长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库的构建及免疫学筛选

目的构建长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库,筛选长角血蜱功能性抗原基因。方法在无RNA酶污染的条件下提取长角血蜱总RNA,进而纯化mRNA,以寡脱氧胸腺核苷酸[oligo(dT)]为引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将cDNA分子定向克隆至具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体。用噬菌体包装蛋白对以上连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,转化大肠埃希菌(Escherichia coli)ER1647,从而构建长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库。使用兔抗长角血蜱全蜱血清对该文库进行免疫学筛选,经过2次筛选得到的阳性噬菌体转化E.coli BM25.8亚克隆为重组质粒,转化E.coli JM109,提取重组质粒进行PCR和测序分析。结果长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库的基础库容量为1.8×106pfu,重组率为100%,扩增后的滴度为2.4×109pfu/ml。筛选获得42个阳性克隆,序列分析表明有12个新cDNA序列,其编码蛋白与长角血蜱原肌凝蛋白、环状扇头蜱幼蜱未知蛋白、黑腹果蝇染色体2R、褐黄血蜱线粒体DNA、青海血蜱HqL09、Hq05和肌球蛋白轻链mRNA等具有同源性。结论构建了长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库,获得的阳性克隆为长角血蜱功能性抗原的研究奠定基础。

镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA文库的构建

目的 为了筛选抗蜱及蜱传疾病基因工程疫苗的抗原候选分子,构建了镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA表达文库。方法 用Frizol试剂提取镰形扇头蜱半饱血雌蜱总RNA,经反转录合成cDNA第一链,应用长链PCR(LD-PCR)扩增方法,合成双链cDNA。双链cDNA(ds cDNA)在Sfi I内切酶的作用下,形成两端分别带有Sfi I A和Sfi I B的粘性末端。经CHROMA SPIN-400柱纯化,收集500bp以上的双链cDNA片段,将其连接于带有Sfi工A和Sfl I B末端的λTriplEx2噬菌体载体,经体外包装后,以XL1-Blue为受体菌构建cDNA噬菌体表达文库。结果 经测定,库容量为4.2×106,重组率为96％。扩增后的文库滴度为2.04×1010pfu/ml。通过对文库中随机挑选的15个克隆进行序列分析,获得一个编码线粒体ATP酶第6亚基蛋白的全长cDNA序列。结论 结果显示,镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA表达文库已构建成功。

长角血蜱雌蜱不同发育时期唾液腺蛋白的组成分析

为阐明长角血蜱雌蜱唾液腺蛋白随发育期的变化规律,采用Bradford蛋白定量法和SDS-PAGE电泳对不同发育期唾液腺蛋白含量及成分变化进行研究.结果表明：雌蜱唾液腺的总蛋白含量随着发育期的不同而变化,饥饿期唾液腺蛋白含量最低,交配期蛋白含量达到峰值,此后蛋白含量持续下降.长角血蜱唾液腺的蛋白分子质量集中分布于32~97 k Da,其中97 k Da蛋白与唾液腺蛋白含量变化趋势一致.

溴氰菊酯对微小牛蜱的敏感度和对雌蜱产卵的影响的研究

１９９１～１９９２年在福建省研究溴氰菊酯对微小牛蜱各变态期的敏感度和对饱血雌蜱产卵情况的影响。结果表明，幼蜱对溴氰菊酯最敏感，当施用浓度为５ｐｐｍ时，幼蜱平均死亡率为１００％；若蜱其次，死亡率２８．９％；未吸虫成蜱敏感度最低，死亡率仅１０％。据Ｘ２检验，微小牛蜱在不同变态期间对溴氰菊酯的敏感度差异极显著（Ｐ＜０．０１）。饱血雌蜱接触溴氰菊酯１０μｇ／虫后，其产卵前期比对照蜱延长６天，产卵期缩短６天，产卵量减少２１８８粒。

斯氏线虫S.carpocapsae BJ对森林革蜱饱血雌蜱产卵量的影响

研究了不同浓度的斯氏线虫S.carpocapsae BJ对森林革蜱饱血雌蜱产卵量的影响。用浓度为1000、3000、5 000、7 000、10000IJs/dish的线虫接种到培养皿中侵染森林革蜱饱血雌蜱,对照组用重蒸水代替。结果表明,随着线虫浓度的增加,雌蜱的死亡率不断提高（30%-95%）;处理组饱血雌蜱的产卵量显著少于对照组,低浓度时随着线虫浓度的增加,产卵量呈显著下降的趋势,而浓度5 000IJs/dish以上的3个处理组之间,雌蜱的产卵量无显著差异;低浓度时线虫浓度的增加使线虫侵入率显著提高,浓度达到一定数值后,浓度的增加对线虫的侵入率和雌蜱的产卵量都无显著影响。

刻点血蜱成蜱中肠菌群结构的分析

旨在探明雌、雄刻点血蜱中肠菌群结构特征及其差异。从新疆沙湾市绵羊体表采集刻点血蜱雌、雄蜱,无菌条件下收集雌、雄蜱中肠内容物,提取各样本细菌总DNA,PCR扩增细菌16S rDNA V3-V4区,运用Illiumina NovaSeq高通量双末端测序,对数据进行拼接和过滤,扩增子序列变异(ASVs)降噪与物种注释后,对比分析雌、雄蜱中肠菌群结构的组成及差异。结果:雌蜱中肠菌群多样性高于雄蜱;在门水平上,变形菌门、厚壁菌门、异常球菌门、拟杆菌门、放线菌门在雌、雄蜱中肠内相对丰度较高,其中变形菌门相对丰度最高,为2个样本的优势菌门,且变形菌门在雄蜱中肠内的含量大于雌蜱;在属水平上,Schlegelella、不动杆菌属、拟杆菌属、乳杆菌属、短波单胞菌属、罗姆布茨菌属等在雌、雄蜱中肠内的相对丰度较高,其中Schlegelella的丰度最高,且在雌蜱(41.7%)中的含量高于雄蜱(0.8%);注释到种水平且2个样本共有的菌种包括:西尔瓦诺斯亚栖热菌、鲍曼不动杆菌、柯克斯氏体共生菌、肠乳杆菌、长双歧杆菌、巴氏杆菌拟杆菌等。本研究表明,刻点血蜱雌、雄蜱中肠菌群结构较为相似,但各细菌在不同分类级别上的相对丰度差异较大,这可能与雌、雄蜱吸血及生理特性不同有关。

斯氏线虫S.carpocapsae BJ对森林革蜱产卵量及其侵入部位的研究

用线虫浓度为8000 IJ/ml的斯氏线虫S.carpocapsae BJ品系侵染森林革蜱饱血雌蜱。实验期间统计饱血雌蜱的产卵量,用解剖镜观察线虫进入蜱体内的部位。结果表明,经线虫侵染后,平均每只蜱的产卵量为(327.0±11.0)个,而对照中每只蜱的产卵量为(4420.6±282.6)个;经线虫侵染后饱血雌蜱的死亡率高达90%。线虫的侵染使雌蜱的产卵量显著减少。线虫主要从蜱的口器、肛门、气门和生殖孔及节间膜处入侵。