UPLC-MS/MS测定九味羌活颗粒中7个马兜铃酸类成分

目的:采用超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定九味羌活颗粒中7个马兜铃酸类成分的含量。方法:采用Shim-pack Velox PFPP色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以1 mmol·L^(–1)甲酸铵溶液(含0.05%甲酸,A)-甲醇(B)为流动相梯度洗脱。体积流量为0.4 mL·min^(–1),柱温为40℃,进样量为1μL,电喷雾离子源,多反应监测模式。结果:7个马兜铃酸类成分线性关系良好,r均≥0.997,加样回收率为86.5%~112.2%;检出限为0.05~0.31 ng·mL^(–1),定量限为0.18~1.04 ng·mL^(–1)。对3个企业8批样品进行测定,结果检出马兜铃酸Ⅳa、马兜铃内酰胺的质量分数分别为0~0.417、0.021~0.173μg·g^(–1)。结论:该方法重复性好、灵敏度高,可用于九味羌活颗粒中马兜铃酸类成分的测定。

超高效液相色谱串联质谱法测定木香马兜铃中马兜铃酸Ⅰ及马兜铃酸Ⅱ的含量

目的:建立测定木香马兜铃中马兜铃酸Ⅰ(AA-Ⅰ)及AA-Ⅱ含量的超高效液相色谱-质谱法。方法:色谱柱为Agilent Poroshell SB-C18(100 mm×2.1 mm,2.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(含5 mmol·L^(–1)甲酸铵),梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(–1),柱温35℃,离子源为电喷雾离子源,扫描方式为正离子扫描,多反应离子监测模式。结果:AA-Ⅰ在质量浓度为1.036~207.310 ng·mL^(–1)时与峰面积线性关系良好(r=0.9995);AA-Ⅱ在质量浓度为1.1~110.0 ng·mL^(–1)时与峰面积线性关系良好(r=0.9991);AA-Ⅰ的定量限、检测限分别为0.3287、0.0986 pg;AA-Ⅱ的定量限、检测限分别为0.6506、0.1952 pg;AA-Ⅰ的精密度、稳定性、重复性试验RSD均小于5.0%;AA-Ⅱ的精密度、稳定性、重复性试验RSD均小于5.0%;AA-Ⅰ的平均加样回收率为92.50%,RSD为4.3%;AA-Ⅱ的平均加样回收率为104.97%,RSD为3.7%。15批木香马兜铃药材中1批未检出AA-Ⅰ,8批未检出AA-Ⅱ,其余批次的AA-Ⅰ质量分数为5.94×10^(–4)~2.86 mg·g^(–1),AA-Ⅱ质量分数为0.09~0.50 mg·g^(–1)。结论:所建立的方法专属性强、快速、灵敏,可用于木香马兜铃中AA-Ⅰ及AA-Ⅱ的含量测定。

HPLC法同时测定马兜铃中4种成分

目的建立同时测定马兜铃Aristolochia debilis Sieb.et Zucc.中马兜铃酸III、7-羟基马兜铃酸Ⅰ、马兜铃内酰胺Ⅰ、马兜铃酸Ⅰ的HPLC方法。方法马兜铃70%甲醇提取液的分析采用Agilent Extend C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相为乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃,检测波长254 nm。结合大鼠口服马兜铃酸I的半数致死量（LD50）及细辛药材中马兜铃酸I的限量,确定马兜铃中马兜铃酸的限量。结果马兜铃酸Ⅲ、7-羟基马兜铃酸Ⅰ、马兜铃内酰胺Ⅰ、马兜铃酸Ⅰ分别在0.34-31.90、0.32-30.20、0.12-28.10和0.21-41.30μg/mL范围内线性关系良好。马兜铃中马兜铃酸Ⅰ或马兜铃总酸的限量为0.000 3%。结论该方法准确可靠,可用于马兜铃中马兜铃酸的限量测定。

UPLC-MS/MS检测伤痛宁片中5个马兜铃酸成分

目的:测定伤痛宁片中马兜铃酸类成分的含量。方法:采用超高效液相色谱-质谱法测定伤痛宁片中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ、马兜铃酸Ⅲa、马兜铃酸AA-Ⅳa、马兜铃内酰胺Ⅰ的含量。采用Agilentporoshell C18(100 mm×2.1 mm,2.7μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱;电喷雾正离子模式,多反应监测,进样量为1μL,以基质标准曲线外标法计算伤痛宁片中5个马兜铃酸成分含量。结果:18批样品中检出马兜铃酸Ⅰ质量分数为0.01~0.05 mg·kg^(–1),马兜铃酸Ⅱ和马兜铃酸Ⅲa未检出,马兜铃酸AA-Ⅳa质量分数为0.26~1.00 mg·kg^(–1),马兜铃内酰胺Ⅰ质量分数为0.40~2.17 mg·kg^(–1)。结论:建立的含量测定方法,可为伤痛宁片及含马兜铃酸中药制剂的临床应用和安全监管提供参考。

超高效液相-质谱法测定滴通鼻炎水中马兜铃酸Ⅰ、Ⅱ的含量

目的测定滴通鼻炎水中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ的含量,为其质量控制提供借鉴。方法采用超高效液相-质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定滴通鼻炎水中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ的含量。色谱柱采用Waters-ACQUI UPLC HSS T3 C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.8μm),采用乙腈为流动相A,0.1%甲酸含1 mmol·L^(-1)乙酸铵溶液为流动相B,梯度洗脱,电喷雾离子源(ESI),正离子多反应监测模式,以标准曲线法计算含量。结果17批滴通鼻炎水中有9批样品未检出马兜铃酸Ⅰ(检出限0.13 pg),8批样品中检出马兜铃酸Ⅰ,含量在0.41~3.60 ng·mL^(-1)。所有样品中均未检出马兜铃酸Ⅱ(检出限0.41 pg)。结论建立了UPLC-MS/MS同时测定滴通鼻炎水中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ含量的方法,该方法专属性强、灵敏度高、重复性好,可为滴通鼻炎水中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ的质量控制提供参考。

UPLC-MS/MS同时测定京制咳嗽痰喘丸中马兜铃酸Ⅰ、Ⅱ的含量

目的:建立超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定京制咳嗽痰喘丸中马兜铃酸Ⅰ、Ⅱ的含量方法。方法:采用Agilent Poroshell SB-C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.7μm),以甲醇(A)-5 mmol/L甲酸铵(含0.1%甲酸),(B)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为30℃,进样量为1μL。质谱采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式下多反应监测(MRM),标准曲线法测定。结果:马兜铃酸I和马兜铃酸Ⅱ分别在1.052 4~210.48 pg(R^(2)=0.998 1,n=6)、1.002~100.2 pg(R^(2)=0.999 9,n=6)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为96.09%(RSD=2.08%)和88.05%(RSD=2.64%)。结论:该方法简便、灵敏、专属性好,可用于京制咳嗽痰喘丸马兜铃酸Ⅰ、Ⅱ的含量测定。

UPLC-MS/MS测定双辛鼻窦炎颗粒中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ的含量

目的:同时测定双辛鼻窦炎颗粒中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ的含量,为其质量控制提供参考。方法:采用超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定双辛鼻窦炎颗粒中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ的含量。采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(含1 mmol·L^(–1)乙酸铵,B)为流动相梯度洗脱,电喷雾离子源,正离子扫描,多反应监测模式,以标准曲线法计算样品中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ的含量。结果:12批双辛鼻窦炎颗粒中9批样品未检出马兜铃酸Ⅰ(检出限0.13 pg),3批样品检出马兜铃酸Ⅰ,质量分数为14.62~25.82 ng·g^(–1)。所有样品均未检出马兜铃酸Ⅱ(检出限0.44 pg)。结论:建立的UPLC-MS/MS同时测定双辛鼻窦炎颗粒中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ含量的方法,专属性强、灵敏度高、重复性好,可为双辛鼻窦炎颗粒中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ的质量控制提供参考。

马兜铃配伍生地黄对其肾毒性的影响

为了探究马兜铃与生地黄配伍对马兜铃肾毒性的影响,试验将24只8周龄SD雄性大鼠随机分为空白对照组、马兜铃组、生地黄组、配伍组并连续灌胃给药28 d。试验期间观察并记录SD大鼠的采食量、体重并在末次给药后收集大鼠24 h尿液,测定尿液中24 h尿蛋白、β2-微球蛋白(β2-MG)含量及N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性;试验结束后,采集血液,检测外周血中白细胞(WBC)和红细胞(RBC)数量,血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、肾损伤分子1(KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)含量;处死大鼠并解剖采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏,测定脏器系数;取部分肾脏进行H.E.染色,观察肾脏组织病理学变化。结果表明:与空白对照组相比,马兜铃组大鼠精神食欲欠佳,增重显著下降(P<0.05);外周血中WBC数量显著升高(P<0.05),RBC数量显著下降(P<0.05);血清中Cr、BUN、KIM-1、NGAL、TNF-α和IL-6含量均显著升高(P<0.05);尿液中24 h尿蛋白、NAG活性及β2-MG含量均显著升高(P<0.05);肾脏和肝脏系数均显著升高(P<0.05);肾单位数量减少,大量肾小管上皮细胞出现空泡或脱落,甚至出现核溶解。配伍组大鼠精神食欲状况及体重、肾脏和肝脏系数均接近空白对照组。与马兜铃组相比,配伍组外周血中WBC数量显著降低,RBC数量显著升高(P<0.05);血清中Cr、BUN、KIM-1、NGAL、TNF-α、IL-6及尿液中24 h尿蛋白、β2-MG含量及NAG活性均显著降低(P<0.05);肾组织结构基本完整,近曲小管损伤程度较轻。说明与生地黄配伍后,马兜铃肾毒性明显降低。

UPLC-MS/MS同时测定通迪胶囊中的马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ

目的:建立通迪胶囊中马兜铃酸Ⅰ(AA-Ⅰ)和AA-Ⅱ的超高效液相色谱-质谱法。方法:采用Shiseido Shim-pack velox C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(含甲酸铵,B)为流动相梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(–1),采用多反应监测,AA-Ⅰ以m/z 358.9→298.0(定量)和m/z 358.9→296.0(定性)为监测离子对;AA-Ⅱ以m/z 329.0→268.0(定量)和m/z 329.0→294.0(定性)为监测离子对,建立了液相色谱-质谱法检测方法,并对样品进行分析。结果:AA-Ⅰ在1.0524~420.9600 pg、AA-Ⅱ在1.002~100.200 ng时与峰面积线性关系良好(r>0.999),加样回收率分别为97.63%、92.34%,RSD分别为2.24%、1.49%,15批样品中AA-Ⅰ和AA-Ⅱ的质量分数分别为3.760~20.790、0.010~0.156μg·g^(–1)。结论:该方法灵敏、快速、准确、专属性强,可用于测定通迪胶囊中AA-Ⅰ和AA-Ⅱ的含量,可为通迪胶囊用药安全提供参考。

111例马兜铃酸肾病调查分析

目的分析含有马兜铃酸成分的药物引起马兜铃酸肾病的临床特点和规律。方法回顾性研究111例服用含马兜铃酸成分的药物致肾损害患者的临床资料,分析马兜铃酸肾病的临床特点、服药及治疗方法等。结果111例患者中,女性多于男性(2.58∶1),大于50岁的101例(90.99%);年龄(63.70±11.67)岁;平均用药时间(8.08±6.94)年;涉及冠心苏合丸和龙胆泻肝丸共106例(95.50%);血肌酐升高108例,尿素氮升高106例,血红蛋白降低103例,多见低比重尿、轻中度蛋白尿和潜血;B超检查示肾脏均不同程度受损。肾脏病理活检为肾小管损害。多数患者起病隐匿,进展程度不一,与年龄、服药时间不成正比,临床上肾功能呈进行性损害,多数不可逆、预后较差。结论肾损害患者个体差异较大,肾损伤与服用马兜铃酸药物时间长短、剂量不平行;马兜铃酸肾病进展迅速,且停止服用含马兜铃酸药物后病情依然进展。加强药物警戒工作,实施早期的诊断和有效的干预,有助于减少马兜铃酸肾病的发生,延缓其发展。

马兜铃提取条件的优化以及炮制减毒的研究

采用单因素试验考察药材粒径、加水量、煎煮时间和煎煮次数4个因素对马兜铃中马兜铃酸A提取效果的影响。运用HPLC测定炒制马兜铃与蜜炙马兜铃中马兜铃酸A的含量。结果表明马兜铃的最佳提取条件为粒径1cm2,加水22倍量,煎煮2次,每次1.0h。马兜铃炒制和蜜炙均可降低毒性成分马兜铃酸A的含量,蜜炙使马兜铃酸A的含量降低了51.77%,减毒效果明显优于炒制。

绵毛马兜铃油的镇痛和中枢抑制作用

绵毛马兜铃〔Aristolochia mollissima ance〕为马兜铃科马兜铃属植物,药材名为寻骨风。全草入药,可祛风湿、通经络、治筋骨痛等病。马兜铃地下茎含马兜铃酸和挥发油等成分。挥发油成分复杂,已知含有马兜铃内酯、马兜铃酮等20多种成分。挥发油有较好的抗炎作用。本文对马兜铃油的镇痛作用和中枢抑制作用进行了研究。报告如下。

含马兜铃酸的中药现状及相关问题思考

马兜铃酸的安全性问题引起国际社会的广泛关注。我国是中药资源大国,马兜铃科马兜铃属和细辛属中药材均含有马兜铃酸类成分,这引起了人们对使用含马兜铃酸中药安全性的担忧。研究者从不同角度回答了马兜铃酸的安全风险问题,国家也出台了多项措施控制马兜铃酸的安全风险。从化学、毒性、检测等多方面系统综述了含马兜铃酸中药的现状并提出了合理化建议,可为其进一步研究和科学监管提供参考。

马兜铃科植物Aristolochia triangularis的生物碱成分研究

从马兜铃科植物Aristolochia triangularis的根部分离出十五个生物碱成分，其中两种成分triangularine-A和triangularine-B系列生物碱，三种系阿卟啡类季胺碱，这些化合物的结构经各种波谱（IR，UV，MS，2D NMR）解析和化学转化技术得以确定。

急性马兜铃酸I中毒小鼠肾小管上皮细胞损伤变化

为连续观察急性马兜铃酸I (Aristolochic Acids I, AAI)中毒时小鼠肾脏病理学改变,本实验将40只KM小鼠分为5组:对照组、AAI暴露2、4、6、8天组,AAI组小鼠以5 mg/kg/2d AAI灌胃模拟急性马兜铃酸肾病(Aristolochic Acid Nephropathy, AAN),使各组小鼠AAI累积剂量分别为5、10、15、20 mg/kg。分别于AAI暴露2、4、6、8天处死,检测其肾功能指标肌酐(Creatinine, Cre)和尿素氮(Blood Urea Nitrogen, BUN),并观察肾脏病理学改变。结果显示,与对照组相比,AAI各组小鼠Cre和BUN均呈剂量依赖性上升,Cre于第6、8天具有显著性差异(P P < 0.05)。AAI组小鼠主要病理变化为肾小管上皮细胞顶端微绒毛脱落、细胞水肿、坏死脱落。本研究发现暴露于AAI的小鼠肾小管损伤程度与AAI累积剂量呈正相关。

急性马兜铃酸肾病小鼠C-Myc和Cyclin D1的表达变化

为探索急性马兜铃酸肾病(Aristolochic Acid Nephropathy, AAN)过程中细胞损伤后的再生与修复,本实验将40只KM小鼠分为5组:对照组、AAI暴露2、4、6、8天组,AAI组小鼠以5 mg/kg/2d AAI灌胃模拟AAN,使各组小鼠AAI累积剂量分别为5、10、15、20 mg/kg。分别于AAI暴露2、4、6、8天处死,观察肾脏病理学改变,并进行免疫组化染色观察C-myc和Cyclin D1蛋白表达情况。结果显示,与对照组相比,AAI组小鼠C-myc于第2天开始下降,第4天、6天、8天上升;Cyclin D1于AAI暴露第2天、4天下降,第6天、8天升高。本研究可得出结论暴露于AAI的小鼠C-myc和Cyclin D1蛋白表达随AAI累积剂量增加呈“先降后升”趋势。

马兜铃属(Aristolochia)植物的化学成分

马兜铃属(Aristolochia)植物全世界约有200种,有37种进行过化学成分研究。自该属植物中得到并签定的化学成分有140种,分别属于马兜铃酸类及其衍生物、生物碱类、萜类及甾体化合物、黄酮类、苯丙素酚类和其它类化合物。本文介绍了这些化合物的名称、结构式及存在的植物等。重点介绍了植物界中罕见的含硝基菲类有机酸(马兜铃酸类)及其衍生物,并指出这类化合物结构规律性。在马兜铃属植物中以马兜铃酸A、B、C、D(aristolochic acid A、B、C、D)、马兜铃内酰胺(aristololactam)、木兰碱(magnoflorine)、β-谷甾醇(β-sitosterol)及尿囊素(all-antoin)分布较普遍,尤以马兜铃酸A存在最广泛。

马兜铃酸Ⅰ致癌作用及其与代谢酶关系的研究进展

马兜铃酸(aristolochic acid,AA)广泛存在于马兜铃科马兜铃属中草药中,是马兜铃酸肾病(aristolochic acid nephropathy,AAN)的致病因素,此类肾病患者可伴发泌尿系统肿瘤,阐明马兜铃酸的致癌机制成为其毒性研究的一大焦点。马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)是马兜铃酸的主要毒性成分,其在体内经氧化还原后活化,与DNA共价结合形成加合物而诱发癌变。本文综述参与AAⅠ氧化还原的代谢酶及其代谢过程在AAⅠ致癌中的作用。

管花马兜铃化学成分的研究

从管花马兜铃（ＡｒｉｓｔｏｌｃｈｉａｔｕｂｆｌｏｒａＤｕｎｎ）中分得一个新化合物，经光谱（ＩＲ，ＵＶ，ＨＲＭＳ，ＨＮＭＲ，ＮＯＥＤＳ）鉴定为９，１Ｏ－二羟基－８－甲氧基－３，４－亚甲二氧基菲－１－羧酸－内酯，命名为马兜铃菲内酯Ｉ；另七个马兜铃菲类化合物是马兜铃酸Ⅰ，Ⅱ，Ⅲａ，Ⅶａ，马兜铃内酰胺Ⅰ，Ⅱ及青木香酸。