉素肾病模型,分为模型组、泼尼松组、ICA组及联合组,每组12只。泼尼松组按6.3 mg/(kg·d)剂量予以泼尼松,ICA组按50 mg/(kg·d)剂量予以ICA,联合组按泼尼松组和ICA组的药物剂量予以泼尼松+ICA,空白组和模型组仅予以0.9%生理盐水按1 mL/100 g剂量灌胃,并连续灌胃6周。全自动血液生化分析仪检测血清白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr);酶联免疫吸附试验检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、纤维黏连蛋白(FN);Western blotting检测SPARC蛋白表达;Masson染色法观察肾组织病理学改变。结果与空白组相比,模型组大鼠肾小球基底膜沉积物逐渐增多,肾小球硬化和肾小管间质纤维组织增生,广泛间质纤维化;与空白组相比,24 h尿蛋白量升高,ALB、Scr降低,BUN、IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β、FN升高,SPARC蛋白相对表达量升高(P<0.05)。与模型组相比,各治疗组上述病理改变减轻,24 h尿蛋白量降低,ALB、Scr升高,BUN、IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β、FN降低,SPARC蛋白相对表达量下降(P<0.05)。结论ICA能够减轻炎症反应,抑制纤维化,对阿霉素肾病大鼠肾损伤发挥保护作用。

萆薢分清颗粒对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及肾小球滤过屏障相关蛋白HSPG、α-actinin-4、nephrin的影响

目的:通过实验研究观察萆薢分清颗粒对阿霉素肾病大鼠肾小球滤过屏障相关蛋白HSPG、α-actinin-4、nephrin表达的影响,探讨萆薢分清颗粒修复阿霉素肾病大鼠足细胞损伤,保护肾小球滤过屏障的作用机制。方法:本研究选用60只SPF级SD大鼠,适应性喂养1周后随机分为空白组、造模组,造模组分为阿霉素肾病模型组(模型组)、萆薢分清颗粒干预组(中药组)、泼尼松干预组(泼尼松组)、萆薢分清颗粒+泼尼松干预组(结合组),每组12只。造模成功后各组大鼠开始药物干预治疗4周,治疗期间记录24 h尿蛋白(24-hour urine protein, 24 h-UPr),4周后收集大鼠肾脏标本进行检测。借助免疫组化法及Western blot检测HSPG、α-actinin-4、nephrin蛋白在阿霉素肾病大鼠肾脏中的表达水平。结果:(1)24 h尿蛋白定量测定示:造模后,与空白组比较,模型组24 h尿蛋白定量显著升高(P<0.05);给药后,各治疗组比同期模型组24 h尿蛋白不同程度减少(P<0.05)。(2)免疫组化及Western blot检测结果示:(1)与模型组比较,各治疗组HSPG表达明显增多(P<0.05);各药物干预组间,与中药组、泼尼松组比较,结合组HSPG表达明显增多(P<0.05)。(2)与模型组相比,各药物干预组大鼠肾组织α-actinin-4蛋白表达均有所下降(P<0.05);各药物干预组间,与中药组、泼尼松组相比,结合组α-actinin-4蛋白表达下降(P<0.05)。(3)与模型组相比较,结合组肾组织nephrin蛋白的相对表达量和平均光密度值均升高(P<0.05)。结论:萆薢分清颗粒可通过上调阿霉素肾病大鼠肾组织HSPG、nephrin表达水平,下调肾组织α-actinin-4蛋白表达,从而修复阿霉素肾病大鼠足细胞损伤,保护肾小球滤过屏障,降低尿蛋白的排泄,改善肾小球滤过功能,减轻肾损伤,尤其在联合泼尼松时效果更明显。

复方青龙衣胶囊对阿霉素肾病模型大鼠尿蛋白及足细胞自噬因子表达影响

目的探究复方青龙衣胶囊对阿霉素肾病模型大鼠尿蛋白及足细胞自噬因子的影响。方法将60只雄性SD大鼠随机分为4组,即空白组(K组)、模型组(M组)、青龙衣组(Q组)、雷公藤多苷组(L组)。除K组注射等体积生理盐水外,其余各组大鼠构建阿霉素肾病模型。造模成功后,Q组给予复方青龙衣胶囊溶液,剂量为378mg/kg/d。L组给予雷公藤多苷片溶液,剂量为7.875mg/kg/d。K组及M组给予等容积蒸馏水灌胃。治疗4周,在第1、2、4周末,收集24 h尿液,测定大鼠24h-UPr。治疗结束后,腹主动脉取血,检测Scr、BUN、TP、ALB、TC、TG。HE染色观察肾脏病理变化,透射电镜观察肾组织超微结构,实时荧光定量PCR检测肾组织Beclin1 mRNA、LC3B mRNA的表达,免疫组化法检测肾组织Beclin1、LC3B及Podocin蛋白平均光密度比。结果M组大鼠24h-UPr、Scr、BUN、TC和TG均升高,TP、ALB均降低(P<0.05);足细胞Beclin1、LC3B mRNA及Podocin蛋白表达均降低(P<0.05);HE染色显示肾小球系膜基质增多,肾小囊腔变窄,炎细胞浸润;电镜观察显示自噬小体减少,足细胞足突融合。与M组相比,Q组及L组大鼠24h-UPr、Scr、BUN和TG均降低,TP、ALB均升高(P<0.05),Q组TC明显降低(P<0.05);足细胞Beclin1、LC3B mRNA及Podocin蛋白表达均升高(P<0.05);HE染色显示肾组织损伤程度减轻;电镜观察显示自噬小体增多,足细胞足突融合程度减轻。结论复方青龙衣胶囊具有降低AN大鼠24h-UPr、Scr、BUN、TC、TG、升高TP、ALB的作用,上调足细胞自噬相关基因Beclin1、LC3B及足细胞标志蛋白Podocin的表达,激活自噬,保护足细胞,减轻肾损伤。

益肾消结方对阿霉素肾病综合征大鼠TGF-β1、SMAD3表达的影响

目的:观察益肾消结方对阿霉素肾病综合征大鼠TGF-β1、SMAD3表达的影响。方法:选取雄性SD大鼠100只,适应性喂养1周后,随机分为健康组(20只)和模型组(80只),采用阿霉素注射法建立肾病综合征大鼠模型,去除造模后死亡大鼠9只,将造模成功大鼠随机分为模型对照组、治疗组、中药组各20只。健康组和模型对照组予生理盐水灌胃,治疗组予强的松+卡托普利片灌胃,中药组在治疗组的基础上加用益肾消结方颗粒灌胃,给药四周后,取尿液测量尿蛋白排出量,测量血清肝肾功、血脂等指标,取出大鼠肾组织行HE染色及PAS染色,分别观察肾小管及肾小球的组织形态结构变化,采用免疫组织化学检测大鼠肾小球中转化生长因子-β1(TGF-β1)及信号转导蛋白3(SMAD3)的变化及分布情况。结果:造模成功后,与健康组比较,模型组大鼠体质量均减轻,大鼠尿蛋白排出量均不同程度增加,光镜下可见模型组大鼠肾脏部分肾小球节段性硬化,肾脏皮质和髓质区域小管管腔内均可见蛋白管型的蓄积。灌胃4周后,与模型对照组比较,镜下可见治疗组及中药组大鼠损伤肾小球数量有所降低,小管内蛋白管型的蓄积均所减少;中药组大鼠尿蛋白排出量显著减少(P<0.05);中药组大鼠血清白蛋白显著升高(P<0.05),血清总胆固醇显著降低(P<0.01);与模型对照组比较,治疗组大鼠仅TGF-β1表达显著下调(P<0.05),SMAD3的表达无明显差异,而中药组大鼠TGF-β1、SMAD3表达较模型对照组则显著降低(P<0.01)。结论:益肾消结方具有减少尿蛋白排出、调节血脂及改善肾脏微循环的功效,可多途径参与下调TGF-β1、Smad3水平,达到延缓肾脏纤维化进程的作用。

中药治疗阿霉素肾病模型实验的研究进展

阿霉素肾病(adriamycin nephropathy,AN)模型是经典的慢性肾脏病模型,可以模拟人类肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)的临床表现及病理变化,用于研究NS的病理机制,为开发NS的治疗药物提供基础。实验研究多采用中医治疗水肿的方法治疗AN,大多从肺、脾、肾论治,以补肺,健脾,益肾,活血,利水为治则指导用药。根据肾脏的生理功能及慢性肾脏病的病理变化,关于中药治疗AN的机制的研究主要集中在以下几个方面:调节水通道蛋白(aquaporin,AQP)的表达,改善肾脏对水平衡的调节功能;改善炎症细胞的表达,减轻炎症反应;修复足细胞,改善肾小球的通透性;以及通过各种信号通路减缓肾脏纤维化进程。各个实验研究结果显示中药在AN模型治疗中有显著的效果,不同的中药方剂具有不同的作用机制,有一种或多种作用通路。本文选取了近年来中药治疗AN的实验研究,做此综述,希望能为临床治疗NS提供佐证,能为后来的实验研究提供经验和思路。

过表达APMAP减轻阿霉素肾病肾小球足细胞损伤

目的探讨脂肪细胞膜相关蛋白质(APMAP)过表达对阿霉素(ADR)肾病肾小球足细胞损伤的影响。方法采用尾静脉注射ADR构建阿霉素肾病大鼠模型,免疫组化观察肾组织中APMAP、NF-κB p65蛋白表达情况。构建APMAP基因过表达的鼠源肾小球足细胞MPC-5细胞株,并以0.5μmol/L ADR体外诱导构建足细胞损伤模型,再联合NF-κB信号通路激活剂CU-T12-9进行处理。CCK-8检测细胞增殖活性;ELISA检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65、TNF-α等蛋白表达。结果APMAP在阿霉素肾病大鼠肾组织中低表达,而NF-κB p65高表达(P<0.05)。APMAP过表达可提高ADR暴露下MPC-5细胞增殖活性,降低LDH活性及细胞凋亡率,下调NF-κB p65、p-NF-κB p65、TNF-α等蛋白表达(P<0.05);联合CU-T12-9处理可显著抑制APMAP过表达对ADR暴露下MPC-5细胞损伤的改善作用。结论过表达APMAP可抑制ADR诱导的肾小球足细胞损伤,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。

白茅根不同提取物对阿霉素肾病大鼠的保护作用及对TGF-β_1、NF-κB p65分子表达的影响

目的:研究白茅根不同提取物对阿霉素肾病大鼠的影响及其机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、泼尼松阳性对照组及白茅根石油醚部位组、乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组、水部位组,一次性尾静脉注射阿霉素(ADR)复制阿霉素肾病模型,灌胃给药8 w。于造模前1 d及造模后每周末将大鼠放入代谢笼中,收集24 h尿液,全自动生化仪检测尿蛋白含量。于末次给药24 h后,眼眶取血,全自动生化仪检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量;ELISA法检测血清TNF-α含量,免疫组化法检测肾组织TGF-β1、NF-κB p65的表达;光镜下观察肾脏组织病理学改变。结果:与模型组比较,白茅根提取物乙酸乙酯部位组大鼠24 h尿蛋白在第6、7、8周显著降低,TP、ALB含量显著升高,炎性细胞因子TNF-α含量以及TGF-β1、NF-κB p65阳性率显著降低;正丁醇部位组、水部位组TG含量显著降低,24 h尿蛋白含量分别在7、6周显著降低;光镜下病理形态学观察显示乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位组大鼠肾组织损伤明显改善。结论:白茅根不同提取物对阿霉素肾病大鼠有不同程度的保护作用,其中乙酸乙酯部位组作用最强,其作用机制可能是通过降低TGF-β1以及NF-κB p65的表达,抑制TNF-α的活性,进而改善阿霉素肾病大鼠肾组织病变。

改良阿霉素肾病大鼠模型的建立

目的探讨阿霉素肾病在不同病理发展阶段动物模型的制作。方法采用间隔2周两次尾静脉注射阿霉素的方法复制大鼠阿霉素肾病模型,观察各组大鼠血、尿生化指标和肾组织病理学的改变。结果该模型表现为严重水肿、大量蛋白尿、低蛋白血症和高脂血症;病理学检查显示,4周末肾小球足细胞肿胀,系膜细胞轻度增生;8周末有球囊粘连,肾小管上皮细胞萎缩;12周末部分肾小球节段性轻、中度硬化,间质内有明显灶性淋巴细胞浸润,并有轻度纤维化。结论经改良间隔2周两次尾静脉内注射阿霉素4mg/kg,可以成功复制阿霉素肾病模型。急性模型病理学改变类似人的微小病变性肾病,慢性模型病理学改变类似人的局灶节段性肾小球硬化。

加味当归补血汤对阿霉素肾病大鼠肾脏足细胞保护机制的研究

目的利用阿霉素肾病模型研究加味当归补血汤对肾小球足细胞作用的影响。方法实验动物分为正常组、模型组、贝那普利组和加味当归补血汤组。分别在造模第7、28、42、56天留取尿液标本,观察尿白蛋白定量的动态变化;取肾组织进行光镜、电镜和足细胞表达蛋白nephrin、podocin的免疫荧光检测,并进一步应用分子生物学(RT-PCR及Wetern blot)的方法对肾组织中足细胞裂孔膜表达蛋白的表达情况进行分析。结果 (1)尿白蛋白:各治疗组治疗7天尿白蛋白减少不明显,但在28、42、56天表现为非常明显的下降,贝那普利组和加味当归补血汤组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),而且加味当归补血汤最为明显;(2)肾脏组织和足细胞的影响:光镜和电镜观察结果显示加味当归补血汤治疗组与贝那普利治疗组和模型组比较,系膜细胞增生情况、肾小管-间质病变情况、足细胞融合和足细胞表达蛋白nephrin、podo-cin的表达情况均较轻,尿白蛋白定量相对模型组明显减少的情况下仍然存在与肾脏纤维化相关的肾脏病理进展,说明肾脏病变程度相比模型组较轻但不是逆转;(3)治疗第56天肾脏组织足细胞RT-PCR及Weternblot检测nephrin、podocin表达;各治疗组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论加味当归补血汤对于阿霉素肾病模型具有治疗作用,作用主要是通过减少尿白蛋白,抑制系膜细胞增生和减轻肾小管-间质损伤,保护足细胞裂孔膜结构的完整性。

阿霉素肾病大鼠模型动态变化及其足细胞数量和nephrin的表达变化

【目的】探讨足细胞数量及nephrin在阿霉素肾病大鼠肾小球中的表达变化及意义。【方法】SD大鼠64只分为两组,模型组40只和对照组24只。模型组大鼠间隔2周两次尾静脉注射盐酸阿霉素,对照组大鼠相同时间尾静脉注射等容积生理盐水,各组分别于注射后1周、4周、8周、12周检测血、尿的生化指标,光镜、电镜观察肾脏病理学改变,免疫组化技术观察足细胞数量及nephrin的表达变化。【结果】①根据肾脏病理变化模型可分为两期:急性期(1～4周)和慢性期(5～12周)。光镜检查4周末可见肾小球足细胞肿胀,8周末出现球囊粘连,12周末部分肾小球节段性轻、中度硬化。②1周末足细胞nephrin表达减弱(P<0.05),8周末足细胞数量减少(约是对照组的84%,P<0.05)。③nephrin、足细胞数量与24h尿蛋白定量、尿素氮、血肌酐呈负相关关系;足细胞数量与nephrin呈正相关关系。【结论】①经改良间隔2周两次尾静脉注射阿霉素0.004mg/g,可成功建立急性和慢性阿霉素肾病模型,急性模型病理学改变类似人的微小病变性肾病,慢性模型病理学改变类似人的局灶节段性肾小球硬化(FSGS)。②足细胞nephrin的表达减少和分布方式改变可能是大量蛋白尿发生的重要因素。③FSGS发生时足细胞数量减少了约16%。

阿霉素肾病大鼠肾小球中足细胞数量及nephrin、VEGF的表达变化

目的探讨足细胞的数量及nephrin、VEGF在阿霉素(ADR)肾病大鼠肾小球中的表达变化及意义。方法建立ADR诱导的大鼠肾病模型,于不同实验时间点检测血尿生化指标;光镜、电镜观察肾脏病理学改变;免疫组化技术观察足细胞数量、nephrin、VEGF的表达变化。结果肾病模型组大鼠在第2次注射ADR后1周末足细胞nephrin表达减弱(P<0.05);8周末肾小球VEGF表达增强(P<0.05)、足细胞数量减少(P<0.05);nephrin、足细胞数量与24 h尿蛋白定量、尿素氮、血肌酐呈负相关;VEGF与24 h尿蛋白定量、尿素氮、血肌酐呈正相关。结论足细胞nephrin的表达减少和分布方式改变可能是大量蛋白尿发生的重要因素,VEGF既参与蛋白尿的产生,又参与肾小球硬化。