上调miR-100降低宫颈癌细胞侵袭和迁移及顺铂耐药性

【目的】在宫颈癌Hela、Siha细胞中上调mi R-100后,研究细胞侵袭及迁移功能及顺铂耐药性变化并探讨其机制。【方法】将mi R-100 mimic通过lipomax试剂转染至宫颈癌细胞Hela、Siha中,细胞主要分为两组:NC组,为空白对照;mir100组,为上调mi R-100后的细胞。transwell法观察细胞侵袭性,划痕实验观察迁移性;WB测定上皮间质变相关蛋白ECadherin、Snail、Vimintin及MMP2、u PA的表达;CCK8法测定顺铂耐药性。【结果】1两系宫颈癌细胞上调mi R-100后,细胞的侵袭、迁移性降低;2上调mi R-100后的宫颈癌细胞中上皮相关分子E-Cadherin表达上调,间质表型分子Snail、Vimintin表达下调,MMP-2表达无差异,u PA表达下降;3不同浓度顺铂作用(P<0.001)及是否转染mir-100 si RNA(P<0.001)对细胞存活率的改变均具有显著统计学意义,且浓度因素与处理因素间相对独立;在Siha细胞中得出相同结论 (P<0.001)。Hela NC、Hela 100细胞株顺铂IC50(μmol/L)分别为:8.19±0.34、5.38±0.47,Siha NC、Siha 100的IC50分别为8.86±0.92、6.19±0.23,P<0.05。【结论】mi R-100在宫颈癌细胞Hela及Siha中通过降低上皮间质变过程起抑制侵袭和转移的作用,该功能可能与u PA的改变有关。上调mi R-100可降低宫颈癌细胞对顺铂的耐药性。

ATIP3a-HMGA2-ERK信号通路对卵巢上皮细胞癌顺铂耐药性的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体的相互作用蛋白3a(angiotensinⅡtype 2receptor-interacting protein3a,ATIP3a)-高迁移率族蛋白A2(high mobility group AT-hook 2,HMGA2)-细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)信号通路对卵巢上皮细胞癌顺铂耐药性的影响。方法培养顺铂耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP、A2780/DDP,分为8组(n=3),对照组C1和C2组仅向SKOV3/DDP、A2780/DDP细胞中加入RMPI 1640培养基,A1组和A2组为分别向SKOV3/DDP、A2780/DDP细胞中加入ATIP3a多肽(1nmol/L)处理6h,S1和S2组为分别向SKOV3/DDP、A2780/DDP细胞中转染siRNA-ATIP3a,VC1和VC2组分别向SKOV3/DDP、A2780/DDP细胞中转染siRNA-vector作为对照。顺铂3μg/mL处理72h后,采用乳酸脱氢酶法检测细胞的增殖能力,体外侵袭实验检测细胞侵袭能力,Real-time PCR法检测HMGA2mRNA表达,免疫蛋白印记法检测HMGA2和磷酸化ERK的表达。结果A1组SKOV3/DDP细胞增殖率和侵袭能力、HMGA2 mRNA和蛋白表达、磷酸化ERK蛋白表达明显低于C1组,S1组SKOV3/DDP细胞增殖率和侵袭能力、HMGA2mRNA和蛋白表达、磷酸化ERK蛋白表达明显高于C1组、A1组,VC1组SKOV3/DDP细胞增殖率和侵袭能力、HMGA2 mRNA和蛋白表达、磷酸化ERK蛋白表达高于A1组,低于S1组,差异均有统计学意义(P<0.05);A2组A2780/DDP细胞增殖率和侵袭能力、HMGA2mRNA和蛋白表达、磷酸化ERK蛋白表达低于C2组;S2组A2780/DDP细胞增殖率和侵袭能力、HMGA2 mRNA和蛋白表达、磷酸化ERK蛋白表达明显高于C2组、A2组,VC2组A2780/DDP细胞增殖率和侵袭能力、HMGA2mRNA和蛋白表达、磷酸化ERK蛋白表达高于A2组,低于S2组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢上皮细胞癌顺铂耐药性可能与ATIP3a-HMGA2-ERK信号通路有关。

沉默ciRS-7通过靶向miR-944逆转胃癌细胞顺铂耐药性机制

目的 探讨沉默环状RNA(circRNA)ciRS-7对胃癌细胞顺铂耐药性的影响及相关机制。方法 构建顺铂耐药胃癌细胞HGC-27/DDP,沉默ciRS-7并用顺铂处理HGC-27/DDP细胞后,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ciRS-7、微小RNA-944(miR-944)表达水平,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活率、克隆形成实验检测克隆形成数,蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡指数,双荧光素酶实验验证ciRS-7与miR-944的靶向关系。结果 ciRS-7在顺铂耐药胃癌组织和细胞中高表达,miR-944在顺铂耐药胃癌组织和细胞中低表达,沉默ciRS-7明显降低顺铂处理的HGC-27/DDP细胞存活率、克隆形成数、cyclinD1、PCNA、Bcl-2蛋白表达水平,明显增加顺铂处理的HGC-27/DDP细胞ciRS-7、凋亡率、凋亡指数、Bax、cleaved-caspase-3蛋白表达水平,ciRS-7靶向抑制miR-944的表达。结论 沉默ciRS-7可逆转胃癌细胞对顺铂的耐药性,其机制可能与沉默ciRS-7可促进miR-944的表达有关。

miR-218抑制卵巢癌细胞A2780对顺铂耐药性的实验研究

目的研究miR-218抑制卵巢癌细胞A2780对顺铂耐药性的影响及可能机制。方法实时定量PCR检测A2780及顺铂耐药细胞株A2780/DDP中miR-218的表达,转染miR-218 inhibitors和mimics改变A2780及A2780/DDP细胞中miR-218的表达,MTT法检测转染前后细胞对顺铂的敏感性,并分析Wnt2B蛋白表达的改变。结果与A2780细胞相比,miR-218在A2780/DDP中的表达明显降低。A2780细胞转染miR-218 inhibitors后,细胞对顺铂的敏感性降低,Wnt2B蛋白表达明显增强;而A2780/DDP细胞转染miR-218mimics后,细胞对顺铂的敏感性增强,Wnt2B蛋白表达明显减少。结论 miR-218可能通过靶向Wnt2B抑制卵巢癌细胞A2780对顺铂的耐药性。

银杏双黄酮对未分化型甲状腺癌细胞顺铂耐药性的影响与机制研究

目的:探究银杏双黄酮对未分化型甲状腺癌(ATC)细胞顺铂(DDP)耐药性的影响与分子机制。方法:体外培养人ATC细胞8505C,并构建8505C DDP耐药细胞株(8505C/DDP)。用不同浓度的DDP(1.25、2.5、5、10、20μg/mL)或银杏双黄酮(1.25、2.5、5、10、20μmol/L)处理后,CCK-8法检测DDP、银杏双黄酮对8505C、8505C/DDP细胞的毒性作用以及两者联合对8505C/DDP细胞的毒性作用。将8505C/DDP细胞分为DDP组、DDP+银杏双黄酮组、DDP+AMPK抑制剂组、DDP+银杏双黄酮+AMPK抑制剂组,CCK-8法检测细胞增殖活力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;划痕愈合实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western Blot检测AMPK/mTOR信号通路相关蛋白表达。结果:DDP对8505C/DDP细胞的半数抑制浓度(IC_(50))高于8505C细胞(P<0.05);银杏双黄酮对8505C/DDP、8505C细胞的IC_(50)无明显差异(P>0.05);银杏双黄酮可增强DDP对8505C/DDP细胞的敏感性(P<0.05)。与8505C细胞比较,8505C/DDP细胞中p-AMPK/AMPK比值降低,p-mTOR/mTOR比值升高(P<0.05);银杏双黄酮可上调8505C细胞和8505C/DDP细胞中p-AMPK/AMPK比值,降低p-mTOR/mTOR比值(P<0.05)。与DDP组比较,DDP+银杏双黄酮组8505C/DDP细胞增殖活力、划痕愈合率、侵袭数量、p-mTOR/mTOR比值降低,凋亡率、p-AMPK/AMPK比值升高(P<0.05);与DDP+银杏双黄酮组比较,DDP+银杏双黄酮+AMPK抑制剂组细胞增殖活力、划痕愈合率、侵袭数量、p-mTOR/mTOR比值升高,凋亡率、p-AMPK/AMPK比值降低(P<0.05)。结论:银杏双黄酮可降低8505C/DDP细胞对DDP的耐药性,增强DDP对8505C/DDP细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用以及对细胞凋亡的诱导作用,其作用机制可能与激活AMPK/mTOR信号通路有关。

二至丸合桂枝汤对三阴性乳腺癌细胞系顺铂耐药性的调控作用

目的:探讨二至丸合桂枝汤对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞系顺铂耐药性的影响及其分子机制作用。方法:设计并合成3条缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)siRNA,分为1#siRNA组、2#siRNA组、3#siRNA组、阴性对照组及Control组分别转染,Western blot筛选最适siRNA。同时利用药物连续诱导法筛选顺铂耐药性MDA-MB-231细胞株(MDA-MB-231/CDDP)。制备含二至丸合桂枝汤血清,MDA-MB-231/CDDP细胞株随机分为A:空白组(转染siRNA阴性对照)、B:HIF-1αsiRNA组、C:HIF-1αsiRNA+二至丸合桂枝汤组(200μg/ml含药血清)、D:HIF-1αsiRNA+二至丸合桂枝汤(200μg/ml)+顺铂(10μmol/L)组,继续培养,检测细胞活性、细胞凋亡及细胞侵袭情况。同时利用qRT-PCR和Western blot分别检测各组细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、HIF-1αm RNA及蛋白表达情况。结果:3#siRNA组HIF-1α蛋白表达水平抑制最显著,选此siRNA用于后续研究。与A组相比,C组和D组在作用24h、48h后均可显著抑制MDA-MB-231/CDDP细胞活性(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),且能显著抑制细胞侵袭能力(P<0.05或P<0.01),其中,D组作用效果最显著。q RT-PCR和Western blot检测结果显示二至丸合桂枝汤与顺铂联合干预,可显著下调MDA-MB-231/CDDP细胞中VEGF、HIF-1ɑmRNA及蛋白表达。结论:二至丸合桂枝汤可通过抑制HIF-1α通路,下调VEGF表达,调控TNBC细胞系的顺铂耐药性。

尿苷-胞苷激酶2对肺癌顺铂耐药性的影响及机制

目的:通过免疫组化方式分析尿苷-胞苷激酶(UCK)2与肺癌顺铂耐药性相关性。方法:行手术切除的80例非小细胞肺癌(NSCLC)患者的病理标本,所有患者术前均未经放疗或化疗,术后根据NCCN治疗指南给予铂类方案化疗,静脉注射顺铂30 mg/m^(2),d1-3,每3周重复,连续4个周期。并以患者接受肺癌根治手术的时间作为术后生存起始时间展开随访,根据随访结果分为铂类耐药组和铂类敏感组。比较两组患者肺癌组织UCK2阳性表达率,同时比较UCK2阳性与阴性组肺癌组织STAT3、促进多药耐药(MDR-1)、多药耐药蛋白(MRP-1)阳性表达率及3年生存率。结果:铂类耐药组肺组织UCK2阳性率明显高于铂类敏感组,差异有统计学意义(P<0.01)。UCK2阳性组肺组织p-STAT3、MDR-1及MRP-1阳性率均明显高于UCK2阴性组,差异有统计学意义(P<0.01)。UCK2阳性组患者的3年生存率明显低于UCK2阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:UCK2阳性表达增加肺癌顺铂耐药风险,并可能通过活化STAT3途径促进肺癌顺铂耐药性,可望为降低肺癌化疗耐药提供新方向。

长链非编码RNA LINC00478抑制微小RNA-214对口腔鳞癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨长链非编码RNA LINC00478对口腔鳞癌细胞顺铂耐药性的影响及其对微小RNA-214(miR-214)的靶向调控作用.方法:采用qRT-PCR法检测口腔鳞癌组织、癌旁组织中LINC00478、miR-214的表达量;体外培养口腔鳞癌细胞CAL-27,建立顺铂耐药性细胞CAL-27/DDP,分别将pcDNA、pcDNA-LINC00478、pcDNA-LINC00478与miR-NC、pcDNA-LINC00478与miR-214 mimics转染至CAL-27/DDP细胞;采用qRT-PCR法检测CAL-27细胞与CAL-27/DDP细胞中LINC00478、miR-214的表达量;MTT法与克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测LINC00478、miR-214的靶向关系;Western blot法检测Ki67、Pro-caspase3、Cleaved-caspase3蛋白表达量.结果:与癌旁组织比较,口腔鳞癌组织LINC00478的表达水平显著降低(P<0.05),miR-214的表达水平显著升高(P<0.05);与CAL-27组比较,CAL-27/DDP组LINC00478的表达水平显著降低(P<0.05),miR-214的表达水平显著升高(P<0.05);与转染pcDNA比较,CAL-27/DDP细胞中转染pcDNA-LINC00478可提高增殖抑制率、凋亡率及Cleaved-caspase3蛋白水平(P<0.05),减少克隆形成数(P<0.05),降低Ki67、Pro-caspase3蛋白水平(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实LINC00478能够靶向调控miR-214的表达及活性;与共转染pcDNA-LINC00478与miR-NC比较,共转染pcDNA-LINC00478与miR-214 mimics可降低增殖抑制率、凋亡率及Cleaved-caspase3蛋白水平(P<0.05),增加克隆形成数(P<0.05),提高Ki67、Pro-caspase3蛋白水平(P<0.05).结论:LINC00478通过靶向抑制miR-214的表达而抑制口腔鳞癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,从而降低细胞顺铂耐药性.

Stim1在骨肉瘤组织和细胞中的表达水平及与顺铂耐药性的关系

目的:探讨Stim1在骨肉瘤组织和细胞中的表达水平及与顺铂耐药性的关系。方法:采用免疫组织化学染色检测了50例骨肉瘤患者的肿瘤组织中Stim1的表达。通过用高浓度的顺铂处理人骨肉瘤细胞系U-2 OS来建立耐药性骨肉瘤细胞(U-2 OS/DDP细胞)。通过RT-PCR和蛋白质印迹检测细胞中Stim1、ATF4、CHOP和GRP78的表达。通过转染人Stim1-siRNA或过表达Stim1的pCDNA3-HA质粒来下调或上调骨肉瘤细胞中Stim1的表达,并检测了细胞的钙离子内流情况。通过CCK-8法检测细胞增殖,通过Annexin V-FITC/PI双重染色法检测细胞凋亡。结果:Stim1的阳性表达与骨肉瘤患者的TNM分期和远处转移有关,Stim1阳性患者中,74.19%(23例)为TNMⅢ期,87.10%(27例)发生远处转移。而Stim1阴性患者中,26.31%(5例)为TNMⅢ期,26.31%(5例)发生远处转移。顺铂耐药的骨肉瘤U-2 OS/DDP细胞中的Stim1 mRNA和蛋白表达水平显著高于非耐药U-2 OS细胞(P<0.05)。下调Stim1表达明显减少了U-2 OS/DDP细胞中的钙离子内流(P<0.05);下调Stim1表达抑制了细胞的增殖并促进了细胞凋亡(P<0.05)。此外,下调Stim1进一步提高了内质网应激分子标志物ATF4、CHOP和GRP78的表达(P<0.05)。相反,上调Stim1的表达则发挥了相反的作用。结论:Stim1在骨肉瘤患者中高表达并与不良预后有关。Stim1的高表达可增加骨肉瘤细胞的顺铂耐药性。下调Stim1通过抑制钙离子内流并促进内质网应激诱导的细胞凋亡来降低骨肉瘤细胞的顺铂耐药性。

miR-30a对卵巢癌细胞PTEN/PI3K/AKT/mTOR自噬通路及顺铂耐药性的影响

目的:探究miR-30a对人卵巢癌SKOV3细胞自噬及顺铂耐药性的影响,并初步研究其作用机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞和人卵巢癌细胞(耐药)细胞(SKOV3/DDP);将SKOV3/DDP细胞随机分为对照组、miR-30a阴性对照(NC)组和miR-30a模拟(mimics)组,SKOV3细胞作为正常组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞miR-30a表达情况;CCK-8法检测各组细胞顺铂耐药性;Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡情况;蛋白印迹分析法检测各组细胞微管相关蛋白轻链3 I/II(LC3I/II)、p62、磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达情况;双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-30a与PTEN的靶向关系。结果:与对照组和miR-30a NC组相比,miR-30a mimics组SKOV3/DDP细胞miR-30a表达水平、凋亡率、p62、p-PI3K、p-AKT及p-mTOR水平显著升高(P<0.05),IC 50值、LC3II、PTEN蛋白表达水平及LC3II/LC3I比值显著降低(P<0.05);与正常组相比,对照组SKOV3/DDP细胞上述各指标变化趋势完全相反;mirbase数据库预测显示,miR-30a与PTEN mRNA 3'UTR区有结合位点,与PTEN-3'UTR-WT+miR-30a NC组比较,PTEN-3'UTR-WT+miR-30a inhibitor组荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论:miR-30a可能通过靶向抑制PTEN表达,激活PI3K/AKT/mTOR信号通路调控人卵巢癌细胞自噬,降低卵巢癌细胞的顺铂耐药性。

干扰MDM4基因对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨沉默鼠双微体4(MDM4)基因对卵巢癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法:采用qRT-PCR法检测卵巢癌细胞株SKOV3、A2780及其DDP耐药细胞株SKOV3/DDP、A2780/DDP中MDM4的表达情况。在A2780/DDP细胞中分别转染MDM4 siRNA及阴性对照,分别记为MDM4 siRNA组和阴性对照组,将未转染的A2780/DDP细胞记为空白对照组,采用qRT-PCR和Western blot法检测转染效率,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,采用Western blot法检测t-PI3K、p-PI3K、t-AKT和p-AKT蛋白的表达水平。结果:SKOV3/DDP、A2780/DDP细胞与SKOV3、A2780细胞比较,MDM4的表达水平升高(P<0.05)。MDM4 siRNA组与空白对照组和阴性对照组相比,MDM4 mRNA和蛋白表达水平降低,细胞增殖抑制率升高,p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低,IC 50降低(P<0.05)。结论:沉默MDM4基因能够降低A2780/DDP细胞对DDP的耐药性,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。

长链非编码RNA变异性浆细胞瘤异位1通过调控微小RNA-214-3p/人凋亡抑制蛋白X轴影响皮肤黑色素瘤细胞的顺铂耐药性

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)变异性浆细胞瘤异位1(PVT1)调控微小RNA(miR)-214-3p/人凋亡抑制蛋白X(XIAP)对皮肤黑色素瘤(CMM)细胞的顺铂(DDP)耐药性的影响。方法该研究起止时间为2020年3—9月。体外培养人皮肤黑色素瘤SK-MEL-1/DDP细胞,将细胞分为空白对照组(NG组,不做处理)、阴性转染组(NC组,转染PVT1-inhibitor阴性对照)、抑制PVT1表达组(PVT1-inhibitor组,转染PVT1-inhibitor)、共转染组(PVT1-inhibitor-miR-214-3p-inhibitor组,转染PVT1-inhibitor同时转染miR-214-3p-inhibitor)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SK-MEL-1/DDP细胞PVT1、miR-214-3p水平;MTT法检测四组SK-MEL-1/DDP细胞增殖能力及对DDP的耐药性;流式细胞仪检测四组SK-MEL-1/DDP细胞凋亡率;蛋白质印迹法(Western blotting)检测四组SK-MEL-1/DDP细胞XIAP、细胞增殖相关核抗原Ki-67、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。应用TargetScan数据库预测PVT1与miR-214-3p的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验验证。结果与NG组、NC组比较,PVT1-inhibitor组SK-MEL-1/DDP细胞增殖抑制率[(22.87±3.43)%比(0.00±0.00)%、(0.08±0.01)%]、凋亡率[(40.05±6.06)%比(15.69±2.35)%、(17.01±2.55)%]、miR-214-3p及Bax表达均显著升高(P<0.05),PVT1、药物半数抑制浓度(IC_(50))值[(15.13±0.45)µg/L比(45.03±1.35)µg/L、(47.81±1.33)µg/L]、Ki-67、Bcl-2蛋白、XIAP mRNA及其蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与PVT1-inhibitor组比较,PVT1-inhibitor+miR-214-3p-inhibitor组SK-MEL-1/DDP细胞增殖抑制率[(15.12±2.27)%比(22.87±3.43)%]、凋亡率[(27.88±4.19)%比(40.05±6.06)%]、miR-214-3p及Bax表达均显著降低(P<0.05),IC_(50)值[(23.98±0.72)µg/L比(15.13±0.45)µg/L]、Ki-67、Bcl-2蛋白、XIAP mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示miR-214-3p是PVT1的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系。结论下调lncRNA PVT1可靶向上调miR-214-3p表达,抑制XIAP表达,减弱CMM SK-MEL-1/DDP细胞对DPP耐药性。

CircITGB6调节miR-542-3p/PCNA轴对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响及其机制

目的:探讨环状RNA(Circ)ITGB6调节微小RNA(miR)-542-3p/增殖细胞核抗原(PCNA)轴对卵巢癌(OC)细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及其机制。方法:qRT-PCR检测OC组织及正常卵巢组织、SKOV3、SKOV3/DDP、正常卵巢上皮细胞系(IOSE-80)中CircITGB6、miR-542-3p、PCNA mRNA表达水平;SKOV3/DDP设置为对照组(不作处理)、干扰(si CircITGB6)组(转染si CircITGB6)、阴性对照(si NC)组(转染si NC)、si CircITGB6+抑制物阴性对照(inhibitor NC)组(共转染si CircITGB6、inhibitor NC)、si CircITGB6+miR-542-3p抑制物(miR-542-3p inhibitor)组(共转染si CircITGB6、miR-542-3p inhibitor)。流式细胞仪、CCK-8、qRT-PCR分别检测各组SKOV3/DDP细胞中凋亡、增殖、耐药性及CircITGB6、miR-542-3p、PCNA mRNA表达水平;双荧光素酶验证miR-542-3p与CircITGB6、PCNA的靶向关系;Western blot检测PCNA、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞增殖相关核抗原(Ki-67)。结果:OC组织中CircITGB6(1.66±0.17比0.95±0.10)、PCNA mRNA(1.59±0.16比0.98±0.10)表达高于正常卵巢组织,miR-542-3p表达(0.64±0.07比1.06±0.11)降低(均P<0.05);IOSE-80、SKOV3、SKOV3/DDP中CircITGB6、PCNA mRNA表达依次增加,miR-542-3p表达依次减少(P<0.05);与对照组、si NC组相比,si CircITGB6组细胞增殖率及IC50、CircITGB6(1.21±0.13比1.88±0.19、1.84±0.19)、Ki-67、PCNA显著降低,凋亡率及Bax、miR-542-3p表达(0.86±0.09比0.51±0.06、0.55±0.06)显著增加(均P<0.05);与si CircITGB6+inhibitor NC组相比,CircITGB6+miR-542-3p inhibitor组细胞增殖率及IC50、Ki-67、PCNA显著增加,凋亡率及Bax、miR-542-3p表达显著降低(均P<0.05)。结论:干扰CircITGB6表达可通过调节miR-542-3p/PCNA轴降低SKOV3对DDP的耐药性。

miR-95和miR-19b在骨肉瘤组织中的表达及与顺铂耐药性的关系

目的探究miR-95和miR-19b在骨肉瘤组织中的表达及与顺铂耐药性的关系。方法选取骨肉瘤患者100例,收集患者临床资料。采用RT-PCR法检测组织miR-95和miR-19b表达水平,分析其与临床病理参数以及化疗耐药的关系。结果miR-95和miR-19b表达与性别无关(P>0.05),与临床分期、肿瘤直径以及远处转移有关(P均<0.05),临床分期Ⅲ期、肿瘤直径≥5 cm、发生远处转移患者miR-95表达水平显著低于其他患者(P<0.05),miR-19b表达水平显著高于其他患者(P<0.05)。miR-95在耐药组的表达水平明显低于敏感组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-19b在耐药组的表达水平明显高于敏感组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-95和miR-19b评估骨肉瘤患者化疗耐药的预测AUC分别为0.707、0.692,联合检测AUC为0.808,高于单独检测的AUC值。结论miR-95和miR-19b在骨肉瘤组织中的表达水平与临床病理参数以及化疗耐药有一定关系,为进一步研究骨肉瘤病情提供了一定的研究基础。

姜黄素调节LKB1-AMPK-LC3信号通路对膀胱癌细胞增殖、迁移和顺铂耐药性的影响

目的研究姜黄素调节肝激酶B1-磷酸腺苷激活的蛋白激酶-微管相关蛋白1轻链3(LKB1-AMPK-LC3)信号通路对膀胱癌细胞增殖、迁移和顺铂(DDP)耐药性的影响。方法体外培养人膀胱癌细胞系T24细胞,用DDP诱导建立其DDP耐药细胞T24/DDP细胞,用不同浓度姜黄素处理T24和T24/DDP细胞后以MTT法筛选姜黄素最佳作用浓度。将T24细胞随机分为对照组、姜黄素组、二甲双胍组、姜黄素联合二甲双胍组,用姜黄素和LKB1-AMPK激活剂二甲双胍分组处理后以MTT法、单丹磺酰戊二胺(MDC)荧光染色法、细胞划痕法、流式细胞术分别检测各组T24细胞增殖、自噬、迁移与凋亡;Western blot法检测各组T24细胞LKB1-AMPK-LC3信号通路相关蛋白表达。将T24/DDP细胞随机分为对照组、姜黄素组、二甲双胍组、姜黄素联合二甲双胍组,用姜黄素和二甲双胍分组处理的同时用不同浓度DDP处理,然后以MTT法检测姜黄素对T24/DDP细胞DDP耐药系数的影响。将T24/DDP细胞随机分为对照组、DDP组、DDP联合姜黄素组、DDP联合二甲双胍组、DDP和姜黄素联合二甲双胍组,用DDP、姜黄素和二甲双胍分组处理后以同样方法检测各组T24/DDP细胞增殖、自噬、迁移、凋亡、耐药与LKB1-AMPK-LC3信号通路相关蛋白表达。结果相比对照组,姜黄素组T24细胞活力、自噬体相对数、迁移率、磷酸化的LKB1(p-LKB1)/LKB1、磷酸化的AMPK(p-AMPK)/AMPK与LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、T24/DDP细胞DDP耐药系数降低,T24细胞凋亡率升高;二甲双胍组各指标变化与姜黄素组相反。相比姜黄素组,姜黄素联合二甲双胍组T24细胞活力、自噬体相对数、迁移率、p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK与LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、T24/DDP细胞DDP耐药系数升高,T24细胞凋亡率降低。相比对照组,DDP组T24/DDP细胞各指标无明显变化。相比对照组、DDP组,DDP联合姜黄素组T24/DDP细胞活力、自噬体相对数、迁移率、P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达、p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK与LC3Ⅱ/LC3Ⅰ降低,T24/DDP细胞凋亡率升高;DDP联合二甲双胍组上述各指标变化与DDP联合姜黄素组相反。相比DDP联合姜黄素组,DDP和姜黄素联合二甲双胍组T24/DDP细胞活力、自噬体相对数、迁移率、P-gp蛋白表达、p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK与LC3Ⅱ/LC3Ⅰ升高,T24/DDP细胞凋亡率降低。结论姜黄素可降低LKB1-AMPK-LC3信号通路活性,进而抑制膀胱癌细胞自噬、增殖与迁移,促使其凋亡,并减弱其DDP耐药性。

EZH2基因沉默逆转卵巢上皮性癌细胞顺铂耐药性的实验研究

EZH2基因是果蝇zeste基因增强子的人同源物，作为一种转录抑制因子参与基因沉默，在细胞生长调控中发挥着重要作用。研究发现，EZH2基因可以抑制相关癌基因的活性，在前列腺癌、乳腺癌。和胰腺癌等多种恶性肿瘤组织中高表达，促进肿瘤生长、侵袭和转移。然而迄今为止，对EZH2基因参与卵巢上皮性癌（卵巢癌）化疗耐药及其机制的研究鲜见报道。本研究应用真核质粒载体介导的RNA干扰技术抑制EZH2基因的表达，探讨EZH2基因沉默后逆转卵巢癌耐药细胞株A2780／DDP对顺铂耐药的可能作用机制，为EZH2基因在卵巢癌耐药的基因治疗提供实验基础。

膜脂物理状态的变化与肺腺癌细胞A_(549)的顺铂耐药性

用荧光探剂DPH分别标记药物敏感的肺腺癌细胞A549和抗顺铂药物的肺腺癌细胞A549/DDP, 对其膜脂物理状态的变化研究结果表明, 对顺铂药物敏感的A549的DPH各向异性值(P)为0.162, 而抗顺铂药物的A549/DDP者为0.194, 统计分析表明二者具有明显的差异. 当用可探测细胞膜脂双层不同层次的荧光探剂2-AS, 7-AS和12-AS进一步测定不同层次的膜脂质分子的流动性变化时, 结果表明: 分别反映膜表层和中层的2-AS和7-AS的各向异性值, 对敏感性的A549细胞分别为0.134和0.144, 具抗药性的A549/DDP细胞则分别为0.171和0.178. 而反映膜深层脂质分子变化的12-AS的各向异性值二者却无显著差异. 这提示, 两种细胞膜脂流动性的变化主要反映在膜的表层和中层. 同时, 用MC540荧光探剂标记两种细胞膜在FCM (flow cytometry)上测定反映膜脂质分子头部堆积程度差异的二维散点图及频数分布直方图的结果分析也表明, A549/DDP细胞膜脂质分子的有序性增加, 即流动性降低. 用气相色谱测量两株细胞膜脂肪酸的不饱和度, A549/DDP细胞膜脂肪酸的不饱和度明显低于A549细胞, 进一步肯定了上述结果. 结果提示, 在药物长期作用下, 膜脂物理状态的变化亦可能是肿瘤细胞具有抗药性的原因之一.

脂多糖通过调节iNOS表达影响人卵巢癌SKOV3/DDP细胞顺铂耐药性的研究

目的观察脂多糖诱导的SKOV3/DDP细胞内分泌型一氧化氮合酶(iNOS)表达变化对人卵巢癌SKOV3/DDP细胞株顺铂耐药性的影响,并初步探讨机制。方法体外培养SKOV3/DDP细胞,分为对照组、顺铂组、脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)组和联合用药组共4组,对照组给予常规不加血清培养基,顺铂组给予10μg/ml顺铂,LPS组给予浓度为1μg/ml的LPS,联合用药组给予10μg/ml顺铂和1μg/ml LPS,均作用24 h。MTT法检测各组细胞活力;蛋白免疫印迹法观察各组iNOS表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;间接免疫荧光法观察各组细胞激活型Caspase-3表达。结果联合用药组细胞活力明显低于顺铂组(P<0.05);顺铂组与对照组iNOS表达差异无统计学意义(P>0.05),LPS组和联合用药组iNOS表达水平明显高于对照组(P<0.05),且联合用药组高于LPS组(P<0.05);流式细胞术结果显示联合用药组细胞凋亡率明显高于顺铂组(P<0.05),且通过间接免疫荧光法显示联合用药组细胞激活型Caspase-3表达高于顺铂组(P<0.05)。结论 LPS能够降低人卵巢癌SKOV3/DDP细胞顺铂耐药性,这可能与其提高SKOV3/DDP细胞内iNOS表达水平有关。