Box-Behnken响应面法优选低共熔溶剂提取马蹄金总黄酮工艺

目的 优选低共熔溶剂提取马蹄金总黄酮的工艺。方法 以低共熔溶剂体系摩尔比、含水量、超声功率、超声时间为单因素变量,以马蹄金中黄酮类成分提取率为评价指标,采用Box-Behnken响应面法优选总黄酮提取工艺,并进行验证试验。结果 优选的提取工艺为低共熔溶剂氯化胆碱-乳酸(摩尔比1∶2),含水量为70%,超声(功率为180 W)提取30 min。验证试验结果显示,在此条件下的总黄酮提取率与回归模型预测值的相对误差为0.55%。结论 该优选工艺操作简便、重复性好,可用于马蹄金总黄酮的提取。

气相色谱-串联质谱法分析不同产地马蹄金挥发性成分

为探究不同产地马蹄金的挥发性成分,建立气相色谱-串联质谱法对河北、广西、四川、贵州、浙江5个产地的马蹄金样品挥发性成分进行测定,采用面积归一化法计算各成分的相对含量。称取0.5 g马蹄金样品,以乙酸乙酯为提取溶剂,冷浸2 h,低温超声提取30 min,滤液作为样品溶液。通过谱库检索,5个产地马蹄金的挥发性成分中共鉴定出有机酸、醇、烯、酯、烷烃等35种化合物,其中14种是共有成分,6种是产地特有成分,相对含量较高的挥发性成分分别为十六烷酸、亚油酸、桦木醇、α-亚麻酸、β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇,相对含量分别为27.99%、13.14%、12.91%、11.83%、11.64%、8.16%、5.28%。该方法可对马蹄金中多种挥发性成分进行定量分析,为马蹄金的质量控制和药效研究提供参考。

马蹄金素衍生物抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭与迁移的分子机制

目的探讨马蹄金素衍生物HXL130对前列腺癌PC3细胞的增殖、侵袭及迁移的影响及其分子机制。方法采用MTT法检测HXL130对PC3细胞增殖的影响,Hoechst 33258染色和流式细胞术检测对癌细胞凋亡以及对其细胞周期的影响,运用Transwell法检测对癌细胞侵袭与迁移的影响;运用蛋白组学测序技术检测化合物处理癌细胞引起的差异表达蛋白(DEPs),分析DEPs的功能及其调控的相关信号通路,并运用Western blot进行验证。结果PC3细胞成活率随着HXL130浓度和时间的增加而降低,且可明显的诱导细胞凋亡和阻滞G 2期,并可明显的抑制PC3细胞的侵袭和迁移能力;蛋白质组学分析表明,HXL130处理癌细胞引起67个蛋白发生差异表达,包括51个上调蛋白和16个下调蛋白,其主要参与PI3K-AKT、MAPK、细胞凋亡及内质网蛋白处理相关信号通路;Western blot结果研究表明HXL130可明显促进细胞中上述信号通路中的关键蛋白PERK、p-elF2α、CHOP、Bax蛋白表达,抑制Bcl-2、MMP1和VEGF的蛋白表达。结论马蹄金素衍生物HXL130可抑制PC3细胞的增殖和转移,其分子机制主要涉及到PI3K-AKT、MAPK、细胞凋亡及内质网蛋白处理相关信号通路的调控。

马蹄金中10种真菌毒素UPLC-MS/MS检测方法的建立

建立马蹄金中10种真菌毒素的测定方法.基于QuEChERS法对样品进行前处理,应用UPLC-MS/MS法进行样品检测,色谱柱:Boltimate C_(18)(2.1×100 mm,2.6μm);流动相:0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱;流速:0.3 mL/min;进样量:1μL;电离模式:正、负离子同时电离;监测采集模式:MRM(多反应监测模式);定量分析方法:基质标准曲线法.结果表明,在各自浓度范围内,10种真菌毒素均有良好线性关系,10种真菌毒素检出限为(0.2~13.6μg/kg),定量限为(0.7~45.3μg/kg),回收率为82.5%~109.2%,RSD为1.1%~5.8%.不同来源的样品中真菌毒素检出率为70%,污染值范围分别为AFB1(0.8~3.9μg/kg)、AFG1(0.9μg/kg)、OTA(2.0~7.5μg/kg)、ZEN(11.6~58.7μg/kg)、FB1(28.6~43.0μg/kg)、DON(79.4~139.3μg/kg).该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高,适用于马蹄金中10种真菌毒素的快速测定.

两种马蹄金素衍生物体内抗HBV药效学研究

目的:比较两种马蹄金素衍生物的体内抗HBV活性。方法:通过高压尾静脉注射pAAV-HBV1.2质粒进入C57BL/6J小鼠体内的方法,建立慢性HBV感染的小鼠模型;选取建模成功的小鼠,随机分为4组,即阴性对照组、阳性对照组和马蹄金素衍生物-1组、-2组,每组10只,分别腹腔注射200μL体积的PBS、阳性药物Birinapant 30 mg/kg、马蹄金素衍生物-1和-2(均为20 mg/kg),每周给药1次,连续给药4周。观察各组治疗前后的抗HBV病毒效果,并进行治疗后肝组织病理形态检测。结果:治疗后,马蹄金素衍生物1组和马蹄金素衍生物2组血清中HBsAg、HBeAg、AST和ALT显著性下降(P<0.05);与阳性对照组相比较,下降程度无明显区别(P>0.05);肝组织病理对比,各组间无显著区别。结论:马蹄金素衍生物具有一定的体内抗HBV作用。

野生和栽培马蹄金抗旱性比较及其抗旱机制初探

为了鉴别野生和栽培马蹄金(Dichondra repens)的抗旱性,探讨其抗旱适应性的生理机制,对野生和栽培马蹄金进行了土壤水分胁迫处理,系统测定了野生和栽培马蹄金叶片内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、硝酸还原酶的活性和游离脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白、NO2-/NO3-含量以及总DNA片断化程度。结果表明野生和栽培马蹄金在抗旱适应性上存在显著差异。随水分胁迫强度的增加,野生马蹄金叶片内抗氧化酶活性及其升高幅度,渗透调节物质的积累量及积累速度均高于栽培马蹄金,而叶片含水量下降的程度、DNA片断化程度低于栽培马蹄金,其中野生和栽培马蹄金叶片内NO2-/NO3-含量,硝酸还原酶的活性变化差异尤其显著,野生马蹄金叶片内的NO2-/NO3-含量、硝酸还原酶的活性明显高于栽培马蹄金,二者最大含量分别相差10和2.2倍。研究结果说明了野生马蹄金对干旱环境的适应性强于栽培品种;在干旱逆境下马蹄金叶片内的NO2-/NO3-含量的变化在一定程度上可能反映了内源NO的变化,内源NO浓度的高低可能是野生和栽培马蹄金不同抗性的真正原因。

一朝遇祥瑞 千年马蹄金

国家珍藏,流通货币,还是带着祈愿的祭祀器物?对于辽宁地区出土的三块被称为马蹄金的纯金金块,学界一直存有不同声音。虽然用途有争议,但学界对这三块马蹄金的铸造年代与铸造主人已经取得了共识,即它们为西汉时期汉武帝所造。这三块马蹄金,也印证了一个不争的事实,那就是远在两千多年的西汉,辽宁大部分地区已经纳入了中原政权的版图。

马蹄金褐色叶斑病菌的生物学特性

马蹄金褐色叶斑病菌(Pyrenophora dichondrae sp.nov.)在PDA上生长和产孢最好,菌丝生长和产孢的适温为25～28℃,适宜pH5～7,全黑暗促进产孢,全光照促进菌丝生长。对碳源的利用以葡萄糖最好,麦芽糖最差;对氮源的利用以硝酸钙最好,氯化铵最差。孢子萌发的最适温度为20～28℃,最适相对湿度为90%～100%,最适pH6～8,最适于孢子萌发的碳源为葡萄糖,氮源是硝酸钠。子囊孢子致死温度是49℃。

马蹄金愈伤组织诱导及植株再生研究

以马蹄金无菌苗的下胚轴、子叶和叶片作为外植体 ,结合不同植物生长调节剂组合和不同基本培养基 ,探讨了马蹄金离体培养的方法和影响因素。结果表明 ,不同植物生长调节剂组合的培养基对愈伤组织诱导频率有显著影响 ,以MS培养基作愈伤组织诱导的基本培养基效果较好 ,使用MS +1.0mg/L 2 ,4 -D +0 .2mg/L6 -BA或MS +1.0mg/L 2 ,4 -D +0 .2mg/LKT作为愈伤组织诱导培养基 ,对 3种外植体愈伤组织诱导的效果均较好 ,出愈率均为 10 0 % ,而且愈伤组织质地好、生长旺盛 ,再用MS +0 .1mg/L 2 ,4 -D +2 .0mg/L 6-BA +3.0mg/LAgNO3 作愈伤组织分化培养基出苗效果最佳 ,愈伤组织分化频率达 2 0 .7%。

马蹄金化学成分的研究

目的 分离鉴定马蹄金全草的化学成分。方法 采用硅胶柱色谱等方法对马蹄金进行分离纯化 ,用IR ,MS ,1 H NMR ,1 3C NMR鉴定化合物。结果 分离得到 7个化合物 :β 谷甾醇 (Ⅰ ) ,香荚兰醛 (Ⅱ ) ,正三十八烷 (Ⅲ ) ,麦芽酚 (Ⅳ ) ,乌苏酸 (Ⅴ ) ,东莨菪素 (Ⅵ ) ,伞形花内酯 (Ⅶ )。

马蹄金提取物镇痛、抗炎及抑菌作用的实验研究

目的 :探讨马蹄金提取物的镇痛、抗炎及抑菌作用 ,以验证该药的相关功效。方法 :用小鼠扭体法、热板法及电刺激法观察其镇痛作用 ;以小鼠腹腔毛细血管通透法、小鼠耳肿法及大鼠足肿法观察其抗炎作用 ;以微生物试验琼脂法、钢管法及试管法观察其抗菌作用。结果 :实验数据经t检验统计 ,表明具有镇痛作用 ,以中剂量组作用显著 ;有抗炎作用 ,以大剂量组作用显著 ;其提取物对金黄色葡萄球菌及乙型溶血性链球菌等致病革兰氏阳性球菌有较强的抗菌作用。结论 :实验结果表明 ,民族药马蹄金提取物具有较好的镇痛、抗炎及抗菌作用 ,此与其相关的中医临床功效及主治相符 。

马蹄金叶片中铜、铅含量及其对生理指标的影响

研究了草坪草马蹄金对不同污染土壤的Cu、Pb含量 .结果表明 ,马蹄金体内Cu含量 (4 4 8mg·kg-1)高于Pb含量 (2 5 5 9mg·kg-1) 两种元素在体内的分布特征是根、茎 >叶 (P <0 0 5 ) ,并随着土壤内重金属含量增加而增加 ,但富集系数呈下降趋势 ;马蹄金对Cu的富集系数 (0 784 )高于Pb的富集系数(0 4 6 5 ) .自然状态下不同程度Cu、Pb复合污染对马蹄金叶片细胞膜及细胞保护系统的影响结果表明 ,随着Cu、Pb浓度增加 ,叶片内叶绿素a、叶绿素a/b分别由 1 6 10mg·g-1FW和 4 10 0下降到 1 0 17mg·g-1FW和 2 2 99;SOD活性先升高至 10 6 4 94U·g-1FW ,随后下降至 86 2 5 8U·g-1FW ;POD活性则逐渐增加 ;

马蹄金素衍生物的合成及抗乙肝病毒活性

以化合物马蹄金素[N-(N-苯甲酰基-L-苯丙氨酰基)-O-乙酰基-L-苯丙氨醇,MTS]为先导化合物,设计并合成了10个马蹄金素衍生物,所有化合物均为新化合物,其结构经NMR、ESI-MS确认。以HepG2 2.2.15细胞为乙肝病毒载体,对合成的马蹄金素衍生物进行了抗乙肝病毒活性测试。结果表明,在测试浓度范围内,化合物5e(IC50:10.67μmol/L,SI:47.26)、4c(IC50:11.09μmol/L,SI:15.03)、4b(IC50:19.75μmol/L,SI:4.74)、5b(IC50:59.55μmol/L,SI:3.00)和5a(IC50:77.69μmol/L,SI:5.81)对乙肝病毒DNA复制的抑制活性高于阳性对照药物拉米夫定(IC50:82.42μmol/L,SI:41.59)。其中,化合物5e(IC50:10.67μmol/L,SI:47.26)的抑制活性最强,选择指数较高,具有进一步研究开发的价值。

不同生长调节剂对马蹄金愈伤组织诱导的影响

马蹄金是一种优良的地被兼观赏草坪植物。采用正交设计试验法 ,研究了四种不同生长调节剂对马蹄金子叶、叶片、叶柄和下胚轴愈伤组织诱导的影响。结果表明 :生长调节剂是诱导愈伤组织的关键 ,2 ,4 D对愈伤组织诱导具有显著的影响 ,适宜于马蹄金愈伤组织诱导的培养基及生长调节剂为MS +1 .0mg/L 2 ,4 D +0 .2mg/L 6 BA +0 .2mg/LKT +1 .0mg/Lα NAA。

干旱胁迫下马蹄金草坪反射光谱研究

通过在不同灌水处理下马蹄金草坪干旱胁迫试验，对草坪反射光谱的变化及所对应的叶片相对含水量、叶绿素含量以及草坪外观变化进行测定。结果表明：不同灌水处理下马蹄金草坪反射光谱在可见光波段呈规律性变化。随着干旱胁迫程度的加重，其光谱反射率随土壤含水量逐渐降低而依次升高，在波峰（556mm）和波谷（679mm）处尤为明显，蓝光（400～475mm）和红光（580～700mm）范围的反射光谱增加，与叶绿素含量呈正相关。在同一灌水处理中，草坪可见光范围反射光谱随干旱的加剧而增加，且与马蹄金植株叶片相对含水量呈显著负相关，与草坪叶绿素含量则呈正相关，且叶片相对含水量与反射光谱的相关性高于叶绿素含量与反射光谱的相关性，它们之间的关系可以用直线回归方程来表示。

马蹄金素杂环衍生物的合成及抗乙肝病毒活性

以马蹄金素[N-(N-苯甲酰基-L-苯丙氨酰基)-O-乙酰基-L-苯丙氨醇,MTS]为先导化合物,设计并合成了16个杂环取代的马蹄金素衍生物,其结构经NMR,ESI-MS和元素分析确证.以HepG2 2.2.15细胞为乙肝病毒(HBV)载体,对合成的马蹄金素衍生物进行了抗HBV活性测试.实验结果表明,在测试浓度范围内,化合物5b(IC50=8.20μg/L,SI=10.26),5g(IC50=5.58μg/L,SI=22.78)和5i(IC50=5.07μg/L,SI=16.67)的抗HBV活性较强;在8μg/mL的浓度下,其抑制率分别为56.57%,67.06%和66.83%.

不同光照强度对马蹄金叶的特征及总黄酮含量的影响

以马蹄金叶为研究对象,利用遮荫网设置光照梯度(透光率分别为:对照100%、76.19%、59.27%、38.09%),对其形态特征及总黄酮含量进行测定和分析。结果表明:(1)随着光照强度的降低,马蹄金叶片的长度、宽度及厚度均表现出先增大后减小的趋势,在76.19%透光率下达到最大值;叶柄长度随着光强的减弱而增长,叶片的形态并未发生显著变化。(2)光照强度对马蹄金叶片总黄酮含量有影响,透光率为76.19%时,马蹄金叶中总黄酮含量最高。分析表明76.19%的透光率有利于马蹄金的生长并能提高马蹄金叶中总黄酮的含量。

马蹄金草坪草对干旱胁迫的生理响应研究

为明确马蹄金（Dichondra repens Forst）对干旱胁迫的生理响应机理,采用盆栽法研究不同灌溉梯度下马蹄金草坪草叶片相对含水量、丙二醛、可溶性糖、叶绿素、游离脯氨酸的含量和超氧化物歧化酶活性的变化,探讨马蹄金草坪草的抗旱性问题,为马蹄金草坪的建植和养护管理提供依据.结果表明：干旱胁迫下马蹄金叶片相对含水量和叶绿素含量显著下降,超氧化物歧化酶活性呈先急剧增加,后又急剧下降的变化趋势,丙二醛、可溶性糖和游离脯氨酸的含量显著上升,以胁迫12～16 d下降或上升幅度最大.因此,马蹄金对干旱胁迫表现为一定的耐旱性,但干旱胁迫到一定程度（胁迫12d左右）,需对其进行浇水养护,防止其萎蔫枯黄.

不同外植体对马蹄金愈伤组织诱导及分化的影响

从不同外植体的生长时间、切取方式和光照条件诸因素探讨了对草坪地被植物马蹄金Dichondrarepens愈伤组织诱导及分化的影响作用。结果表明 :下胚轴和子叶的生长时间只对愈伤组织诱导的始愈时间和生长势有影响 ,生长期越短 ,则始愈时间缩短 ,愈伤组织生长势强 ,而对出愈率、愈伤组织状态和愈伤组织分化率无明显作用 ;光照和黑暗培养只对下胚轴诱导愈伤组织的生长状态有影响而对子叶诱导愈伤组织无作用 ;外植体的不同切取方式对愈伤组织诱导的始愈时间有影响 ,经切取后可缩短始愈时间 ;仅从完整子叶离体培养诱导愈伤组织获得了再生植株 ,其分化频率为 13 9%～ 18 6 %。

草坪草马蹄金与结缕草种子萌发期抗旱性比较

通过不同浓度分子量为6 000的聚乙二醇(PEG)溶液模拟干旱的方法及不同土壤含水量下成坪速度的试验,比较了马蹄金Dichondra repens与结缕草Zoysia japonica种子萌发期抗旱性强弱。结果表明,马蹄金、结缕草的发芽势随干旱胁迫强度的增加呈下降趋势,马蹄金比结缕草更易受影响,导致出芽整齐度降低;马蹄金种子萌发期抗旱性临界值为-11 bar,结缕草为-7 bar,若以发芽率作为抗旱性衡量标准,则马蹄金种子萌发期抗旱性比结缕草强;短期的轻度土壤水分胁迫有利于马蹄金和结缕草的成坪,严重土壤水分胁迫使成坪速度明显减慢,且结缕草比马蹄金更易受影响。