青蒿琥酯调节cGAS-STING信号通路对抑郁症模型小鼠神经炎性反应的影响

目的探讨青蒿琥酯(ART)调节环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)通路对抑郁症小鼠神经炎性反应的影响。方法小鼠分为模型组、对照组、ART低剂量组、ART高剂量组、氟西汀组、ART高剂量+RocA(cGAS-STING通路激活剂)组。糖水消耗实验、强迫游泳实验评估小鼠的抑郁行为;HE染色检测海马组织病理变化;ELISA检测白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、五羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)水平;TUNEL染色检测神经元凋亡;Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p53、cGAS、STING蛋白。结果与对照组相比,模型组小鼠表现出神经元性脓疱变性,糖水消耗率、5-HT、DA水平降低,强迫游泳静止时间延长,IL-6、TNF-α水平、神经元凋亡率及Bax、p53、cGAS、STING蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,ART低剂量组、ART高剂量组、氟西汀组小鼠海马神经元损伤有所缓解,糖水消耗率、5-HT、DA水平升高,强迫游泳静止时间缩短,IL-6、TNF-α水平、神经元凋亡率及Bax、p53、cGAS、STING蛋白表达降低(P<0.05);RocA逆转了高剂量ART对小鼠抑郁症的改善作用。结论ART抑制抑郁症小鼠神经炎性反应及神经元凋亡,上调胺类神经递质水平的机制可能与阻断cGAS-STING通路有关。

青蒿琥酯调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对肾母细胞瘤细胞增殖、凋亡和自噬的影响

目的探讨青蒿琥酯对肾母细胞瘤细胞增殖、凋亡和自噬的作用及其分子机制。方法体外培养人肾母细胞瘤细胞株SK-NEP-1并以0、12.5、25.0、50.0、100.0、150.0μmol/L浓度的青蒿琥酯处理,采用CCK-8法测定各组细胞活力并筛选出青蒿琥酯最佳作用浓度。将SK-NEP-1细胞随机分为对照组、青蒿琥酯(100.0μmol/L)组、AMPK抑制剂Dorsomorphin(10.0μmol/L)组、青蒿琥酯(100.0μmol/L)+Dorsomorphin(10.0μmol/L)组,以青蒿琥酯和Dorsomorphin单独或联合处理各组细胞后,采用CCK-8法检测各组细胞活力,采用平板克隆形成实验检测各组细胞的集落形成情况;采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况;采用MDC荧光染色法检测各组细胞的自噬情况;采用蛋白免疫印迹法检测各组细胞中凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、cleaved多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]、自噬相关蛋白[轻链3(LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ、Beclin-1]及AMPK/mTOR/ULK1信号通路相关蛋白的表达情况。结果不同浓度青蒿琥酯均可抑制SK-NEP-1细胞的活力(均P<0.05),且随浓度升高其抑制作用增强。用100.0μmol/L青蒿琥酯和10.0μmol/L Dorsomorphin分别处理SK-NEP-1细胞后,与对照组相比,青蒿琥酯组细胞的凋亡率、自噬空泡相对量及Bax、cleaved PARP、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1蛋白表达水平均升高(均P<0.05),细胞活力、集落形成率及Bcl-2、p-mTOR/mTOR蛋白表达水平均降低(均P<0.05);Dorsomorphin组细胞凋亡率、自噬空泡相对量及Bax、cleaved PARP、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1蛋白表达水平均降低(均P<0.05),细胞活力、集落形成率及Bcl-2、p-mTOR/mTOR蛋白表达水平均升高(均P<0.05)。青蒿琥酯和Dorsomorphin联合干预SK-NEP-1细胞逆转了青蒿琥酯的抗肿瘤作用。结论青蒿琥酯可能通过激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路增强肾母细胞瘤细胞自噬,进而抑制其增殖并促进其凋亡。

青蒿琥酯纳米胶束制备及其体内药动学、抗肿瘤活性研究

目的制备青蒿琥酯纳米胶束,并考察体内药动学和抗肿瘤活性。方法以聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚组氨酸(mPEG-PLA-PHis)为载体制备纳米胶束,单因素试验结合Box-Behnken响应面法优化处方,测定包封率、载药量、沉降率、粒径、Zeta电位、体外释药。12只H_(22)荷瘤小鼠随机分为2组,分别尾静脉注射给予青蒿琥酯注射液和青蒿琥酯纳米胶束(1 mg/kg),于不同时间点采血,HPLC法测定青蒿琥酯血药浓度,计算主要药动学参数。36只H_(22)肝癌荷瘤小鼠随机分为6组,即模型组(生理盐水)、阳性组(20 mg/kg环磷酰胺)、青蒿琥酯注射液组(30 mg/kg)及青蒿琥酯纳米胶束低、中、高剂量组(10、20、30 mg/kg),末次给药3 d后记录体质量和瘤重,计算抑瘤率。结果最佳处方为mPEG-PLA-PHis与青蒿琥酯比例10.18∶1,青蒿琥酯质量浓度0.48 mg/mL,水化时间0.96 h,包封率、载药量、沉降率、粒径、Zeta电位分别为(94.27±1.26)%、(8.26±0.18)%、(4.19±0.20)%、(65.14±4.96)nm、-(17.64±1.06)mV。纳米胶束在弱酸性介质中的累积释放度高于在弱碱性介质中,具有pH敏感性。与注射液比较,纳米胶束t_(1/2)、MRT延长(P<0.01),CL降低(P<0.01),AUC_(0~t)升高(P<0.01);与模型组比较,青蒿琥酯纳米胶束不同剂量组小鼠体质量无明显变化(P>0.05),瘤重下降(P<0.05,P<0.01),以中剂量组更明显,抑瘤率达55.40%。结论青蒿琥酯纳米胶束包封率较高,体内抗肿瘤活性较强。

青蒿琥酯联合左氧氟沙星对耐碳青霉烯类大肠埃希菌抗菌活性的影响

目的 探讨青蒿琥酯与抗生素联用对耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CRECO)抗菌活性的影响。方法 收集分离的CRECO 20株,采用肉汤稀释法测定抗菌物质青蒿琥酯(ASN)、左氧氟沙星(LEV)、头孢他啶(CAZ)、亚胺培南(IMP)最小抑菌浓度(MIC)。用棋盘法测定ASN与LEV、CAZ、IMP协同抗菌活性;用细菌生长曲线法观察不同处理组CRECO临床菌株(E5)生长的情况;用RT-PCR检测外排泵基因以及调控基因的表达。结果 抗菌物质ASN、LEV、CAZ、IMP的MIC50分别为>8 192、64、2 048、32μg/mL。协同抗菌试验显示:ASN (1 024μg/mL)与LEV联用时,LEV的MIC50由64μg/mL降至16μg/mL (即1/4 MIC50),联合作用效果以协同为主;与CAZ联用时,CAZ的MIC50由2 048μg/mL降至1 024μg/mL (即1/2 MIC50),联合作用效果以相加为主。生长曲线显示,ASN联合LEV能有效抑制CRECO生长,曲线走向平缓。20株菌株全部携带外排泵基因AcrA和AcrB基因。RT-PCR结果显示ASN联合LEV可降低外排泵基因AcrB表达。结论 ASN对CRECO无抗菌活性,但ASN联合LEV能有效增强抗生素的抑菌作用,其协同抑菌机制与降低外排泵基因AcrB表达相关。

青蒿琥酯通过调控GADD45A、NACC1的表达抑制肝癌细胞的作用

目的阐明青蒿琥酯(artesunate,ART)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)病理进程中对肿瘤细胞的作用及潜在的机制。方法用含不同浓度ART的培养基处理两种HCC细胞系MHCC-97H、HCC-LM3,以0 mg·L-1 ART处理的细胞作为对照组,对比ART对HCC的作用。采用MTT和克隆形成实验测定ART对HCC细胞生长能力的影响;划痕实验和Transwell实验分别检测ART对HCC细胞迁移和侵袭能力的影响;流式细胞术验证ART对HCC细胞凋亡和细胞周期变化的影响;通过转录组测序分析以及qRT-PCR验证关键基因的表达情况探究ART在HCC细胞中的可能作用机制。结果与对照组相比,ART处理后的肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力明显降低(P<0.01),而细胞凋亡率明显上升,且G_(2)/M期细胞比例明显增高,提示肿瘤细胞被阻滞于该期。使用RNA测序数据进行转录组学分析,确定生长停滞与DNA损伤诱导蛋白45A(growth arrest and DNA damage inducible alpha,GADD45A)是ART的潜在作用靶点,并且提示,ART可通过上调GADD45A的表达进而诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。此外,生信分析结果提示,GADD45A与其上游转录因子伏隔核相关蛋白1(nucleus accumbens associated 1,NACC1)有蛋白互作现象,并且经ART处理后,GADD45A与NACC1的mRNA水平和蛋白水平均发生明显变化。结论ART可能通过影响GADD45A及其潜在上游NACC1基因的表达抑制HCC的发生发展。通过探究ART作用于HCC的功能影响及发生机制,为临床治疗肝癌提供新药物、新方向和新思路。

青蒿琥酯对氟化钠所致骨细胞MLO-Y4凋亡和线粒体自噬的影响

目的 探讨青蒿琥酯(Art)对氟化钠(NaF)所致骨细胞MLO-Y4损伤的改善作用及其分子机制。方法 NaF(2 mmol·L^(-1))与MLO-Y4细胞共孵育48 h,构建MLO-Y4细胞损伤模型。细胞分为细胞对照组、NaF组及NaF+Art 0.25,0.50和1.00μmol·L^(-1)组(Art预孵育2 h后,加NaF继续孵育12或48 h)。MTT法检测细胞存活率。钙黄绿素乙酰甲酯(calcein-AM)染色观察细胞活性。化学比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)水平,DCFH-DA染色检测活性氧(ROS)水平,化学比色法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,Hoechst33342染色和Annexin-V/PI染色分析细胞凋亡,JC-1染色检测线粒体膜电位(MMP),Lyso-Tracker和Mito-Tracker染色观察自噬泡形成和线粒体形态,荧光素酶法检测腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量,免疫荧光染色检测微管相关蛋白轻链3(LC-3)在线粒体中的表达,Western印迹法检测LC-3、p62、PTEN诱导假定激酶1(PINK1)和E3泛素-连接酶(Parkin)蛋白表达水平。结果 与细胞对照组比较,NaF组细胞存活率和细胞活性显著降低(P<0.01),LDH含量、ROS水平、MDA含量、细胞凋亡率和自噬泡形成明显增加(P<0.01),PINK1和Parkin蛋白表达增加(P<0.01),LC3在线粒体中的表达增加且LC-3Ⅰ向LC-3Ⅱ转换增加(P<0.01),SOD活性、MMP水平、ATP水平和P62蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。与NaF组比较,NaF+Art 0.25,0.50和1.00μmol·L^(-1)组细胞活性和存活率显著增加(P<0.01),LDH含量、ROS水平、MDA含量、细胞凋亡率和自噬泡形成明显减少(P<0.05,P<0.01),PINK1和Parkin蛋白表达下降(P<0.01),LC3在线粒体中的表达下降且LC-3Ⅰ向LC-3Ⅱ转换减少(P<0.01),SOD活性、MMP、ATP水平和P62蛋白表达显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论 Art对NaF所致MLO-Y4细胞氧化损伤具有改善作用,其机制可能与减少细胞凋亡和线粒体自噬水平有关。

2001—2022年青蒿琥酯的文献计量学分析

目的本研究旨在了解该领域的发展趋势和热点,并预测潜在的研究方向。方法利用文献计量学的方法,从Web of Science Core Collection中收集相关论文,使用Cite Space和VOSviewer进行可视化分析。结果2001—2022年共有4102篇关于青蒿琥酯的英文文章。近年来发表的青蒿琥酯相关的年出版物数量稳步增长。英国参与的研究最多,玛希隆大学是出版物数量最多的机构。疟疾、青蒿素、疗效和癌症等在青蒿琥酯领域是研究热点。严重疟疾、细胞凋亡和铁死亡未来可能成为青蒿琥酯相关研究的重点。结论疟疾和青蒿素是青蒿琥酯研究领域的主要课题。利用文献计量学通过对青蒿琥酯研究的分析,为其更好地应用于临床治疗提供新的思路。

青蒿琥酯在脓毒症相关脏器损伤中的保护作用及其机制研究进展

脓毒症是重症监护病房患者死亡的主要原因,其发病机制及病程复杂,严重脓毒症可导致多器官功能障碍综合征,目前暂无有效治疗方法。青蒿琥酯(AS)是青蒿素的衍生物之一,除抗疟疾作用之外还具有抗炎作用,它通过抑制炎症因子释放及调节免疫反应在脓毒症的治疗中发挥明显作用。AS通过调控不同信号通路对脓毒症诱导的急性肺损伤和肝损伤发挥保护作用,对于脓毒症易受累的靶器官如心脏、肾脏、神经系统也具有一定保护作用。本研究总结AS在脓毒症以及脓毒症相关脏器损伤中保护作用的最新研究进展,以期为探索脓毒症相关脏器损伤提供新的研究思路及治疗策略。

青蒿琥酯调节PI_(3)K/Akt信号通路对肾草酸结石形成的影响

目的探讨青蒿琥酯(artesunate,Art)对肾结石形成及磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI_(3)K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路的影响。方法实验分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、青蒿琥酯低剂量组(Art-L组)、青蒿琥酯高剂量组(Art-H组)、青蒿琥酯高剂量+PI_(3)K抑制剂组(Art+LY294002组)。通过乙二醇饮水和草酸钠腹腔注射建立肾结石大鼠模型;HK-2细胞暴露于200mg/L一水草酸钙晶体和2mmol/L草酸盐中建立肾结石细胞模型。检测尿液Ca^(2+)、草酸(oxalic acid,Ox)及血液血清肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;Pizzolato染色测量肾组织钙盐沉积;HE染色测定肾病理形态;丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)试剂盒检测肾组织和HK-2细胞MDA、SOD水平;ELISA法检测肾组织和HK-2细胞TNF-α、IL-1β和IL-6水平;荧光定量检测Bax、caspase-3及PI_(3)K、Akt水平;免疫组化和Western blot法测量PI_(3)K、Akt蛋白表达;流式细胞术测量HK-2细胞凋亡。结果与Model组比较,Art-L组、Art-H组Ca^(2+)、Ox、Scr、BUN、肾组织和HK-2细胞MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6及肾组织Bax、caspase-3下降,肾组织和HK-2细胞SOD、PI_(3)K、Akt升高(P<0.05);与Art-H组比较,Art+LY294002组Ca^(2+)、Ox、Scr、BUN、肾组织和HK-2细胞MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6及肾组织Bax、caspase-3升高,肾组织和HK-2细胞SOD、PI_(3)K、Akt下降(P<0.05)。结论青蒿琥酯可以可以抑制肾结石的形成;其抑制结石形成可能是通过上调PI_(3)K/Akt信号通路的机制产生的。

青蒿琥酯通过p53/SLC7A11/GPX4轴诱导人骨肉瘤细胞铁死亡

目的:探讨青蒿琥酯(Art)对骨肉瘤的促铁死亡作用及其机制。方法:将人骨肉瘤U-2 OS细胞分为4组:正常对照组、ferrostatin-1(Fer-1)组、Art组和Art+Fer-1组。CCK-8法检测细胞活力;生化方法检测细胞ROS、Fe^(2+)和GSH水平;透射电镜观察细胞线粒体形态;RT-qPCR检测p53、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化生物酶4(GPX4)的mRNA水平;Western blot检测p53、SLC7A11和GPX4蛋白水平。结果:Art显著抑制了U-2 OS细胞的生长。Art通过促进Fe^(2+)的积累和ROS的形成、抑制GSH的产生,诱发了OS细胞铁死亡,而铁死亡抑制剂Fer-1则抑制了U-2 OS细胞铁死亡。此外,Art还改变了U-2 OS细胞的线粒体形态,表现为线粒体缩小,线粒体膜密度增高,线粒体嵴减少。Art抑制了铁死亡通路上SLC7A11和GPX4 mRNA及蛋白的表达、上调了铁死亡上游调控因子p53的表达,从而诱导铁死亡。结论:Art能通过p53/SLC7A11/GPX4通路诱导骨肉瘤细胞铁死亡。

青蒿琥酯下调lncRNA HOTAIR表达抑制肝癌细胞增殖及迁移作用

目的:探讨青蒿琥酯通过抑制lncRNA HOTAIR表达对人肝癌细胞增殖、迁移能力影响及其作用机制。方法:分别采用MTT法、Transwell小室法检测不同浓度青蒿琥酯对人肝癌细胞Huh7、HepG2增殖及迁移能力的影响;采用qRT-PCR法检测青蒿琥酯对Huh7细胞HOTAIR表达影响;使用HOTAIR过表达质粒转染Huh7细胞,qRT-PCR验证其转染效率;不同浓度青蒿琥酯处理正常Huh7细胞和Huh7+HOTAIR-OE细胞,MTT法、Transell小室法检测各组细胞增殖、迁移能力变化,验证HOTAIR过表达对青蒿琥酯抑癌作用影响,进一步了解青蒿琥酯通过调控HOTAIR实现对肝癌细胞的抑制作用。结果:青蒿琥酯可抑制人肝癌Huh7、HepG2细胞增殖及迁移能力,且呈剂量依赖性(P<0.05);青蒿琥酯可抑制Huh7细胞HOTAIR表达;HOTAIR过表达后减弱了青蒿琥酯抑制Huh7细胞的增殖及迁移能力(P<0.05)。结论:青蒿琥酯可能是通过或者部分通过下调lncRNA HOTAIR表达,从而达到抑制肝癌细胞增殖和迁移能力。

青蒿琥酯通过调控Skp2、P21基因的表达抑制食管鳞癌细胞的研究

目的阐明青蒿琥酯在食管鳞癌病理进程中对肿瘤细胞功能以及细胞周期的调控作用。方法用不同浓度青蒿琥酯的培养基处理KYSE450细胞和TE14细胞,以0 mg·L^(-1)青蒿琥酯处理的细胞作为空白组,以30 mg·L^(-1)青蒿琥酯处理后细胞作为实验组。采用MTT和克隆形成实验去测定细胞的生长情况;以Transwell实验去分别检测青蒿琥酯处理前后细胞的侵袭迁移能力的变化情况;利用流式细胞术检测细胞周期变化。通过转录组测序检测基因变化,并利用RT-qPCR验证差异基因以探究青蒿琥酯在ESCC中发挥作用的可能机制。结果与空白组相比,青蒿琥酯处理后KYSE450、TE14细胞的增殖、侵袭、迁移能力明显下降(P<0.01)。测序结果表明,青蒿琥酯可能通过影响细胞周期发挥抑制肿瘤发生发展的作用。青蒿琥酯处理后KYSE450细胞和TE14细胞G 1期比例明显上升。与细胞周期调控密切相关的基因Skp2表达降低,其下游靶基因P21升高。结论青蒿琥酯通过调控Skp2、P21的表达抑制食管鳞癌细胞发生发展。本研究以抗疟疾中成药青蒿琥酯的重新应用为创新点,为开发新型安全、有效的ESCC靶向药物提供了科学依据,也为开发ESCC新治疗方案提供了思路。

青蒿琥酯通过抑制NLRP3炎性体激活和炎性细胞因子分泌减轻新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的研究青蒿琥酯对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)的保护作用及其作用机制。方法7日龄新生SD大鼠随机分为假手术组、模型组、5 mg/kg青蒿琥酯组、10 mg/kg青蒿琥酯组、20 mg/kg青蒿琥酯组、6 mg/kg地塞米松组,每组18只。除假手术组外,其余各组建立HIBD模型,假手术组只需分离左颈侧总动脉,不行结扎和氮氧混合气体通气处理。在手术后,各组立刻腹腔注射对应药物,假手术组和模型组大鼠注射等体积的生理盐水,之后每日一次,共给药5次。末次给药1 h后,对各组大鼠进行神经功能缺损评分,大鼠处死后检测脑含水量,观察大鼠海马CA1区脑组织病理学改变,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况,ELISA分别检测各组大鼠脑组织和外周血中白细胞介素1β(IL⁃1β)、IL⁃6、肿瘤坏死因子α(TNF⁃α)的水平,Western blot法检测各组大鼠海马CA1区脑组织含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、含胱天蛋白酶募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase⁃1)蛋白表达。结果与模型组比较,(10、20)mg/kg青蒿琥酯组和地塞米松组大鼠神经功能缺损评分下降,脑组织病理损伤减轻,脑含水量明显减少,海马神经元细胞凋亡数明显减少,脑组织和外周血中IL⁃1β、IL⁃6、TNF⁃α水平明显降低,NLRP3、ASC、caspase⁃1水平明显降低。结论青蒿琥酯能够改善HIBD新生大鼠的神经功能、缓解脑部损伤、减轻脑水肿,对HIBD起保护作用,这可能与抑制NLRP3炎性体激活,减少炎性细胞因子的分泌有关。

基于网络毒理学和代谢组学的青蒿琥酯心脏毒性作用机制研究

目的运用网络毒理学和血清非靶向代谢组学研究青蒿琥酯致心脏毒性作用机制。方法运用网络毒理学挖掘青蒿琥酯致心脏毒性关键靶点及信号通路;选用C57BL/6J健康小鼠灌胃给予青蒿琥酯后,观察经毒性暴露小鼠的心脏病理形态和血清生化指标以评价其毒性作用;运用血清非靶向代谢组学技术筛选青蒿琥酯致心脏毒性相关内源性代谢物,并进一步富集其毒性所干扰的关键代谢通路。结果通过网络毒理学分析共获取青蒿琥酯心脏毒性作用靶点包括AKT1、EGFR、CASP3、VEGFA等64个,以及Apoptosis、PI3K-Akt、FoxO等165条信号通路,血清代谢组学分析显示青蒿琥酯引发心脏毒性所影响的血清代谢物包括溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、吲哚乙醛等,所富集的代谢通路为甘油磷脂代谢和色氨酸代谢。结论青蒿琥酯600 mg·kg^(-1)给药1周后可诱发C57BL/6J小鼠的心脏毒性,其诱发的毒性机制与甘油磷脂代谢失调及色氨酸代谢紊乱有关,本研究为青蒿琥酯引发药源性心脏毒性的早期预测和评价提供了参考依据。

青蒿琥酯体外抗弓形虫作用的实验研究

目的:观察青蒿琥酯(Artesunate,Art)对体外培养的弓形虫感染模型的抑制作用。方法:采用表达绿色荧光蛋白的转基因弓形虫RH株(RH-GFP)感染小鼠腹腔巨噬细胞(Macrophage,Mφ),建立体外作用模型并分为对照组(0.9%氯化钠溶液阴性对照);Art组,药物浓度分别为1.5625、3.125、6.25、12.5、25、50、100和200μg/mL;阿奇霉素(Azithromycin,Azm)组(阳性对照),药物浓度分别为12.5、25、50、100、200、400、800和1600μg/mL;Art+Azm组,药物浓度分别为:Art1.5625+Azm12.5、Art3.125+Azm25、Art6.25+Azm50、Art12.5+Azm100、Art25+Azm200和Art50+Azm400μg/mL。各组孵育24 h后以流式细胞仪检测感染体系中虫体和细胞比例变化,以吉姆萨染色观察速殖子形态和结构变化。结果:与对照组相比,Art组弓形虫速殖子比例自3.125μg/mL起随着药物浓度的增加明显下降(P<0.01),50μg/mL时游离虫体比例低于0.3%,Mφ感染率低于1.6%。Azm组速殖子在400μg/mL时比例低于0.6%,Mφ感染率低于3.5%。Art+Azm组中Art12.5+Azm100μg/mL起速殖子比例低于0.04%,此时Mφ感染率低于1.8%。吉姆萨染色显示,各组随着药物浓度增加,弓形虫速殖子由香蕉状逐渐肿胀变形,细胞质内呈泡沫状,内部结构崩塌瓦解,直至细胞膜破裂内容物溢出,视野内仅残留固缩深染的胞核或碎片。结论:体外实验中,Art可显著杀伤弓形虫游离速殖子,降低宿主细胞感染率,该抗虫效果在一定范围内与浓度呈正相关。

青蒿琥酯研究进展

青蒿素的发现和抗疟应用是中医药研发贡献于人类健康福祉的一个范例。本世纪初以来,世界卫生组织(WHO)大力推广青蒿素联合疗法,大大降低了疟疾的发病率和死亡率,挽救了全球特别是发展中国家数百万人的生命。WHO推荐的青蒿素联合疗法6个主要配方中,4个联合疗法采用了青蒿琥酯,这与青蒿琥酯的抗疟效果较好有关,尤其是它治疗可引发高病死率的恶性疟的疗效显著。2010年青蒿琥酯静脉注射剂成为WHO抢救重症疟疾的首选用药,在全球抗疟进程中起着不可替代的作用。

青蒿琥酯通过调节miR-21/PTEN/AKT轴对甲状腺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 观察青蒿琥酯对甲状腺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响及微小RNA(miRNA)-21在该过程中的作用,并探讨相关机制。方法 取TPC-1细胞,将miR-21过表达质粒miR-21 mimics转染至TPC-1细胞,随机分为mimics组、联合组,mimics组常规培养,联合组加入青蒿琥酯(320μg/mL)。另取TPC-1细胞分为空白组、青蒿琥酯组,空白组常规培养,青蒿琥酯组加入青蒿琥酯(320μg/mL)。实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测细胞miR-21表达量;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移能力;双荧光素酶实验验证miR-21与第十染色体同源丢失性磷酸酶和张力蛋白基因(PTEN)的靶向关系;免疫印迹法检测细胞PTEN、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT蛋白表达。结果 与空白组比较,青蒿琥酯组miR-21表达量,24、48、72 h吸光度值,迁移率,p-AKT/AKT降低,凋亡率、PTEN蛋白表达量升高(P<0.05),mimics组miR-21表达量,24、48、72 h吸光度值,迁移率,p-AKT/AKT升高,凋亡率、PTEN蛋白表达量降低(P<0.05);与青蒿琥酯组比较,联合组miR-21表达量,24、48、72 h吸光度值,迁移率,p-AKT/AKT升高,凋亡率、PTEN蛋白表达量降低(P<0.05);与mimics组比较,联合组miR-21表达量,24、48、72 h吸光度值,迁移率,p-AKT/AKT降低,凋亡率、PTEN蛋白表达量升高(P<0.05);双荧光素酶结果显示,PTEN是miR-21的靶基因。结论 青蒿琥酯可抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移,并促进其凋亡,其作用机制可能与下调miR-21进一步靶向调控下游PTEN/AKT轴表达有关。

青蒿琥酯通过调节卵巢癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路诱导铁死亡

目的:探讨青蒿琥酯(ART)对人卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其可能机制。方法:体外培养人卵巢癌细胞系SKOV3和ES-2,分为对照组和ART处理组(使用10、20、40μmol/L ART处理)。采用CCK-8法、平板克隆法检测细胞增殖情况;划痕法检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞内活性氧(ROS)水平变化;谷胱甘肽测定试剂盒检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量变化;透射电镜观察ART作用后细胞超微结构变化;CCK-8法检测铁死亡小分子抑制剂对ART的逆转作用;Western blot检测Bcl-2、Bax、Wnt/β-catenin通路表达蛋白及GPX4蛋白的表达。结果:不同浓度ART均能显著抑制卵巢癌的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,且该作用呈剂量依赖性(P<0.05)。与对照组相比,ART处理组出现明显铁死亡特征,包括ROS水平增加(P<0.05),GSH水平下降(P<0.05)和电镜下细胞超微结构的变化,且铁死亡小分子抑制剂能逆转ART对卵巢癌细胞的铁死亡作用(P<0.05)。Western blot结果显示,ART处理后卵巢癌细胞中抑凋亡蛋白Bcl-2显著下调,促进凋亡蛋白Bax表达显著上调,Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、TCF4、c-myc、Cyclin D1表达下调,铁死亡相关蛋白GPX4表达下调,且呈浓度剂量依赖性(P<0.05)。结论:ART可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭,促进细胞凋亡,诱导卵巢癌细胞铁死亡。

青蒿琥酯对猪心肺复苏后心脑损伤的保护作用

目的探讨青蒿琥酯(ART)对猪心肺复苏(CPR)后心脑损伤的保护作用。方法国产健康白猪24头,体质量(36.63±2.55)kg,应用随机数字表法分为三组:假手术组(Sham组,n=6)、CPR组(n=10)、ART组(n=8)。CPR组和ART组采用电刺激诱发室颤9 min、CPR 6 min的方法制作心脏骤停复苏模型。Sham组不经历心脏骤停。在制作模型后5 min时,ART组静脉注射青蒿琥酯4.8 mg/kg,维持2 h。另外两组输注等量溶媒。分别于基线及复苏后1、2、4、24 h检测血心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、钙结合蛋白S100 B(S100B)水平。复苏后24 h实验猪安乐死,获取心脏及大脑组织,检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及细胞凋亡指数。结果与Sham组比较,CPR组血cTnI、CK-MB、NSE、S100B在复苏后1、2、4、24 h均明显升高(P<0.05);ART组血cTnI仅在复苏后4、24 h明显升高(P<0.05),CK-MB仅在复苏后1、2 h明显升高(P<0.05),NSE和S100B仅在复苏后2、4、24 h明显升高(P<0.05)。与CPR组比较,ART组血cTnI在复苏后4、24 h明显降低,CK-MB在复苏后2 h明显降低,NSE在复苏后2、4、24 h明显降低,S100B在复苏后2、4 h明显降低[cTnI(pg/mL):4 h为469.10±55.29 vs.291.15±17.68,24 h为566.35±31.34 vs.333.50±22.50;CK-MB(ng/mL):66.78±5.93 vs.58.65±5.84;NSE(ng/mL):2 h为21.44±1.61 vs.15.91±1.26,4 h为26.08±1.03 vs.19.47±1.22,24 h为31.70±0.87 vs.23.46±1.09;S100B(pg/mL):2 h为2643.10±215.90 vs.2041.46±107.37,4 h为3132.82±178.64 vs.2337.77±112.85,均P<0.05]。与Sham组比较,CPR组心肌及大脑皮层TNF-α、IL-1β均明显升高(P<0.05)。与CPR组比较,ART组心肌TNF-α、IL-1β及皮层IL-1β均明显降低[TNF-α(pg/mL):心肌632.68±33.19 vs.348.69±27.12;IL-1β(pg/mL):心肌1627.29±53.94 vs.982.88±52.79,皮层1606.54±49.56 vs.976.45±44.84,均P<0.05]。与Sham组比较,CPR组心肌及皮层的凋亡指数均明显升高(P<0.05)。与CPR组比较,ART组心肌及皮层的凋亡指数均有所降低,但差异无统计学意义[心肌(%):52.78±10.53 vs.14.33±4.01,皮层(%):59.00±7.76 vs.19.11±5.56,均P>0.05]。结论青蒿琥酯能通过抑制炎症反应、抗细胞凋亡途径,减轻猪心脏骤停复苏后的心脑损伤。

青蒿琥酯通过影响Skp2和CDKN1A基因的表达抑制乳腺癌细胞

目的阐明青蒿琥酯(artesunate,ART)在乳腺癌发展过程中所发挥的功能及可能的作用机制。方法设置用不同浓度ART处理MCF-7、MDA-MB-231为实验组,0μmol·L^(-1)ART处理细胞为对照组。通过MTT、平板单克隆实验测定ART对乳腺癌细胞生长能力的影响;Transwell实验探究ART对乳腺癌细胞侵袭以及迁移能力的影响;采用流式细胞术检测ART对乳腺癌细胞周期及其凋亡的影响;通过转录组测序分析及RT-qPCR实验方法检测并验证ART在乳腺癌细胞中可能的作用机制。结果经ART处理后的两种乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231其增殖、迁移以及侵袭能力与对照组相比均明显下降,ART作用后的乳腺癌细胞其G 0-G 1期细胞比例明显增加,并且乳腺癌细胞凋亡率明显上升。转录组测序结果提示,ART可能通过下调S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)基因的表达、上调周期蛋白抑制因子1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A)基因的表达调控乳腺癌细胞的周期以达到抑制乳腺癌细胞发生发展的目的。结论ART可通过影响Skp2基因、CDKN1A基因的表达抑制乳腺癌细胞的发展。