马钱子总生物碱对实验性关节炎的影响

目的 :观察马钱子总生物碱及士的宁对实验性关节炎的影响。方法 :从马钱子中提取生物碱并进一步分离出番木鳖碱 (士的宁 )、总生物碱 (除去部分士的宁 )、非生物碱 3个部分 ,观察各部分对角叉菜胶引起的大鼠足肿胀及棉球致肉芽组织增生的影响。结果 :总生物碱部分能明显抑制大鼠足肿胀 ,第 4,5 ,6小时抑制率分别为 19.76% ,3 0 .0 2 % ,3 6.89% ;明显抑制大鼠肉芽组织增生 ,抑制率 3 7.60 % ,士的宁及非生物碱部分对上述炎症无明显影响。结论 :总生物碱具有抗炎作用 。

马钱子总生物碱缓释片处方和工艺的研究

以羟丙基甲基纤维素(HPMC)为骨架材料,制备马钱子生物碱缓释片,建立马钱子生物碱缓释片释放度的HPLC测定方法,并考察其体外释放度.采用HPLC测定马钱子生物碱缓释片的体外释放度,并对影响释药的因素进行了单因素考察.羟丙甲纤维素(HPMC)的规格和用量对释药速率有显著影响,马钱子生物碱缓释片的体外释放曲线基本符合Higuchi方程.本法制备的缓释片比普通片具有明显的缓释作用.该制备工艺简单易行,生产成本低,片剂外观及可压性良好.

马钱子总生物碱树脂复合物的制备及结合机制

确定制备马钱子总生物碱强酸型阳离子交换树脂复合物的最佳工艺并确定总生物碱与树脂结合机制.采用静态交换法,用强酸型阳离子交换树脂作为药物载体,马钱子总生物碱为模型药物,以士的宁和马钱子碱为指标成分,通过对树脂类型、树脂粒径大小、溶解总生物碱溶液的离子强度、总生物碱与树脂用量比例和反应温度的研究,考察不同条件下指标性成分进行离子交换反应的速率和平衡问题.静态交换法制备马钱子总生物碱-树脂复合物的最佳工艺为:用0.1 mol/L HCl溶液溶解总生物碱,配制成质量浓度为2 mg/mL的马钱子总生物碱溶液,与粒径在160～180目(0.080～0.096mm)的H+型离子交换树脂在50℃反应,经差示扫描检测马钱子总生物碱与离子交换树脂是通过离子键结合而非简单的物理吸附.

磷脂组成对马钱子总生物碱隐形脂质体体外抗肿瘤作用的影响

目的比较3种不同磷脂,其组成为大豆磷脂(SPC)、氢化大豆磷脂(HSPC)、复合磷脂(SPC∶HSPC为3∶1,摩尔比)马钱子总生物碱隐形脂质体的体外肝癌细胞SMM7721的摄取特性与抗肿瘤作用。方法硫酸铵梯度法制备马钱子总生物碱隐形脂质体并考察其基本药剂学性质,MTT法比较马钱子总生物碱溶液和3种不同磷脂组成隐形脂质体的抗肿瘤效果,流式细胞仪技术测定肝癌细胞对香豆素-6标记的3种不同磷脂组成隐形脂质体的摄取率。结果不同磷脂组成马钱子总生物碱隐形脂质体的体外抗肿瘤效果与SMMC-7721细胞摄取量均具有显著差异,马钱子总生物碱溶液、复合磷脂隐形脂质体、SPC隐形脂质体、HSPC隐形脂质体的IC50分为64.4、17.8、29.6、40.9μg/mL,肝癌细胞对香豆素-6标记的复合磷脂隐形脂质体、SPC隐形脂质体、HSPC隐形脂质体的转染率分别为92.1%、86.2%、18.6%。结论复合磷脂脂质体作为马钱子总生物碱的载体,能显著提高药物进入肝癌细胞的摄取量,增强体外抗肿瘤效果,为临床用药提供了理论依据。

马钱子总生物碱对家兔实验性变态反应性神经炎细胞免疫机制影响的研究

目的通过马钱子总生物碱对实验性变态反应性神经炎(EAN)家兔淋巴细胞转化影响的实验研究,初步探讨马钱子总生物碱对家兔实验性变态反应性神经炎治疗作用的细胞免疫机制。方法应用牛坐骨神经提取的MBP(髓鞘碱性蛋白)免疫家兔建立EAN动物模型,应用国际分级标准和临床评分对发病家兔进行临床评定。采用MTT法测取家兔脾脏淋巴细胞增殖率,获取淋巴细胞转化率。结果通过统计学处理,体内外实验均表明该药能够明显降低家兔T淋巴细胞转化率(P<0.05)。结论马钱子总生物碱调节亢进的T淋巴细胞反应性,降低增值能力,可能是该药治疗GBS机理之一。

马钱子总生物碱缓释片稳定性的初步研究

目的:考察马钱子总生物碱缓释片的稳定性。方法:按《中国药典》相关规定的方法进行高温、高湿、光照、暴露空气、加速和长期试验考察。结果:在不同条件下,马钱子总生物碱缓释片的性状、杂质检查、释放度以及含量等均符合规定。结论:经初步考察,马钱子总生物碱缓释片具有良好的稳定性。

马钱子总生物碱树脂微囊分散片的处方确定

目的:确定马钱子总生物碱树脂微囊分散片的最佳处方。方法:以不同处方比例制备分散片,以分散片的外观、片重、硬度、崩解时限、分散均匀性及溶出度等作为考察指标,采用正交设计法分析筛选最优处方。结果:最佳分散片处方为微晶纤维素为填充剂,交联聚乙烯吡咯烷酮和碳酸氢钠与枸橼酸为联合崩解剂,卡波姆和羧甲基纤维素钠联合应用为助悬剂,滑石粉为润滑剂。结论:马钱子总生物碱树脂微囊分散片的外观、片重差异、崩解时限、分散均匀性、含量等均符合2010年版《中国药典》要求。

马钱子总生物碱对髓鞘碱性蛋白Ⅱ致敏家兔淋巴细胞的影响

目的:观察马钱子总生物碱对髓鞘碱性蛋白Ⅱ致敏的家兔淋巴细胞的影响。方法:使用髓鞘碱性蛋白Ⅱ对提取的健康家兔的淋巴细胞进行致敏,测定淋巴细胞的活化增殖水平及马钱子总生物碱引起的P2致敏后的淋巴细胞的转化水平的变化。结果:阴性孔的淋巴细胞活化水平均显著高于空白孔P<0.01,给药孔的淋巴细胞活化水平较阴性组明显降低。结论:马钱子总生物碱能明确抑制淋巴细胞活化增殖水平。

基于PI3K/Akt/mTOR通路探究马钱子总生物碱对类风湿性关节炎大鼠的作用及机制

目的:分析马钱子总生物碱对类风湿性关节炎(RA)大鼠的作用及对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)通路的影响。方法:50只Wistar大鼠随机分为对照组、RA组、RA+马钱子总生物碱组(100 mg·kg^(-1))、RA+PI3K抑制剂组(20 mg·mL^(-1)LY294002)、RA+马钱子总生物碱+PI3K激活剂组[100 mg·kg^(-1)马钱子总生物碱+20μg·kg^(-1)胰岛素样生长因子1(IGF-1)],除对照组外,其余各组均构建RA模型并根据剂量给药,计算每只大鼠关节评分,测定大鼠血清抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)、丙二醛(MDA)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察评估大鼠膝关节滑膜组织病理,比较各组Mankin评分、炎细胞浸润数、软骨厚度;测定滑膜组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核转录因子(NF)-κB受体活化因子配体(RANKL)水平;蛋白免疫印迹(Western blot)测定大鼠滑膜组织PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达。结果:1)对照组大鼠关节软骨组织结构正常,表面光滑完整,腔隙内组织有良好的完整软骨细胞;RA组关节表面广泛侵蚀,形态无规则,软骨细胞明显丢失,炎性细胞大量浸润,关节软骨厚度低,细胞间基质显著丢失,滑膜中单核炎性细胞浸润可见;RA+马钱子总生物碱组、RA+PI3K抑制剂组呈现保护性体征,关节表面侵蚀降低,炎性细胞浸润减轻,关节软骨厚度增加;与RA+马钱子总生物碱组相比,RA+马钱子总生物碱+PI3K激活剂组关节软骨损伤加重。2)与对照组相比,RA组大鼠关节炎症评分、血清ACPA及MDA水平、Mankin评分、炎细胞浸润数、滑膜组织IL-1β、IL-6、TNF-α、RANKL升高(P<0.05),软骨厚度降低(P<0.05);与RA组相比,RA+马钱子总生物碱组、RA+PI3K抑制剂组大鼠关节炎症评分、血清ACPA及MDA水平、Mankin评分、炎细胞浸润数、滑膜组织IL-1β、IL-6、TNF-α、RANKL降低(P<0.05),软骨厚度升高(P<0.05);与RA+马钱子总生物碱组相比,RA+马钱子总生物碱+PI3K激活剂组大鼠关节炎症评分、血清ACPA及MDA水平、Mankin评分、炎细胞浸润数、滑膜组织IL-1β、IL-6、TNF-α、RANKL升高(P<0.05),软骨厚度降低(P<0.05)。3)与对照组相比,RA组大鼠滑膜组织磷酸化(p)-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR升高(P<0.05);与RA组相比,RA+马钱子总生物碱组、RA+PI3K抑制剂组大鼠滑膜组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR降低(P<0.05);与RA+马钱子总生物碱组相比,RA+马钱子总生物碱+PI3K激活剂组大鼠滑膜组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR升高(P<0.05)。结论:马钱子总生物碱可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路缓解RA大鼠炎症。

马钱子碱、马钱子总生物碱与马钱子粉在大鼠体内药动学的比较

目的:研究马钱子碱、马钱子砂烫炮制品总生物碱与马钱子粉在大鼠体内的药动学规律,探寻单成分与整体之间的相互影响。方法:给各组大鼠分别灌胃给予马钱子碱溶液、马钱子砂烫炮制品总碱溶液及马钱子粉混悬液,采用高效液相色谱测定大鼠体内马钱子碱的血浆浓度,血药浓度-时间曲线经3P97软件包进行房室模型拟合并计算和比较各组药物动力学参数。结果:马钱子碱在大鼠体内的代谢过程符合二室模型,权重W=1/C2,方差分析结果表明,相同剂量的马钱子碱在3组不同的存在形式中,马钱子碱溶液组与马钱子砂烫炮制品总生物碱组在Cmax,MRT有显著性差异(P<0.05);马钱子碱溶液组与马钱子粉混悬液组在Cmax,AUC0-t,AUC0-∞有显著性差异(P<0.05),其中马钱子粉混悬液组值最小。结论:马钱子砂烫炮制品总生物碱组可相对延长马钱子中有效成分马钱子碱的血浆滞留时间,马钱子粉混悬液组的生物利用度较低。

星点设计-响应面法优选马钱子总生物碱微囊制备工艺

目的:优选马钱子总生物碱微囊的制备工艺,对马钱子总生物碱微囊的质量及毒性进行评价初步研究。方法:以壳聚糖、明胶为囊材,采用复乳化-交联法制备马钱子总生物碱微囊,通过星点设计-响应面法优选其制备工艺,并对微囊的载药量、包封率、产率、表征、粒径分布等质量评价指标进行考察。通过急性毒性试验考察马钱子总生物碱微囊的LD50值。结果:马钱子总生物碱微囊最佳工艺处方为壳聚糖质量浓度为1.5%,明胶质量浓度为11%,囊芯囊材质量比为1∶1,戊二醛用量为2m L。载药量为17.84%、包封率为70.31%、产率为91.66%。外观呈圆球形、表面较为光滑、未出现粘连现象,粒径分布较集中,平均粒径为112.47μm。马钱子总生物碱微囊LD50为236.59mg/kg,是马钱子总生物碱的2.23倍。结论:以最佳工艺处方制备马钱子总生物碱微囊工艺合理、稳定,综合质量评价结果表明该微囊质量较好,同时急性毒性试验表明,微囊的LD50较原总生物碱有一定程度的提高,安全性进一步提高,推测可能与缓释过程有关。

马钱子减毒总生物碱的制备及毒性

目的制备去除大部分士的宁的马钱子减毒总生物碱,并考察马钱子总生物碱减毒前后成分及毒性的变化。方法用不同体积分数的乙醇溶解马钱子总生物碱,经磁力搅拌、离心后制备得到马钱子减毒总生物碱,HPLC法测定马钱子减毒总生物碱中马钱子碱和士的宁的量。用Q-TOF-MS技术比较鉴定了马钱子总生物碱减毒前后的主要生物碱类成分。通过小鼠口服急性毒性试验考察了马钱子总生物碱减毒前后的毒性变化情况。结果以20%乙醇为溶剂制备的马钱子减毒总生物碱去士的宁效果最好,同时不影响其他19种生物碱类含有量。小鼠口服急性毒性LD50实验表明马钱子减毒总生物碱与马钱子总生物碱的LD50分别为31.08 mg/kg、10.92 mg/kg。结论马钱子总生物碱中士的宁占38.49%,减毒后仅占14%,减毒工艺提高了马钱子总生物碱临床使用的安全性。

马钱子总生物碱中其他生物碱对马钱子碱体外透皮吸收性质的影响

目的:考察马钱子总生物碱中马钱子碱透皮吸收性质。方法:测定总生物碱中马钱子碱的油水分配系数;用改良的Franz扩散池法,选择离体大鼠腹部皮肤为渗透屏障,高效液相色谱(HPLC)法测定其中马钱子碱的浓度。结果:与马钱子碱对照品相比,总生物碱中马钱子碱在pH 5,7.4,9的磷酸盐缓冲液(PBS)中的油水分配系数均无显著性差异;在pH 7.4和9的PBS中,透皮吸收速率分别提高1.40和1.26倍(P<0.05),累积透过率也有显著提高(P<0.05),而在pH 5的PBS中透皮吸收性质无显著性差异。结论:总生物碱中其他生物碱在游离型状态时对马钱子碱的透皮吸收有一定的促进作用。

优化马钱子总生物碱贴膏剂对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用及其机制

目的:考察优化马钱子总生物碱贴膏剂(MTAP)对大鼠佐剂性关节炎(AA)的治疗作用及其机制。方法:60只大鼠随机分为模型组、正常组、扶他林乳胶剂组(24 mg·kg-1),MTAP低、中、高剂量组(12,24,48 mg·kg-1)。大鼠足跖皮内注射弗氏完全佐剂造模后,给药组于腹部脱毛区域给予一定面积的贴膏剂,模型组、正常组给予空白基质的贴膏剂,隔天给药1次,连续治疗30 d。采用足容积法测定足肿胀度,MTT法检测刀豆蛋白(Con A)和脂多糖(LPS)诱导的脾淋巴细胞增殖反应,ELISA法测定腹腔巨噬细胞(PMΦ)产生白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,HE染色法光镜观察关节病理形态学变化等。结果:与正常组比较,模型组关节滑膜组织可见多量炎细胞浸润,有不同程度的充血、水肿;AA大鼠T,B细胞增殖水平显著升高(P<0.05),腹腔巨噬细胞产生的IL-1β,TNF-α的含量亦显著升高(P<0.05)。与模型组比较,MTAP给药组对大鼠原发性和继发性肿胀有明显的治疗作用(P<0.05),对AA大鼠升高的TNF-α水平、增强的T,B细胞增殖反应及关节病理形态改变等方面均有不同程度的改善作用(P<0.05,P<0.01)。结论:MTAP对大鼠佐剂性关节炎有一定的治疗作用,其作用机制可能与其改善AA大鼠异常的细胞免疫功能,调节细胞因子的平衡有关。

马钱子总生物碱致肾毒性模型建立及甘草内生菌代谢产物减毒作用对比

目的:建立马钱子总生物碱(TAS)致肾毒性模型,探究甘草及其内生菌代谢产物对TAS致肾毒性模型的减毒作用。方法:Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、甘草提取物176 mg/kg组、甘草内生真菌17、33 mg/kg组、甘草内生细菌17、33 mg/kg组,每组10只,以7.50 mg/mL的TAS建立大鼠肾毒性模型,灌胃给予甘草和甘草内生菌进行干预,观察大鼠体征状况,检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量,计算脏器指数,观察组织病理学变化及损伤分数等指标,评价TAS肾毒性模型及甘草内生菌对TAS致肾毒性的减毒作用。结果:与正常对照组比较,模型对照组血清BUN、Cr含量及脏器指数明显升高(P<0.05或P<0.01),肾脏组织中肾小管空泡样变形,肾小管萎缩,且肾小球肾小管损伤评分明显升高(P<0.01);与模型对照组比较,甘草提取物及其内生菌代谢物各组大鼠体征状况逐渐恢复,BUN的含量显著降低(P<0.01),大鼠肾组织病理损伤减轻,肾小球与肾小管损伤评分降低(P<0.05或P<0.01);与甘草提取物176 mg/kg组比较,甘草内生细菌代谢物17 mg/kg组BUN含量显著升高(P<0.01),甘草内生真菌代谢物33 mg/kg组、甘草内生细菌代谢物33 mg/kg组肾小管损伤评分和肾小球损伤评分明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:7.50 mg/kg的TAS成功建立大鼠的肾毒性模型;甘草内生菌代谢物具有减毒作用,一定剂量内,甘草内生真菌代谢物呈现出优于甘草的减毒作用。

马钱子生物碱组分对类风湿性关节炎滑膜细胞增殖作用的比较研究

[目的]比较观察马钱子总生物碱不同组分对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞增殖的影响。[方法]体外培养人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA),加入不同浓度的马钱子总生物碱、马钱子碱和士的宁,采用溴脱氧尿苷(bromodeoxyuridine,BRDU)比色法观察马钱子不同生物碱组分对细胞增殖的影响。[结果]不同浓度的马钱子总生物碱对HFLS-RA细胞增殖表现出良好的抑制作用。同浓度水平组比较,仅在浓度水平为0.22mg.mL-1时,马钱子碱组对细胞增殖的抑制率明显低于士的宁组(P<0.05),其余各浓度水平时均高于士的宁组。以马钱子总生物碱对细胞增殖的抑制率减去士的宁的抑制率,间接反应非士的宁生物碱对该细胞增殖的抑制率,在士的宁和马钱子碱浓度水平均为0.22mg.mL-1或0.11mg.mL-1时,明显低于士的宁组(P<0.01,P<0.05)与马钱子碱组(P<0.01,P<0.01),其余浓度水平时,均高于士的宁组的抑制率(P<0.01),低于马钱子碱组的抑制率但无显著性差异。[结论]马钱子总生物碱、士的宁、马钱子碱对类风湿性关节炎滑膜细胞的增殖均有良好的抑制作用;随着浓度的降低,马钱子碱对滑膜细胞增殖的抑制作用优于士的宁;在马钱子总生物碱中存在的非马钱子碱、非士的宁的生物碱组分未表现出对HFLS-RA细胞增殖的抑制作用。

马钱子组分对人HaCaT细胞毒性作用的比较

目的研究马钱子生物碱及其不同组分对人永生化表皮细胞系Ha Ca T细胞的毒性作用。方法体外培养Ha Ca T细胞,加入相同质量浓度的马钱子碱、士的宁、马钱子碱与士的宁的混合物,和马钱子总生物碱作用于细胞24 h后,采用MTT比色法测定不同生物碱的细胞增殖抑制作用;流式细胞仪检测对Ha Ca T细胞的凋亡,比较马钱子生物碱不同组分对Ha Ca T细胞的毒性作用。结果士的宁对Ha Ca T细胞的抑制率和细胞凋亡率大于马钱子碱;马钱子碱和士的宁混合物组对Ha Ca T细胞的抑制率和细胞凋亡率大于马钱子总生物碱。结论马钱子生物碱组分均对Ha Ca T细胞存在细胞毒作用,呈剂量依赖关系,但马钱子碱的细胞毒性明显小于士的宁。

马钱子苏木有效组分配伍对RA血瘀证模型大鼠炎症和血管内皮损伤的影响

目的：在类风湿关节炎（RA）血瘀证大鼠模型建立的基础上,观察马钱子、苏木有效组分（马苏组分）配伍对模型大鼠的关节炎症和血管内皮损伤的影响。方法：通过对RA血瘀证大鼠一般情况检查,足趾肿胀度及Elisa检测等方法分析各项指标,评估马苏组分配伍对大鼠炎症和血管内皮的影响。结果：马苏组分配伍能较好的改善RA血瘀证大鼠的一般状态,显著降低其足趾肿胀度,抑制炎症反应,改善血管内皮的损伤;降低模型大鼠血清中TNF-α、IL-1α、VEGF、COX-2、IL-1β、IL-6、IL-17、IL-15、VCAM-1、ICAM-1炎症因子水平,较好的逆转膝关节软骨的病理损伤改变,延缓关节软骨的退化进程。结论 ：马苏组分配伍能够有效抑制RA血瘀证模型大鼠的炎症及血管内皮损伤,延缓膝关节软骨退变,起到保护关节软骨的作用。

马钱子减毒增效方法

马钱子减毒增效主要方法有炮制:砂烫、清炒、爆压、烘烤、微波、麻黄、阳江九制、大米砂炒、绿豆煮、醋泡等;配伍中药也有减毒增效作用,如配伍地黄、甘草、白芍、赤芍、肉桂、桂枝、地龙、洋金花等;其他方法有超细粉体技术、马钱子碱脂质体、马钱子总生物碱隐形脂质体、双向发酵法、脱毒试验、优化总生物碱、碱免疫纳米微粒等;无论采用何种方法降低毒性及增强疗效,都伴随有化学成分的改变,尤其是含量较高的生物碱类成分士的宁和马钱子碱;研究主要针对降低主要毒性成分士的宁和马钱子碱含量,尤其是士的宁,对其它成分研究相对较少;未来期待加强减毒后毒理学研究,重视毒效相关性,利用现代科技和手段积极探索新方法,重视临床有长期应用基础的方法,尤其是对临床有较长应用历史,较为安全有效方法进行深入研究。

马钱子生物碱类成分经皮给药后在小鼠体内的药动学研究

目的考察马钱子碱、马钱子总生物碱和优化马钱子总生物碱凝胶剂经皮给药后在小鼠体内的药动学过程。方法建立测定小鼠血浆中马钱子碱质量浓度的HPLC法,比较含相同剂量(10.8 mg/kg)马钱子碱各凝胶剂经皮给药后,马钱子碱的血药浓度,并对结果进行药动学拟合。结果经皮给药后马钱子生物碱类成分的药动学行为均符合二室模型。优化马钱子总生物碱凝胶剂能显著增加马钱子碱的体内吸收,相对生物利用度显著提高,AUC0→t是马钱子碱凝胶剂的1.74倍,是马钱子总生物碱凝胶剂的1.89倍,其他药动学参数无显著差异。结论以优化马钱子总生物碱经皮给药,可有效改善单体马钱子碱和总生物碱的体内药动学行为,有利于对马钱子碱的减毒增效。