核骨架蛋白Emerin在刚度耦合拓扑结构微环境下对HSF分化的调控机制研究

目的增生性瘢痕细胞外基质刚度增加与胶原纤维束紊乱排列是其重要特征,但其发病机制仍有待探索。方法使用聚丙烯酰胺水凝胶构建19.3 kPa和90.1 kPa两种刚度耦合交叉角度为45°、90°和180°沟槽的弹性基底,利用活细胞动态监测、原子力显微镜和RNAi技术等实验方法研究基底对人体皮肤成纤维细胞(Human skin fibroblasts,HSF)铺展形态、分化与细胞核力学特性的影响,并阐述核骨架蛋白Emerin在其中发挥的作用。结果基底细胞大多黏附在沟槽单侧或中央,细胞沿沟槽生长,中央生长的细胞与细胞核最终铺展为长梭形,单侧生长的细胞与细胞核由圆形逐渐变为三角锥形;高刚度基底上,细胞核体积、高度更大;高刚度和单侧沟槽的限制,促进HSF分化;Emerin参与细胞及细胞核的形态变化,干扰Emerin表达,显著降低HSF的分化,并通过降低细胞质及细胞核刚度,促进细胞迁移。结论本研究揭示了刚度耦合拓扑结构基底对HSF生物学行为的调控作用,并深入研究了Emerin在该过程中发挥的作用,为阐明瘢痕纤维化形成机制及防治提供新的研究思路和参考。

响应曲面法在鸡骨架蛋白酶解工艺中的应用

采用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和复合蛋白酶水解鸡骨架蛋白制备富含氨基酸、生物寡肽的水解液,确定了酶解的前处理条件、理想用酶及适宜添加量。结果表明,理想用酶为复合蛋白酶,其适宜添加量为2400UP/g蛋白。采用响应面(RSM)法对复合蛋白酶酶水解条件进行了优化,最终确定复合酶的酶解条件为:[S]=2.8%(蛋白),T=54.0℃,起始pH=7.0,在优化条件下水解5h时的水解度(DH)=42.39%,较常规法水解度提高了约8%～10%,氨基酸分析表明,酶解液中富含各种必需氨基酸和生物寡肽。

糖尿病肾病尿毒症患者体内微炎症状态和外周血单个核细胞骨架蛋白的表达

目的探讨2型糖尿病肾病(DN)尿毒症患者外周血单个核细胞(PBMC)骨架蛋白的表达及炎症细胞因子的水平。方法采用Ficoll淋巴细胞分离液密度梯度离心分离出PBMC,激光共聚焦技术检测研究对象(8例2型DN尿毒症患者和8例健康志愿者)PBMC骨架蛋的表达,并分别用ELISA法和免疫比浊法检测血清白细胞介素-6(IL-6)和C反应蛋白(CRP)浓度。结果 2型DN尿毒症患者外周血IL-6和CRP水平均高于健康志愿者(P<0.01),DN尿毒症患者PBMC可见细胞形态变形,肌动蛋白重排,细胞周边肌动蛋白丝带消失,出现明显的肌动蛋白收缩团块,有的细胞出现微丝溶解现象。结论 DN尿毒症患者体内存在微炎症状态,这一微炎症状态可能与PBMC骨架蛋白重排有关。

异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤肥大时骨架蛋白的变化及意义

目的复制异丙肾上腺素(isoproteronol,Iso)致大鼠心肌损伤及肥大模型,观察细胞骨架蛋白微管蛋白(tubulin)、结蛋白(desmin)变化特点,探讨心肌支持蛋白在心肌肥厚过程中的关系和变化规律,为抑制心室肥厚的发生和发展提供实验依据。方法①将雄性Wistar大白鼠随机分成对照组和损伤肥大组(Iso组)。Iso组皮下多点注射中等剂量Iso,建立大鼠损伤、代偿性肥厚模型。②光镜观察心肌组织的病理变化。③RT-PCR法检测tubulin、desminmRAN表达。④免疫组化法检测tubulin、desmin蛋白表达。结果光镜下Iso组心肌组织有明显的损伤肥大及纤维化,tubulinmRNA(0.9252±0.3765)和desminmRNA(1.2453±0.5326)表达与对照组(0.6846±0.2372)和(0.7142±0.1416)比较明显升高,差异有统计学意义(t=2.3258,P<0.05;t=4.0972,P<0.01)。Iso组tubulin(0.75±0.32)和desmin(0.85±0.29)蛋白表达与对照组(0.56±0.25)和(0.64±0.31)比较,差异也有统计学意义(t=2.5627,P<0.05;t=2.7544,P<0.01)。结论Iso致大鼠心肌损伤肥大时,tubulin、desmin无论在蛋白水平,还是在基因水平都增加,提示异丙基肾上腺素对大鼠心肌tubulin、desmin蛋白水平和基因水平的影响是平行、一致的。

一次性离心运动对大鼠骨骼肌骨架蛋白表达和肌力的影响

目的:探讨一次性离心运动对大鼠骨骼肌肌力和收缩蛋白myosin,细胞膜骨架蛋白dystrophin、a-DG、-DG,细胞外基质蛋白laminin-2、collagen IV表达的影响,以及上述蛋白与骨骼肌收缩力和拉断力的相关关系。方法:42只雄性Wistar大鼠分成对照组(n=6)和运动组(n=36)。运动组大鼠进行一次性离心运动,坡度为-16°,跑速为26.8 m/min,运动5 min,间歇1 min,共进行10组。分别于运动后即刻、4小时、24小时、48小时、72小时、7天,将大鼠腓肠肌在半离体状态下固定于微型材料实验机,用电刺激法测试大鼠腓肠肌收缩力,然后测拉断力,后取材测试血清CK、LDH,用免疫组化法测定大鼠腓肠肌myosin、dystrophin、-DG、-DG、laminin-2、collagen IV蛋白和laminin-2基因表达。结果:一次性离心运动后即刻,大鼠血清CK和LDH与对照组相比均有显著性增加(P<0.05)。一次性离心运动后即刻和48小时,大鼠腓肠肌收缩力与对照组相比显著下降(P<0.05),运动后24小时拉断力与对照组相比显著下降(P<0.05)。收缩力与拉断力呈正相关(r=0.501,P<0.01);一次性离心运动即刻laminin-2基因表达与对照组相比显著下降(P<0.05),运动后24小时laminin-2蛋白含量与对照组相比显著增加(P<0.05)。骨架蛋白含量与大鼠腓肠肌收缩力无相关关系,laminin-2蛋白含量变化与大鼠腓肠肌拉断力呈负相关(r=-0.727,P<0.01)。结论:(1)一次性离心运动致骨骼肌损伤,收缩力下降和肌肉损伤有关。(2)大鼠腓肠肌的材料力学特性在一次性离心运动后24小时最弱。(3)大鼠腓肠肌收缩力和骨架蛋白变化无相关关系。(4)大鼠腓肠肌拉断力在一次性离心运动后和laminin-2蛋白含量高度负相关,其内在机制值得进一步探讨。

四氯化碳诱导大鼠肝纤维化过程中肝内细胞骨架蛋白表达的变化

探讨肝纤维化发生过程中，细胞骨架蛋白—结蛋白（Ｄｍ）和α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）阳性细胞动态变化的规律以及这些阳性细胞之间的关系。方法用四氯化碳辅以低胆碱饲料诱导大鼠肝纤维化，应用免疫组化、电镜技术和图像分析方法对肝纤维化过程中出现的Ｄｍ和α－ＳＭＡ阳性细胞进行定位和定量研究。结果α－ＳＭＡ阳性细胞的变化几乎与Ｄｍ阳性细胞同步，两者于实验早期均有增生，但前者少于后者，至纤维间隔大量形成时（１２周），两者增生均达到最高峰，但前者多于后者，以后两者均逐步下降；从形态分析，Ｄｍ和α－ＳＭＡ阳性细胞主要为贮脂细胞（ＦＳＣ），部分卵圆细胞和新生胆管上皮细胞也表达此两种骨架蛋白。结论除了ＦＳＣ以外，α－ＳＭＡ和Ｄｍ阳性卵圆细胞也可能在肝纤维化发生发展中起重要作用。

高温对小鼠神经元骨架蛋白及热休克蛋白70表达的影响

目的:观察39℃环境对体外培养的小鼠皮层神经元骨架蛋白(β-tubulin)和热休克蛋白70(HSP70)表达的影响,探讨HSP70的神经保护作用.方法:取小鼠胚胎大脑皮层进行神经元原代培养,将培养好的神经元分为37℃培养的对照组和39℃刺激30min后0,2,6,24和72h的高温组.分别进行荧光免疫染色,应用激光共聚焦扫描观察神经元β-tubulin和HSP70的表达.结果:39℃刺激后,高温组神经元β-tubulin荧光强度均低于37℃对照组,且随着恢复时间的延长其荧光强度值逐渐升高.高温组神经元HSP70荧光强度均高于37℃对照组,且随着恢复时间的延长其荧光强度值先升高后降低,于2h时达高峰,24h仍维持在较高的水平.高温可导致HSP70荧光分布转移至细胞核,并随着恢复时间的延长逐渐转移至细胞浆.结论:高温可以导致神经元形态变化,骨架蛋白结构紊乱可能是神经元形态变化的重要原因之一,HSP70可能参与并起到保护作用.

2,5己二酮对大鼠大脑组织骨架蛋白的影响

目的探讨2,5己二酮(HD)对大脑组织中神经丝、微管、微丝等骨架蛋白的影响。方法Wistar雄性大鼠,经腹腔染毒,剂量分别为200和400mg/(kg.d),连续8周(每周5次),采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western印迹方法检测大脑组织匀浆28000g、30min离心后所得上清和沉淀中低分子量神经丝(NF-L)、中分子量神经丝(NF-M)、高分子量神经丝(NF-H)、β-肌动蛋白、α-管蛋白和β-管蛋白的相对含量。结果上清中NF-L和NF-M未能检测到,其它神经丝亚单位的含量在沉淀和上清中均明显降低,下降至对照组的33%～73%,且呈现良好的剂量-反应关系。β-肌动蛋白、α-管蛋白、β-管蛋白的含量与对照组相比无明显变化。结论HD导致大鼠大脑中神经丝含量的降低,神经丝含量的改变和其神经毒性有关。

大鼠皮层神经干细胞分化为胆碱能神经元过程中骨架蛋白的表达

目的 对皮层神经干细胞向胆碱能神经元定向分化及骨架蛋白 (β tubulin)进行探讨研究。方法 采用细胞培养技术、免疫细胞化学方法观察皮层神经干细胞向胆碱能神经元定向分化及其过程中骨架蛋白表达变化。结果 皮层神经干细胞在去除丝裂原后开始进行分化 ,至第 7d可分化为成熟神经元 ,NSE、AchE反应明显阳性 ,随着分化神经元的逐渐成熟 ,β tublin在细胞内的分布亦发生变化 ,由核周集中分布变化为广泛分布于细胞质内 ,形成细网状 ,构成细胞骨架。结论 皮层神经干细胞定向分化为胆碱能神经元的过程中伴随有骨架蛋白的时空变化 ,随神经元的成熟而构成细胞骨架。

NIV毒素对软骨细胞骨架蛋白的影响及硒的拮抗作用

目的利用C-28/12软骨细胞系进行体外单层培养,研究KBD可疑致病因子雪腐镰刀菌烯醇和硒对软骨细胞骨架蛋白中肌动蛋白和波形蛋白的影响。方法用Real-time PCR法检测细胞中肌动蛋白和波形蛋白mRNA的表达;用Western-blot方法检测细胞中肌动蛋白和波形蛋白蛋白的表达。结果①肌动蛋白在毒素组和毒素加硒组均表现为随着毒素浓度的升高mRNA的表达逐渐升高;毒素组肌动蛋白蛋白的表达量随着毒素浓度的升高而逐渐降低,毒素加硒组蛋白的表达量与相应的毒素组相比较,可显示出硒的拮抗作用。②波形蛋白PCR的结果:毒素组表现为随着毒素浓度的增加有下降的趋势,毒素加硒组表现为随着毒素浓度的增加有逐渐升高的趋势;波形蛋白Western-blot的结果:毒素组表现为随着毒素浓度的增加蛋白的表达逐渐下降,毒素加硒组表现为随着毒素浓度的增加有升高的趋势。结论 NTV毒素对肌动蛋白和波形蛋白mRNA和蛋白的表达有影响。

骨架蛋白、肌力与骨骼肌微损伤的关系研究

综述了近年来细胞外基质蛋白、膜骨架蛋白和肌肉微损伤相关联的研究。对骨架蛋白在运动中的变化进行了由内而外的探讨,重点探讨了细胞外基质蛋白在力的传递和组织结构的保持中可能发挥着的重要作用,阐明了肌细胞骨架蛋白在力的传导过程中存在的可能机理,揭示了细胞外基质蛋白对维持骨骼肌细胞结构稳定方面所起的重要作用。

肺减容术对肺气肿兔膈肌骨架蛋白mRNA表达的影响

目的探讨肺减容术(LVRS)对肺气肿兔膈肌骨架蛋白信使核糖核酸(mRNA)表达的影响。方法40只家兔随机分为正常对照组、肺气肿组、单纯开胸组和LVRS组,每组10只。正常对照组气管内滴入生理盐水,余3组采用烟熏加气管内滴入0.4%木瓜蛋白酶0.5m l/kg诱发肺气肿,建立肺气肿模型,其中肺气肿组不作手术干预;单纯开胸组仅行胸骨正中切口进入双侧胸膜腔,不行LVRS;LVRS组胸骨正中开胸后行双侧LVRS。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测膈肌组织中肌联蛋白(titin)和伴肌动蛋白(nebu lin)mRNA的表达。结果与正常对照组比较,肺气肿组和单纯开胸组膈肌组织肌联蛋白mRNA和伴肌动蛋白mRNA表达均显著降低(P<0.01),LVRS组亦降低(P<0.05),但高于肺气肿组和单纯开胸组(P<0.05)。结论LVRS能够使肺气肿兔膈肌组织中肌联蛋白和伴肌动蛋白得到明显恢复,这可能是术后膈肌功能得以恢复的分子基础。

电刺激结合冷却排酸对牦牛细胞骨架蛋白(Desmin、Troponin-C、Integrin)降解影响的研究进展

本文旨在介绍电刺激在牦牛肉类工业中的应用与研究及其机理。根据电刺激对骨架蛋白Desmin、Troponin-C、Integrin降解的影响机理,在此基础上讨论电刺激结合冷却排酸对骨架蛋白降解的机理。

适应性训练对骨骼肌肌力、骨架蛋白含量的影响

以雄性Wistar大鼠为研究对象,进行"3周、6周适应性离心运动训练"两种方式运动。其中3周适应性离心训练(渐进增加强度),每周5天训练,速度从20.0 m/min增加到32.5 m/min,每次20 min,-5°下坡间歇跑。6周适应性离心训练(相同强度),每周5天训练,前3周速度从20.0 m/min增加到32.5 m/min,后3周保持35.0 m/min,每次20min,-5°下坡间歇跑。离心运动后不同时段和适应性训练后取大鼠后肢腓肠肌外侧头进行分析。6周适应性训练组进行一次性大强度离心运动,一次性离心运动实验为-16°下坡跑台跑,定量大负荷间歇性运动,跑速为26.8 m/min,运动5 min×10组,组间歇1min。研究适应性训练后大鼠腓肠肌收缩力和拉断力和骨骼肌细胞骨架蛋白含量的变化特点;分析肌收缩力和拉断力与肌细胞骨架蛋白缺失的关系以及与延迟性骨骼肌损伤时血清酶升高的关系;通过观察大鼠经过适应性训练后,骨骼肌肌力及肌细胞基质蛋白含量是否会有适应性的变化,是否会因此提高对抗大强度离心运动所致骨骼肌损伤的能力。

蛋白激酶C与内皮细胞骨架蛋白和血管通透性研究进展

蛋白激酶C作为一种重要的蛋白激酶和细胞内信号分子,可作用于多种底物蛋白;内皮细胞骨架蛋白作为PKC的一种重要作用底物,在维持细胞形态、黏附及细胞连接中起重要的作用.

活血化瘀方抗被动吸烟对大鼠红细胞膜骨架蛋白损伤的研究

用被动吸烟的大鼠模型，研究活血化瘀方抗红细胞膜骨架蛋白（EMSP）损伤的作用。红细胞膜经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，用光密度仪540nm扫描分析各蛋白成分的质量分数（％）。结果：模型组红细胞膜与对照组相比，高分子量聚合物（HMW）明显增高［分别为（11．27±0．53）％、（1．80±0．42）％，P＜0．01］，带3蛋白明显减少［分别为（12．83±0．93）％、（21．33±0．78）％，P＜0．01）；而用药组红细胞膜除HMW外，带3蛋白、带4．2蛋白与对照组大致相同（均为P＞0．05）；模型组红细胞膜巯基总量较对照组及用药组明显减少（分别为P＜0．01、＜0．05），用药组与对照组差异无显著意义（P＞0．05）。提示被动吸烟后红细胞膜蛋白质有大量交联聚合，而本活血化瘀方有抗被动吸烟所致EMSP损伤的作用。

心肌细胞骨架蛋白在终末期心脏病患者中的表达

目的探讨扩张型心肌病(DCM)以及其他终末期心脏病患者衰竭心肌的细胞骨架蛋白actin、desmin、sarcoglycans(SGs、α、β、γ、δ)表达情况。方法对9例终末期DCM与6例其他终末期心脏病患者和l例非心源性脑死亡者的心尖部心肌标本进行免疫荧光或免疫组化检测,采用Fisher’s精确概率检验法分析aCtin、desmin、SGs(α、β、γ、δ)在DCM组和对照组中表达异常的分布情况。结果免疫组化检查结果显示,8例DCM患者存在上述多个骨架蛋白表达异常,且均有至少1个SGs亚型异常,其中γ-SG异常1例,α-SG异常1例,α-／γ-SG异常3例,而β-／δ-SG、γ-／δ-SG及α-／β-／γ-／δ-SG异常各1例,有5例患者还伴有actin和(或)desmin的表达异常;这8例患者术前心功能状况与受累骨架蛋白异常的数目相关,心功能Ⅲ-Ⅳ级者骨架蛋白的异常(>2个)较心功能Ⅱ-Ⅲ级者(≤2个)多;6例非DCM患者中4例心功能Ⅳ级者也有细胞骨架蛋白表达异常,包括α、δ-SG异常各1例(分别为心脏肉瘤、缺血性心肌病),actin异常1例(先天性心脏病),以及α、β-SG及actin均异常1例(呈DCM表现的终末期非梗阻性肥厚型心肌病); 1例脑死亡者心肌中未检出上述骨架蛋白表达异常。结论DCM衰竭心肌中存有多种细胞骨架蛋白的表达异常,多数为actin、desmin、SGs表达水平的降低,提示由细胞骨架蛋白的表达异常所致的细胞内外力的传递缺陷可能是导致终末期心脏病的共同发病或演进机制。

3-硝基丙酸预处理对大鼠脑组织缺血-再灌注损伤的保护作用与神经细胞骨架蛋白的相关性研究

目的在蛋白质水平探讨3-硝基丙酸(3-NAP)预处理对缺血-再灌注损伤(IRI)大鼠的脑保护作用的可能机制。方法采用大脑中动脉线栓法(MCAO)制备脑缺血再灌注模型,对3-NPA预处理的大鼠(预处理组)与单纯IRI组大鼠(IRI组)应用荧光差异双向凝胶(2D-DIGE)电泳、基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱分析(MALDI-TOF MS)及数据库检索鉴定出差异表达的神经细胞骨架蛋白。结果预处理组与IRI组相比有52种蛋白表达量具有显著性差异,其中鉴定出15种主要的差异蛋白质,神经细胞骨架相关蛋白有7种。结论一些神经细胞骨架相关蛋白可能对IRI后的脑组织具有保护作用。