骨髓间质干细胞移植对梗死心肌的影响

目的探讨自体骨髓间质干细胞移植对梗死心肌基本结构及心肌收缩力的影响。方法贵州香猪24只,随机分为对照组和实验组,每组12只。抽取骨髓3 mL,按照W ak itan i方法培养出骨髓间质干细胞,经5-氮胞苷诱导后,5-溴脱氧尿苷标记备用。开胸结扎左冠状动脉前降支后,实验组第三代自体骨髓间质干细胞分别注射至结扎的左冠状动脉前降支和远端多点注入急性心肌梗死区域;对照组以同样方法注射DMEM。术后3、6周取标本,组织切片染色,观察组织基本结构;体外药物刺激离体肌条,检测心肌收缩情况。结果VG染色显示实验组胶原纤维融合较少,组织结构排列基本处于有序状态。实验组心肌收缩力明显高于对照组(P<0.001),且随时间推移恢复程度增加(P<0.05)。结论自体骨髓间质干细胞梗死心肌移植可以增加心肌细胞的收缩力,调节组织内胶原纤维的含量和组成,防止心室重构,从而起到对心肌基本结构的保护作用。

成人骨髓间质干细胞定向诱导为神经元样细胞的研究

目的 :体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞。方法 :采用Ficoll -Paque液 (1 0 77× 10 3 g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,分别采用含巯基乙醇和硫代甘油等试剂的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增 5代可获 5× 10 7个细胞。加入巯基乙醇等或硫代甘油等诱导剂诱导后 ,MSC胞体收缩 ,突起伸出 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF表达阳性 ,GFAP阴性。结论 :成人骨髓间质干细胞在体外可以分化为神经元样细胞。

天麻诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

目的 :探讨天麻对体外定向诱导大鼠骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞的影响。方法 :通过贴壁法分离大鼠MSC ,体外扩增培养。中药天麻定向诱导分化为类神经元样细胞。光镜下观察细胞形态 ,免疫细胞化学法检测神经细胞特异性抗原标志物神经原烯醇化酶 (NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白 (Nestin)。结果 :大鼠MSC可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。天麻诱导 2h后大部分可分化为神经元样细胞 ,出现胞体和突起 ,免疫细胞化学染色NSE、Nestin呈阳性 ,GFAP阴性。结论 :大鼠MSC可诱导分化为神经元样细胞。

骨形成蛋白-2基因转染人骨髓间质干细胞诱导异位成骨的实验研究

目的 评价腺病毒介导的人骨形成蛋白 - 2基因 (Adv- h BMP- 2 )转染人骨髓间质干细胞 (MSCs)的诱导成骨能力。方法 从人骨髓中分离培养获取 MSCs,分为三组 :1Adv- h BMP- 2转染细胞组 ;2 Adv- βgal转染细胞组 ;3未转染细胞组。分别于体外行 Western immunoblot试验、碱性磷酸酶 (AL P)和 Von Kossa染色、AL P定量测定 ,以及裸鼠肌内诱导成骨试验。共 9只裸鼠 ,双侧股后肌群内注射 ,每组 6侧。结果 Adv- h BMP- 2组 MSCs可分泌 BMP- 2蛋白 ;转染后第 9天 AL P染色多数细胞为阳性 ,其它两组 AL P染色阳性细胞少见 ;AL P活性第 3天开始升高 ,12天达高峰为 14 .76单位 ,与其它两组比较有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ;于第 2 1天后出现钙结节 ,而其它两组未见。裸鼠肌内注射后 4周 Adv- h BMP- 2组 X线片均有异位成骨 ,Adv- βgal转染细胞组未见明显成骨 ,未转染细胞组仅有少量骨形成。组织学检查发现 :Adv- h BMP- 2组也可见典型的板层骨和骨髓腔形成 ,Adv- βgal组主要为纤维组织 ,未转染组也可见散在骨小梁形成。结论 Adv- h BMP- 2基因转染可诱导人骨髓间质干细胞成骨。

骨髓间质干细胞降低大鼠移植物抗宿主反应的实验研究

目的探讨MSCs对GVHD的作用及其机制。方法建立大鼠同种异体骨髓移植模型,同时输入供者的T淋巴细胞诱导出移植物抗宿主反应,联合或不联合移植供体来源的MSCs,观察受鼠的生存时间,同时利用RT-PCR法研究Th1/Th2淋巴细胞亚群的比例,用ELISA法检测移植后体内IL-4细胞因子的浓度。结果GVHD组的平均生存时间为(17.30±2.33)天,实验组的平均生存时间为(24.10±2.36)天,与单独移植HSCs相比,MSCs与HSCs共移植明显延长的受鼠的生存时间。同时,GVHD组Th1/Th2细胞比值为1.29±0.06,IL-4因子的浓度平均为(14.84±2.59)pg/mL,实验组Th1/Th2细胞比值为(0.77±0.14),IL-4因子的浓度平均为(40.09±13.99)pg/mL。MSCs与HSCs共移植降低了体内Th1/Th2淋巴细胞亚群的比例,提高了体内IL-4细胞因子的浓度。结论MSCs与HSCs共移植能有效抑制HSCs移植后致死性GVHD的发生,延长生存时间,同时MSCs可能通过作用于体内Th1/Th2淋巴细胞亚群的比例,促进体内IL-4细胞因子的分泌从而间接发挥了抑制GVHD的作用。

骨髓间质干细胞复合多孔磷酸钙陶瓷修复兔颅骨缺损的研究

目的 探讨以骨髓间质干细胞 (MSCs)作为种子细胞、β-磷酸三钙 (β- TCP)多孔生物陶瓷作为支架材料构建组织工程化人工骨 ,修复兔实验性颅骨标准缺损的可行性。 方法 选择 5月龄新西兰大白兔 34只 ,制作颅骨标准缺损后分成 3组。A组 (n=2 0 ) :分离培养兔同胎异体 MSCs,体外扩增后接种到预制的 β- TCP多孔生物陶瓷材料上 ,细胞 -材料复合体经体外孵育后 ,无菌条件下植入颅骨缺损 ;B组 (n=10 ) :采用单纯β- TCP材料修复兔颅骨缺损 ;C组(n=4 ) :兔实验性颅骨标准缺损区未做骨修复。术后 6周和 12周分别处死动物、取材 ,进行缺损区大体、组织学、组织化学和免疫组织化学分析。 结果 颅骨缺损处 A组术后 6周表面肉眼可见骨样组织形成 ,组织学提示材料部分降解 ,未降解吸收的材料孔洞内广泛分布着新生骨组织 ,成骨细胞外基质丰富 , 型胶原染色阳性 ;术后 12周 ,支架材料几乎完全降解 ,缺损区被新生骨组织所取代。B组术后 6周 ,可见从缺损区边缘有新生骨组织向支架材料内长入 ,支架材料部分吸收 ;术后 12周 ,可见从缺损区边缘长入到支架材料内的新生骨组织逐渐增多 ,但材料的中心部位未发现新生骨形成。C组术后 12周 ,仅见少量骨组织从缺损区边缘向缺损区内长入 ,缺损中央大部分区域未得到修复。

小鼠骨髓间质干细胞的生物学特点及分化潜能鉴定

目的 建立一种体外分离、培养和鉴定小鼠骨髓间质干细胞的方法 ,探讨体外培养中间质干细胞的一些生物学特点 ,为利用MSCs促进创伤修复提供实验基础。方法 分离 5～ 6周龄的小鼠胫骨、股骨 ,用预冷的IMDM培养基冲洗出骨髓 ,经密度梯度离心得到骨髓单个核细胞 ,接种后 1 2～ 1 6d形成单层贴壁的成纤维状细胞。体外多向诱导分化鉴定分离的细胞 ,用传代的细胞进行生长曲线的测定、观察其接种贴壁率、检测细胞周期和超微结构。结果 体外传代培养的MSCs具有分化形成成骨和成脂细胞的能力 ;MSCs倍增时间约为 3 8h ,传代后 1 2h贴壁达 90 %以上 ,细胞周期显示有 80 %细胞处于G0 G1 期 ,并用电镜照片显示其超微结构。结论 在本实验条件下 ,体外培养的MSCs具有多向分化潜能 ,体外生长稳定 ,传代后的细胞适应性强 ,增殖较快 ,超微结构和细胞周期表现出较早期细胞特点。

成人骨髓间质干细胞定向诱导为脂肪细胞的研究

目的 :体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为脂肪细胞。方法 :采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液 (1 0 77× 10 3 g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达 ,地塞米松、IBMX、胰岛素、indomethacin定向诱导MSC分化为脂肪细胞。油红O检测中性脂肪 ,光镜下细胞计数。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增 5代可获得 1× 10 8个细胞。流式细胞仪检测结果显示CD2 9、CD44、CD90、CD10 5、CD16 6表达阳性 ,CD14、CD34、CD45、CD11a为阴性。诱导 48h后 ,细胞内有脂滴出现 ,随着时间延长 ,脂滴逐渐增加并融合为脂泡。细胞由梭形转变为圆形或多角性。细胞计数结果显示 85 %以上细胞转变为脂肪细胞。结论 :成人骨髓间质干细胞在体外可以分化为脂肪细胞。

隐丹参酮诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

目的:观察隐丹参酮体外定向诱导成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞。方法:采用Ficoll-Paque液分离成人MSC,体外扩增,FACScan流式细胞仪检测表面抗原表达,采用含隐丹参酮的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元样细胞。免疫组化鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF—M,NF—H)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(Nestin)的表达。结果:成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得0.5×106个细胞,15代可获得(2～3)×1012个细胞,流式细胞仪检测显示CD29、CD44、CD90、CD105、CD166表达阳性,CD11a、CD14、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性。加入隐丹参酮诱导后,MSC胞体收缩,突起伸出;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF-M,NF-H、Nestin表达阳性.GFAP阴性。结论:隐丹参酮在体外可诱导成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。

骨髓间质干细胞向大鼠损伤心肌组织的迁移(英文)

实验旨在动态观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向不同微环境下心肌组织的迁移特点,明确组织 损伤在干细胞迁移中的作用,为提高干细胞治疗的靶向性和高效性奠定初步试验基础。分离纯化雄性Sprague-Dawley(SD)大 鼠的骨髓MSCs,输注入雌性SD大鼠。实验分为4组:正常大鼠+MSCs移植组,假手术+MSCs移植组,心肌缺血+MSCs 移植组,心肌缺血对照组(心肌缺血+培养基移植)。结扎冠状动脉前降支制造心肌缺血模型,将相等数量的雄性MSCs经尾 静脉注射移植入前3组雌性大鼠体内,对照组注射等体积培养基,分别于移植后1周及8周取心脏组织标本,采用荧光原位 杂交方法(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测大鼠Y染色体雄性鉴别基因sry片段的表达,用透射电镜观察大鼠心肌组 织超微结构改变。结果发现,移植后1周和8周,正常大鼠移植组和对照组大鼠的心肌组织中均未见sry基因的表达,但假 手术移植组和心肌缺血移植组的心肌组织中均可见sry基因的表达,心肌缺血移植组的Y染色体sry基因阳性细胞数量在两个 时间点均显著高于假手术移植组(P<0．01)。分别比较心肌缺血移植组和假手术组在移植后1周和8周的Y染色体sry基因阳性细 胞的数量,两个时间点无明显差异。心肌组织的超微结构观察发现心肌缺血移植组大鼠的心肌梗死周边区域可见一些细胞, 其形态类似于体外培养的MSCs。研究结果提示MSCs具有向损伤心肌组织迁移的特性,迁移的高峰期可能在组织损伤1周左 右,组织损伤及其程度在干细胞迁移中起重要作用。

人骨髓间质干细胞分离纯化及基本生物学特性研究

目的 分离纯化人骨髓间质干细胞 (MSC) ,研究其基本生物学特性。方法 用比密 1 .0 73Ficoll淋巴细胞分离液分离成人骨髓MSC ,体外扩增 ,观察细胞生长特性 ,流式细胞仪检测骨髓MSC表面抗原表达及细胞周期 ,染色体技术分析骨髓MSC遗传特性。结果 成人骨髓MSC培养 3d后有散在呈针尖状的贴壁细胞 ,7～ 1 0d后形成集落或融合呈纤维状 ;体外扩增原代可获得 (4～ 6 )× 1 0 5个细胞 ,1 0代可获得 (1～ 5 )× 1 0 1 0 个细胞 ,5～ 6代以后的细胞增殖能力下降 ;流式细胞仪检测结果显示 :CD1 3、CD2 9、CD4 4、CD71表达阳性 ,CD3、CDl4、CD33、CD34、CD38、CD4 5、HLA DR不表达 ;染色体核型正常 ;细胞周期分析显示 ,G0 /G1 期 :79.4 8% ,G2 /M期 :6 .1 0 % ,S期 :1 4 .4 2 %。结论 人骨髓MSC体外具有较好的增殖更新能力 ,3～

人骨髓间质干细胞对肝星状细胞的体外调控

背景:目前肝纤维化尚没有公认的特效疗法,近年来骨髓间质干细胞应用于肝纤维化的治疗已取得一定效果,但具体机制仍不明确。目的:体外探讨人骨髓间质干细胞对肝星状细胞的调控作用。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/12在中山大学干细胞与组织工程研究中心、中山大学第三附属医院中心实验室完成。材料:骨髓来源于青年健康志愿者髂骨,人肝星状细胞购自中山大学实验动物中心,人正常肝细胞系L-O2购自中山大学实验动物中心。方法:将分离提纯的人骨髓间质干细胞与肝星状细胞在6孔Transwell板上建立上下共培养体系,接种密度均为2×104cells/well。另设L-O2代替人骨髓间质干细胞作为阴性对照,单纯培养的肝星状细胞为空白对照,培养72h。主要观察指标:肝星状细胞形态及免疫细胞化学染色结果,流式细胞仪检测肝星状细胞凋亡情况,Westernblot法检测肝星状细胞活化标志α-肌动蛋白的表达。结果:倒置显微镜下活化的肝星状细胞呈扁平状,胞浆内缺乏脂肪滴,α-肌动蛋白位于肝星状细胞胞质内,呈高张力纤维状分布。与L-02+肝星状细胞组、单纯肝星状细胞组比较,骨髓间质干细胞+肝星状细胞共培养组的肝星状细胞凋亡率明显升高(P<0.05),α-肌动蛋白表达水平明显下调。结论:人骨髓间质干细胞可抑制肝星状细胞活化,促进其凋亡,这可能是骨髓间质干细胞抗肝纤维化的作用机制。

体外定向诱导人骨髓间质干细胞分化为成骨细胞的研究

目的 :建立体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为成骨细胞的模型。方法 :采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离成人MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达 ,应用地塞米松、β -甘油磷酸钠、vitaminC定向诱导MSC分化为成骨细胞 ,检测碱性磷酸酶 (AP)活性、钙沉积、骨桥蛋白的表达鉴定成骨细胞 ,比较P3和P10代MSC成骨分化的能力。结果 :MSC在体外扩增原代可获得 (5 - 6 )× 10 5个细胞 ,10代可获得 2× 10 10个细胞。流式细胞仪检测结果显示CD2 9、CD4 4、CD5 9、CD10 5、CD16 6表达阳性 ,CD11a、CD14、CD33、CD34、CD4 5、CD38、CD80、CD86、CD117表达为阴性。加入成骨诱导剂 ,细胞形态发生变化 ,AP活性增强 ,骨桥蛋白表达阳性 ,钙沉积逐渐出现。P3和P10代的MSC均有良好的分化为成骨细胞的能力。结论 :成人骨髓间质干细胞在体外可分化为成骨细胞。

体外诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为胰岛素分泌细胞(英文)

目的探索大鼠骨髓间质干细胞体外诱导分化为胰岛素分泌细胞的方法。为解决胰岛移植物来源匮乏这一问题提供新的思路。方法 采用横向分化技术,将成年大鼠骨髓间质干细胞诱导成为胰岛素分泌细胞。间接免疫荧光法鉴定诱导前后细胞nestin、胰岛素、胰高血糖素、生长抑素及Pdx-1的表达,RT-PCR法检测诱导前后细胞nestin,胰岛素-1,葡萄糖转运子-2,葡萄糖激酶及其转录因子Isl-1,Pdx-1,Pax-4和Pax-6 mRNA的表达;测定24 h胰岛素分泌量和胰岛素刺激实验评价诱导前后细胞的功能。结果 诱导5 h,nestin阳性细胞为(44.6±7.3)％;诱导24 h,nestin阳性细胞增至(61.8±8.4)％;此后,nestin阳性细胞数目开始下降,诱导第14天后,nestin表达基本消失。诱导后的胰岛素分泌细胞可以表达胰岛素、胰高血糖素、生长抑素和Pdx-1等蛋白;表达胰岛素-1、葡萄糖转运子-2、葡萄糖激酶及其多种转录因子mRNA;胰岛素分泌量增加;胰岛素刺激实验反应敏感等。而诱导前MSCc不县备上述特点。结论 大鼠骨髓间质干细胞体外可以诱导成为胰岛素分泌细胞,为胰岛移植开辟新的研究思路。

诱导骨髓间质干细胞分化为角膜上皮样细胞的初步研究

目的:观察人骨髓间质干细胞(MSCs)移植到兔角膜基质后的分化发育情况,探讨MSCs分化为角膜上皮细胞的可行性。方法:24只新西兰兔随机分为2组。实验组:将人MSCs接种在保存人羊膜上培养4d,用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记后移植到兔角膜基质;对照组:采用保存羊膜移植到兔角膜基质。分别于移植后1、2、3、4、6和8周,摘取各组实验眼行组织学和免疫组织化学检查,检查移植到兔角膜基质的MSCs的存活、形态变化以及移植局部的反应等情况;免疫组织化学检测移植到角膜基质的带有BrdU标记的细胞角蛋白K3/12(CK3/CK12)和角蛋白K13(CK13)的表达。结果:MSCs接种到羊膜后能在羊膜上生长,与羊膜共培养4d后,MSCs贴附羊膜生长迅速,组织学特征无明显改变。羊膜负载MSCs移植到兔角膜基质表面,术后免疫组织化学检测角膜上皮层CK3/CK12表达阳性,CK13表达阴性,在重建的角膜上皮层可检测到BrdU核阳性细胞并同时表达角膜上皮细胞特异性表面标志蛋白K3/K12,未发生免疫排斥反应,未见异常增殖细胞。结论:羊膜负载MSCs移植到兔眼表角膜基质后,MSCs能存活、增殖并向角膜上皮样细胞分化。

胎儿骨髓间质干细胞体外诱导为神经细胞的初步实验研究

目的 :体外定向诱导胎儿骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经细胞。方法 :采用Ficoll淋巴细胞分离液分离MSC ,体外扩增、传代 ,采用 β 巯基乙醇等诱导剂诱导MSC分化为神经细胞 ,免疫组化鉴定神经丝蛋白(NF2 0 0 )、神经元烯醇化酶 (NSE)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) ,并且用RT PCR鉴定NF2 0 0、NSE和GFAP的mR NA表达情况。结果 :胎儿骨髓MSC在体外扩增第 5代以后 ,经诱导后 ,形态学上可呈现神经细胞形态特征 ;免疫组化显示诱导出的神经细胞NF2 0 0、NSE和GFAP均有阳性表达 ;RT PCR也显示诱导后表达量明显增加。结论 :胎儿骨髓MSC在体外可以分化为神经细胞。

骨髓间质干细胞复合生物陶瓷构建组织工程化人工软骨

目的 探索以多孔β-磷酸三钙 (β- TCP)生物陶瓷材料为支架 ,经体外诱导的骨髓间质干细胞 (MSCs)为种子细胞 ,构建组织工程化软骨修复羊关节软骨缺损的可行性。方法 将 2 8只中国美利奴绵羊分为三组。实验组 (n=12 ) :分离培养羊自体第 7代 MSCs,经转化生长因子 - β诱导后接种到预制的 β- TCP多孔生物陶瓷材料上 ,细胞 -材料复合体经体外孵育后 ,无菌条件下植入预制的羊单侧肱骨近端关节面缺损处 ;单纯材料组 (n=12 ) :采用单纯β- TCP材料修复羊关节软骨缺损 ;空白对照组 (n=4 ) :制备的羊关节软骨缺损区未做任何修复。术后 12周和 2 4周分别取材 ,进行组织学、组织化学和免疫组织化学分析。结果 实验组术后 12周羊关节软骨缺损处肉眼可见透明软骨样组织形成 ,组织学检查发现 ,材料降解明显 ,未降解吸收的材料孔洞内广泛分布着新生软骨组织 ,软骨细胞外基质丰富 , 型胶原染色阳性 ;术后 2 4周 ,支架材料几乎完全降解 ,缺损区被新生软骨组织所取代。单纯材料组术后 12周 ,缺损区边缘有新生软骨组织向支架材料内长入 ,支架材料吸收明显 ;术后 2 4周 ,见从缺损区边缘长入到支架材料内的新生软骨组织逐渐增多 ,但材料的中心部位未发现新生软骨形成。空白对照组至术后 2 4周 。

慢病毒载体介导Bdnf基因修饰的骨髓间质干细胞移植治疗脑梗死

为研究经Bdnf基因修饰的骨髓间质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)对脑梗死的协同治疗作用,构建带有大鼠Bdnf基因之慢病毒载体,并感染大鼠骨髓间质干细胞(Rat mesenchymal stem cells,rMSCs)。运用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型,经尾静脉注射移植,对照组注射0.1mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)1mL,Bdnf-rMSCs和Mock-rMSCs组分别注射Bdnf-rMSCs细胞悬液以及未插入目的基因的空病毒载体感染后的rMSCs细胞悬液各1mL。各组大鼠分别于术后24h、移植后2周及2月应用modified Neurological Severity Scores(mNSS)评价神经功能状况。结果显示,与对照组相比,Mock-rMSCs及Bdnf-rMSCs移植组神经功能改善明显,mNSS评分差异有统计学意义(P<0.001),而且Bdnf-rMSCs移植组明显优于Mock-rMSCs移植组(P<0.001)。移植后2周及2月,与对照组相比两移植组梗死区脑组织结构恢复较好,均可见EGFP阳性细胞在梗死区及其周边区聚集并存活,并有部分细胞出现神经元样改变。Bdnf-rMSCs移植组中移植细胞大量表达BDNF,两移植组中均有部分植入细胞表达神经细胞表面标志物。研究表明Bdnf基因修饰的rMSCs经静脉移植后可迁移至脑梗死灶周围,向神经细胞分化并长期存活。移植后的干细胞可与其分泌的BDNF协同促进脑梗死后神经功能恢复,这为将来基因工程干细胞移植治疗脑梗死提供了实验依据。

荜茇提取物对大鼠骨髓间质干细胞MSC的增殖作用及与化学官能团的关系

目的:观察荜茇挥发油和水溶性部分对大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)体外增殖的影响,并进一步探讨了与分子中化学官能团的关系。方法:使用密度梯度法分离大鼠骨髓间质干细胞,体外培养,经Brdu标记和CD44染色及两者双重染色鉴定后,观察在培养液中添加不同浓度荜茇挥发油及其水溶性部分的条件下MSC的生长变化。应用形态学、MTT法和5-溴脱氧尿嘧啶(5-Bromodeoxyuridine,Brdu)、增殖细胞核抗原(Proliferationcellnuclearantigen,PCNA)免疫细胞化学方法测定细胞增殖活性。结果:荜茇挥发油以浓度依赖方式促进MSC增殖活力和增加Brdu、PCNA阳性细胞数,与对照组比较有显著性(P<0.05)。经GC-MS检测,荜茇挥发油含C=C(50.66%)、-OH(27.02%)、多种官能团(5.05%)等;而荜茇水提物对MSC无增殖作用。结论:荜茇挥发油明显促进MSC的增殖,这种作用可能与分子中C=C、-OH等官能团有关。

PD98059对人骨髓间质干细胞分化为成骨细胞的影响

目的 :探讨胞外信号调节激酶 (ERK)信号传导途径对骨髓间质干细胞 (MSC)分化为成骨细胞的影响。方法 :采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离成人MSC ,体外扩增 ,应用地塞米松、β -甘油磷酸钠、vitaminC定向诱导MSC分化为成骨细胞。在成骨诱导液中加入不同剂量的PD980 59,观察其对成骨细胞形成的影响。结果 :MSC体外扩增 1 5代可获得 (3 - 4 )× 1 0 1 2 个细胞。在成骨诱导液作用下 ,MSC可在体外定向分化为成骨细胞。不同剂量的PD980 59均可抑制MSC分化为成骨细胞 ,并有剂量依赖关系 ;同时促使部分细胞转化为脂肪细胞。结论