血清骨生成诱导因子及miR-22-3p表达水平对2型糖尿病肾病早期诊断价值研究

目的分析血清骨生成诱导因子(osteoinductive factor,OIF)和微小核糖核酸(microRNA,miR)-22-3p在2型糖尿病肾病(type 2 diabetes nephropathy,T2DN)早期诊断中的价值。方法选取2018年3月~2020年3月重庆医科大学附属遂宁市中心医院2型糖尿病患者190例为研究对象,根据24h尿微量清蛋白排泄率(24 hour urinary microalbumin excretion rate,24h UAER)分为糖尿病无肾病组(n=58)、早期糖尿病肾病组(n=62)及临床糖尿病肾病组(n=70)。并以同期体检的健康体检者50例为健康对照组。比较各组血清OIF和miR-22-3p水平,Pearson法分析血清OIF,miR-22-3p表达与肾功能指标的相关性。采用受试者工作曲线分析血清OIF和miR-22-3p及联合检测对早期2型糖尿病肾病的诊断效能。结果糖尿病无肾病组、早期糖尿病肾病组及临床糖尿病肾病组血清OIF(7.81±1.31pg/ml,9.75±1.45 pg/ml,13.44±1.61pg/ml)和miR-22-3p(1.03±0.18,5.43±0.81,7.42±0.95)表达水平均高于健康对照组(6.42±1.22 pg/ml,0.82±0.12),差异有统计学意义(t=5.675~48.790,均P<0.05)。早期糖尿病肾病组血清OIF,miR-22-3p表达高于糖尿病无肾病组(t=7.673,40.436,均P<0.05),临床糖尿病肾病组血清OIF,miR-22-3p表达高于早期糖尿病肾病组(t=13.766,12.863,均P<0.05),差异具有统计学意义。糖尿病无肾病组、早期糖尿病肾病组和临床糖尿病肾病组血清尿酸、糖化血红蛋白、24h UAER表达水平依次升高(t=1.847~47.555,均P<0.05),eGFR表达水平依次降低(t=10.018,5.416,P<0.05),差异均有统计学意义。血清OIF和miR-22-3p表达水平与尿酸、糖化血红蛋白、24h UAER呈正相关(r=0.510~0.604,均P<0.01),与eGFR呈负相关(r=-0.476,-0.408,均P<0.01);血清OIF,miR-22-3p及联合检测对早期2型糖尿病肾病诊断的曲线下面积(area under the curve,AUC)及95%置信区间(95%confidence intervals,95%CI)分别为0.815(95%CI:0.761~0.859),0.726(95%CI:0.706~0.812)及0.893(95%CI:0.849~0.950)。联合检测血清OIF,miR-22-3p对早期糖尿病肾病的诊断效能高于单一指标(Z=2.305,2.616,P=0.018,0.010)。结论2型糖尿病肾病患者血清OIF和miR-22-3p表达升高,两者与尿酸、糖化血红蛋白、24h UAER及eGFR有关,联合检测有助于2型糖尿病肾病的早期诊断。

雷帕霉素对铁蓄积高转换骨质疏松小鼠骨生成的影响

目的 研究雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)抑制剂雷帕霉素(rapamycin, Rapa)对铁蓄积高转换骨质疏松骨生成的影响。方法 将16只8周龄野生(wide type, Wt)雌性小鼠和48只8周龄铁调素敲除(△Hep)转基因雌性小鼠予以卵巢切除(OVX),分为四组(Wt+OVX组、△Hep+OVX组、△Hep+OVX+羧甲基纤维素(carboxymethylcellulose, CMC)组和△Hep+OVX+Rapa组)。Rapa为腹腔注射,3mg/(kg·d),持续2个月。CMC为Rapa溶剂,注射剂量及持续时间同Rapa。末次注射结束后4组小鼠处死取血清和骨组织标本。用股骨微型计算机断层扫描(micro computed tomography, micro-CT)检测股骨骨量及骨密度(bone mineral density, BMD)等参数,扫描电镜、HE染色检测骨量及骨小梁结构,生物力学实验检测股骨弯曲弹性模量、弯曲能量、最大弯曲应力、弯曲刚性系数,血清成骨指标如碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、Ⅰ型前胶原N端前肽(procollagenⅠN-terminal propeptide, P1NP)、骨钙素(osteocalcin, OCN)等采用ELISA检测,成骨基因如Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、成骨相关转录因子SP7(transcription factor SP7,SP7)、ALP等表达采用RT-PCR检测。结果 股骨micro-CT显示,与Wt+OVX组相比,△Hep+OVX组和△Hep+OVX+CMC组BMD、骨体积分数(bone volume to total volume, BV/TV)、骨小梁数量(trabecular number, TB.N)、骨小梁厚度(trabecular thickness, TB.Th)、连接密度(connection density, ConnD)明显减少,骨小梁分离度(trabecular separation, TB.Sp)、结构模型指数(structure model index, SMI)明显增加;而△Hep+OVX+Rapa组较△Hep+OVX组和△Hep+OVX+CMC组BMD、BV/TV、TB.N、TB.Th、ConnD增加,TB.Sp、SMI减少(P<0.05)。股骨电镜、胫骨HE染色显示,与Wt+OVX组相比,△Hep+OVX组和△Hep+OVX+CMC组骨量及骨小梁明显减少,使用雷帕霉素后骨量及骨小梁明显改善(P<0.05)。生物力学显示,与Wt+OVX组相比,△Hep+OVX组和△Hep+OVX+CMC组弯曲弹性模量、弯曲能量、最大弯曲应力、弯曲刚性系数明显降低,注射雷帕霉素后明显恢复(P<0.05)。与Wt+OVX组相比,△Hep+OVX组和△Hep+OVX+CMC组血清成骨指标(ALP、P1NP、OCN)、骨组织成骨基因(Runx2、SP7、ALP)表达明显减少,雷帕霉素干预后明显增加(P<0.05)。结论 雷帕霉素可以提高铁蓄积高转换骨质疏松小鼠的骨量及成骨活性,具有改善骨生成作用。

外源性成纤维细胞生长因子结合Bio-Oss骨粉用于前牙种植修复引导骨再生的效果及对骨生成情况、生长因子水平的影响

目的探讨外源性成纤维细胞生长因子结合Bio-Oss骨粉用于前牙种植修复引导骨再生的效果及对骨生成情况、生长因子水平的影响。方法择取2021年1月至2022年2月接收的84例前牙种植修复引导骨再生患者为研究对象,根据治疗方案将其分为对照组(n=42)和观察组(n=42)。两组均给予前牙种植修复引导骨再生治疗,对照组术后给予Bio-Oss骨粉治疗,观察组术后给予外源性成纤维细胞生长因子结合Bio-Oss骨粉治疗。比较两组的治疗效果。结果术后2个月,观察组的骨密度、牙槽骨高度、牙槽骨宽度、牙槽骨唇舌向宽度高于对照组(P<0.05)。术后2个月,观察组的血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平高于对照组(P<0.05)。术后2个月,观察组的神经纤维数目、神经纤维直径大于对照组(P<0.05)。结论外源性成纤维细胞生长因子结合Bio-Oss骨粉用于前牙种植修复引导骨再生,可改善患者生长因子水平,促进骨生成,改善神经功能,值得推广。

不同牵张速率对下颌骨延长后新骨生成的影响

目的 :研究不同牵张速率延长下颌骨时对新骨生成的影响。方法 :将 12只山羊随机分为三组 ,行双侧下颌体骨皮质切开术后以三种不同牵张速率 (0 .5mm/d ,1mm/d ,2mm/d)向前延长下颌 10mm。牵张完成后第 2、4周各处死 2只山羊 ,取双侧牵张间隙内新骨组织作X光片、组织学、扫描电镜和能谱仪分析。结果 :以 0 .5mm/d和1mm/d牵张下颌骨后形成的新骨质量要好于 2mm/d。结论 :在牵张延长下颌骨时 。

伤科黄水对兔牵拉成骨区新骨生成的影响

目的:探讨伤科黄水对兔牵拉成骨区新骨生成的影响及作用机制。方法:对24只新西兰白兔左侧股骨进行牵拉成骨手术,手术成功后将所有兔子随机分为2组,每组12只。实验组手术切口处及克氏针针孔处外敷伤科黄水纱布,对照组切口处及克氏针针孔处外敷酒精纱布。术后通过肉眼观察、血液学检查及X线检查,比较2组动物的切口和新骨生成情况。结果:1肉眼观察。术后3 d,实验组动物手术切口表面及克氏针针孔处色红、干燥、少许结痂、肌肉组织轻度肿胀;术后5 d,切口表面干燥,远端克氏针针孔处肤色淡红;术后7 d,切口处有大量皮毛生长,切口已愈合,针孔处无感染迹象;术后10 d,切口完全愈合,皮毛生长接近正常。术后3 d,对照组动物切口色红、较湿润,远端有少许渗液,针孔处未见渗液,肌肉组织明显肿胀;术后5 d,切口皮肤色红、轻度湿润、肿胀,有少许结痂及皮毛生长;术后7 d,远端针孔处有少许渗液,肌肉组织轻度肿胀,有中等量皮毛生长;术后10 d,切口结痂愈合,无明显肿胀,表面干燥,有中等量皮毛生长。实验组动物比对照组创面愈合快[(7.5±0.6)d,(8.3±1.2)d,t=-2.066,P=0.025]。2血液学检查。术后5 d,实验组肿瘤坏死因子α含量和碱性成纤维细胞生长因子含量均高于对照组[(2.3±0.8)ng·mL-1,(1.8±0.5)ng·mL-1,t=1.836,P=0.040;(125.2±4.6)ng·L-1,(121.3±3.8)ng·L-1,t=2.264,P=0.017];术后7 d,实验组白细胞计数、中心粒细胞计数和百分比、淋巴细胞计数和百分比均低于对照组[(7.3±0.3)个·mL-1,(8.7±1.7)个·mL-1,t=-2.809,P=0.001;(4.0±0.9)个·mL-1,(5.1±1.6)个·mL-1,t=2.076,P=0.025;(54.8±1.7)%,(57.1±3.9)%,t=-1.873,P=0.037;(2.5±0.5)个·mL-1,(3.1±0.9)个·mL-1,t=2.019,P=0.028;(23.8±1.6)%,(25.3±1.4)%,t=2.444,P=0.011]。3X线检查。术后4周时的X线片示,2组动物牵拉成骨区均可见灰色低密度影,有大量新骨形成,骨皮质尚未连续;实验组牵拉成骨区骨小梁密度、数量明显多于对照组,骨痂生长情况也优于对照组。结论:伤科黄水能促进兔牵拉成骨区新骨生成,其机制可能是伤科黄水改善了手术部位的软组织条件。

电穿孔介导的基因治疗对下颌骨牵引新骨生成影响的组织形态计量学研究

目的:探索电穿孔介导的基因治疗对下颌骨牵引成骨(distraction osteogenesis,DO)过程中牵引间隙新骨生成的影响。方法:采用新西兰大白兔50只,双侧下颌骨截骨安装牵引器后3天开始牵引,每天0.8mm,连续牵引7天后,将实验动物分为5组,每组10只:A组:在牵引区注射2μg(0.1μg/μl)pIRES-hVEGF165-hBMP2;B组:在牵引区注射2μg(0.1μg/μl)pIRES-hBMP2。C组:在牵引区注射2μg(0.1μg/μl)pIRES-hVEGF165;D组:在牵引区注射2μg(0.1μg/μl)空质粒pIRES;E组:在牵引区注射相同剂量的生理盐水。5组实验动物均施加电穿孔刺激。各组分别于固定期第2、4、8周取材行组织学检查和形态计量学分析,测定牵引区新生骨量和新生骨小梁宽度。结果:A、B、C组新生骨量及新生骨小梁宽度明显高于D、E组(P<0.01)。且A组明显高于B、C组,但B、C组,D、E组间无显著性差异。结论:电脉冲介导的pIRES-hVEGF165-hBMP2重组质粒体内转染可能实现成骨与血供的联合重建,使单一生长因子的效应放大,促进牵引区新骨的生成。

牵开扩张骨生成技术在治疗后牙严重锁中的应用

目的探讨牵张成骨术辅助解决后牙严重锁牙合的适应症、加力原则等问题。方法对后牙严重锁牙合患者,在全麻下采用骨皮质切开术,术后配合正畸力牵引矫治。结果锁牙合解决且疗程短,手术部位的牙槽骨密度未有降低。结论牵张成骨术配合正畸力是一种解决牙弓塌陷和后牙锁牙合等正畸疑难病例的有效方法。

下颌骨牵张成骨过程中新骨生成的定量组织学观察

目的:对下颌牵张成骨过程中的新骨生成进行动态定量组织学观察,探讨下颌牵张成骨过程中新骨生成的规律。方法:采用牵张成骨术延长10只山羊双侧下颌骨10mm,于术后第10、15、25、35和45天各处死2只动物;另选取2只山羊,不实施手术作为正常对照组。用骨组织形态法评价新生骨组织的形态结构变化;用四环素荧光标记法间接测定新骨的生成速率,并用方差分析法对数据进行统计学分析。结果:从10天组到45天组的平均骨小梁体积分数、平均骨小梁厚度、平均骨小梁数目和新生骨小梁体积密度比均表现为向正常对照组阶梯式递增(P<0.05),而平均骨小梁分隔距离和新生骨小梁表面积密度则表现为向正常对照组阶梯式递减(P<0.05)。从15天组到45天组,成骨细胞活性均显著高于正常对照组(P<0.05);而破骨细胞活性则表现为向正常对照组阶梯式递增(P<0.05)。从15天组到45天组,新骨生成速率与正常对照组相比有3个数量级的差异(P<0.05)。结论:在下颌骨牵张过程中,新生骨小梁由少到多,从幼稚到成熟;新骨生成过程持续活跃;骨吸收改建过程逐渐增强;牵张期新骨生成速率快于固定期。

骨生成蛋白及其受体信号途径和肺动脉高压

肺动脉高压主要与血管效应器失调、相关疾病及遗传因素有关。近年来研究发现,在所有的家族性肺动脉高压患者和40%的特发性肺动脉高压患者中,骨形成蛋白受体Ⅱ基因发生突变。本文对骨形成蛋白及其受体途径与特发性肺动脉高压的关系作一综述。

瘦素促进骨髓间充质干细胞成骨分化并增加内植物-骨界面骨生成

目的探讨瘦素促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化和内植物-骨界面骨生成的效果。方法从Sprague-Dawley大鼠骨髓腔获得BMSCs,经过流式细胞仪鉴定后,使用含不同质量浓度瘦素(0、10、20ng/mL,以0为对照组)的成骨诱导液培养21d,采用Western印迹法检测BMSCs碱性磷酸酶(ALP)和成骨特异性转录因子2(RUNX-2)表达,采用细胞计数试剂盒(CCK)8检测试剂并在酶标仪下读取光密度值(D值)反映BMSCs的增殖能力。在内植物-骨界面骨生成模型的新西兰大白兔皮下分别注射瘦素(实验组,术后即刻和术后第3天各注射瘦素20μg/kg)和0.9%氯化钠溶液(对照组,术后即刻和术后第3天各注射0.9%氯化钠溶液0.1mL),在术后4周处死实验兔,应用微型CT扫描并三维重建检测内植物表面之外厚度为0.3mm的环形感兴趣区域,计算骨体积分数(BVF)反映内植物-骨界面骨生成效果,并对模型兔的相关脏器进行病理学检查。结果与对照组相比,BMSCs以含10、20ng/mL瘦素的成骨细胞诱导液培养21d表达ALP和RUNX-2均显著增多(P值均<0.05);CCK-8增殖检测发现,10和20ng/mL瘦素处理组的D值均显著高于对照组(P值均<0.05)。内植物-骨界面骨生成模型的检测发现,实验组的BVF值显著高于对照组(P<0.05),光学显微镜下兔模型的心、肝、肾、脾组织细胞均未见变性、坏死。结论瘦素可以促进BMSCs成骨分化并且增加内植物-骨界面骨生成,且生理剂量瘦素对机体重要器官并未造成损害。

血小板源性生长因子在骨生成和改建中的调节作用

在骨生成和改建过程中,血小板源性生长因子(PDGF)发挥了非常重要的作用,它既参与骨的生成过程,又参与破骨过程。PDGF可刺激骨间质细胞增殖、分化,并对基底膜的钙沉积产生作用,刺激软骨细胞增殖、分化。PDGF还可直接或间接作用于破骨细胞,促进破骨过程的进行。PDGF的这种双重作用,有利于骨的生成和改建。

中空多孔钛假体复合松质骨基质兔体内骨生成组织学研究

目的利用复合松质骨基质（Cancellous bone matrix,CBM）的中空多孔钛假体（Hollow porous titanium prostheses,HPTP）观察兔体内假体周围及内部骨生成情况,探讨人工假体与骨质整合的改进方法。方法设计中空多孔（孔径2 mm）和无孔两种假体,表面行羟基磷灰石（Hydroxyapatite,HA）喷涂。实验组分为无孔假体组（A组）、HPTP组（B组）和HPTP＋CBM组（C组）,每组16例。将假体分别植入48只4-6个月龄新西兰大白兔右侧股骨外侧髁,饲养至第3、8、12周时取材,以X线、显微镜、电镜及形态计量软件观察复合假体表面及内部骨生成情况。采用SPSS13.0进行t检验分析。结果三组植入物外表面HA涂层的组织生长情况类似;A组无孔,未见骨长入,B组和C组中骨组织最终可长入假体2 mm大的圆孔;各时间点C组中空腔内骨生长率均明显高于B组（P〈0.01）。结论骨质可经HPTP假体孔洞长入腔内,达到交锁固定,较无孔假体更稳定;中空腔复合CBM后可明显加快骨长入并诱导骨生成,使假体与骨质更好整合。

不同时期转染基因对牵引区新骨生成的影响

背景:前期研究表明,电穿孔介导的重组质粒pIRES-hBMP2-hVEGF165能促进牵引区早期新生血管的形成和新骨形成。目的:观察不同时机转染基因对兔下颌骨牵张成骨过程中牵引区新骨生成的影响,探索基因导入的最佳转染时间,以获得更好的治疗效果。方法:新西兰大白兔48只,全麻下行双侧下颌骨截骨及牵引器植入后,采用随机区组法分成4组,分别于造模后即刻、牵引开始时、牵引结束时在双侧牵引区注射2μg(0.1 g/L)重组质粒pIRES-hBMP2-hVEGF165,3组均予电穿孔刺激;单纯牵引组单纯牵引不行基因转染。各组于造模后3 d开始以0.8 mm/d、1次/d的速率进行牵引,连续牵引10 d;各组分别于固定期1,2,4,8周处死3只兔子,切取下颌牵引区新生组织行组织学检测和形态计量学分析。结果与结论:组织学检查和形态计量学分析发现,牵引期转染组与即刻转染组、固定期转染组、单纯牵引组比较间隙内有更多的新生血管、成骨细胞和间充质细胞等成分,各时点新生骨量与新生骨小梁宽度明显高于后者(P<0.05)。表明在牵引开始时(牵引期)进行基因转染较其他时间转染促进新骨生成作用明显,能够获得最佳的促进新骨生成的效果,提示牵引期是下颌骨基因治疗的最佳时机。

小鼠骨生成诱导因子基因逆转录病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达

目的构建小鼠骨生成诱导因子(OIF)基因重组逆转录病毒载体,鉴定其在293T细胞中的表达。方法 PCR法扩增OIF-3FLAG基因,测序后克隆入逆转录病毒载体pMSCV PIG(Puro-IRES-GFP)的相应位点,构建重组逆转录病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG,并对重组体进行测序鉴定。应用脂质体分别将PMSCV PIG-OIF-3FLAG和VSVG、GAG-POL辅助病毒包装载体共转染至293T包装细胞,48h后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达;收集包装细胞上清液,进一步用含有包装病毒的上清液再感染293T细胞,48 h后加入3μg/mL嘌呤霉素(puromycin),连续7d,筛选病毒感染的稳定表达pMSCVPIG-OIF-3FLAG的293T细胞株,分别采用Real-time PCR技术和Western blotting方法检测293T细胞OIF mRNA及其蛋白表达。结果构建OIF基因逆转录病毒表达载体PMSCV PIG-OIF-3FLAG,经酶切及测序鉴定证实目的基因插入位点和读码框架正确;病毒感染293T细胞,经嘌呤霉素筛选稳定表达小鼠OIF的293T细胞株;Real-time PCR和Western blotting鉴定证实OIF mRNA和蛋白在该细胞株中呈高表达。结论成功构建小鼠OIF基因的逆转录病毒载体,并获得稳定高表达OIF基因的293T细胞株。

硬骨素在骨生成中的作用

硬骨素（sclerostin,SO）是硬化性骨化病（sclerosteosis,SOST）基因表达的一种蛋白产物。近年来,研究发现SO在骨生成发生机制方面具有重要的作用。研究发现在胚胎发生期间矿化骨中存在SOSTmRNA表达,在出生之后,骨细胞中SO蛋白和SOST mRNA表达均被严格地限制。在成骨细胞培养的矿化阶段,SOST mRNA表达水平有不同变化,其表达水平的差别与骨小梁的缺乏、存在及大小相关。还发现SOST mRNA表达与骨重建,细胞凋亡和细胞更新是紧密连锁的。

人骨生成诱导因子基因慢病毒载体构建及在人主动脉平滑肌细胞中稳定过表达

目的:构建人骨生成诱导因子基因(osteoinductive factor,OIF)慢病毒载体,并在人主动脉平滑肌细胞(human aorticsmooth muscle cell,HASMC)中稳定过表达OIF。方法:PCR扩增OIF-3FLAG,并克隆到慢病毒载体pMSCV PIG中,构建慢病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG,并测序鉴定。应用脂质体将pMSCV PIG-OIF-3FLAG或pMSCV PIG与VSVG、GAG-POL共转染293T细胞,48 h后收集细胞上清,感染HASMC,48 h后加入嘌呤霉素4 d,即筛选出稳定过表达pMSCV PIG-OIF-3FLAG的HASMC细胞株,采用real-time PCR和Western blot检测OIF mRNA和蛋白表达。结果:构建OIF基因慢病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG,经酶切及测序后证实目的基因的插入位点和读码框正确;包装病毒感染HASMC,经real-time PCR和Western blot检测证实OIF mRNA和蛋白水平在该细胞株中高表达。结论:成功构建人OIF基因的慢病毒载体,并获得稳定过表达该基因的HASMC。

罗宾序列征牵拉骨生成技术患儿的临床护理

罗宾序列征（PRS）是一种由胚胎发育障碍引起的常染色体显性遗传性疾病,表现为先天性小颌畸形、舌后坠,可能导致呼吸道梗阻。新生儿期表现为不同程度的呼吸困难、喂养困难或两者都有,一出生时就有表现,或在生后几周内表现出来,如果不治疗,会引发严重的并发症,包括发育停滞、低氧血症、肺源性心脏病等，病死率高达14％.