骨形态发生蛋白10及其突变体在CHO细胞中的表达

为了解决骨形态发生蛋白10(bone morphogenetic protein 10,BMP10)前体蛋白proBMP10在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中由于Furin导致的表达产物不均一问题,构建了proBMP10在Furin酶切识别位点处的突变体proBMP10-1(R313K)和proBMP10-2(R316K),并分别将目的基因定点整合进CHO-K1-BAK-/BAX-基因组,成功构建了稳定表达目标蛋白质的重组CHO细胞株。结果表明,proBMP10-2 (R316K)不再被Furin切割,且具有生物活性,而proBMP10-1(R313K)仍然会被Furin切割。

血清骨形态发生蛋白10、脂蛋白相关磷脂酶A2、糖化血红蛋白水平与心房颤动合并缺血性脑卒中的相关性

目的探讨血清骨形态发生蛋白10(BMP10)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平与非瓣膜性心房颤动(NVAF)合并缺血性脑卒中(AIS)的相关性。方法选取2019年6月至2023年5月该院收治的320例NVAF患者作为研究对象,根据是否合并AIS将患者分为房颤组(240例)和合并AIS组(80例)。另选取同期在该院进行体检的300健康体检者作为对照组。采用Pearson相关分析血清BMP10、Lp-PLA2、HbA1c与房颤卒中风险评分(CHA2DS2-VASc评分)的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清BMP10、Lp-PLA2、HbA1c单独及三者联合检测对NVAF患者合并AIS的诊断价值。采用多因素Logistic回归分析NVAF患者合并AIS的危险因素。结果对照组、房颤组、合并AIS组血清BMP10、Lp-PLA2、HbA1c水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);房颤组、合并AIS组患者血清BMP10、Lp-PLA2、HbA1c水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);合并AIS组患者血清BMP10、Lp-PLA2、HbA1c水平均高于房颤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。合并AIS组血清左心室射血分数低于房颤组,CHA2DS2-VASc评分均高于房颤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,血清BMP10、Lp-PLA2、HbA1c水平与CHA2DS2-VASc评分均呈正相关(r=0.431、0.509、0.508,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血清BMP10、Lp-PLA2、HbA1c单独检测预测NVAF患者合并AIS的曲线下面积分别为0.781、0.741、0.786,均低于三者联合预测的0.899(Z=3.172、4.156、3.104,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,BMP10>3.29 ng/mL、Lp-PLA2>12.07 ng/mL、HbA1c>26.14 ng/mL均是NVAF合并AIS的危险因素(P<0.05)。结论血清BMP10、Lp-PLA2,HbA1c水平升高与NVAF合并AIS关系密切,可能成为评估NVAF合并AIS的标志物。

合浦珠母贝骨形态发生蛋白10(BMP10)基因的克隆与表达分析

骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)具有成骨活性,在胚胎发育、组织发生、生殖调控等方面也有重要作用,但在贝类中研究还很少。研究克隆了合浦珠母贝(Pinctada fucata)BMP10基因,命名为Pf BMP10。该基因c DNA长1 752 bp,包含开放阅读框(ORF)1 344 bp,编码447个氨基酸。编码蛋白包含一个N端信号肽、一个前结构域和成熟蛋白区。成熟区包含转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)结构域,其中含7个半胱氨酸残基。不同发育时期表达分析显示Pf BMP10高表达于担轮期和变态期,提示其可能参与幼体担轮期、变态期的发育调控。组织表达分析显示其在鳃和外套膜高表达,贝壳缺刻实验显示缺刻处理24h后其在鳃和外套膜中的表达量均显著上升,表明Pf BMP10可能与贝壳形成相关。研究结果可为BMP家族基因功能及贝壳形成机理研究提供参考。

重组人骨形态发生蛋白10的表达纯化及其心脏保护功能

目的验证重组人骨形态发生蛋白10(rhBMP10)的心脏保护作用。方法使用CHO细胞表达并纯化rhBMP10;利用多柔比星多次给药构建小鼠心力衰竭模型;使用超声心动图、TUNEL染色等方法评价小鼠心功能变化和心肌细胞凋亡情况。结果本研究成功表达了具有生物活性的rhBMP10;多柔比星造模小鼠的心功能受到严重损伤;心肌细胞凋亡比例显著升高,而rhBMP10处理的小鼠心脏功能和心肌细胞未受到显著影响。结论rhBMP10在减轻多柔比星引起的心脏损伤方面具有积极作用。

仿生电刺激联合人工周期对卵巢储备功能减退患者子宫容受性及血清生长分化因子-9、抑制素B、骨形态发生蛋白-10水平的影响

目的探讨仿生电刺激联合人工周期对卵巢储备功能减退(DOR)患者子宫容受性及血清生长分化因子-9(GDF-9)、抑制素B(INHB)、骨形态发生蛋白-10(BMP-10)水平的影响。方法选取2019年1月至2022年3月广西壮族自治区妇幼保健院收治的87例DOR患者作为研究对象。采用随机数字表法分为A组、B组、C组,每组29例。A组采用仿生电刺激治疗,B组采用人工周期治疗,C组采用仿生电刺激联合人工周期治疗。比较三组治疗前后子宫容受性,血清GDF-9、INHB、BMP-10水平,子宫内膜血流参数及卵巢体积;随访1年,比较三组的妊娠情况;比较三组治疗期间不良反应发生情况。结果与治疗前比较,治疗后A组、B组、C组初级卵泡数、优势卵泡数、排卵数及血清GDF-9、INHB、BMP-10水平均升高,卵巢体积均增大,且A组、B组、C组呈增高趋势(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后A组、B组、C组子宫内膜血流搏动指数(PI)、子宫内膜血流阻力指数(RI)均减小,且A组、B组、C组呈下降趋势(P<0.05)。随访1年,C组妊娠率高于A组、B组(P<0.05)。治疗期间,三组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论仿生电刺激联合人工周期可提高DOR患者子宫容受性,改善子宫内膜血流参数及卵巢体积,也可改善血清GDF-9、INHB、BMP-10水平,提高自然妊娠率,且安全性好。

骨形态发生蛋白10在中国仓鼠卵巢细胞中的表达、纯化及其生物活性

目的在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表达改造后的骨形态发生蛋白10(bone morphogenetic protein 10,BMP10)全长基因,纯化后检测其生物活性,以期获得具有生物活性的BMP10分子。方法于rh BMP10的propeptide与mature chain基因片段之间插入6×his-tag标签及DDDDK(肠激酶识别位点),构建p MH3-rh BMP10-histag-DDDDK质粒,电转入CHO细胞,用500μg/ml G418从单克隆中筛选出稳定表达目的蛋白的重组细胞,悬浮驯化表达8 d后,收集培养液上清,阴离子交换柱和镍柱纯化目的蛋白。采用q-PCR法检测纯化蛋白的体外细胞活性。结果目的蛋白纯化液经SDS-PAGE检测到的条带相对分子质量与目的蛋白理论值相符,Western blot分析可见相对分子质量约48 000、96 000和190 000的3个条带,与目的蛋白单体及多聚体相对分子质量一致。酶切后的目的蛋白可有效刺激P19细胞的标志蛋白(Smad6)表达上调。结论 BMP10 propeptide的存在对BMP10的蛋白活性具有重要作用,改造后的BMP10在CHO细胞中表达具有一定的生物活性。本研究为全长BMP10活性二聚体的制备提供了新的思路。

miR-155在炎症微环境下对牙周膜干细胞成骨分化的调控作用

目的 研究miR-155在炎症微环境下对牙周膜干细胞(periodontal ligment stem cells, PDLSCs)成骨分化的调控作用。方法 将PDLSCs按照不同处理方法分为对照组、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)组、miR-阴性对照(NC)组、TNF-α+miR-NC组、TNF-α+miR-155抑制物组、miR-155组,采用荧光定量PCR检测miR-155、Runt相关转录因子2(recombinant runt related transcription factor 2,Runx2)、骨钙素(osteocalcin, OCN)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ,Col-Ⅰ)、骨形态发生蛋白5(bone morphogenetic protein 5,BMP5)、骨形态发生蛋白10(bone morphogenetic protein 10,BMP10) mRNA表达水平;Western blot检测Runx2、OCN、Col-Ⅰ、BMP5、BMP10蛋白表达;茜素红染色检测细胞钙结节形成;双荧光素酶报告基因验证miR-155靶向BMP5、BMP10。结果 与对照组比较,TNF-α组PDLSCs中miR-155的表达水平明显升高,Runx2、OCN、Col-Ⅰ的mRNA和蛋白表达水平以及钙结节形成量降低(P<0.05);与miR-NC组比较,TNF-α+miR-NC组PDLSCs中Runx2、OCN、Col-Ⅰ的mRNA和蛋白表达水平及钙结节形成量降低,差异有统计学意义(P<0.05);与TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-155抑制物组PDLSCs中Runx2、OCN、Col-Ⅰ的mRNA和蛋白表达水平及钙结节形成量明显升高(P<0.05);miR-155靶向负调控BMP5、BMP10表达。结论 炎症微环境下PDLSCs中miR-155表达增加,敲低miR-155可促进炎症微环境下PDLSCs成骨分化,靶向调控BMP5及BMP10是相关分子机制。

归肾丸加减治疗肾虚型卵巢储备功能下降不孕症疗效及对血GDF-9、BMP-10影响

目的:探讨归肾丸加减治疗肾虚型卵巢储备功能下降(DOR)不孕症疗效及对血清生长分化因子-9(GDF-9)、骨形态发生蛋白-10(BMP-10)影响。方法:选取2016年1月-2017年6月本院DOR伴不孕症(肾虚型)患者140例,随机分为观察组与对照组各70例。对照组予以常规西医人工周期激素治疗,观察组在对照组基础上加用归肾丸加减治疗。治疗前后评价中医症状积分,测定血清激素和细胞因子水平,超声监测窦卵泡数(AFC)、最大卵泡直径及卵巢血流参数。随访12个月统计妊娠情况。结果:治疗后观察组临床总有效率(94.3%)、妊娠率(41.4%)均高于对照组(77.1%、15.7%),中医症状积分低于对照组,雌二醇(E;)、黄体生成素(LH)、卵泡雌激素(FSH)水平低于对照组,抗苗勒激素(AMH)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、GDF-9、BMP-10水平高于对照组,AFC、卵泡直径、PSV及EDV均高于对照组,RI、PI低于对照组(均P<0.05)。结论:归肾丸加减治疗肾虚型DOR不孕疗效显著,能够改善临床症状及卵巢功能,提高妊娠率,并可提高血清TGF-β1、GDF-9、BMP-10表达。