海洋寄生甲藻血卵涡鞭虫孢子活力评估及抑制药物筛选研究

血卵涡鞭虫(Hematodinium spp.)是一类主要寄生于海洋甲壳类动物的寄生甲藻,其引发的流行病严重危害我国沿海重要养殖经济蟹类(三疣梭子蟹、拟穴青蟹)的渔业生产。孢子是血卵涡鞭虫水体传播过程中的关键生活史阶段,准确评估孢子活力并筛选可抑制其活力的药物,可为防控该寄生甲藻流行性病害提供重要依据。为此,本研究建立了基于计算机图像分析的血卵涡鞭虫孢子运动活力评估方法,评估了4种水产常用药物(苯扎溴铵、戊二醛、辛硫磷、聚维酮碘)对血卵涡鞭虫孢子运动活力的影响。结果显示,2 h苯扎溴铵、戊二醛、辛硫磷、聚维酮碘对大孢子的半数效应浓度(EC_(50))依次为0.380 mg·L^(–1)、1.411 mg·L^(–1)、1.808 mg·L^(–1)、108.694 mg·L^(–1),2 h苯扎溴铵、戊二醛、辛硫磷对小孢子的EC50依次为0.172 mg·L^(–1)、0.038 mg·L^(–1)、0.101 mg·L^(–1)。苯扎溴铵抑制两种孢子运动活力的效果明显优于其余3种药物,可作为水产养殖中防控血卵涡鞭虫流行病的候选药物,建议防治血卵涡鞭虫大孢子的泼洒浓度为0.38~1.72 mg·L^(–1),小孢子泼洒浓度为0.17~0.35 mg·L^(–1)。以上研究结果为丰富血卵涡鞭虫孢子活力评估方法,筛选水产养殖应用药物防控血卵涡鞭虫流行病提供了参考。

一例猪鞭虫病的诊治

鞭虫属于线形动物门,线虫纲,鞭虫目,鞭虫科,毛首属,是一种常见的寄生于人体和动物肠道的线虫,以猪、绵羊和山羊的感染最普遍,尤其是对幼畜,严重感染时可引起仔猪、羔羊死亡。鞭虫主要通过夺取动物营养物质,排泄和分泌毒素,导致动物机体消瘦、衰弱、贫血,从而影响其生产性能和品质,甚至引起死亡,给养殖业造成很大的经济损失。鞭虫感染也是目前应当关注的重要公共卫生问题,曾有人发生感染的病例报道。

猪鞭虫病的防治措施

猪鞭虫病是由毛首线虫寄生在猪的结肠和盲肠引起的一种寄生虫病^([1])。本文主要介绍该病的病原学、流行特点、临床症状、病理变化、治疗及防控措施,以期为生产实践中防治猪鞭虫病提供参考。

猪鞭虫和斯氏鞭虫线粒体pnad4和pcox1基因的扩增与序列分析

以采自广东不同地区的猪鞭虫(Trichuris suis)和斯氏鞭虫(Trichuris skrjabini)为研究对象,扩增线粒体基因组的pnad4和pcox1基因,将扩增产物纯化后克隆至pMD18-T载体,对阳性菌落进行测序和序列分析。结果表明,来源于不同地区的鞭虫上述两个基因种内相对保守,差异性不大,但种间差异较大。猪鞭虫和斯氏鞭虫的pnad4长度均为468 bp,相互间有162个种间遗传标记位点;猪鞭虫和斯氏鞭虫的pcox1长度分别为600 bp与438 bp,相互间有156个种间遗传标记位点。两种鞭虫之间的pnad4基因差异率为45.1%-45.9%,pcox1基因差异率为44.1%-45.4%。上述线粒体两个基因均可作为区分两种线虫的种间遗传标记。

饱和蔗糖漂浮离心法与水洗沉淀集卵法在食蟹猴鞭虫病感染调査中的应用效果比较

为了解广西食蟹猴饲养场鞭虫病的感染情况,并比较饱和蔗糖漂浮离心法和水洗沉淀集卵法对虫卵检出率的影响,笔者采集广西3个饲养场食蟹猴新鲜粪便样品共计457份,采用饱和蔗糖漂浮离心法和水洗沉淀集卵法,取样涂于载玻片上,制片后于显微镜下测量观察。结果：饱和蔗糖漂浮离心法检出鞭虫阳性数分别为10/62、2/80、9/315,阳性率分别为16.13%、2.50%、2.86%,平均为4.60%;水洗沉淀集卵法检出鞭虫阳性数分别为6/62、1/80、4/315,阳性率分别为9.68%、1.25%、1.27%,平均为2.41%。饱和蔗糖漂浮离心法显著提高了鞭虫检出率,并且有镜检视野杂质少,虫卵密集,节约时间等优点,适用于食蟹猴鞭虫病诊断、流行病学调查等检测项目。

腹泻当注意鞭虫感染

了解鞭虫的感染期,致病性,熟悉鞭虫感染时所出现的症状及体征,明确鞭虫感染的诊断依据,注意与其他腹泻的鉴别诊断,从而避免误诊的发生。

池塘养殖脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)感染血卵涡鞭虫的研究

通过现场取样、显微镜检、细菌培养、组织病理、电镜观察以及PCR检测等研究手段,对2008年9月浙江省舟山市普陀区某梭子蟹养殖塘混养的脊尾白虾"白浊病"进行了系统的病原学研究。结果表明,病虾体色发白,反应迟钝,血淋巴液呈浊白色,严重患病白虾血淋巴中的血细胞几乎没有或者极少,代之以大量与血细胞形似的寄生虫;组织病理切片及电镜观察发现,病虾心脏、肝胰腺、肌肉、鳃部等组织寄生有大量单细胞寄生虫,该寄生虫虫体形态特征、显微结构及宿主临床症状与本实验室之前研究报道的感染三疣梭子蟹和锯缘青蟹的血卵涡鞭虫类似;采用已建立的针对血卵涡鞭虫ITS1基因的引物对"白浊病"病虾的血淋巴样品进行PCR检测,可扩增出585bp左右的特异条带。综合以上研究结果,确定该寄生虫为血卵涡鞭虫(Hematodinium sp.)。有关脊尾白虾感染该寄生虫的报道在国内外尚属首次。

养殖梭子蟹血卵涡鞭虫感染的初步研究

2004年7—9月,浙江舟山人工养殖梭子蟹相继发生一种被当地渔民称为"牛奶病"的流行性疾病,并引起大量死亡。病蟹蟹体消瘦,肌肉白浊,蟹盖内可见大量乳白色液体。对带有典型病症的濒死病蟹进行细菌分离,未分离到细菌。组织病理学观察发现,病蟹血淋巴急剧下降,代之以大量的寄生原虫,该寄生虫在病蟹的肝胰腺、鳃、心脏、肌肉等部位大量侵袭,并引起这些组织发生以坏死为主的变质性病变,其病理特征主要表现为:细胞肿胀、变性、坏死,某些细胞的细胞核固缩、碎裂或崩解。电镜观察乳白色体液及病变组织,可见大量寄生原虫,该寄生虫大小约5—7μm,多数呈卵圆形,单核或多核,具有2根鞭毛。进一步通过分子生物学方法,确定该寄生虫为血卵涡鞭虫Hematodinium sp.,初步认定其是引起养殖梭子蟹"牛奶病"的一种重要病原。

血卵涡鞭虫在养殖锯缘青蟹中的寄生

利用光镜和电镜对2005年9月浙江三门湾地区某养殖场发生的养殖锯缘青蟹规模性死亡病蟹进行观察,并对病原进行分子生物学鉴定。组织病理学研究发现,病蟹蟹体消瘦,肌肉白浊,头胸甲内可见大量乳白色液体,血淋巴细胞的量急剧减少,代之以大量寄生原虫,该原虫在病蟹的肝胰腺、鳃、心脏、肌肉等部位大量寄生,引起这些组织发生以坏死为主的变质性病变。电镜下,乳白色液体及病变组织内可见大量寄生虫体,其形态特征、内部结构及宿主表现的症状,与血卵涡鞭虫相类似。采用Small等[5]的血卵涡鞭虫ITS特异引物,扩增出分子量为300 bp左右的条带,并对其进行了测序及序列相似性比较,确定该寄生原虫为一种血卵涡鞭虫Hematodiniumsp。血卵涡鞭虫是海水甲壳类的重要病原寄生虫,我国尚未有该寄生虫病的研究报道,文中首次发现其在养殖锯缘青蟹中的寄生,为靳一步研究该寄生虫病积累了资料。

甘肃黄河首曲湿地省级自然保护区肉鞭虫物种多样性研究

2007年8月至2008年8月,用＂非淹没培养皿法＂和＂活体观察法＂研究了甘肃黄河首曲湿地省级自然保护区的肉鞭虫物种多样性.共鉴定到肉鞭虫74种,其中鞭毛虫51种,肉足虫23种,包括4个未定名种和1个国内土壤肉足虫新纪录种,隶属于2亚门6纲13目26科39属.眼虫目、动基体目和变形目为保护区肉鞭虫群落的优势类群,附生眼虫、绿眼虫、腐波豆虫、鼻吻滴虫、棘变虫属一种和结节鳞壳虫为优势种.74种肉鞭虫中,罕见种、常见种和广布种分别占物种总数的82.43%,10.81%和6.76%;各生境肉鞭虫的物种相似性系数均在0～0.24范围内,物种组成极不相似.结节鳞壳虫、线条三足虫、鼻吻滴虫、平截环滴虫和球波豆虫为保护区肉鞭虫群落的广布种;活泼尾滴虫、斜口三足虫、倒卵形波豆虫、慢行波豆虫、外穴屋滴虫、纺锤形波豆虫、表壳圆壳虫和卵形单鞭金虫为常见种.

海产甲壳类血卵涡鞭虫病研究进展

血卵涡鞭虫是导致海产甲壳类疾病的主要寄生虫病原之一,国内迄今尚未见相关报道。本文结合作者近年来对海水养殖甲壳类病害的研究结果,较系统地综述了国外甲壳类寄生血卵涡鞭虫的研究进展,包括分类地位、生活史、传播途径、流行病学、组织病理以及诊断方法,并提出了相应的防治措施,旨在为中国海水养殖蟹类血卵涡鞭虫病害的研究与防治提供参考。

应用PCR方法检测患“黄水病”锯缘青蟹中的血卵涡鞭虫

"黄水病"是目前锯缘青蟹养殖过程中的主要疾病之一,病蟹主要症状表现为肌肉白浊,体液呈土黄色或浊白色牛奶状。因该病流行范围广、发病率和死亡率高,给青蟹养殖业主造成巨大经济损失,严重地影响了青蟹养殖的健康发展。本研究从病蟹体液中发现大量疑似血卵涡鞭虫的寄生原虫,应用已建立的梭子蟹血卵涡鞭虫病的PCR检测方法对患"黄水病"青蟹进行检测。结果从患病青蟹组织的DNA中扩增出产物大小为585bp的特异性目的片段,经序列分析比较,与三疣梭子蟹上发现的血卵涡鞭虫的序列同源,同源性达99.7%。综合病原流行病学调查、组织病理学、电镜观察等分析结果,初步确定血卵涡鞭虫是引起养殖青蟹"黄水病"的重要病原。

甘肃小陇山桃花沟森林公园土壤肉鞭虫群落特征

2004年8月—2007年7月,用非淹没培养皿法和活体观察法对桃花沟森林公园及符家滩土壤肉鞭虫的群落特征进行了研究。共鉴定出肉鞭虫75种,在桃花沟森林公园的土壤中鉴定出肉鞭虫69种,隶属于4纲10目22科33属,其中桃花沟景区的土壤肉鞭虫58种,普渡峡景区33种;而受人为干扰较为严重的符家滩的土样中鉴定出22种。在桃花沟森林公园土壤肉鞭虫群落中,金滴目、动基体目和变形目为其优势类群;星状棘变虫、噬棘变虫、气球屋滴虫、球形波豆虫、卵形波豆虫和变形泡虫为其优势种。符家滩土壤肉鞭虫群落中,眼虫目、金滴目和动基体目为其优势类群;卵形波豆虫为其优势种。桃花沟景区、普渡峡景区和符家滩土壤肉鞭虫的Gleason-Margalef物种多样性指数分别为6.60、4.00和3.20;桃花沟景区与普渡峡景区土壤肉鞭虫的Jaccard群落相似性系数为0.32,桃花沟景区、普渡峡景区与符家滩土壤肉鞭虫的群落相似性系数分别为0.18和0.20。结果表明,桃花沟森林公园土壤肉鞭虫物种丰富,特有和稀有物种繁多,群落结构复杂,群落组成具有鲜明的独特性,同时也表明自然环境与受人为干扰的环境中土壤肉鞭虫物种多样性和群落结构有显著差异。

我国人群鞭虫感染现状与流行因素分析

目的了解全国(除港澳台外)人群鞭虫感染状况,为制定防治规划提供依据。方法按全国统一方案进行抽样调查,粪检采用改良加藤厚涂片法定量。结果内蒙、辽宁、吉林省未发现鞭虫感染者,其余省(市、区)感染率在0.01%～31.35%之间,人群平均感染率为4.63%。感染者平均克粪虫卵数(EPG)18.99,以轻度感染为主,占89.75%。鞭虫感染受经济状况、居住环境、饮用水源和生产类型等因素影响,感染率女性高于男性,5～15岁组高于其他年龄,少数民族居民高于汉族居民,渔民高于其他职业者(P<0.01)。结论鞭虫感染仍是我国应当关注的重要公共卫生问题,预防控制工作不可松懈。

海产蟹类血卵涡鞭虫间接荧光抗体快速检测技术

以寄生于三疣梭子蟹血淋巴中的血卵涡鞭虫虫体为抗原,制备了多克隆血清抗体。抗体经健康梭子蟹血淋巴吸附处理后,间接ELISA检测效价达7 680。应用该抗体建立了血卵涡鞭虫的间接荧光抗体检测技术(IFAT)。采用常规显微镜检、PCR及IFAT 3种方法对采集的养殖青蟹、梭子蟹及海捕梭子蟹等18个样本进行了检测。检测结果显示:常规显微镜检阳性检出率为33.3%,而IFAT及PCR检测阳性率77.8%,符合率达100%;阳性虫体被染上黄绿色荧光,而正常梭子蟹血细胞则未被染色;可检测到血卵涡鞭虫不同生活阶段的营养体、腰鞭孢子及合孢体阶段。为血卵涡鞭虫的流行病学调查及生活史研究提供了简便实用的方法。

甘肃白水江国家级自然保护区土壤肉鞭虫物种多样性

2004年2月～2006年5月,用"非淹没培养皿法"和活体观察法对甘肃白水江国家级自然保护区土壤肉鞭虫的物种多样性进行了研究。共鉴定到肉鞭类原生动物84种,其中包括2个未定名种和23个国内土壤肉鞭虫新纪录种,隶属于2亚门5纲13目32科49属。鞭毛亚门以动基体目的物种占优势,肉足亚门以变形目的物种占优势。研究结果表明,保护区土壤肉鞭虫物种丰富,特有和稀有物种较多,物种组成具有独特性。分析了保护区土壤肉鞭虫物种多样性与自然环境的关系。

甘肃麦积山风景名胜区土壤肉鞭虫群落特征

用"非淹没培养皿法"和活体观察法对甘肃麦积山风景名胜区土壤肉鞭虫群落特征进行了研究。共鉴定到肉鞭虫90种,其中包括5个未定名种和29个国内新纪录种,隶属于2亚门5纲14目27科46属。结果表明,风景名胜区土壤肉鞭虫群落物种丰富,特有和稀有物种繁多,群落结构复杂,物种组成具有独特性;物种分布呈现高度的空间异质性;土壤和水生肉鞭虫群落物种组成极不相似,土壤和水生肉鞭虫群落是不同的2个独立群落。

我国狍子源鞭虫的分子鉴定与进化分析

为鉴定我国黑龙江省分离的狍子源鞭虫的种类及确定其在鞭虫中的分类地位,本研究首先对鞭虫进行形态学特征观察,并利用PCR方法扩增该鞭虫r DNA ITS序列,经测序分析结果表明,r DNA ITS序列全长为1 371 bp,其中ITS1、5.8S及ITS2大小分别为800 bp、163 bp及408 bp,与之前报道的狍子源鞭虫同源性达99.8%。将其与NCBI数据库中相应鞭虫ITS序列进行比对分析,并将r DNA ITS序列作为基因标记构建鞭虫属系统发生树,结果显示本研究所分离的狍子源鞭虫与其他不同宿主的无色鞭虫均处于同一个分支,因此可鉴定本研究分离的我国狍子源鞭虫为无色鞭虫。本研究为国内首次对狍子源鞭虫进行分子鉴定及系统进化分析,为草食动物的鞭虫病分子鉴别诊断和鞭虫系统进化分析研究提供依据。

三疣梭子蟹感染血卵涡鞭虫PCR检测方法的建立

血卵涡鞭虫病是近年来三疣梭子蟹养殖过程中发生的一种危害较大的流行性疾病，患病蟹的体液和肌肉组织中有大量的血卵涡鞭虫寄生。该病多发生于每年9～11月份的夏秋季节，会在短时间内出现死亡高峰。因该病流行范围广、死亡率高、危害严重，对三疣梭子蟹养殖业发展影响很大。本文根据GenBank中登陆的血卵涡鞭虫18S rDNA和ITS1基因序列设计了1对特异性引物，建立了血卵涡鞭虫病的PCR检测方法，从感染血卵涡鞭虫的三疣梭子蟹组织DNA中扩增出产物大小为585bp的DNA片段。本方法可快速、特异地检测出三疣梭子蟹感染和携带血卵涡鞭虫的状况，为三疣梭子蟹的健康养殖和血卵涡鞭虫病的流行病学调查提供了快速、简便的手段。