骨基质非酶糖基化交联对骨细胞力学敏感性的影响

目的微重力下骨细胞力学敏感性下降,机制不明。骨细胞突起比胞体对力学刺激更敏感,通过整合素αVβ_(3)和横向栓系结构(perlecan)与骨小管壁连接,放大突起膜局部应变。微重力下非酶糖基化NEG交联增加致基质胶原变硬,可能损害突起与基质的连接,影响骨细胞对力学刺激的感知。本研究旨在探究NEG交联对骨细胞力学敏感性的影响机制。方法用0.1 M和0.4 M浓度核糖孵育骨切片,在切片上接种骨细胞,分为CON、0.1 M和0.4 M组。HPLC检测NEG产物AGEs含量,纳米压痕检测骨基质力学性能;免疫荧光染色检测突起形态、F-actin、整合素αVβ_(3)和perlecan的表达和分布,q PCR检测突起功能相关蛋白表达,原子力显微镜检测突起弹性模量,显微注射仪给突起施加局部力学刺激检测细胞瞬时钙离子响应。结果与CON相比,0.1 M和0.4 M组骨切片AGEs含量、弹性模量及硬度显著升高。与CON相比,0.1 M组和0.4 M组骨细胞突起形态无显著改变;0.1 M组突起F-actin和整合素αVβ_(3)的荧光强度、Perlecan的基因表达、突起对局部力学刺激钙离子响应均更高;0.4 M组突起F-actin、αVβ_(3)和Perlecan的荧光强度、Perlecan的基因表达、钙响应均被抑制。结论病理水平NEG交联(0.4 M)抑制骨细胞突起力学感知结构基因及蛋白表达,影响骨细胞对力学刺激的感知能力。这有助于理解微重力下骨细胞力学敏感性改变机制。

长双歧杆菌胞外多糖对非酶糖基化的抑制作用

利用人粪便中分离的一株长双歧杆菌ZJ1株胞外多糖提取物(ZJ1-EPS),分别采用丙酮醛(MGO)诱导牛血清白蛋白(BSA)和人皮肤细胞非酶糖基化(AGEs)模型和葡萄糖诱导斑马鱼AGEs模型,探究ZJ1-EPS抑制AGEs的作用和机制。结果表明,ZJ1-EPS对AGEs生成有明显的抑制作用,同时可显著抑制角质细胞和成纤维细胞中丙酮醛(MGO)诱导的MMP-1表达,促进胶原蛋白的表达。研究揭示了双歧杆菌胞外多糖提取物具有抑制AGEs生成的作用,提示其用于皮肤抗衰的作用机制和应用潜力。

22种中药醇提物抑制蛋白质非酶糖基化作用的研究

比较22种中药醇提物和氨基胍对体外蛋白质非酶糖基化反应的影响。分别将上述22种中药各5g,用乙醇提取、浓缩并定容至100ml,取1ml提取液与1ml磷酸缓冲液混合,90℃水浴40min,然后与乙二醛和牛血清白蛋白混合,反应混合液于37℃孵育15d,用荧光法测定糖基化产物的自发荧光值,计算不同中药醇提物对体外蛋白质非酶糖基化反应的抑制率。结果表明,在检测的浓度范围内,抑制率最高的是槐米(抑制率为96．7%),其次为大黄(抑制率为93．79%)和黄芩(抑制率为93．15%),它们都显著高于氨基胍的抑制率(89．56%)。槐米、大黄和黄芩的乙醇提取物可明显抑制体外蛋白质糖基化反应的结果预示它们在防治糖尿病血管并发症方面有应用潜力。

黄芪对早期糖尿病大鼠心肌非酶糖基化及氧化应激反应的影响

目的:研究黄芪(AS)对糖尿病大鼠心肌非酶糖基化反应和氧化应激反应的影响。方法:用链脲佐菌素腹腔注射制备糖尿病大鼠模型。黄芪注射液(10g/kg、8g/kg)ig治疗8周,分别测定各组大鼠体重、心脏质量指数、血糖、糖化血红蛋白、血清LDH、CK含量及心肌组织AGEs、MDA、NO含量及SOD、NOS活性。结果:8周实验终止时,糖尿病大鼠的心脏质量指数、血糖、糖化血红蛋白、血清LDH、CK和心肌AGEs、MDA、NO含量及NOS活性均明显高于正常组,而体重、心肌SOD活性明显低于正常组;黄芪治疗组的心脏质量指数、血糖、糖化血红蛋白、血清LDH、CK和心肌AGEs、MDA、NO含量及NOS活性均明显低于糖尿病组,但高于正常组,而体重、心肌SOD活性明显高于糖尿病组,但低于正常组。黄芪高、低剂量组间在血清LDH水平、心肌SOD活性及NO含量上有明显差异,高剂量组优于低剂量组。结论:黄芪能抑制糖尿病大鼠心肌非酶糖基化和氧化应激反应。

褪黑素对早期糖尿病大鼠心肌非酶糖基化及氧化应激反应的影响

目的:研究褪黑素(Mel)对糖尿病大鼠氧化应激反应和非酶糖基化反应的影响。方法:用链脲佐菌素腹腔注射制备糖尿病大鼠模型。正常大鼠、糖尿病大鼠及用褪黑素治疗8周的糖尿病大鼠各10只,应用荧光法测定心肌组织糖基化终末产物(AGEs)含量,应用比色法测定心肌组织及血清丙二醛(MDA)含量,乳胶免疫聚集抑制法测定糖化血红蛋白(HbA1c)含量,计算心脏质量指数。结果:与正常大鼠比较,糖尿病大鼠各指标升高,而褪黑素组血清MDA以及心肌组织中AGEs、MDA含量和心脏质量指数均较糖尿病组下降。结论:褪黑素能抑制糖尿病大鼠心肌非酶糖基化和氧化应激反应。

猴头菌转化EGB发酵液提取物抗氧化及抑制非酶糖基化活性研究

[目的]研究猴头菌转化EGB发酵液提取物抗氧化及抑制非酶糖基化活性。[方法]以DPPH自由基清除率和还原力两种抗氧化能力及非酶糖基化抑制率为考察指标,比较了猴头菌转化EGB发酵液经AB-8大孔树脂吸附前后,发酵液冻干物、提取物抗氧化及抑制非酶糖基能力的变化。[结果]发酵液经AB-8大孔树脂吸附后可浓缩分离活性物质,吸附后的提取物自由基清除率、还原力、非酶糖基化抑制率均显著提高。提取物中可能含有三萜皂甙类和黄酮类成分。[结论]AB-8树脂可用于猴头菌转化EGB发酵液提取物的初步浓缩。

9种植物粗多糖体外降脂及抑制非酶糖基化活性的研究

对9种植物中的多糖进行提取,并对其体外降脂和抑制蛋白质非酶糖基化的作用进行了测定。分别将9种植物样品经粉碎、脱脂、脱色处理后,用超声辅助70%乙醇浸提得粗多糖。以葡萄糖为标准样品,用紫外分光光度法测其在510 nm处吸光度值并绘制标准曲线,以同样的方法测定样品中多糖的含量。随后进行体外降脂实验,通过比较有无抑制剂(提取液)加入的情况下,脂肪酶的活性差异,所得各提取物的抑制率,比较降脂活性大小;再进行体外非酶糖基化实验,去1 mL提取液(加氨基胍做阳性对照,加水做阴性对照)与1 mL磷酸缓冲液混合,90℃水浴40 min,然后与乙二醛和牛血清白蛋白混合,反应液于37℃孵育15 d,用荧光法在发射波长440 nm激发波长365 nm处测定糖基化产物的自发荧光值,计算9种植物粗提多糖对体外非酶糖基化反应的抑制率。结果表明9种植物多糖粗提物对脂肪酶均有较强的抑制作用,以蛇接骨草的抑制活性最强。在体外非酶糖基化试验中,9种植物对非酶糖基化终产物的生成均有较强的抑制作用,以芦荟粗多糖非酶糖基化抑制活性最强。

葛根对蛋白质非酶糖基化的抑制作用

观察了中药葛根（Ｒａｄｉｘ Ｐｕｅｒａｒｉａｅ） 对人血清白蛋白和大鼠晶状体蛋白的非酶糖基化的抑制作用．结果表明，葛根的乙醇提取物对此两种蛋白质的糖基化均有不同程度的抑制作用．当葛根浓度为０－１ ％ ，０－３ ％ 和０－５ ％ 时，对人血浆白蛋白糖基化的抑制百分率分别是对照的：３３ ，４５ 和６６ ；对于大鼠晶状体蛋白的糖基化抑制百分率分别是对照的：３９ ，５０ 和７４ ．实验结果提示。

乌骨鸡活性肽对体外非酶糖基化的抑制作用

采用正交实验优化了体外非酶糖基化反应体系,体系中加入不同浓度的乌骨鸡活性肽Ⅰ、Ⅱ37℃孵育,同时以肌肽为阳性对照,观察乌骨鸡活性肽对非酶糖基化反应的影响。通过测定预定时间体外非酶糖基化体系的吸光度和荧光值计算乌骨鸡活性肽对非酶糖基化反应的抑制率和对非酶糖基化终产物生成的抑制率。结果表明乌骨鸡活性肽Ⅱ对体外非酶糖基化反应和非酶糖基化终产物的生成均具有较强的抑制作用。

车前子多糖对衰老模型大鼠脑氧化-非酶糖基化影响的实验研究

目的探讨车前子多糖对D-半乳糖致衰大鼠氧化-非酶糖基化作用的影响,明确车前子抗衰老作用及机制。方法选用D-半乳糖衰老模型Wistar大鼠作研究对象,观察不同剂量车前子多糖对衰老模型大鼠总抗氧化能力(T-AOC)、抑制羟自由基能力(AHR)、脑单胺氧化酶B活性(MAO-B)、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSH)比值、羰基化蛋白、醛糖还原酶(AR)和晚期糖基化终末产物特异性受体(RAGE)mRNA表达水平的影响,并与衰老模型组和车前子水煎剂组进行比较。T-AOC、AHR、MAO-B活性、GSH/GSSH、羰基化蛋白含量采用分光光度法,ARmRNA和RAGE mRNA检测采用RT-PCR法。结果衰老模型组羰基化蛋白含量、MAO-B活性较青年组明显增加(P<0.01),而T-AOC、GSH/GSSG比值降低(P<0.01),ARmRNA表达明显低于青年组(P<0.01),而RAGEmRNA表达明显高于青年组(P<0.01)。车前子多糖和车前子水煎剂组各组T-AOC、GSH/GSSG、AHR,ARmRNA表达明显高于衰老模型组(P<0.05,P<0.01),而羰基化蛋白含量、MAO-B和RAGEmRNA表达显著低于衰老模型组(P<0.05,P<0.01)。以车前子多糖大剂量组效果最明显。结论车前子及其多糖可通过提高机体抗氧化能力和清除羰基能力而发挥抗脑老化作用,车前子多糖是其作用的重要成分。

类姜黄素化合物的合成及对蛋白质非酶糖基化抑制活性的研究

通过芳香醛和环己酮及丙酮在乙酸-HC l催化缩合制备了两个系列(A、C)类姜黄素化合物,多酚羟基类姜黄素不需经过羟基保护一步直接缩合制得。对所合成的类姜黄素化合物对牛血清白蛋白非酶糖基化的抑制活性进行了研究,结果表明带酚羟基的类姜黄素均表现出一定的非酶糖基化的抑制活性,四羟基类姜黄素A2及C2表现出极强的非酶糖基化的抑制活性,IC50分别为5.1μmol/L和9.4μmol/L。

葛根素对糖尿病大鼠肾脏非酶糖基化和氧化应激的抑制作用

目的 研究葛根素对糖尿病大鼠氧化应激反应和非酶糖基化的抑制作用。方法 糖尿病大鼠用葛根素治疗后 ,评价葛根素对糖尿病大鼠的非酶糖基化终末期产物、氧化应激及肾脏结构的影响。结果 与对照组比较 ,糖尿病大鼠糖化血清蛋白 (GSP)、糖基化终末期产物—肽链 (AGE P)、肾小球AGEs含量及肾小球截面积明显上升 ,同时丙二醛 (MDA)显著升高 ,而葛根素治疗组可明显降低糖尿病大鼠GSP、AGE P、MDA含量 ,明显降低肾小球内AGE含量及肾小球截面积。

姜黄素类化合物对体外非酶糖基化的抑制作用

比较研究了姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素和姜黄素衍生物a对蛋白质非酶糖基化反应的终末产物(AGEs)的抑制作用,同时测定了它们与牛血清白蛋白的结合作用及其对牛血清白蛋白二级结构的影响。结果表明,4种姜黄素类化合物均有抑制作用,抑制效果依次为姜黄素,双去甲氧基姜黄素,去甲氧基姜黄素和姜黄素衍生物a;姜黄素类化合物与牛血清白蛋白有较强的结合作用并能引起蛋白质结构的变化。

非酶糖基化抑制剂的体外筛选方法

目的:建立非酶糖基化抑制剂(NEGI)的体外筛选模型并筛选NEGI。方法:依据非酶糖基化(NEG)致衰老假说,用酶基糖基化终产物(AGE)多克隆抗体建立体外NEGI筛选模型。采用竞争性AGE-ELISA方法定量测定AGE的含量。结果:从60余种中草药组分、合成化合物中筛选得到了3种NEGI,AG2070为化学合成的化合物,INEG-1和INEG-2都属于中药多糖,在结构上与其他NEGI都不同。这3种抑制剂在体外实验中均显示出明显的抑制AGE形成的能力。结论:NEGI的体外筛选模型是可行的。

槲皮素与葛根素对食品体系中非酶糖基化的抑制作用

通过对果糖胺、二羰基化合物、5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural,5-HMF)和荧光性末端产物的检测,考察槲皮素和葛根素对食品体系非酶糖基化反应的抑制作用。结果表明:槲皮素能促进非酶糖基化早期产物果糖胺和5-HMF的生成,对反应中期的二羰基化合物和非酶糖基化末端产物(advanced glycation end products,AGEs)具有较强的抑制作用;葛根素能促进果糖胺的生成,抑制二羰基化合物的生成,对5-HMF和AGEs无影响。这可能与槲皮素与葛根素的结构差异有关。

冬梅饮对早期糖尿病肾病大鼠肾组织非酶糖基化终产物影响的实验研究

目的:评价中药冬梅饮(DMY)对糖尿病大鼠非酶糖基化终产物(advanced glycation endproducts,AGEs)的影响,探讨中药防治早期糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法:用链尿佐菌素(STZ)建立早期DN模型,观察中药冬梅饮对其血糖、肾标志蛋白尿微量白蛋白(uAlb)和1α-尿微球蛋白(u1α-MG)、肾脏病理和肾皮质AGEs的影响。结果:模型大鼠的血糖、尿微量白蛋白(uAlb)和1α-尿微球蛋白(uα1-MG)、肾皮质AGEs均显著高于正常组(P<0.05或P<0.01);冬梅饮能降低模型组肾皮质AGEs(P<0.01),且冬梅饮尚能明显降低肾标志蛋白(P<0.05,P<0.01),改善模型大鼠的病理改变。结论:冬梅饮可抑制肾皮质中AGEs沉积,阻止DN的进一步发展。

西红花酸对体外蛋白质非酶糖基化的抑制作用

目的研究西红花酸对体外蛋白质非酶糖基化的影响。方法以牛血清白蛋白(BSA)质量浓度、葡萄糖质量浓度及温孵时间为3因素,采用3因素4水平正交设计,通过方差分析寻找体外非酶糖基化的最适反应体系,以此最适体系观察西红花酸对非酶糖基化的影响。结果糖基化蛋白产量与BSA质量浓度、葡萄糖质量浓度、温孵时间呈正相关;方差分析结果提示,5 g/L BSA、4.5 m g/mL葡萄糖及14 d的温孵时间为蛋白质体外非酶糖基化的最佳条件;荧光值测定和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE s)均表明西红花酸对体外蛋白质非酶糖基化具有显著的抑制作用。结论西红花酸对体外蛋白质的非酶糖基化具有明显的抑制作用;这可能是西红花酸具有广泛的心血管药理活性及改善胰岛素抵抗的重要机制之一。

非酶糖基化对α-synuclein分子构象的影响

将纯化后的α-synuclein分别与果糖和葡萄糖孵育,通过内源荧光、非酶糖基化衍生物特征荧光、圆二色光谱以及电子显微镜等技术进行检测发现:α-synuclein与还原糖共同孵育后,308nm内源荧光强度明显降低,同时在447nm产生一个非酶糖基化衍生物特征荧光.与果糖孵育的蛋白质样品其非酶糖基化特征荧光的出现速度快于葡萄糖孵育样品.内源荧光与非酶糖基化特征荧光之间存在能量传递现象,提示Tyr残基与非酶糖基化特征荧光发色团在空间距离上彼此接近.圆二色光谱测定结果显示,α-synuclein与果糖孵育后,其α-螺旋含量增加.非酶糖基化的α-synuclein在电子显微镜下表现为短纤维状.非酶糖基化可以诱导α-synuclein蛋白分子聚集,且果糖较葡萄糖更容易使α-synuclein发生非酶糖基化.以上结果提示,非酶糖基化似乎可以导致α-synuclein在细胞内的错误折叠和分子聚集.