宁夏地区奶牛源隐孢子虫分子鉴定与分析

为了明确宁夏地区奶牛隐孢子虫的流行情况及其优势基因型,采集宁夏4个地区10个规模化奶牛养殖场中1174份奶牛粪便样品,基于核糖体小亚基RNA(SSU rRNA)基因通过套式PCR进行检测和分析。结果显示,宁夏地区奶牛隐孢子虫阳性率为28.5%(335/1174);共鉴定出4种虫种,即微小隐孢子虫、牛隐孢子虫、瑞氏隐孢子虫和安氏隐孢子虫,阳性率分别为40.6%(136/335)、36.1%(121/335)、19.4%(65/335)和3.9%(13/335);微小隐孢子虫共鉴定出4种基因亚型,分别为ⅡdA15G1(n=70)、ⅡdA18G1(n=26)、ⅡdA19G1(n=23)和ⅡdA20G1(n=17)。统计学分析显示,在宁夏地区,0~2月龄的犊牛隐孢子虫感染率最高,且奶牛隐孢子虫的感染率与月龄差异显著相关(P<0.001)。表明宁夏地区奶牛存在隐孢子虫感染且存在人畜共患虫种,ⅡdA15G1微小隐孢子虫是宁夏地区奶牛感染的优势亚型。

昌吉州牛隐孢子虫流行病学调查与防控

隐孢子虫病(Cryptosporidium,sp)是由隐孢子虫引起的一种以腹泻为主要特征的人畜共患的肠道寄生原虫病,该病不仅严重危害了牛养殖业的经济效益,并且患病牛也成为人患隐孢子虫病的重要传染源。因此,本研究针对新疆昌吉州辖区肉牛规模化养殖场内不同生长阶段且具有腹泻、弱犊、营养不良、腹痛、厌食等临床表现的病牛,通过问卷调查和实验室检测等方式开展流行病学调查,以期为肉牛规模化养殖场犊牛隐孢子虫感染制定科学合理的生物安全防控措施提供依据。

广西2月龄内犊奶牛隐孢子虫感染情况调查

自Tyzzer （1907）首次发现小鼠隐孢子虫（C.muris）以来,国内外学者对隐孢子虫病进行了大量研究,已在人、哺乳动物、禽类、爬行动物和鱼类等多种动物中发现15个种类的隐孢子虫感染^[1-3],其中可感染牛的隐孢子虫种为安氏隐孢子虫（C.an-dersoni小球隐孢子虫（C.parvum）、牛隐孢子虫（C.boris）、小鼠隐孢子虫（C.muris）、犬隐孢子虫（C.ca-nis）、猫隐孢子虫（C.fells）、猪隐孢子虫（C.suis）、鹿样基因型（C.deer-like genotype）和赖氏隐孢子虫（C.ryanae）^[4-5].隐孢子虫对牛的感染与牛的年龄呈正相关性[6].

甘肃某牛场隐孢子虫引起犊牛腹泻的虫种鉴定及亚型分析

新生犊牛腹泻(NCD)严重影响犊牛的健康,给养殖业造成巨大的经济损失。隐孢子虫病是引起NCD的重要原因之一,但是由隐孢子虫引起的NCD疾病暴发的报道还非常少。2022年9月,甘肃省武威市某奶牛场1月龄以内犊牛发生严重腹泻,并伴有部分犊牛死亡。为弄清犊牛腹泻是否由隐孢子虫引起,本研究对该牛场1月龄以内腹泻和非腹泻犊牛分别采集10份样品,应用显微镜检和套氏PCR方法对犊牛粪便样品进行了检测。结果显示,应用显微镜检方法检出10份隐孢子虫阳性样品;应用PCR方法检出14份阳性样品,包括8份腹泻样品和6份非腹泻样品。PCR方法隐孢子虫总的感染率为70.0%,其中腹泻犊牛的感染率为80.0%,非腹泻犊牛的感染率为60.0%。对所有PCR阳性样品进行测序分析,均为微小隐孢子虫。进一步对14份C.parvum阳性样品进行gp60基因扩增和亚型鉴定,13份样品测序成功,均为IIdA19G1亚型。本研究首次在甘肃省发现隐孢子虫引起犊牛腹泻的暴发,研究结果对深入了解该地区犊牛腹泻的病因,做好腹泻疾病的精准防控具有重要意义。

福建省部分规模化畜禽场隐孢子虫感染情况调查

为了解福建省规模化畜禽场隐孢子虫感染情况,对10个规模化畜禽场(牛场、猪场、羊场、鸡场、鸭场各2个)100份粪样采用隐孢子虫通用引物进行荧光定量PCR检测,结果相应牛场、猪场、羊场、鸡场、鸭场的隐孢子虫平均检出率分别为60.0%、45.0%、42.1%、42.9%和15.0%。该结果可为福建省规模化畜禽场的隐孢子虫防控及保障公共卫生安全提供参考。

一例牛隐孢子虫病的诊疗体会

该文介绍一例犊牛顽固性腹泻,经检查诊断为牛隐孢子虫病,采用相应治疗措施后,取得较好效果。

隐孢子虫病的流行现状

隐孢子虫病是由隐孢子虫(Cryptosporidium)寄生于人类、家养动物及多种野生动物胃肠道引起的一种严重的人畜共患胃肠疾病。该病不但威胁人类健康,亦严重影响畜牧业发展。近年来随着研究的深入,隐孢子虫的流行表现出许多新的特点,危害远远超出了人们的估计。这些特点主要表现在:感染家畜,增加人类感染风险;与动物其他病原混合感染危害加重;感染野生动物,具有自然疫源性;感染海洋和水生动物,造成水体污染;经水源和食物传播引起人类群体感染;暴发感染对人群危害严重。深入开展隐孢子虫病流行病及防控研究对提高公共卫生水平具有重要意义。

牛隐孢子虫病的综合防控

牛隐孢子虫病是一种常见的寄生虫疾病,感染隐孢子虫会导致牛生产能力下降,特别是犊牛感染后会出现严重的腹泻,有时可导致病牛死亡,给养殖业带来巨大的损失。笔者旨在通过对牛隐孢子虫病的病原特点、流行特点、临床症状及病理变化的综合阐述,提出科学有效的综合防控措施,为养殖场提供牛隐孢子虫病防控策略的参考,保障牛隐孢子虫病的有效防治。

牛隐孢子虫病研究进展与综合防控

牛隐孢子虫病是由牛感染隐孢子虫诱发的一种寄生性原虫病,患病后牛会表现出腹泻、厌食等症状,制约牛的生长发育,严重时可造成死亡。随着养牛业的发展,养殖规模进一步扩大,但存在牛隐孢子虫病高发的情况,疾病在各大养殖场流行,逐渐成为影响新生犊牛最常见的疾病之一,引起了更多养殖人员和防疫人员的重视。当前,在养殖过程中,应加强疾病防控,促进养殖工作有序展开。

应用巢式PCR-RFLP方法鉴别微小隐孢子虫、安氏隐孢子虫和火鸡隐孢子虫的研究

应用巢式聚合酶链反应(NestedPCR)-限制片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymor-phism,RFLP)方法对微小隐孢子虫(C.parvum)、安氏隐孢子虫(C.andersoni)和火鸡隐孢子虫(C.melea-grides)的鉴别进行了研究。结果显示C.parvumBOCC2、C.andesoniBOCC2和C.meleagridesCHCC1扩增产物片段大小分别为830bp、828bp和828bp,扩增产物分别经VspⅠ酶切后形成3种不同的RFLP图谱,根据RFLP图谱可鉴别C.parvum、C.andersoni和C.meleagrides。本研究为我国隐孢子虫的分类和隐孢子虫病的分子流行病学研究打下了良好基础。

鸡隐孢子虫在安徽的首次定种及感染情况的数学分析

本次调研共采集合肥地区五个大型鸡场的150个新鲜鸡粪便样品，结果在62个粪样中检出了隐孢子虫，总阳性检出率为1.3％。因五个鸡场均发现有隐孢子虫，说明该虫感染在合肥地区较为普遍。不过，各鸡场之间的阳性检出率从10.0%到83.3％高低不等。本研究同时剖检了其中四个鸡场的38只病死鸡尸，发现隐孢子虫的有11只,死鸡感染率为28.9％。通过鉴定，首次认为安徽省有火鸡孢子虫（C.Meleagridis）和贝氏隐孢子虫（C.baileyi)两个虫种。统计分析得知：隐孢子虫的阳性检出率与鸡群的日龄呈一种极显著的抛物线形相关关系；与球虫感染相比，虽然阳性检出率略低，但差异不显著，均可达到同（第）一位（原虫）感染水平；不过，二者之间不存在有直线相关关系。

微小隐孢子虫转录共激活因子CpADA2的生物信息学分析及其编码基因的真核表达

本研究旨在对微小隐孢子虫转录共激活因子ADA2的结构和功能进行生物信息学分析,对其编码基因CpADA2进行真核表达。利用在线生物信息学软件对CpADA2进行生物信息学分析,结果显示,CpADA2含有ZnF和SANT结构域,全长673个氨基酸残基,分子质量为76 kDa,属于可溶性蛋白;不含跨膜区和信号肽,但存在多样化的激酶特异性磷酸化位点;二级结构由α螺旋(36.70%)、β折叠(11.74%)和无规卷曲(51.56%)构成;三级结构中SANT结构域呈典型的α螺旋串联重复构象;互作网络模型和功能预测表明,该蛋白具有锌离子结合特性,并可能参与组蛋白乙酰化过程。以微小隐孢子虫cDNA为模板,PCR扩增得到CpADA2基因,成功构建了真核表达质粒p3×FLAG-CMV14-CpADA2,转染至293T细胞后,Western blot分析显示,转染重组质粒的细胞成功表达重组CpADA2蛋白。本研究为后续开展CpADA2的功能研究提供了基础。

隐孢子虫病免疫诊断研究进展

隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是一种全球性的人畜共患寄生虫病,其病原体是一种属于顶端复合物门的寄生性原虫--隐孢子虫(Cryptosporidium).隐孢子虫是Tyzzer于1907年首先在实验小鼠胃肠道内发现的,但直到80年代以后才逐渐引起重视.当前认为有效的隐孢子虫种类有:微小隐孢子虫(C.parvum),小鼠隐孢子虫(C.muris),火鸡隐孢子虫(C.meleagridis),贝利隐孢子虫(C.baileyi),蛇隐孢子虫(C.serpntis),和鱼隐孢子虫(C.nasorum)等,对人造成感染的主要是微小隐孢子虫.隐孢子虫的生活史简单,不需要转换宿主即可完成,生活史有无性生殖、有性生殖和孢子生殖三个阶段,均在同一宿主体内进行.本虫寄生于肠粘膜,使上皮细胞表面凹陷、老化和脱落,破坏了肠绒毛的正常功能,影响消化吸收而发生腹泻.

安徽省黄牛隐孢子虫病流行病学调查

为查明安徽省黄牛隐孢子虫感染情况 ,取该省 6个县 (市 )进行了黄牛隐孢子虫感染情况的调研 ,在 42头黄牛的粪样中查到了隐孢子虫卵囊 ,其感染率为 1 5 2 7% (42 /2 75)。经鉴定 ,所获虫体为鼠隐孢子虫 (Cryptosporidiummuris)和小隐孢子虫 (Gryptosporidiumparvum)。黄牛隐孢子虫感染存在年龄和地区性差异 ,但与性别无关。

柯坪县规模化养殖场双峰驼隐孢子虫感染情况调查与种类鉴定

[目的]掌握新疆维吾尔自治区阿克苏地区柯坪县规模化养殖场双峰驼隐孢子虫的感染情况和种类分布情况。[方法]从柯坪县4个乡(镇)6个规模化双峰驼养殖场共收集516份粪便样本,全部提取DNA样本,基于隐孢子虫(Cryptosporidium)SSU rDNA序列进行PCR检测,序列比对分析后进行隐孢子虫种类鉴定;采用χ^(2)检验法比较不同规模化养殖场双峰驼隐孢子虫的感染率差异;将被鉴定为微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,C.parvum)阳性的DNA样本,基于gp60基因序列进行PCR检测,序列比对分析后进行微小隐孢子虫亚型鉴定。[结果]516份双峰驼粪便DNA样本中检测出34份隐孢子虫阳性,总体感染率为6.59%(34/516),以阿恰勒镇养殖场2的双峰驼隐孢子虫感染率最高,为9.57%(9/94);不同养殖场双峰驼隐孢子虫的感染率统计学差异显著(χ^(2)=5.497,P<0.05)。基于SSU rDNA序列,34条隐孢子虫序列经比对分析,鉴定出3种隐孢子虫,分别为安氏隐孢子虫(n=29)、隐孢子虫大鼠基因型Ⅳ(n=1)和微小隐孢子虫(n=4);基于gp60基因序列,4条微小隐孢子虫序列经比对分析,均鉴定为Ⅰd-like-A21亚型,具有独特的遗传进化特点。[结论]柯坪县双峰驼隐孢子虫感染率较低,其感染的微小隐孢子虫具有独特亚型。研究结果为我国双峰驼源隐孢子虫种类分布特征和遗传进化提供了基础数据。

喀什地区某规模化引种场奶牛感染隐孢子虫的PCR检测与种系发育分析

[目的]掌握新疆维吾尔自治区喀什地区某规模化引种场奶牛的隐孢子虫(Cryptosporidium)感染情况及其种类分布特征。[方法]采集该场不同年龄段奶牛粪便样本190份,基于小亚基核糖体RNA基因(SSU rDNA),采用PCR方法检测隐孢子虫感染情况,经序列比对鉴定隐孢子虫种类。利用卡方(χ^(2))检验法,比较不同年龄段奶牛隐孢子虫感染率的差异。采用PCR方法扩增微小隐孢子虫(C.parvum)、牛隐孢子虫(C.bovis)和芮氏隐孢子虫(C.ryanae)的gp60基因,经序列比对鉴定3种隐孢子虫的基因亚型,构建种系发育树解析其遗传进化特征。[结果]32份奶牛粪便样本呈隐孢子虫阳性,总体感染率为16.84%(32/190);鉴定出4种隐孢子虫,分别为微小隐孢子虫(n=8)、安氏隐孢子虫(C.andersoni,n=10)、牛隐孢子虫(n=10)和芮氏隐孢子虫(n=4)。以3月龄以下断奶前犊牛的隐孢子虫感染率较高,为28.00%(14/50),不同年龄段奶牛隐孢子虫的感染率差异显著(χ^(2)=8.679,P<0.05)。8份微小隐孢子虫阳性样本成功获得7条gp60基因亚型序列,鉴定出2种亚型,分别为ⅡdA15G1亚型(n=3)和ⅡdA19G1亚型(n=4);10份牛隐孢子虫阳性样本成功获得6条gp60基因亚型序列,鉴定出3种亚型,分别为ⅩⅩⅥb(n=2)、ⅩⅩⅥc(n=3)和ⅩⅩⅥe(n=1);4份芮氏隐孢子虫阳性样本均成功获得gp60基因亚型序列,均为ⅩⅩⅠb亚型。种系发育树分析结果显示,获得的微小隐孢子虫Ⅱd基因亚型序列与不同宿主源微小隐孢子虫Ⅱd亚型家族的序列同处于一个亚群,而与新西兰不同宿主源微小隐孢子虫Ⅱa家族亚型的序列形成不同亚群;获得的牛隐孢子虫和芮氏隐孢子虫的亚型序列均与我国不同地区牛源牛隐孢子虫和芮氏隐孢子虫的亚型序列同处一个大群。[结论]该引种场奶牛感染的隐孢子虫存在遗传多样分布特征,均为引进当地后感染,提示水源和草料污染可能是该场奶牛感染隐孢子虫的主要原因。

微小隐孢子虫含有纤维连接蛋白Ⅲ型结构域蛋白的亚细胞定位及其细胞黏附特性研究

目的本研究以微小隐孢子虫含有纤维连接蛋白Ⅲ型结构域蛋白(Cryptosporidium parvum fibronectin typeⅢdomain-containing protein,CpFN3)为研究对象,研究其亚细胞定位和黏附特性。方法该蛋白由cgd4_640基因编码、全长为含有2430个氨基酸的I型跨膜蛋白。设计特异性抗原多肽并免疫家兔,获得多克隆抗体,利用亲和纯化法获特异性抗体;经Western blot方法验证该抗体特异性,再通过间接免疫荧光法(IFA)进行蛋白定位。通过原核表达获得重组蛋白(His-CpFN3),通过ELISA确定重组蛋白与HCT-8细胞和肝素的结合情况。结果成功获得纯化的抗CpFN3抗体,Western blot分析显示该抗体可识别条带大小约为280 kDa;IFA结果表明该蛋白定位于子孢子的表膜,呈点状分布。该蛋白在子孢子入侵阶段及胞内无性繁殖和有性繁殖阶段均有表达。利用重组蛋白,确定了CpFN3能够与HCT-8细胞及肝素结合(结合常数Kd分别为0.23和1.21μmol/L),并呈剂量依赖性和可饱和性。结论本研究确定CpFN3参与了虫体与宿主细胞的黏附过程。

微小隐孢子虫氨基酸转运蛋白CpAAT1的亚细胞定位研究

目的探究微小隐孢子虫氨基酸转运蛋白的亚细胞定位。方法本研究以微小隐孢子虫氨基酸转运蛋白1(Cryptosporidium parvum Amino acid transporter 1,CpAAT1)为研究对象,设计合成了特异性多肽片段,免疫家兔制备多克隆抗体。利用Western blot验证该抗体的特异性,通过间接免疫荧光的方法对该蛋白的亚细胞定位进行了分析。结果CpAAT1多克隆抗体能特异性识别虫体天然蛋白,后者在微小隐孢子虫生活史的各个时期均有表达。子孢子时期,CpAAT1定位于虫体表膜;无性生殖期时该蛋白定位在成熟的裂殖子表膜;在有性生殖阶段,雌雄配子体均可被该抗体标记。结论本研究为进一步探索微小隐孢子虫氨基酸转运蛋白的转运机制提供了一些新线索。