靛蓝提取物中靛蓝和靛玉红的分析方法比较

以靛膏为原料,采用盐酸酸化、葡萄糖还原和乙酸乙酯提取3种工艺制备靛蓝酸化物、靛蓝还原物和乙酸乙酯提取物。建立高效液相色谱(HPLC)法、紫外可见分光光度(UV)法和双波长紫外分光光度(dW-UV)法,分析3种靛蓝提取物中靛蓝和靛玉红的含量,并以Kolmogorov-Smirnov检验、Bland-Altman偏差图比较和Spearman检验确定3种样品各自最佳分析方法。结果表明:所建立的HPLC法、UV法和dW-UV法简单、准确、灵敏度高、稳定性好和重复性好。3种靛蓝提取物成分含量检测方法均遵从正态分布,两两测定值存在显著差异。UV法更适于分析靛蓝酸化物、靛蓝还原物中靛蓝含量;HPLC法更适于乙酸乙酯提取物中靛蓝、靛玉红含量分析。

基于Nrf2-HO-1/GPX4信号轴探讨中药靛玉红衍生物E804抑制肺癌A549细胞增殖和迁移的作用机制

目的 探讨中药靛玉红衍生物E804对非小细胞肺癌(NSCLC)系A549细胞增殖和迁移的影响,并阐明Nrf2-HO-1/GPX4信号轴可能的作用机制。方法 以肺癌A549细胞为细胞模型。采用MTT和细胞划痕实验观察0、10μmol/L E804和10μmol/L E804+不同特异性抑制剂(Nec-1、CQ、Z-VAD、DFO、Fer-1和Lip-1)组细胞的增殖和迁移能力;采用DCFH-DA荧光探针法检测0、2.5、5和10μmol/LE804组细胞内活性氧(ROS)含量,比色法检测二价铁离子(Fe^(2+))含量,分光光度法检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量,微量法检测丙二醛(MDA)含量;Western blot法检测0、2.5、5和10μmol/L E804组细胞SLC7A11、Transferrin、GPX4、SLC40A1、Nrf2和HO-1蛋白表达水平。结果 与对照组(0μmol/LE804)比较,2.5、5和10μmol/L E804升高细胞内ROS、Fe^(2+)和MDA水平,降低细胞内GSH含量(P<0.01),同时降低SLC7A11、GPX4、SLC40A1、Nrf2和HO-1蛋白表达水平(P<0.01),升高Transferrin表达水平(P<0.05)。与单独使用10μmol/LE804组比较,细胞凋亡抑制剂(Z-VAD)组和细胞铁死亡抑制剂(DFO、Fer-1和Lip-1)组能够部分逆转E804对A549细胞的增殖和迁移抑制(P<0.01)。结论 E804可抑制A549细胞增殖和迁移,并诱发铁死亡,其机制可能与抑制Nrf2-HO-1/GPX4信号轴有关。

靛玉红通过下调Cyclin A2阻滞细胞周期抑制小鼠Lewis肺癌的体内外及网络药理学研究

目的研究中药成分靛玉红在体内外对小鼠Lewis肺癌(LLC)的抑制效果及对细胞周期的调节作用。方法通过细胞毒性实验探究靛玉红在体外对小鼠LLC细胞的抑制作用。构建肺癌原位小鼠模型,随机分为模型组(磷酸盐缓冲液灌胃,每天1次)和靛玉红低、中、高剂量组(25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg灌胃,每天1次)、顺铂组(2 mg/kg腹腔注射,每3天1次),连续3周,记录生存期和体质量。通过活体成像法记录小鼠肺癌进展,取肺肿瘤组织,称重并计算抑瘤率。通过网络药理学预测靛玉红治疗肺癌的核心靶点和通路。Western blot法分别验证靛玉红在体外对LLC细胞及在体内对小鼠肺癌组织中细胞周期蛋白A2(Cyclin A2)表达的影响;免疫组织化学染色(IHC)法和实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法分别检测靛玉红对小鼠肺癌组织中Cyclin A2蛋白及其编码基因CCNA2表达的影响。流式细胞术和IHC法分别检测靛玉红对小鼠肺癌肿瘤细胞的细胞周期和肺癌肿瘤增殖抗原Ki-67表达的影响。结果靛玉红在体外对小鼠LLC细胞的抑制作用呈剂量和时间依赖性,24 h、48 h、72 h的半抑制浓度(IC_(50))分别为188.7μmol/L、109.0μmol/L、58.3μmol/L。与模型组比较,靛玉红中剂量组小鼠肺部荧光表达降低(P<0.05),生存率提高(中位生存期延长7 d),肿瘤抑制率较高(37.76%),且对小鼠体质量没有明显影响(P>0.05)。网络药理学分析表明,靛玉红抑制肺癌可能通过调控细胞周期及Cyclin A2实现。进一步研究证明,靛玉红通过抑制Cyclin A2,导致细胞周期S期阻滞,抑制肿瘤细胞增殖。结论靛玉红体外抑制小鼠LLC细胞,体内通过下调肺癌肿瘤细胞Cyclin A2导致细胞周期阻滞,抑制肿瘤进展,延长肺癌小鼠生存期。

靛玉红可能通过靶向MAPK14参与银屑病的发病

目的探讨靛玉红在银屑病中的作用靶点,初步阐明靛玉红在银屑病中可能通过MAPK14对银屑病产生的影响。方法从高通量基因表达(GEO)数据库下载GSE30999和GSE78097银屑病数据集,分别作为训练集和验证集。筛选出差异表达基因,然后分析其生物学功能和通路。与靛玉红靶点基因取交集获取差异表达的靛玉红靶点基因,分析基因的相关性和验证基因差异表达情况。采用LASSO回归模型和Cox回归模型筛选靛玉红的最佳靶点基因,与靛玉红进行分子对接分析两者之间的结构关系。结果在GSE30999数据集中,共发现8个靛玉红靶点基因,与对照组相比,均有差异表达。其中7个基因均具有较高的诊断价值(AUC均>0.8),1个基因具有较低诊断价值(AUC>0.6)。GO和KEGG富集分析显示靛玉红的8个靶点基因主要与细胞衰老、化学致癌-受体激活、脂质与动脉粥样硬化、急性髓系白血病和AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用有关。通过LASSO回归模型和Cox回归模型筛选了靛玉红的最佳靶点基因——MAPK14基因。分子对接显示靛玉红与MAPK14紧密结合。结论靛玉红可能通过MAPK14参与银屑病发病机制的调控和治疗。

运用近红外光谱技术快速测定大青叶中靛玉红含量

目的运用近红外光谱技术快速测定大青叶中靛玉红含量,建立靛玉红的近红外定量分析模型,并通过模型分析评价大青叶的品质。方法采用传统的高效液相色谱法对74批大青叶中靛玉红含量进行测定及方法学验证,运用偏最小二乘法建立靛玉红含量与近红外光谱之间的定量校正分析模型,并对验证集样品进行含量预测,将预测值与实际测定值进行统计分析。结果靛玉红浓度在1.04~3.13μg·ml^(-1)范围内线性良好,回归方程为Y=11566X+911.7,r=0.9990;精密度、重复性、12 h内稳定性的RSD分别为0.31%、0.86%、1.11%;加样平均回收率为99.22%。建立的定量分析模型准确性好,内部交叉验证均方差、内部交叉验证决定系数分别为0.226、0.983。通过对24份校正集样品进行外部验证,近红外预测值与高效液相测定值的预测回收率为93.66%。对两组数据进行方差显著性分析,其显著性指标值分别为0.540和0.428,表明两种试验方法的数据差异无统计学意义,该模型的精度和再现性均符合规定。结论近红外光谱技术对大青叶中靛玉红含量测定结果较好,建立的定量分析模型可以无损、快速、准确地对大青叶进行质量评价,提高生产效率。

5′-碘靛玉红的抗肿瘤作用

5′-碘靛玉红是靛玉红苯环5′位碘取代的衍生物。对大、小鼠急性毒性试验表明,未见与靛玉红有明显差异。对大鼠W256的实验治疗表明,二药等克分子剂量(2mM/kg)或等剂量(800mg/kg)灌胃,本品的抑瘤率为57～72％(P<0.01),靛玉红为30～34％(P<0.05),二者有显著差异。本品的ID_(50)为490±32.9mg/kg,CI大于10;而靛玉红的抑瘤率低于50％。本品还能明显延长L7212小鼠的存活时间41～73％(P<0.01);而靛玉红无活性。P388瘤细胞体外试验表明,二药均能抑制~3H-TdR参入瘤细胞的DNA,但本品的IC_(50)明显低于靛玉红,分别为6.4和17.0μg/ml。以上结果证明了,5′-碘靛玉红的抗癌活性比靛玉红高。

复合固定相色谱离析靛玉红肟与合成前体靛玉红的应用

目的:从靛玉红肟合成粗品中离除靛玉红、靛蓝等杂质,探讨靛玉红肟衍生物晶体的获得实验方法,为实验室以靛玉红为前体合成高效、低毒的靛玉红肟衍生物奠定基础。方法:筛选色谱分离系统,从靛玉红肟粗品混合物中分离出靛玉红肟、靛玉红、靛蓝等成分,重结晶得到靛玉红肟、靛玉红晶体。结果:采用氧化铝-硅胶复合固定相色谱,实现对靛玉红肟混合物中目标成分的离析。结论:实验采用氧化铝-硅胶复合固定相色谱离析能够实现靛玉红、靛蓝等的离除,为进一步探讨靛玉红肟衍生物晶体的结构及其构效关系打下了前期的工作基础。

HPLC测定板蓝根提取物中靛蓝和靛玉红的含量

目的 采用HPLC测定板蓝根提取物中靛蓝和靛玉红含量。方法 将板蓝根醇提液挥去乙醇 ,经氯仿萃取 ,然后用HPLC测定。色谱柱为DikmaDiamonsilTMC18(5 μm ,2 0 0mm× 4 6mm) ,流动相为甲醇 - 0 1%醋酸铵 -醋酸 (70∶30∶1) ,流速为1 0ml·min-1,检测波长 2 80nm。结果 靛蓝线性范围在 0 0 15 2～ 0 30 4 0 μg(r =0 9997) ,平均加样回收率为 97 3% ,RSD =1 87% (n =5 ) ;靛玉红线性范围在 0 0 16 5 6～ 0 3312 μg ,平均加样回收率为 96 6 % ,RSD =2 .32 % (n =5 )。结论 所用方法简便快捷 ,适合板蓝根药材以及含靛蓝、靛玉红产品的质量控制。

逆境胁迫对菘蓝幼苗靛玉红含量的影响

培养30d的菘蓝无菌幼苗经250mmol／L NaCl、自然干旱、20mmol／L ABA、4℃低温等不同方式逆境处理，不同时间内取样，用高效液相色谱法对其中靛玉红的含量进行测定。结果表明：盐、干旱、ABA处理12h内能提高菘蓝幼苗中靛玉红含量59.05％～161．67％，低温胁迫处理24h也能提高靛玉红含量141．4％，说明适当逆境胁迫处理能有效提高菘蓝幼苗体内靛玉红的累积量，其中250mmol／L NaCl胁迫处理效果最为显著。

HPLC法测定板蓝根药材中靛蓝和靛玉红的含量

目的:采用 HPLC—UV 法测定板蓝根中靛蓝和靛玉红含量。方法:将板蓝根经氯仿回流提取,然后用 HPLC 测定。色谱柱为 Diamonsil^(TM)C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),检测波长为300 nm,柱温为30℃。结果:靛蓝线性范围为0.1488～9.520μg·mL^(-1)(r=0.9999,n=7),平均回收率为97.8%,RSD=1.7%(n=6);靛玉红线性范围为0.2539～16.25μg·mL^(-1)(r=0.9995,n=7),平均回收率为98.5%,RSD=1.64%(n=6)。结论:所用方法准确可靠,适合于板蓝根药材的质量控制。

青黛药材中的靛蓝和靛玉红含量的同时测定

目的以HPLC法同时测定青黛中有效成分靛蓝和靛玉红的含量。对中国药典2010年版中青黛含量测定方法的不足之处进行改进。方法用适量DMF超声30 min提取青黛药材中的靛蓝和靛玉红。液相条件如下:色谱柱:Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流速1 mL/min;流动相:乙腈∶水(70∶30);柱温:30℃;检测波长:290 nm。此法在不影响分析结果的条件下可大大缩短分析时间。结果靛蓝和靛玉红进样量在29.90 ng^298.90 ng和6.71 ng^67.06 ng间与峰面积的线性关系良好(r>0.999,n=6)。靛蓝平均加样回收率:101.05%(RSD=1.81%);靛玉红平均加样回收率:99.78%(RSD=2.52%)。结论本法合理、便捷;能同时测定青黛中靛蓝和靛玉红含量,符合现行药典简便、快速、准确的要求。

靛玉红肠吸收转运机制的研究

目的:探讨靛玉红肠吸收转运机制。方法:采用缚管翻转肠囊模型,以维拉帕米为P-糖蛋白抑制剂,丙磺舒为多药耐药相关蛋白(MRP)抑制剂,2,4-二硝基苯酚(DNP)为能量抑制剂,考察加入抑制剂前后药物在空肠和回肠部位的转运量的变化。结果:靛玉红在空肠和回肠部位的转运量无显著性差异(P>0.05);加入抑制剂前后在空肠和回肠部位的转运量亦无显著性差异(P>0.05);通过吸收动力学的研究,发现靛玉红的吸收符合一级吸收模型,Ka为0.015 min-1,且单位时间吸收药量与浓度成正比,符合Fick′s扩散原理。结论:靛玉红的小肠吸收为典型的被动扩散吸收机制。

板蓝根中靛蓝和靛玉红的提取及其质量分数的测定

采用直接比色法测定板蓝根中靛蓝、靛玉红的质量分数。对靛蓝、靛玉红在 2 4 0～ 70 0nm波段进行扫描 ,确定其最大吸收波长分别为 6 0 1和 5 31nm。分别通过单因素试验和正交试验 ,确定提取靛蓝、靛玉红的最佳工艺参数。结果表明 ,乙醇体积分数为 75 %时 ,靛蓝和靛玉红的提取物得率最高 ;提取时间为 4h时 ,靛蓝和靛玉红的提取物得率最高。正交试验确定的最佳提取工艺参数为 :药材粒度 4 0目 ,提取时间 4h ,乙醇体积分数 75 % ,此时 ,提取物得率达 1 74 %。

靛玉红类CDK1抑制剂的同源模建、分子对接及3D-QSAR研究

细胞周期蛋白依赖性激酶1的异常表达会导致G2期的停滞及多种肿瘤的发生,故CDK1近年来已成为一个理想的治疗靶点.本文以细胞分裂调控蛋白2的同源体为模板,同源模建了CDK1的结构,并与靛玉红类小分子抑制剂进行分子对接.分别运用三种叠合方法进行分子叠合,并在此基础上采用Sybyl 7.1中的比较分子场分析(CoMFA)模块及Discovery Studio 3.0中的三维定量构效关系(3D-QSAR)模块(以下简称为DS)分别建立了3D-QSAR模型.其中,将分子对接叠合与公共骨架叠合联合运用的叠合方法所得3D-QSAR模型的评价参数是最佳的(CoMFA:q2=0.681,r2=0.909,r2pred.=0.836;DS:q2=0.579,r2=0.971,r2pred.=0.795,其中q2为交叉验证系数,r2为非交叉验证系数).本文的研究结果在对靛玉红类小分子进行结构修饰设计出新的CDK1抑制剂方面,可提供重要的理论基础.

靛蓝和靛玉红对小鼠T细胞活化与增殖的影响

目的:研究靛蓝(IB)和靛玉红(IR)对小鼠T细胞活化和增殖的影响。方法:以刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠T细胞活化和增殖,利用流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子表达情况;通过2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-苯二磺酸)-2H-四唑单钠盐(WST-1)法测定细胞增殖;通过CFDA-SE染色流式细胞术检测增殖细胞各代所占比例和增殖指数(PI)。结果:小鼠T细胞离体培养6 h后,对照组活化比率为(14.25±2.25)%,在ConA的刺激下小鼠T细胞活化显著(35.25±2.31)%(P<0.01),IB和IR分别显著降低活化,(26.88±0.99)%和(23.98±2.25)%(P<0.01)。在ConA的刺激下,小鼠T细胞WST-1吸收度(1.28±0.09)显著高于对照组(0.33±0.02)(P<0.01)。IB和IR分别显著降低了ConA引起的WST-1吸收度增加(P<0.01)。在培养48 h后,空白对照组CFDA-SE流式细胞术检测结果仅显示单一亲代峰(parent),PI为1.0。ConA刺激下小鼠T细胞明显增殖,出现子一代和子二代峰,PI为1.36。在IB或IR作用下,ConA介导的小鼠T细胞增殖明显下降,亲代峰细胞数增多,子一代和二代的细胞数降低,PI均为1.22,低于ConA组。结论:靛蓝和靛玉红均可以显著的抑制ConA介导的小鼠T细胞的活化和增殖。

靛玉红缓解三硝基苯磺酸致大鼠溃疡性结肠炎及其机制研究

目的观察靛玉红对三硝基苯磺酸诱导的大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用,并探讨其可能机制。方法 48只清洁级SD大鼠,♂,体质量(200±20)g,随机分为4组,分别为正常组、模型组、靛玉红组、柳氮磺吡啶组。造模并治疗7 d后,进行疾病活动指数(disease activity index, DAI)评分,观察结肠HE染色病理切片,检测转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)水平,以及肠三叶因子(intestinal trefoil factor, ITF)mRNA表达。结果与模型组比较,靛玉红组DAI评分降低,结肠HE染色病理显示炎症细胞明显减少,TGF-β1水平降低,ITF mRNA表达升高,差异均有显著性(P<0.05)。结论靛玉红可以明显改善UC模型大鼠症状、结肠病理形态,通过降低TGF-β1水平,上调ITF mRNA表达,从而达到抑制炎症的效果。

靛玉红对肿瘤细胞抑制作用的研究及相关机制探讨

[目的]探讨靛玉红对与细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)、Src激酶有关的人类肿瘤细胞生长的抑制作用。[方法]用细胞集落培养方法验证靛玉红对的人白血病细胞株K562、人胃癌细胞株、人淋巴瘤细胞株、人宫颈癌细胞株Heal、人早幼粒白血病细胞株HL-60、人胆囊癌、肝癌、肝门胆管癌细胞株的影响。用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法观测靛玉红对K562、胆囊癌、肝门胆管癌细胞株的影响。[结果]靛玉红对这几种肿瘤存在广泛的抑制作用。[结论]靛玉红及其衍生物可能成为有CDK、Src激酶参与的肿瘤的新一代抗肿瘤药物。

靛玉红紫草素对角质形成细胞株凋亡的影响

目的 观察靛玉红、紫草素对体外角质形成细胞株凋亡的影响 ,初步探讨其治疗银屑病的机制。方法 以PI法和Annexin Ⅴ法在流式细胞仪上检测靛玉红、紫草素对体外角质形成细胞凋亡的影响。结果 靛玉红在 0 .10 ,0 .2 5 ,0 .5mol/L时细胞凋亡率分别为 7.5 2 %± 0 .73 % ,19.2 2 %± 4.13 % ,3 0 .62 %± 2 .68% ;紫草素在相同浓度时分别为6.72 %± 0 .73 % ,12 .5 9%± 2 .0 5 % ,3 6.47%± 3 .11%。结论 靛玉红、紫草素可以诱导细胞凋亡 ,从而达到治疗银屑病的目的。

大青叶中靛玉红的提取工艺研究

目的:优选大青叶中靛玉红的最佳提取工艺条件。方法:以靛玉红含量为指标,采用正交实验设计法,考察超声法、回流法不同因素和水平对其提取条件的影响,优选最佳提取工艺。并比较超声法、回流法与传统工艺对靛玉红提取率的影响。结果:三种提取方法中,超声法提取率最高且方法简便。其最佳工艺条件为A1B1C2D3。即加10倍量60%的乙醇、超声提取3次,每次20 m in。结论:超声法具有时间短、收率高、耗能小、无需加热等优点,应用前景广阔。

靛蓝与异构体靛玉红的量子化学研究

靛蓝与靛玉红是青黛的主要成分,也是同分异构体,但是它们的理化性质和生物活性却显示出明显的差异.作者选用B3LYP的方法,基组为6 31G ,优化了这两种同分异构体的几何构型,得到了两者之间的异构化能.进行了集居数分析、自然键轨道(NBO)分析、成键轨道分析及振动光谱分析.通过计算得知,靛蓝分子与靛玉红分子的所有原子均处于同一平面,两个分子都是由碳骨架及环上的氮原子参与的大的π共轭体系构成,环上存在很强的离域.分子内存在较强的氢键,氢键与环上的碳碳键形成六元或七元环,使分子的各原子保持与吲哚环在同一平面并使分子的稳定性增加.