基于网络药理学方法、分子对接技术及动物实验探讨参威骨痹汤治疗骨质疏松症的作用机制

目的:探讨参威骨痹汤治疗骨质疏松症(osteoporosis,OP)的作用机制。方法:①网络药理学研究。采用超高效液相色谱-质谱法鉴定参威骨痹汤中的化合物,采用网络药理学方法初步筛选参威骨痹汤治疗OP的关键活性成分和靶点。②分子对接验证。采用分子对接技术验证网络药理学研究确定的参威骨痹汤治疗OP的关键活性成分与靶点的结合效果,从中筛选结合效果最好的组合。③动物实验验证。将60只雌性C57BL/6JNifdc小鼠随机等分为5组,模型组和参威骨痹汤低、中、高剂量组小鼠通过双侧卵巢切除手术进行OP造模,假手术组小鼠仅切取卵巢周围等体积的脂肪组织。参威骨痹汤低、中、高剂量组小鼠分别按照14.95 g·kg^(-1)·d^(-1)、29.9 g·kg^(-1)·d^(-1)、59.8 g·kg^(-1)·d^(-1)以参威骨痹汤药液灌胃,假手术组和模型组小鼠以等体积生理盐水灌胃。药物干预8周后,取股骨进行Micro-CT检查和组织病理学观察(HE染色和抗酒石酸酸性磷酸酶染色),采用实时定量PCR技术测定胫骨组织中根据网络药理学和分子对接技术确定的关键靶点基因的mRNA表达水平。结果:①网络药理学研究结果。网络药理学研究结果显示,SRC、促分裂原活化的蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)、MAPK1、磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基1(phosphatidylinositol-3-kinase regulatory subunit 1,PI3KR1)、信号转导及转录活化因子3为参威骨痹汤治疗OP的关键靶点,五味子丙素、10-姜酚、对羟基苯甲酸丁酯、倍半萜内酯和香豆雌酚为参威骨痹汤治疗OP的关键活性成分。②分子对接验证结果。分子对接结果显示,参威骨痹汤治疗OP关键活性成分与关键靶点的结合能均小于-5 kJ·mol^(-1),表明结合效果良好,其中靶点SRC、MAPK3、PI3KR1与活性成分五味子丙素、10-姜酚、对羟基苯甲酸丁酯的结合效果更好。③动物实验验证结果。Micro-CT检查及组织病理学观察结果显示,参威骨痹汤能改善OP模型小鼠的骨质疏松程度,其中中剂量参威骨痹汤效果更好。实时定量PCR测定结果显示,参威骨痹汤中剂量组胫骨组织中SRC mRNA和MAPK3 mRNA表达水平低于模型组,PI3KR1 mRNA表达水平与模型组比较差异无统计学意义。结论:参威骨痹汤治疗OP的机制可能是通过五味子丙素、10-姜酚、对羟基苯甲酸丁酯等成分调控SRC、PI3KR1、MAPK3的表达来调节骨代谢。

骨痹通消颗粒干预激素性股骨头坏死小鼠模型的作用及机制

背景:研究发现,糖皮质激素可抑制甲状旁腺素1受体(parathyroid hormone typeⅠreceptor,PTH1R)/蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)信号轴中关键基因表达,干扰骨髓间充质干细胞向成骨、成血管方向分化,导致骨内血供、骨组织结构的破坏。课题组前期研究结果表明骨痹通消颗粒可诱导血管形成、抑制成骨细胞凋亡,对激素性股骨头坏死具有一定的防治作用,其机制尚未明确。目的:观察骨痹通消颗粒对激素性股骨头坏死模型小鼠的治疗效果,从PTH1R/PKA信号轴探讨其作用机制。方法:采取腹腔注射脂多糖和臀肌注射醋酸泼尼松龙建立激素性股骨头坏死模型,将造模成功的60只C57小鼠随机分成模型组、骨痹通消颗粒组和通络生骨胶囊组,每组20只,另选取12只健康小鼠作为正常对照组,分别灌胃相应药物12周后,苏木精-伊红染色观察股骨头组织形态学变化,酶联免疫吸附测定法检测血清中骨碱性磷酸酶、Ⅰ型氨基端延长肽、甲状旁腺激素、骨钙素、碱性磷酸酶水平,Western blot和RT-qPCR法检测股骨头组织中PTH1R、PKA、MEF2、SOST、GNAS的蛋白及基因表达水平。结果与结论:骨痹通消颗粒可能通过降低小鼠血清甲状旁腺激素水平,抑制PTH1R/PKA信号轴的激活,进一步上调SOST、MEF2的表达,提高骨碱性磷酸酶、Ⅰ型氨基端延长肽、骨钙素、碱性磷酸酶水平,从而改善股骨头坏死情况,与通络生骨胶囊干预效果相当,推测骨痹通消颗粒可能通过调节PTH1R/PKA信号轴发挥防治激素性股骨头坏死的作用。

揿针联合加味骨痹汤治疗肩袖损伤(气滞血瘀证)临床观察

目的观察揿针联合加味骨痹汤治疗肩袖损伤(气滞血瘀证)的临床疗效,为肩袖损伤治疗提供一种简单、有效的方法。方法对2022年6月至2023年6月收治的66名肩袖损伤患者进行回顾性分析,并根据治疗方法将其分为观察组与对照组各33例。观察组采用了揿针联合加味骨痹汤,对照组仅使用加味骨痹汤,两组患者均配合功能锻炼。以视觉模拟疼痛(VAS)评分、Constant-Murley肩关节评分量表、美国加州大学(UCLA)肩关节评分系统及关节活动度(ROM)及总有效率为观察指标,记录患者肩关节疼痛、肩关节功能和患者整体满意度,比较治疗前及治疗后4周各项指标的变化。结果观察组的总有效率显著高于对照组,治疗后4周,2组的VAS评分均有所下降,Constant-Murley评分、UCLA肩关节评分和ROM均有所提高,且观察组优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论揿针联合加味骨痹汤可有效缓解肩袖损伤(气滞血瘀证)患者疼痛症状,在改善肩关节活动度方面治疗效果更佳。

刺络拔罐联合骨痹散外敷治疗膝骨关节炎疗效观察及对软骨组织相关信号通路的影响

目的:观察刺络拔罐联合骨痹散外敷治疗膝骨关节炎的疗效及对软骨组织相关信号通路的影响。方法:选取72例膝骨关节炎患者作为研究对象,按随机数字表法分为观察组及对照组各36例。对照组给予骨痹散外敷,观察组给予刺络拔罐联合骨痹散外敷治疗,2组均治疗4周。比较2组临床疗效,比较2组治疗前后疼痛视觉模拟评分法(VAS)评分、“起立-行走”计时测试(TUGT)、中医证候积分、最大主动关节活动度(AROM)、膝关节评分表(KSS)、西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)、软骨组织相关信号通路指标值[白细胞介素-1β(IL-1β)、环氧化酶-2(COX-2)]的变化。结果:观察组临床疗效总有效率为97.22%,对照组为83.33%,2组临床疗效比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗2周、4周后,2组VAS评分、TUGT指标值均较治疗前下降(P<0.05),观察组VAS评分、TUGT指标值均低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组关节疼痛、胫软膝酸、活动不利、动作牵强中医证候积分均较治疗前下降(P<0.05),观察组上述4项中医证候积分均低于对照组(P<0.05)。治疗2周、4周后,2组AROM活动度、KSS指标值均较治疗前升高(P<0.05),观察组AROM活动度、KSS指标值均高于对照组(P<0.05)。治疗后,2组疼痛、僵硬、日常生活难度WOMAC评分均较治疗前下降(P<0.05),观察组上述3项WOMAC评分均低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组IL-1β、COX-2指标值均较治疗前升高(P<0.05),观察组IL-1β、COX-2指标值均高于对照组(P<0.05)。结论:刺络拔罐联合骨痹散外敷治疗膝骨关节炎疗效较好,能减退关节肿痛程度,改善膝关节活动度,促进患者自主生活能力的恢复,有效缓解关节疼痛、活动不利等症状。

骨痹通消颗粒调控PI3K/AKT/FoxO1信号通路对人骨髓间充质干细胞骨脂分化的影响

目的探讨骨痹通消颗粒对激素性股骨头坏死(SANFH)的保护作用。方法收集接受髋关节置换术的SANFH、股骨颈骨折(FNF)患者股骨头和骨髓组织进行研究。检测骨组织内磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、叉头框蛋白1(FoxO1)和胆固醇调节原件结合蛋白(SREBP)表达水平。分离、培养人骨髓间充质干细胞(hBMSCs),CCK-8法检测骨痹通消颗粒含药血清对hBMSCs增殖的影响,油红O及茜素红染色观察细胞成脂和成骨分化情况,RT-qPCR、Western blot法分析过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCATT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、Runt相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)mRNA和通路蛋白表达情况。结果Western blot结果表明,SANFH患者股骨头组织中PI3K、AKT和SREBP蛋白表达较正常组明显升高,FoxO1表达则明显降低(P<0.05);不同体积分数骨痹通消颗粒含药血清均能促进hBMSCs增殖,其中以5%组作用48 h时最为明显;与模型组比,5%含药血清作用后可明显减少胞质中的脂滴着色进而增加钙盐沉积处的橙红色矿化结节,同时下调细胞中PPARγ、C/EBPαmRNA和上调Runx2、ALP mRNA表达水平(P<0.05)。此外,含药血清干预后,还可显著提高细胞中FoxO1蛋白表达,降低AKT、p-FoxO1和SREBP等蛋白表达(P<0.05)。结论骨痹通消颗粒干预后hBMSCs成脂分化减少、成骨分化增多,可有效改善糖皮质激素环境下的脂质沉积,其机制可能与调控PI3K/AKT/FoxO1信号通路有关。

基于PI3K/AKT/mTORC信号通路探讨骨痹通消颗粒对人骨髓间充质干细胞成脂分化负性调节的机制研究

目的:观察骨痹通消颗粒对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成脂分化的影响,探讨其防治激素性股骨头坏死(SANFH)的作用机制。方法:收集接受髋关节置换术的SANFH患者的骨髓组织,采用全骨髓贴壁法分离培养原代细胞并通过流式细胞术鉴定其表型。CCK-8法检测骨痹通消颗粒含药血清对hBMSCs增殖的影响,油红O、茜素红染色、RT-qPCR和Western blot检测骨痹通消颗粒含药血清作用后,hBMSCs骨脂分化、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、胆固醇调节原件结合蛋白(SREBP)、人骨形态发生蛋白(BMP2)、生长转化因子β1(TGF-β1)mRNA和通路蛋白的表达情况。结果:不同体积分数的骨痹通消颗粒含药血清均可促进hBMSCs增殖,且存在着一定的量效和时效关系,尤以5%组作用48 h时促进细胞增殖最为明显;与模型组比,5%含药血清作用后可明显减少胞质中的脂滴着色进而增加钙盐沉积处的橙红色矿化结节(P<0.05),同时下调细胞中PPARγ、SREBP mRNA和上调BMP2、TGF-β1 mRNA表达水平(P<0.05);此外,骨痹通消颗粒含药血清还可明显降低细胞中PI3K、p-AKT和mTORC等蛋白表达水平,上调Maf1蛋白表达(P<0.05)。结论:骨痹通消颗粒可以负性调节hBMSCs的成脂分化,促进成骨分化,进而发挥治疗SANFH的作用,其机制可能与调控PI3K/AKT/mTORC信号通路有关。

基于RANKL/RANK/OPG信号轴探讨骨痹通消颗粒对激素性股骨头坏死模型小鼠的治疗作用

目的观察骨痹通消颗粒对激素性股骨头坏死模型小鼠的治疗作用,并从核因子-κB受体活化因子配体/核因子-κB受体活化因子/骨保护素(RANKL/RANK/OPG)信号轴探讨其作用机制。方法采取腹腔注射脂多糖和臀肌注射醋酸泼尼松龙复制激素性股骨头缺血坏死(SONFH)动物模型,经核磁共振鉴定后,将模型复制成功的60只小鼠分成模型(MC)组、骨痹通消颗粒(GBTX)组及通络生骨胶囊(PC)组,每组20只,另设12只正常小鼠作为空白对照(NC)组。分别予以对应组灌胃相应药物12周后麻醉状态下取材,观察各组小鼠治疗前后的一般行为;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠的骨碱性磷酸酶(BALP)和I型氨基端延长肽(PINP)含量;Western blotting和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-qPCR)检测各组RANK、RANKL、OPG、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Cγ2(PLCγ2)、组织蛋白酶K(CTSK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的蛋白和基因表达。结果核磁共振显示,模型复制成功后的小鼠左侧髋部呈高信号状态。与NC组比较,MC组BALP、PINP水平,以及OPG蛋白和基因相对表达量均降低(P<0.05),RANK、RANKL、PLCγ2、CTSK、TRAP蛋白和基因相对表达量均升高(P<0.05);与MC组比较,GBTX组和PC组BALP、PINP水平,以及OPG蛋白和基因相对表达量均升高(P<0.05),RANK、RANKL、PLCγ2、CTSK、TRAP蛋白和基因相对表达量均下降(P<0.05);与GBTX组比较,PC组OPG、RANK、RANKL、CTSK、TRAP蛋白和基因相对表达量,以及PLCγ2蛋白相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05),而PC组PLCγ2基因相对表达量较GBTX组下降(P<0.05)。结论骨痹通消颗粒可能通过上调OPG表达,抑制RANK、RANKL、PLCγ2、CTSK和TRAP表达,从而改善股骨头坏死情况。

骨痹通消颗粒对糖皮质激素致人骨髓间充质干细胞损伤的干预作用

目的:探讨骨痹通消颗粒对糖皮质激素致骨髓间充质干细胞损伤的干预作用。方法:体外培养人骨髓间充质干细胞,显微镜下观察细胞形态,对照组完全培养基培养,模型组使用梯度浓度地塞米松(10-5 mol/L、10-6 mol/L、10-7 mol/L)溶液诱导损伤,实验组在模型组基础上加入不同浓度骨痹通消颗粒含药血清干预培养。油红O染色检测脂滴,茜素红染色检测成骨钙结节,CCK-8法检测细胞活力,Western blotting检测ALP、OCN、p38和MEK蛋白表达水平,RT-qPCR分析各组ALP mRNA、OCN mRNA、p38 mRNA和MEK mRNA的表达情况。结果:镜下观察及成骨成脂分化鉴定为人骨髓间充质干细胞,地塞米松对人骨髓间充质干细胞的活力有影响,其中10-5 mol/L对细胞活力影响最大(P<0.01),不同浓度含药血清可干预这一损伤,并且促进细胞增殖,其中体积分数为5%时作用最为明显(P<0.01)。茜素红染色后镜下观察含药血清体积分数为5%的染色区域钙结节数量最为密集;与模型组比较,5%含药血清组ALP、OCN、p38和MEK蛋白的表达水平升高(P<0.01)。同时ALP mRNA、OCN mRNA、p38 mRNA和MEK mRNA的表达水平升高(P<0.01)。结论:骨痹通消颗粒含药血清能促进人骨髓间充质干细胞的增殖及矿化,可有效减少Dex对细胞的损伤,并上调成骨相关因子ALP和OCN的表达,其作用机制可能与激活MAPK通路有关。

分析骨痹汤联合龙胆泻肝汤改善骨科患者围术期睡眠质量的效果

目的:分析骨痹汤联合龙胆泻肝汤改善骨科患者围术期睡眠质量的效果。方法:选取2021年7月至2023年6月甘肃省武威市民勤县中医院外科收治的围术期患者100例作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组50例。对照组给予常规护理干预,观察组在对照组基础上联合给予骨痹汤联合龙胆泻肝汤治疗。采用匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)比较2组患者睡眠质量的差异,采用焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)比较2组患者焦虑、抑郁症状改善情况,比较2组患者护理满意度。结果:干预后,观察组PSQI评分、SDS评分、SAS评分均显著低于对照组,观察组护理满意度显著高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:骨痹汤联合龙胆泻肝汤能有效改善骨科患者围术期的睡眠质量,减轻疼痛程度及焦虑程度,提高患者的生命质量,值得临床推广应用。

院内制剂(协方)骨痹合剂纯化工艺研究

目的:优选骨痹合剂的纯化工艺。方法:以纯化后出膏率以及有效成分青藤碱、芍药苷、β-蜕皮甾酮的转移率为指标,分别考察碱沉淀法、平板膜超滤法和醇沉法对骨痹合剂原复方的纯化效果,以筛选最优的纯化方法。结果:在3种纯化工艺中,醇沉法纯化效果最好,当提取液浓缩至含生药量为1.9 g/mL,含醇量为80%,加醇体积为浓缩液体积4倍量时,出膏率可减少至10.28%,青藤碱、芍药苷、β-蜕皮甾酮3种有效成分的转移率分别为94.21%、92.86%、90.80%。结论:采用醇沉法对骨痹合剂纯化效果最好,该法操作简单、工艺稳定,可为制剂进一步开发提供参考。

骨痹方治疗膝骨关节炎的临床研究

目的评价骨痹方治疗KOA的有效性及安全性,探讨骨痹方与双氯芬酸钠联合用药的增效作用。方法采用随机、平行对照方法,将90例KOA患者分为对照组(双氯芬酸钠组)、试验组(双氯芬酸钠缓释胶囊与骨痹方联合用药组)各45例,疗程均为8周。治疗第2、4、8周分别记录2组患者WOMAC评分、关节功能评分、生活质量评分改变,并观察不良反应的发生情况。结果与对照组比较,治疗2、4、8周试验组有效率较高(P<0.05或P<0.01),治疗4、8周后各项指标均明显优于对照组(P<0.05或P<0.01)。两组患者治疗前后血、尿常规,肝、肾功能,心电图均无明显改变。结论骨痹方治疗KOA疗效确切,且起效时间短,安全性高,与双氯芬酸钠联合治疗KOA有协同作用。

骨痹汤合熏蒸治疗机熏蒸治疗膝关节骨性关节炎的疗效观察

目的观察"骨痹汤"合熏蒸治疗机熏蒸治疗膝关节骨性关节炎的临床疗效。方法膝关节骨性关节炎患者100例,随机分为观察组和对照组两组,各50例。观察组给予"骨痹汤"加入熏蒸治疗机内熏蒸法治疗,对照组选用盐酸氨基葡萄糖口服。两组疗程均为4周。结果两组治疗前后对比,观察组总有效率95%,对照组总有效率74%,观察组疗效明显优于对照组。结论 "骨痹汤"熏蒸治疗对膝关节骨性关节炎具有较好的疗效。

嘛呢骨痹液对大鼠创伤性骨痹的治疗作用

目的观察嘛呢骨痹液对大鼠创伤性骨痹的治疗作用。方法手术制作大鼠创伤性骨痹模型,观察药物对组织形态学改变的影响。结果大剂量组大鼠软骨细胞明显增生,体积大,胞浆丰富,潮线消失,骨小梁明显增宽。结论嘛呢骨痹液对大鼠创伤性骨痹具有明显治疗作用。

嘛呢骨痹液对实验性大鼠创伤性骨痹作用的研究

目的 :研究嘛呢骨痹液治疗骨痹的机理。方法 :观察大鼠创伤性骨痹模型组织形态学改变。结果 :大剂量组大鼠软骨细胞明显增生 ,体积大 ,胞浆丰富 ,潮线消失 ,骨小梁明显增宽。结论

中药骨痹通消颗粒通过调控Wnt/β-catenin通路治疗激素性股骨头坏死的实验研究

目的通过动物实验探讨中药骨痹通消颗粒通过调控Wnt/β-catenin通路治疗激素性股骨头坏死的价值。方法将造模成功的激素性股骨头坏死大白兔随机分为3组模型组、碳酸钙组与中药组,每组13只。模型组用生理盐水灌胃治疗,碳酸钙组碳酸钙D3颗粒治疗,中药组给予骨痹通消颗粒治疗。记录实验动物的变化情况与股骨头Wnt/β-catenin蛋白表达水平变化情况。结果碳酸钙组与中药组给药后6周、8周的体质量高于模型组,中药组高于碳酸钙组,对比差异都有统计学意义(P<0.05)。碳酸钙组与中药组给药后6周、8周血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量高于模型组,丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量低于模型组,对比差异有统计学意义(P<0.05),碳酸钙组与中药组对比差异也有统计学意义(P<0.05)。碳酸钙组与中药组给药后8周的股骨应变能力、最大载荷都高于模型组,中药组高于碳酸钙组,对比差异都有统计学意义(P<0.05)。碳酸钙组与中药组给药后8周的股骨Wnt、β-catenin蛋白相对表达水平高于模型组,中药组高于碳酸钙组,对比差异都有统计学意义(P<0.05)。模型组镜下见软骨细胞减少、成骨细胞减少,骨细胞固缩或消失;碳酸钙组骨小梁出现骨质紊乱、扭曲、毛糙,髓腔内脂肪细胞体积增大;中药组股骨头软骨细胞数量正常,排列规则,空骨陷窝较少。结论中药骨痹通消颗粒在激素性股骨头坏死实验动物中的应用能激活Wnt/β-catenin通路,改善股骨的生物力学状况,有利于维持正常机体氧自由基产生与清除处于平衡状态,从而发挥积极的治疗作用。

骨痹饮治疗强直性脊柱炎的临床与实验研究

目的：观察骨痹饮治疗强直性脊柱炎的疗效及其机理。方法：选择强直性脊柱炎活动期患者７０例，用骨痹饮（治疗组４０例）和消炎痛（对照组３０例）随机分组治疗，并进行了动物实验研究观察。结果：临床控显率治疗组（５７５％）优于对照组（２３３％，Ｐ＜００１），总有效率两组比较无显著性差异；对缓解关节症状，改善关节功能，防止骨破坏及实验室各项检测指标治疗组均明显优于对照组（Ｐ＜００５或Ｐ＜００１）。骨痹饮对小鼠实验性纸片肉芽肿、佐剂性关节炎以及大鼠腹腔巨噬细胞产生白细胞介素１（ＩＬ１）、脾细胞产生ＩＬ２均有抑制作用。结论：骨痹饮具有抗炎镇痛、免疫调节、抑制炎性介质和改善血液流变的作用。

陶瓷膜与醇沉等方法精制骨痹颗粒的药效学比较及其作用机理

通过比较3种方法精制中药复方骨痹颗粒的主要药效学研究结果,探讨分离技术对中药复方水提液精制的可行性及其分离机理.以中药复方骨痹颗粒为实验体系,分别以陶瓷膜分离、乙醇沉淀法及大孔吸附树脂法所得精制产物为考察样品,以小鼠足趾肿胀、耳廓肿胀及软骨细胞实验评价不同精制液在高、中、低剂量下的药效学指标.3种精制产物均对小鼠足趾肿胀和耳廓肿胀有不同程度的抑制效果,总体上,陶瓷膜组的抗炎效果在两种模型中的中、高低剂量下都呈现出较好的抗炎效果;3种精制产物对软骨细胞的促增值率存在显著性差异,其中陶瓷膜组优于醇沉组、树脂组.陶瓷膜组产物总体抗炎效果较好的机理之一可能是膜技术在达到精制效果的同时,可较完整保留中药复方药效物质的完整性,从而避免了原方中对软骨细胞具促增值作用的药效成分的损失.陶瓷膜分离技术作为中药复方水提液的精制工艺,在复方药效物质群集筛选方面具有其他分离技术不可比拟的优势.