鞣花酸抑制酪氨酸酶的动力学、荧光光谱分析及分子对接

以蘑菇酪氨酸酶为靶点,采用抑制动力学、荧光光谱分析结合分子对接模拟技术,系统研究鞣花酸(ellagic acid,EA)对酪氨酸酶的抑制作用及机理。体外研究与动力学结果表明,EA以可逆的混合型抑制方式显著抑制酪氨酸酶活性(IC_(50)=0.05mg/mL),其结合常数K_(I)<K_(IS),表明EA与游离酶的结合比与酶-底物复合物的结合更紧密。荧光光谱猝灭分析表明,EA与酪氨酸酶存在静态猝灭作用,两者通过自发的吸热过程结合生成复合物,主要作用力为疏水作用力,只有1个或1类结合位点。同步和三维荧光光谱分析表明,EA使酪氨酸酶的微环境极性增大,疏水能力减弱,酪氨酸酶的Trp残基更靠近结合位点。分子对接模拟分析进一步印证上述实验结果,形象地表明EA对酪氨酸酶为混合型抑制,EA主要通过疏水作用力和氢键与游离酶或酶-底物复合物进行结合,最终导致酶活性降低。本研究对EA在食品工业中作为保鲜剂的各种应用具有一定参考意义。

母马补喂鞣花酸对哺乳马驹生长发育和血液生化指标的影响

试验旨在探究给泌乳期伊犁马补喂不同剂量的鞣花酸对哺乳期马驹体重、体尺、血液生化指标的影响,为进一步研究哺乳期马驹健康生长发育提供参考依据。选取5月份产驹、9~11岁、5~6胎、泌乳30 d且日均8h挤奶量(2.61±0.47)kg的18匹带驹伊犁马泌乳母马,将18匹马驹按照公母各半随机分为3组(母马分组与马驹保持一致),每组6匹(3公3母)。在相同放牧、饮水和挤奶条件下,对照组母马不补喂任何添加剂,试验组母马每天每匹补喂鞣花酸15、30 mg/kg BW(15 mg/kg鞣花酸组、30 mg/kg鞣花酸组),试验期为90 d,每30 d测量1次马驹体重及体尺,并采集血液样品,测定相关指标。结果显示:15 mg/kg鞣花酸组马驹体高、胸围和体长总增长量分别比对照组提高了2.96%(P>0.05)、33.66%和21.22%(P<0.01);30 mg/kg鞣花酸组马驹体高、胸围、体长总增长量分别比对照组提高了2.67%(P>0.05)、26.79%(P<0.01)、17.28%(P<0.05);试验60 d时,30 mg/kg鞣花酸组尿酸含量比15 mg/kg鞣花酸组高57.71%(P<0.05);15 mg/kg鞣花酸组马驹尿素分别比对照组和30 mg/kg鞣花酸组低17.70%和19.37%(P<0.05);15 mg/kg鞣花酸组马驹碱性磷酸酶比对照组高25.68%(P<0.05);15 mg/kg鞣花酸组马驹乳酸脱氢酶比30 mg/kg鞣花酸组高19.71%(P<0.05);试验90 d时,15 mg/kg鞣花酸组尿素分别比对照组和30 mg/kg鞣花酸组马驹低19.18%和20.07%(P<0.05);30 mg/kg鞣花酸组马驹葡萄糖含量比对照组高15.41%(P<0.05);15 mg/kg鞣花酸组碱性磷酸酶含量分别比对照组和30 mg/kg鞣花酸组高39.91%(P<0.01)和20.05%(P<0.05);15 mg/kg鞣花酸组乳酸脱氢酶分别比对照组和30 mg/kg鞣花酸组马驹高19.59%(P<0.05)和26.79%(P<0.01)。在本试验条件下,给泌乳母马补喂15 mg/kg BW鞣花酸可显著提高马驹胸围、体长的总增长量,降低马驹血液尿素,增加血液碱性磷酸酶和乳酸脱氢酶含量;给泌乳母马补喂30 mg/kg BW鞣花酸可显著提高马驹胸围、体长的总增长量,提高血糖水平,且给泌乳母马补喂15 mg/kg BW鞣花酸效果较好。

鞣花酸的生物学功能及其在动物生产中的应用

鞣花酸是一种多酚二内酯类化合物,具有抗炎、抗氧化及抗生物等多种生物学功能。补充鞣花酸能够提高动物生产性能、改善肉品质及提高动物的抗病能力,在畜牧养殖业具有较好的应用前景。本文归纳总结了鞣花酸的抗氧化、抗炎和抗微生物等生物学功能,以期能更好地将其应用于动物生产。

鞣花酸对大口黑鲈生长与肠道健康的影响

本试验旨在探究鞣花酸对大口黑鲈生长与肠道健康的影响。选取初始体重为(59.17±0.06)g的大口黑鲈450尾,随机分成5个组,每组3个重复,每个重复30尾。各组分别投喂鞣花酸添加水平为0(对照组)、0.01%(EA1组)、0.02%(EA2组)、0.03%(EA3组)、0.04%(EA4组)的5种等氮等脂试验饲料。试验期为56 d。结果表明:1)EA4组的终末体重、增重率和特定生长率显著高于对照组(P<0.05)。各组之间肝体比、肥满度、饲料系数、摄食率和存活率无显著差异(P>0.05)。2)各组之间全鱼水分、粗灰分、粗蛋白质、粗脂肪含量及肝脏粗脂肪含量无显著差异(P>0.05)。3)各组之间血清补体3、补体4含量和酸性磷酸酶、溶菌酶活性无显著差异(P>0.05)。EA4组的血清碱性磷酸酶活性显著高于对照组(P<0.05)。4)各组之间肠道胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性无显著差异(P>0.05)。5)与对照组相比,试验组的肠道绒毛高度、绒毛宽度和绒毛数量均有所增长,且排列更为紧密。6)与对照组相比,EA1、EA2和EA4组的肠道梭杆菌门相对丰度显著升高(P<0.05),EA2和EA4组的肠道支原体属相对丰度显著降低(P<0.05),EA1、EA2和EA4组的肠道鲸杆菌属相对丰度显著升高(P<0.05)。综上所述,饲料中添加鞣花酸可有效提高大口黑鲈的生长性能,改善肠道组织结构,在降低有害菌相对丰度的同时提高有益菌相对丰度,保护肠道健康。以增重率和特定生长率为评价依据,大口黑鲈饲料中鞣花酸的适宜添加水平为0.04%。

鞣花酸对下石节长焰煤氧化自燃的阻化影响研究

为考察鞣花酸(EA)对煤氧化自燃过程的影响,首先将EA与陕西铜川下石节煤矿的长焰煤以2%、4%、6%、8%和10%的质量比均匀混合进行试验;然后采用显微红外光谱试验和激光导热试验研究各个样品的活性官能团含量情况和热输运特性,通过评价煤氧化自燃抑制效果,确定最优质量比为8%;最后利用煤自燃程序升温试验对比4种阻化剂对煤氧化自燃气体释放的影响情况,进一步确定EA对煤氧化自燃的阻化程度。结果表明:EA处理煤(EA-tc)中-CH_(3)、-CH_(2)、-OH和-C=O-的峰面积相较于原煤(RC)均减少,但C-O的峰面积增加;在相同煤温下,RC的热扩散系数和导热系数高于EA-tc,其比热容低于EA-tc,且8%EA对RC低温氧化过程的热扩散系数、比热容和导热系数的平均抑制率分别为20.8%、9.8%和13.1%;相比于RC,8%EA-tc的CO释放量在170℃时降低52.3%,且EA对煤氧化自燃的阻化率在30~170℃内保持在50.5%~72.5%,说明EA对煤氧化自燃的阻化效果比其他3种阻化剂更好。

不同浓度鞣花酸对猪精液常温保存效果的影响

【目的】研究鞣花酸(ellagic acid,EA)对公猪精液常温保存过程中精子质量及抗氧化性能的影响,以期为鞣花酸在精液保存中的推广应用提供理论依据。【方法】试验采集4头2~3岁健康的成年杜洛克公猪精液,将合格精液分为5份,用添加不同浓度EA(0(对照)、5、10、15、20μg/mL)的BTS(Beltsville thawing solution)常温保存稀释液分别稀释,在保存的第1、3、5、7天检测精子活率、平均路径速度、侧摆幅度、鞭打频率、质膜完整率、顶体完整率及抗氧化能力等指标。【结果】精液保存第1天,15μg/mL EA组精子质膜完整率显著高于对照组(P<0.05),其他指标各试验组与对照组均无显著性差异(P>0.05)。精液保存第3天,10、15μg/mL EA组精子平均路径速度、过氧化氢酶(CAT)活性、总抗氧化能力(T-AOC)显著高于对照组(P<0.05)。精液保存第5天,15、20μg/mL EA组精子侧摆幅度显著低于对照组及5、10μg/mL EA组(P<0.05),5、10、15μg/mL EA组精子活率显著高于对照组(P<0.05),10、15、20μg/mL EA组精液中CAT、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及T-AOC显著高于对照组(P<0.05)。精液保存第7天,各试验组精子活率、平均路径速度、质膜完整率、顶体完整率、CAT活性、T-AOC均显著高于对照组(P<0.05)。【结论】添加EA于BTS稀释液中,对常温保存的精液具有良好的保护作用,其中10μg/mL EA效果最好。

云南野生余甘子鞣花酸和漆黄素的减肥降脂作用

余甘子(Phyllanthus emblica,PE)是近年广受关注的药食两用水果,但关于其减肥降脂功效及具体作用成分鲜有报道。该研究提取了云南野生PE富含的黄酮多酚物质(Phyllanthus Emblica Extract,PEE),发现其在小鼠前脂肪细胞(3T3-L1)模型中,能够显著抑制3T3-L1细胞分化至成熟脂肪细胞,减少脂滴生成量,300μg/mL作用时,细胞总甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Total Cholesterol,TC)相对含量分别降低至66.47%、40.87%,这表明,云南野生PE中的PEE具有减肥降脂潜力。通过HPLC分析测得,云南野生PE中含有3030.78μg/g鞣花酸,560.70μg/g漆黄素。将鞣花酸和漆黄素以5:1的比例还原搭配成混合物(Ellagic Acid and Fisetin,EF),研究其对高脂饮食(High Fat Diet,HFD)小鼠模型的影响。结果显示,EF能够抑制HFD小鼠的体质量和白色脂肪增长,高剂量干预时,血清TG、TC、LDL-C含量分别降低了45.48%、12.06%、37.54%,HDL-C水平提高了18.75%;HFD小鼠的肝脏指数、血清中ALT和AST分别降低了7.80%、21.59%、41.64%。EF具有减肥降脂功效,且对肝脏具有一定的修复作用,是云南野生PE减肥降脂作用的重要成分。

补喂鞣花酸对哺乳期湖羊羔羊生长发育及血液生化指标的影响

为研究哺乳期湖羊羔羊补喂鞣花酸对其生长发育及血液生化指标的影响,试验选择出生(10±3)d、平均体重(5.41±1.71)kg的哺乳羔羊18只,随机分为3组,每组6只,分别为对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组。在相同的饲养管理条件下,对照组不做任何处理,试验Ⅰ组每天补喂15 mg/kg BW鞣花酸,试验Ⅱ组每天补喂30 mg/kg BW鞣花酸,进行45 d的饲养试验。结果显示:(1)试验Ⅰ组和试验Ⅱ组哺乳羔羊总增重和平均日增重均高于对照组,分别提高了15.03%、14.99%、3.79%和3.74%。(2)血清总蛋白,试验Ⅰ组比对照组和试验Ⅱ组提高了5.19%和22.01%;白蛋白,试验Ⅰ组比对照组和试验Ⅱ组提高了17.54%和13.74%;血清总胆固醇,试验Ⅰ组比对照组和试验Ⅱ组提高了17.61%和9.52%。(3)各组酶活力无显著差异,但谷丙转氨酶比谷草转氨酶,试验Ⅰ组比对照组和试验Ⅱ组提高了51.20%和55.10%。(4)哺乳羔羊血浆中钙、磷、镁离子浓度和血清直接胆红素各组之间无显著性差异。但试验Ⅰ组羔羊血浆中总胆红素显著高于对照组,比对照组提高了56.28%。综上所述,在本试验条件下,羔羊日粮中添加15 mg/kg BW鞣花酸可提高其总增重、平均日增重,血浆氮、糖脂和矿物质离子浓度代谢。羔羊日粮中添加30 mg/kg BW鞣花酸可提高血浆酶活力。综合分析,给哺乳期羔羊补喂15 mg/kg BW鞣花酸效果较好。

鞣花酸对大肠杆菌感染肉鸡生长性能和抗氧化功能的影响

本试验旨在研究鞣花酸(EA)对大肠杆菌感染肉鸡生长性能和抗氧化功能的影响。实验选用216只1日龄遗传背景相同、体重均一、健康的罗斯308肉雏鸡,按照单因素试验设计,随机分为对照组、E.coil K88组和E.coil K88+EA组3个处理组,每组6个重复,每个重复有12羽(公母各半)。对照组和E.coil K88组肉鸡饲喂基础饲粮,E.coil K88+EA组肉鸡饲喂含200 mg/kg EA的基础饲粮。E.coil K88组和E.coil K88+EA组肉鸡在第10日龄口腔灌服1mL E.coil K88菌悬液,对照组灌服1 mL无菌LB培养基。试验期42 d。结果显示:①与对照组相比,E.coil K88感染有降低1~42日龄肉鸡平均日采食量(ADFI,P=0.05)和平均日增重(ADG,P=0.054)的趋势,同时提高了42日龄肉鸡胸腺器官指数、21日龄肉鸡血清谷草转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)活性、尿酸(UA)和过氧化氢(H_(2)O_(2))含量(P<0.05),提高42日龄肉鸡空肠髓过氧化物酶(MPO)活性以及十二指肠IL-17、空肠和回肠IL-8的mRNA水平(P<0.05);E.coil K88感染降低了21日龄肉鸡十二指肠和空肠过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性(P<0.05),也降低了42日龄肉鸡十二指肠CAT活性及空肠CAT、GSH-Px活性(P<0.05)。②与感染组相比,饲粮中添加EA提高了21日龄肉鸡血浆GSH-Px活性、十二指肠的CAT、GSH-Px活性、回肠GSH-Px活性,42日龄肉鸡十二指肠CAT、T-SOD、GSH-Px活性及空肠CAT、GSH-Px活性(P<0.05),还降低了21日龄肉鸡血清ALP活性以及十二指肠丙二醛(MDA)含量和一氧化氮合成酶(i-NOS)活性(P<0.05)。与感染组相比,日粮中添加EA下调了42日龄血清UA含量和MPO活性、十二指肠MPO活性、空肠MPO含量与i-NOS活性、十二指肠IL-17、空肠IL-8以及回肠IL-17、IL-8的转录水平(P<0.05)。由以上可知,日粮中添加200 mg/kg鞣花酸可改善大肠杆菌感染肉鸡生长性能和血液生化指标,增强其抗氧化和免疫功能。

鞣花酸对猪流行性腹泻病毒感染仔猪生长性能、血液生化指标和抗氧化功能的影响

本试验旨在探究鞣花酸(EA)对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染仔猪生长性能、血浆生化指标和血清抗氧化功能的影响。选取30头健康的7日龄三元杂交(杜×长×大)哺乳仔猪,按体重相近原则随机分为对照组、PEDV组和PEDV+EA组,每组10个重复,每个重复1头猪。所有处理组仔猪每天正常饲喂液体代乳粉,为期11 d。试验前3 d为仔猪适应期,第4~10天(除第8天)给PEDV+EA组仔猪灌服以液体代乳粉为溶剂的EA,灌服剂量为20 mg/kg BW,其他处理组灌服等体积的液体代乳粉;第8天给PEDV组和PEDV+EA组仔猪灌服1mL 1×10^(6)TCID_(50)的PEDV病毒液;在第11天早上进行前腔静脉采血,随后屠宰取样。结果显示:与对照组相比,PEDV感染降低了仔猪平均日增重(ADG)(P<0.05),提高了仔猪腹泻腹泻指数(P<0.05),此外还提高了仔猪血浆尿素氮水平(P<0.05),降低了碱性磷酸酶活性、无机磷、高密度脂蛋白水平以及血清过氧化氢酶和超氧化物歧化酶(SOD)活性(P<0.05)。与PEDV组相比,灌服EA提高了仔猪血浆总蛋白水平和血清SOD活性(P<0.05),降低了血浆总胆红素水平(P<0.05),但对仔猪ADG和腹泻指数无显著影响。以上结果表明,EA对PEDV感染仔猪的蛋白合成代谢具有一定改善作用,并在一定程度上缓解了PEDV感染导致的仔猪氧化应激,同时具有保护肝脏的作用。

塔拉单宁液气射流氧化法制备鞣花酸

为解决五倍子原料稀缺的问题,以塔拉粉为原料,采用液气射流技术对塔拉单宁溶液进行氧化制备鞣花酸,探究鞣花酸的纯化方案,确定一条比较理想的工艺技术。通过高效液相色谱仪、紫外可见分光光度计、傅里叶变换红外光谱仪、同步热分析仪检测分析得到的样品。结果表明,以塔拉粉为原料制备鞣花酸的较优工艺条件为:采用水提法提取得到塔拉单宁溶液,塔拉单宁浓度为30 g·L^(-1),用12%NaOH溶液调节反应液的pH值至8.5,反应温度30℃,反应时间6 h,所得到的固相经碱溶酸沉后其鞣花酸的收率为44.58%,质量分数为88.69%,选用溶剂洗涤法对碱溶酸沉后鞣花酸样品进行再纯化,此时得到鞣花酸的收率为61.70%,质量分数为94.69%。此制备方法大幅度缩短了制备的反应时间且质量分数较高。

添加不同水平鞣花酸对哈萨克羊生长性能、血液生化指标及抗氧化能力的影响

【目的】试验旨在探究添加不同水平鞣花酸对哈萨克羊生长性能、血液生化指标及抗氧化能力的影响,为鞣花酸在反刍动物中的应用提供参考依据。【方法】选取体重(25.58±2.85)kg、体况一致且健康的3月龄哈萨克羊公羊20只,随机分为4组,每组5只,各组鞣花酸添加水平分别为0、15、30、45 mg/kg BW,分别为对照组、15 EA组、30 EA组和45 EA组。预饲5 d后开展为期60 d的饲养试验,每30 d空腹称重1次并于第60天晨饲前采集血液样品,测定生长激素、胰岛素样生长因子-Ⅰ、三碘甲状腺原氨酸、甲状腺激素、葡萄糖、总蛋白、白蛋白、球蛋白、尿素氮、甘油三酯、总胆固醇、总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶和丙二醛等指标。【结果】(1)各组试验羊的初始体重、终末体重、采食量、日增重和料重比在整个试验期内均无显著差异(P>0.05)。(2)各组羊血浆生长激素、胰岛素样生长因子、三碘甲状腺原氨酸和甲状腺激素含量均无显著差异(P>0.05)。(3)30 EA和45 EA组试验羊血浆中总蛋白含量比对照组提高了11.28%和10.46%(P<0.05),且随着鞣花酸添加水平的增加呈线性增加(P<0.05);3个试验组试验羊血浆中白蛋白含量与对照组相比,分别提高了17.47%、25.38%和24.85%(P<0.05),且随着鞣花酸添加水平的增加呈线性增加(P<0.05);各组羊血浆中葡萄糖、球蛋白、尿素氮和总胆固醇含量无显著差异(P>0.05),30 EA组血浆中甘油三酯含量显著高于对照组(P<0.05)。(4)与对照组相比,3个试验组羊血浆总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶活性均随着鞣花酸添加水平的增加而呈线性增加(P<0.05),且30 EA和45 EA组血浆总抗氧化能力提高了10.24%和11.02%(P<0.05),3个试验组血浆谷胱甘肽过氧化物酶活性分别提高了29.49%、55.78%和52.36%(P<0.05)。【结论】添加不同水平鞣花酸对哈萨克羊的采食量、日增重以及血浆中生长激素和胰岛素样生长因子含量均无显著影响,但能在一定程度上影响脂肪和蛋白质的代谢并显著提高机体的抗氧化能力,其适宜的添加水平为30 mg/kg BW。

鞣花酸余辉气凝胶制备及光物理性质研究

以鞣花酸(EA)为发色团,将其掺杂在海藻酸钠(SA)中,经过与Zn2+、Ca2+等二价金属离子交联凝胶化,凝胶经过冷冻干燥得到绿色余辉气凝胶(EA@SA)。对EA@SA气凝胶进行光物理性能分析,结果显示,使用不同的二价金属阳离子交联的气凝胶均有良好的磷光发射,EA@SA-Zn、EA@SA-Ca、EA@SA-Sr、EA@SA-Ba气凝胶磷光寿命分别为275.71,157.59,123.92和144.56 ms,其中EA@SA-Zn气凝胶的磷光寿命最长。测试的荧光光谱及荧光寿命表明,EA@SA-Zn气凝胶的荧光发射以430 nm为发射中心,荧光寿命达到5.87 ns。SEM测试结果表明,制备的EA@SA-Zn气凝胶内部呈现网状多孔结构并且结构较为疏松,丰富的孔隙结构为EA分子提供良好的基质环境。同时,EA@SA-Zn气凝胶的元素映射图显示其表面均匀分布C、O、Zn、Cl 4种元素,这说明Zn2+与海藻酸钠交联充分,从而成功制备EA@SA-Zn气凝胶。将制备的EA@SA-Zn气凝胶放置在不同湿度环境下,随着相对湿度的增加,磷光寿命有所降低,干燥之后磷光寿命得到恢复;并且EA@SA-Zn气凝胶在乙腈(ACN)、乙醇(EtOH)、四氢呋喃(THF)、二氯甲烷(DCM)有机溶剂中均表现出良好的磷光发射,磷光寿命分别为254.76,260.14,266.64和268.67 ms。制备的EA@SA-Zn气凝胶在30 d后仍能观察到绿色余辉发射,具有磷光稳定性。最后,制备负载EA@SA-Zn气凝胶的余辉线,将其应用在刺绣和防伪领域,拓展了天然多酚制备余辉材料的策略及应用领域。

补喂鞣花酸对泌乳期母马血液生化指标的影响

文章探究补喂鞣花酸对放牧条件下泌乳期伊犁马血液生化指标的影响,为鞣花酸作为饲料添加剂调节泌乳期家畜的健康提供研究基础。将18匹泌乳期伊犁马母马随机分为3组,每组6匹,分别为对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组。在相同的饲养管理条件下,对照组母马不进行任何添加剂处理,试验Ⅰ组母马每天每匹补喂有效含量15 mg/kg体质量的鞣花酸,试验Ⅱ组母马每天每匹补喂有效含量30 mg/kg体质量的鞣花酸,试验期为90 d,定期采集马匹血液样品,测定相关指标。结果表明,试验Ⅰ组母马血液葡萄糖和直接胆红素水平均极显著低于对照组(P<0.01);试验Ⅱ组血液甘油三酯水平极显著高于试验Ⅰ组(P<0.01)。试验Ⅱ组母马血液天门冬氨酸氨基转移酶和肌酸激酶均显著低于对照组(P<0.05);试验Ⅱ组母马血液碱性磷酸酶极显著低于对照组和试验Ⅰ组(P<0.01);试验Ⅰ组γ-谷氨酰转移酶极显著高于对照组和试验Ⅱ组(P<0.01);试验Ⅱ组母马血液乳酸脱氢酶水平极显著低于对照组和试验Ⅰ组(P<0.01)。试验Ⅰ组母马血液铁极显著高于对照组(P<0.01)。因此,在本试验条件下,泌乳期伊犁马每天补喂有效含量15 mg/kg体质量的鞣花酸可显著降低血糖、甘油三酯和直接胆红素水平,提高γ-谷氨酰转移酶和铁的含量;每天补喂有效含量30 mg/kg体质量的鞣花酸可以降低母马血液天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、肌酸激酶和乳酸脱氢酶活性。

日粮中添加鞣花酸对乳鸽生长发育和屠宰性能的影响

为研究日粮添加鞣花酸对乳鸽生长性能及屠宰性能的影响,试验选取遗传背景相同的24月龄欧洲肉鸽亲鸽120羽和同一天出壳、体况良好的0日龄乳鸽180羽,将120羽亲鸽和180羽乳鸽随机分为对照组、试验Ⅰ、Ⅱ组和试验Ⅲ组,采用“2+3”的孵育模式每组3个重复,每个重复15羽乳鸽。对照组饲喂未添加鞣花酸的基础日粮,3个试验组分别在基础日粮中添加1%、3%、6%的鞣花酸,试验期28 d。试验期间分别于乳鸽0、7、14、21、28日龄时称量体重。试验结束当天每组选择5笼鸽子进行屠宰试验,取内脏器官并计算脏器指数。结果表明:(1)乳鸽7日龄体重,试验Ⅰ、Ⅱ组和Ⅲ组均高于对照组,分别提高了8.17%、10.45%和7.68%(P>0.05)。乳鸽21日龄体重,试验Ⅱ组和试验Ⅲ组均高于对照组,分别提高了1.52%和2.24%(P>0.05)。乳鸽28日龄体重、总增重及平均日增重,试验Ⅲ组均高于对照组,分别提高了2.48%、2.6%和2.5%(P>0.05);(2)屠宰率,对照组及各试验组差异均不显著(P>0.05)。半净膛率,试验Ⅱ组显著高于试验Ⅰ组,提高了11.90%(P<0.05)。全净膛率,试验Ⅱ组显著高于试验Ⅰ组,提高了12.57%(P<0.05)。胸肌率,试验Ⅱ组和试验Ⅲ组均显著高于对照组,分别提高了40.88%和31.32%(P<0.05)。腿肌率,试验Ⅱ组显著高于试验Ⅰ组,提高了15.96%(P<0.05);(3)心脏指数,试验Ⅰ、Ⅱ组和Ⅲ组均高于对照组,提高了18%、8%和13%(P>0.05)。肝脏指数,试验Ⅰ组和试验Ⅲ组高于对照组,分别提高了36.13%(P<0.05)和7.98%(P>0.05)。脾脏指数,试验Ⅰ组显著高于对照组,提高了85.71%(P<0.05)。综上所述,在本试验条件下,日粮中添加鞣花酸能够促进乳鸽的生长发育,改善乳鸽脏器发育,提高乳鸽屠宰性能。

鞣花酸通过TLR4-SRC/MAPK/NF-κB途径抑制脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞的炎症反应

目的基于Toll样受体4(TLR4)-酪氨酸激酶(SRC)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核转录因子-κB(NF-κB)通路探讨鞣花酸的抗炎机制。方法采用不同浓度(0、0.5、5、25、50、75、100μmol·L^(-1))鞣花酸对RAW264.7巨噬细胞[或脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞]干预24 h,噻唑蓝(MTT)法检测RAW264.7巨噬细胞存活率,筛选最适给药浓度。实验分为空白对照组,模型组(0.5 mg·L^(-1)LPS),阳性对照地塞米松组(10μmol·L^(-1)),鞣花酸(5、25、50μmol·L^(-1))给药组。Griess法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量;采用ELISA法检测细胞上清液中前列腺素-2(PGE2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平;采用Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)蛋白以及TLR4-SRC/MAPK/NF-κB通路相关蛋白的表达水平。结果MTT结果筛选出鞣花酸的干预浓度为5~50μmol·L^(-1)。与空白对照组比较,模型组PGE_(2)、NO和炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α表达显著升高(P<0.01);炎症标志物iNOS、COX-2蛋白表达水平显著升高(P<0.01),说明炎症模型建立成功。与模型组比较,鞣花酸能显著抑制LPS诱导NO、PGE_(2)的产生和降低TNF-α、IL-1β、IL-6水平(P<0.05,P<0.01),降低i NOS、COX-2蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),且呈浓度依赖性;显著抑制TLR4蛋白的表达水平以及SRC、P38、JNK、p65、IκBα蛋白的磷酸化水平,并呈浓度依赖性。但对ERK1/2蛋白磷酸化没有显示出明显的抑制作用。结论鞣花酸可能通过TLR4-SRC/MAPK/NF-κB信号通路的调控抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞的炎症反应,具体的调控机制有待进一步研究。

鞣花酸对胃癌细胞生长及迁移的作用研究

目的:探讨鞣花酸对胃癌细胞BGC823的生长及迁移能力的影响。方法:体外培养BGC823细胞,采用MTT法检测细胞活力;采用相差显微镜观察细胞形态;采用细胞划痕实验观察细胞的迁移能力。结果:鞣花酸可显著降低BGC823细胞活力;经鞣花酸干预后,细胞皱缩,细胞碎片增加;鞣花酸可降低BGC823细胞的迁移能力。结论:鞣花酸对BGC823细胞具有明显的抑制生长及迁移的作用。

桉树林区水库致黑物鞣花酸对人源细胞的毒理效应研究

我国南方桉树林种植区里面的水库在秋冬季存在明显的天然致黑物质,主要为单宁酸、鞣花酸等多羟基酚类化合物及其铁盐络合物,中小型水库承担了农村生活饮用水源的功能,因此有必要评估天然致黑物质的毒性潜在风险。本文模拟南方桉树林区水库水体特有的天然致黑物,以不同浓度的鞣花酸(Ellagic acid,EA)和三价铁(Fe3+)为研究对象,评价暴露于EA和/或Fe3+对人源结直肠腺癌上皮细胞(DLD1)、肝细胞(LO2)和肾上皮细胞(293T)的一般细胞毒性、细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)水平和细胞形态变化,并确定不同质量浓度的EA和Fe3+的毒性作用特征。结果提示EA和Fe3+在单独暴露和联合暴露条件下表现出不同程度的细胞毒性。联合暴露时,DLD1在较高质量浓度的EA(1 mg/L,10 mg/L)联合1μmol/L Fe3+处理组中细胞活力显著下降,比EA单独暴露时毒性更强。而LO2和293T在联合暴露组中细胞活力均未产生明显变化,但与Fe3+单独暴露相比联合暴露后细胞活力显著下降。氧化应激检测结果发现,与DMSO对照组相比,EA和/或Fe3+暴露均显著增加了ROS水平。其中,DLD1和LO2的ROS结果可能提示EA与Fe3+共同暴露比EA单独暴露时对细胞内ROS生成的影响更大,提高了氧化应激水平。此外,暴露于EA和/或Fe3+对3种细胞的细胞形态没有发现明显变化,但显著抑制了LO2中肌动蛋白F-actin的表达。结果表明,EA和Fe3+的单独或联合暴露对人源细胞具有较强的毒害作用,按影响程度从大到小排序,依次为:肝细胞LO2>肠道细胞DLD1>肾细胞293T。本文为南方农村水源地污染物的精准管控提供了基础依据。

基于分子动力学模拟探究鞣花酸靶向轮状病毒非结构蛋白的作用机制

从分子水平探究鞣花酸(Ellagic acid,EA)与轮状病毒(Rotavirus,RV)非结构蛋白(Non-structural protein,NSP)作用模式,评价EA作为抗RV药物的潜在价值。以轮状病毒非结构蛋白的晶体结构为基础,借助分子对接(柔性对接的XP模式)的手段分别构建了NSP1-EA、NSP2-EA、NSP3-EA、NSP4-EA、NSP5-EA和NSP6-EA的复合物结构模型,并进行分子力学-广义Born表面积(Molecular mechanics-Generalized born surface area,MMGBSA)分析,最后开展分子动力学模拟的研究。综合分析XP对接得分与MM-GBSA分析结果,EA与NSP6和NSP5的对接表现最好,XP对接得分分别为-7.005和-6.387,MM-GBSA结果分别为-51.62和-43.66 kcal/mol,表明EA与NSP6和NSP5结合稳定。其次EA与NSP4的MM-GBSA结果为-30.44 kcal/mol,表明EA与NSP4结合较稳定。而EA与NSP1、NSP2和NSP3蛋白的对接得分和结合自由能均较高,表明EA与这三个蛋白的结合均不稳定。分子动力学模拟结果显示,EA与NSP4蛋白的结合起到重要作用的氨基酸主要有GLU96、ARG137和ALA138,其相互作用主要为氢键、疏水作用和水桥。EA与NSP5蛋白的结合起到重要作用的氨基酸主要有GLY51、PHE53、ILE85、LEU87和GLU109,其相互作用主要为水桥、氢键和疏水作用。EA与NSP6蛋白的结合起到重要作用的氨基酸主要有THR30、ASN74、ASP106和TYR114,其相互作用主要为水桥、氢键和疏水作用。EA可以通过水桥、氢键和疏水作用与轮状病毒非结构蛋白NSP4、NSP5和NSP6蛋白的特定氨基酸残基结合,是潜在的抗RV的天然化合物。

鞣花酸对饲喂黄曲霉毒素小鼠生长性能、抗氧化功能及肠道屏障功能的影响

[目的]探究鞣花酸对饲喂黄曲霉毒素小鼠生长性能、抗氧化功能及肠道屏障功能的影响。[方法]将30只体重为18~22 g的雌性昆明系小鼠随机分为对照组、黄曲霉毒素组和鞣花酸组,每组10只;对照组小鼠饲喂基础日粮,黄曲霉毒素组小鼠饲喂添加250μg/kg黄曲霉毒素的基础日粮,鞣花酸组小鼠饲喂添加250μg/kg黄曲霉毒素和100 mg/kg鞣花酸的基础日粮,试验期为35 d;称量并记录小鼠的试验初体重和试验末体重,计算试验期间增重;试验结束后采用眼球摘除法采集小鼠血液样本,应用ELISA方法检测小鼠血清抗氧化指标总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量以及肠道屏障功能指标二胺氧化酶(DAO)活性和D-乳酸含量;采集小鼠空肠组织样本,制备石蜡切片,HE染色观察空肠黏膜形态结构、肠绒毛高度及隐窝深度,计算绒隐比。[结果]黄曲霉毒素组小鼠试验末体重、增重均极显著(P<0.01)低于对照组;鞣花酸组小鼠试验末体重与黄曲霉毒素组相比差异不显著(P>0.05),但增重极显著(P<0.01)高于黄曲霉毒素组。黄曲霉毒素组小鼠的血清T-AOC和T-SOD活性与对照组相比分别显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)降低;鞣花酸组小鼠的血清T-AOC与黄曲霉毒素组相比差异不显著(P>0.05),但血清T-SOD活性与黄曲霉毒素组相比极显著(P<0.01)升高;黄曲霉毒素组小鼠的血清MDA含量极显著(P<0.01)高于对照组,鞣花酸组小鼠的MDA含量极显著(P<0.01)低于黄曲霉毒素组;黄曲霉毒素组小鼠的血清DAO活性及D-乳酸含量极显著(P<0.01)高于对照组,鞣花酸组小鼠的血清DAO活性显著(P<0.05)低于黄曲霉毒素组,血清D-乳酸含量与黄曲霉毒素组相比差异不显著(P>0.05)。对照组小鼠空肠绒毛和隐窝形态整齐,未见异常变化;黄曲霉毒素组小鼠的空肠组织病理损伤严重,肠绒毛排列不整齐、不紧密、间隙变大,并且有断裂现象,肠隐窝的排列也不整齐;黄曲霉毒素组小鼠的空肠绒毛高度和绒隐比与对照组相比极显著(P<0.01)降低,而肠隐窝深度与对照组相比差异不显著(P>0.05);鞣花酸组小鼠的空肠组织病理损伤程度与黄曲霉毒素组相比有所减轻,空肠黏膜形态基本正常,肠绒毛断裂有所改善,肠隐窝排列较为整齐;鞣花酸组小鼠的肠绒毛高度和绒隐比极显著(P<0.01)高于黄曲霉毒素组,肠隐窝深度与黄曲霉毒素组相比差异不显著(P>0.05)。[结论]鞣花酸能通过抑制体重下降、改善血清抗氧化功能及空肠黏膜屏障功能,缓解黄曲霉毒素对小鼠机体造成的损伤。