年轻卵巢储备功能减退患者囊胚非整倍体率及妊娠结局的分析

目的探讨年轻(<38岁)女性中卵巢储备功能减退(DOR)是否会影响囊胚的染色体非整倍体率和囊胚的继续发育潜能。方法回顾性分析2020年1月至2022年9月在徐州市妇幼保健院生殖医学中心行胚胎植入前非整倍体遗传学检测的180例患者(243个周期)的临床资料。根据是否存在DOR将研究对象分为对照组(155例,196个周期)和DOR组(25例,47个周期),比较两组患者的基本资料、胚胎实验室指标及整倍体囊胚移植周期的妊娠结局。结果两组患者的年龄、不孕年限和基础E 2(bE 2)均无显著性差异(P>0.05);DOR组的基础窦卵泡数(AFC)和抗苗勒管激素(AMH)显著低于对照组(P<0.01),而基础FSH(bFSH)水平显著高于对照组(P<0.05)。DOR组与对照组的2PN率、囊胚形成率、可用囊胚形成率和活检囊胚整倍体率、嵌合体率均无显著性差异(P>0.05)。两组患者整倍体囊胚移植周期的临床妊娠率、流产率和活产率亦无显著性差异(P>0.05)。结论年轻DOR女性卵巢储备的降低并不影响其囊胚的整倍体率和整倍体胚胎移植后的活产率。

荧光原位杂交(FISH)检测人精子染色体非整倍体率方法的研究

本研究建立了荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）方法，并测定了十名正常健康男子精子Ｘ染色体非整倍体率。取少量精液经洗后制片，用二梳苏糖醇（ＤＴＴ）和二碘水杨酸锂（ＬＩＳ）处理，使精子头部紧密的染色质去凝集，然后与生物素标记的α－卫星Ｘ染色体特异ＤＮＡ探针（ＤＸＺ１）作原位杂交；用Ｃｙ３－链亲和素检测杂交信号。结果在荧光显微镜下可清楚见到带有红色杂交点信号的Ｘ精子。杂交率平均为４８６２％（４７５４％－４９３６％）。此值与Ｘ精子占５０％的理论值差别无显著性。总共计数５５４５３个Ｘ精子，Ｘ染色体双体率为００６％；此结果与国外一些学者先前报导的结果一致，本研究提供的正常人Ｘ精子双体率的资料。

双色荧光原位杂交法检测锰作业工人精子染色体非整倍体率

目的探讨锰对精子性染色体数目畸变的影响。方法用X、Y染色体特异DNA探针与锰作业男工精子行双色荧光原位杂交,同时测定X和Y精子染色体非整倍体率。结果对6位锰作业工人共计数13203条精子与6位正常对照组工人共计数13032条精子进行比较,结果显示接触组精子X双体率、Y双体率、Xy双体率及总双体率均高于对照组(P<0.05)。结论锰作业工人精子性染色体非整倍体率增加。

双色荧光原位杂交检测正常人精子9、18号染色体非整倍体率

目的 :测定健康人精子 9、18号染色体非整倍体率。方法 :用 9、18号染色体着丝粒探针与精子核进行双色荧光原位杂交 ,计数非整倍体率。结果 :检查 16位健康捐精者 15 6 95 5个精子 ,每人约计数 10 0 0 0个精子。平均杂交率 >99%,平均 9双体率 0 .0 5 0 %± 0 .0 30 %,18双体率 0 .0 33%± 0 .0 2 5 %,二倍体精子率 0 .0 40 %± 0 .0 36 %,9缺体率 0 .0 6 7%± 0 .0 37%,18缺体率 0 .0 48%± 0 .0 34 %,无荧光点精子率 0 .42 7%± 0 .35 7%,总数目畸变率 0 .2 18%± 0 .0 71%。结论 :测定了 16例健康人精子 9、18号染色体非整倍体率 ,与传统的人精子染色体分析法测定的结果相近。

用双色荧光原位杂交检测人精子染色体非整倍体率

目的检测人精子染色体非整倍体率。方法采用双色荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）方法，取少量精标本经洗后制片，用二硫苏糖醇（ＤＴＴ）和二碘水杨酸锂（ＬＩＳ）处理，使精子头部染色质去凝集。然后，与生物素标记的α卫星Ｘ染色体特异ＤＮＡ探针（ＤＸＺ１）和地高辛标记的α卫星Ｙ染色体特异ＤＮＡ探针（ＤＹＺ３）进行原位杂交。用ＣＹ３－链亲和素、山羊抗链亲和素检测Ｘ染色体探针杂交信号；用鼠抗地高辛抗体、与荧光素结合的兔抗鼠抗体检测Ｙ染色体探针杂交信号。结果在Ｎｉｋｏｎ荧光显微镜下可以清楚看到精子头部的杂交信号，头部有１个红色荧光杂交信号的精子为Ｘ染色体精子（Ｘ精子），有１个绿色荧光杂交信号的精子为Ｙ染色体精子（Ｙ精子）。精子头部有２个荧光杂交信号的精子为染色体数目异常精子。若用１条常染色体探针和１条性染色体探针进行ＦＩＳＨ，可以区别头部有２个相同颜色荧光杂交信号的精子属非整倍体精子或二倍体精子。结论双色荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）方法，可以用于测定接触致突变剂和非整倍体诱导剂后，人精子染色体非整倍体率的变化。

二硫化碳对小鼠卵母细胞及受精卵雌原核染色体非整倍体率的影响

目的 研究二硫化碳 (CS2 )对卵母细胞和受精卵雌原核染色体非整倍体率的影响。方法 用CS2 给成年雌性NIH小鼠一次性灌胃 (372、744、1488mg/kg)和多次吸入 (199、6 5 1、12 0 9mg/m3)染毒 ,灌胃后雌、雄鼠以 1∶1同笼过夜 ,收集卵母细胞和受精卵作细胞遗传学分析 ,检测非整倍体率。结果 CS2 一次性灌胃 (372、744、1488mg/kg)和多次吸入 (199、6 5 1、12 0 9mg/m3)诱导的小鼠MⅡ卵母细胞染色体非整倍体率分别为 4.88%、6 .82 %、6 .82 %和 6 .6 0 %、12 .0 0 %、10 .0 0 % ,与对照组(0 .78%、1.30 % )比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。CS2 一次性灌胃诱导的小鼠受精卵雌原核染色体非整倍体率为 2 .18%、6 .98%、7.40 % ,后两组与对照组 (1.0 2 % )比较 ,差异亦有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 接触CS2

5例精子鞭毛多发形态异常患者的非整倍体率与卵胞质内单精子注射的临床结局研究

目的评估精子鞭毛多发形态异常(multiple morphological abnormalities of the sperm flagella,MMAF)患者的精子非整倍体率与卵胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)的临床结局关系。方法本研究在2017年1月至2018年6月期间共收集到来自郑州大学第二附属医院生殖中心的5例MMAF患者及10例精液参数正常的可育对照,通过巴氏染色和电子显微镜观察患者精子的形态及超微结构特征,采用荧光原位杂交技术(FISH)检测患者精子非整倍体率,最后对患者行ICSI助孕并观察其临床结局。结果患者精液中存在大量缺失的、短的、弯的、卷曲的和不规则的精子鞭毛,且鞭毛轴丝中央微管缺失;患者精子非整倍体率与正常相比差异无统计学意义(P>0.05);5对MMAF患者夫妇经过7个ICSI周期,均实现临床妊娠,其中活产3例,自然流产2例。结论MMAF患者精子鞭毛存在严重形态和超微结构异常,但患者较低的精子非整倍体率提示MMAF患者进行ICSI治疗具有较好的临床结局。

用三色荧光原位杂交检测人精子染色体非整倍体率

目的建立人精子间期核三色荧光原位杂交(tripl-color fluorescence in situhybr idizat ion)的实验方法。方法采用三色荧光原位杂交技术对10例和正常精子标本进行间期核的原位杂交,并统计精子间期核13、16、18、21、22、X、Y染色体的杂交信号数量。结果在显微镜下可见精子头部有杂交探针的信号,间期核背景经DAPI复染显示蓝色。结论本法具有荧光杂交信号直观易分辨、短时间内能大量分析精子数量和实验操作相对简便、结果准确可信等优点。

用FISH技术研究人类体外未受精卵的21号染色体非整倍体

采用荧光原位杂交技术 ,选用人类 2 1号染色体端粒探针 ( 2 1 qter) ,检测人类体外未受精卵的 2 1号染色体非整倍体发生率 ,并比较非整倍体率与 2 5～ 30岁和 31～ 35岁这两个女性年龄组、IVF指征、超排方案之间的关系 .在 54个未受精卵中 ,正常 2 1号单体 30枚 ,二体 1 6枚 ,三体 4枚 ,缺体 4枚 ,非整倍体率为 4 4.4 %( 2 4 /54) ;2 5～ 30岁和 31～ 35岁这两个年龄组、IVF指征、超排方案的患者的 2 1号染色体非整倍体率之间的差异无显著性 .卵母细胞 2 1号染色体的非整倍性是造成体外受精失败的重要原因之一 .

环磷酰胺对小鼠生殖细胞非整倍体诱变性研究

环磷酰胺对小鼠生殖细胞非整倍体诱变性研究孟全新，王菊凝，张月非整倍体是指细胞染色体数目不成倍数地增加或减少，从而形成不同于正常细胞核型的细胞。非整倍体对人类有巨大危害，当其发生在体细胞时可能引起癌变［１．２］，发生在生殖细胞可引起自然流产和先无缺陷［...

降调节对卵子质量的影响

To investigate the effects of the down-regulation on quality of oocyte.The protocols,age,down-regulation days before Gn and the level of LH on the day of hCG injection are not significantly related to the rate of normal fertilization and cleavage.The age between 25-35 years old and LH≤5 IU/L on the day of hCG injection,have higher rate of good-quality embryo,embryo implantation and pregrancy.The embryo’s aneuploid rate is higher when the age raise up.The number of retrieval oocyte don’t affect the embryo’s aneuploid rate.The way of insemination and control ovarian stimulation protocols affect the embryo’s aneuploid rate.

荧光原位杂交技术在检测人精子染色体异常中的应用进展

荧光原位杂交技术(FISH)以其快速、简便、高灵敏度及高特异性的优点,可一次检测成千上万精子染色体而被广泛应用,并逐渐成为检测精子染色体的首选方法。本文总结近10年来国内外相关文献,将FISH技术在检测正常人、不育者、染色体平衡易位者、有毒物接触者及肿瘤患者化疗后精子染色体异常方面的应用加以综述。

男性年龄对胚胎染色体及其辅助生殖结局影响的研究

目的探讨男性年龄对胚胎染色体及其辅助生殖结局影响。方法选择在济宁医学院附属医院生殖中心接受IVF（In vitro fertilisation）/ICSI（Intracytoplasmic sperm injection）治疗的男性精液标本120例,按照男方年龄分为3组。〈35岁组（n=42）、35~39岁组（n=40）、≥40（n=38）,同时通过荧光原位杂交技术对以上3组患者通过常规体外受精周期中受精的第3天的废弃胚胎进行胚胎染色体分析,并对以上三组观察男方年龄对IVF的受精率、卵裂率、优质胚胎率、着床率、妊娠率及流产率的影响。结果≥40岁组胚胎染色体完全正常率39.6%（19/48）小于〈35岁组50.0%（31/62）及35~39岁组胚胎染色体完全正常率48.3%（28/58）,差异有统计学意义（P〈0.05）,〈35岁组50.0%（31/62）与35~39岁组胚胎染色体完全正常率48.3%（28/58）差异无统计学意义（P〉0.05）。男方年龄≥40岁组的受精率、卵裂率、优质胚胎率、植入率、妊娠率与男方年龄〈35岁组、35~39岁组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。而男方年龄≥40岁组患者的流产率17.65%（3/17）与男方年龄〈35岁4.34%（1/23）及35~39岁组5.00（1/20）相比明显升高,有统计学差异（P〈0.05）。结论男性年龄对受精率、胚胎质量、植入率、妊娠率、没有明显的相关性。而男性年龄对IVF胚胎染色体以及流产率有一定影响。在生育过程中,男性年龄应引起关注。

特发性不育对精子、胚胎染色体及其辅助生殖结局影响的研究

目的探讨特发性不育对精子、胚胎染色体及其辅助生殖结局影响。方法实验组中132例特发性不育患者患者作为实验组,正常生育组50例男性纳入对照组。同时通过荧光原位杂交技术对以上2组患者精液进行精子非整倍体检测,并对通过常规体外受精周期中受精的第3天的废弃胚胎进行胚胎染色体分析。分析以上两组的受精率、卵裂率、优质胚胎率、着床率、妊娠率及流产率等指标。结果特发性不育患者的DNA精子非整体率(5.75±0.51)%高于正常生育患者组(3.64±0.68)%,差异有统计学意义(P<0.05),特发性不育患者的胚胎染色体完全正常率45.00(36/80)小于正常生育患者组63.95(55/86)差异有统计学意义(P<0.05),特发性不育患者的受精率、卵裂率、优质胚胎率、植入率、妊娠率与正常生育患者组比较,差异有统计学意义(P>0.05)。而男特发性不育患者的流产18.18(2/11)高于正常生育患者组10.53(2/19),有统计学差异(P<0.05)。结论特发性不育患者精子、胚胎染色体非整倍体率增加,且特发性不育对辅助生殖结局也有不良影响。

人精子间期核的双色荧光原位杂交

目的 建立人精子间期核双色荧光原位杂交 (dual colorfluorescenceinsituhybridization ,D FISH)的实验方法。方法 采用双色荧光原位杂交技术对 12例正常精子标本进行间期核的原位杂交 ,并统计精子间期核X、Y染色体的杂交信号颗粒数量。结果 在显微镜下可见精子头部有以Biotin标记的pBamX7探针显示 1个绿色杂交信号为X染色体精子 (X精子 ) ,以Digoxigenin标记的 pY3.4探针显示 1个红色杂交信号为Y染色体精子 (Y精子 ) ;精子头部有 2个荧光杂交信号的精子为染色体数目异常精子 (如XX、XY、YY精子 ) ;间期核背景经DAPI复染显示蓝色 ;统计 12例正常精子标本总共 4 80 0个精子间期核 ,X精子杂交信号阳性率为 4 8.5 6 % ,Y精子杂交信号阳性率为 4 9.73% ,总共统计 2 4 0 0 0个精子 ,3种双体总杂交率为 0 .197%。结论 本法具有荧光杂交信号直观易分辨、短时间内能大量分析精子数量和实验操作相对简便。

人精子荧光原位杂交技术在IVF-ET中的应用及价值

目前，约有15％的育龄夫妇会发生不育，而其中有一半的原因是由男性引起的。众所周知，染色体不正常的男性常会带有二体性精子而生出染色体不正常的胎儿，近十年的研究发现，国内男性精子质量有明显下降，即使是染色体正常的男性，其精子发生非整倍体率也在不断上升，