优化溃结方对溃疡性结肠炎大鼠结肠Toll样受体/髓样分化因子88/核转录因子κB信号通路的影响

目的观察优化溃结方对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠Toll样受体/髓样分化因子88/核转录因子κB(TLR/MyD88/NF-κB)信号通路的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、优化溃结方组、柳氮磺吡啶组,每组10只。除空白组外,其余3组均参考三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇二次致炎法结合束缚法建立UC气滞血瘀型大鼠模型。造模成功后优化溃结方组大鼠予优化溃结方药液1.674 g/(kg·d)灌胃,柳氮磺吡啶组大鼠予柳氮磺吡啶药液0.54 g/(kg·d)灌胃,空白组、模型组不予任何治疗。14天后检测各组大鼠血清白细胞介素17A(IL-17A)、IL-10、IL-22水平,结肠组织MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达水平。结果与空白组相比,模型组血清IL-17A、IL-22水平显著升高(P<0.05),IL-10水平显著下降(P<0.05);与模型组相比,优化溃结方组、柳氮磺吡啶组IL-17A、IL-22水平显著降低(P<0.05),IL-10水平显著升高(P<0.05);优化溃结方组IL-17A、IL-22、IL-10水平与柳氮磺吡啶组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组相比,模型组结肠组织MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达均显著增加(P<0.05);与模型组相比,柳氮磺吡啶组、优化溃结方组MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达均显著下降(P<0.05);优化溃结方组MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达与柳氮磺吡啶组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论优化溃结方可能通过调节TLR/MyD88/NF-κB信号通路,降低炎症因子水平,减轻炎症反应,修复结肠组织的超微结构,从而修复UC大鼠结肠黏膜屏障功能。

青藤碱对兔膝骨关节炎模型软骨Toll样受体2、4及髓样分化因子88表达的影响

目的观察不同剂量青藤碱对兔膝骨关节炎模型关节软骨中Toll样受体(TLR)2、4和髓样分化因子88(My D88)表达的影响,探讨其相关作用机制。方法采用Hulth法建立膝骨关节炎模型。实验兔随机分为空白组、模型组和青藤碱低、中、高剂量组,空白组不予任何处理,模型组和青藤碱低、中、高剂量组膝关节腔分别注射生理盐水和0.2 mL(5 mg)、0.35 mL(8.75 mg)、0.5 mL(12.5 mg)青藤碱,共干预10次。实时荧光定量PCR和Western blot检测关节软骨TLR2、TLR4和My D88的mRNA和蛋白表达。结果模型组TLR2、TLR4、My D88的mRNA和蛋白表达较空白组均显著升高(P<0.01);与模型组比较,青藤碱中、高剂量组TLR2、TLR4、My D88的mRNA和蛋白表达均显著下调(P<0.05,P<0.01)。结论青藤碱可通过下调TLR/My D88通路中关键分子的表达抑制兔膝骨性关节炎软骨免疫反应。

益气活血复方含药血清对人脐静脉内皮细胞TLR4及其下游髓样分化因子88、肿瘤坏死因子受体相关因子-6表达的影响

目的研究益气活血复方含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路主要元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)表达的影响,从mRNA和蛋白水平探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化的机制。方法选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高、中、低浓度(1.6、0.8、0.4g/mL)组,每组5只。各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7天。末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清。体外培养HUVECs,随机分为6组,即空白对照组、模型组、西药对照组、中药高、中、低浓度组,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24h,收集细胞,用荧光定量PCR方法和Western blotting法分别测定TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA和蛋白的表达。结果用LPS刺激HUVECs后,引起TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA和蛋白的高表达(与空白对照组比较,P<0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA和蛋白的高表达(与模型组比较,P<0.01,P<0.05)。结论益气活血复方可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,抑制下游NF-κB以及各种相关基因表达,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一。

久泻灵颗粒对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠结肠髓样分化因子88和白细胞介素受体相关激酶1表达的影响

目的观察久泻灵颗粒对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠髓样分化因子88(MyD88)和白细胞介素受体相关激酶1(IRAK1)表达的影响,探讨其作用机制。方法采用复合方法制作动物模型。90只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组和久泻灵高、中、低剂量组,各给药组给予相应药物灌胃。RT-q PCR、免疫组化和Western blot分别检测MyD88、IRAK1基因和蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组大鼠MyD88、IRAK1基因和蛋白表达均增强(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠MyD88、IRAK1基因和蛋白表达均减弱(P<0.01),久泻灵颗粒高剂量组最为明显。结论久泻灵颗粒可抑制MyD88、IRAK1的表达,影响MyD88信号通路的传导,阻滞下游炎症因子的释放,从而达到治疗脾肾阳虚型UC的目的。

芒果苷对慢性炎症大鼠外周血单核细胞髓样分化因子88表达的影响

目的探讨芒果苷对脂多糖诱导慢性炎症大鼠外周血单核细胞髓样分化因子88表达的调控作用。方法以间断尾静脉注射小剂量脂多糖(200μg.kg-1)建立慢性炎症大鼠模型,大鼠随机分为对照组、模型组、泼尼松(5 mg.kg-1.d-1)组与芒果苷高、中、低剂量(MGF-H、MGF-M、MGF-L,200、100、50 mg.kg-1.d-1)组,灌胃给药,共4周。第4周末分离外周血单核细胞并经磁珠分选纯化,分别以RT-PCR、流式细胞术检测单核细胞髓样分化因子88的表达水平。结果与模型组比较,MGFH组外周血单核细胞髓样分化因子88过表达被明显抑制,全血白细胞计数与血清超敏C反应蛋白水平明显降低。结论芒果苷可抑制脂多糖诱导慢性炎症大鼠外周血单核细胞髓样分化因子88的过表达,可能与其抗炎作用有关。

新生儿窒息后Toll样受体4及髓样分化因子88表达变化在多器官功能障碍综合征中的意义

目的研究窒息新生儿外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体4(TLR4)及其信号转导途径中髓样分化因子88(MyD88)的变化与新生儿窒息后多器官功能障碍综合征(MODS)的关系。方法对窒息后24h之内入院的50例窒息新生儿和10例健康足月新生儿,应用免疫组化的方法检测窒息后第1、3、7天(PBMCs)TLR4及MyD88的表达情况,并与窒息后全身炎症反应综合征(SIRS)和MODS的发生及预后情况进行比较。结果①窒息新生儿外周血单个核细胞的TLR4和MyD88的表达在窒息后第1天增强,第3天开始减弱,第7天左右恢复正常。②在窒息后第1天,TLR4和MyD88的表达与新生儿危重症评分呈显著负相关(r=-0.74、-0.73,P均<0.01),TLR4和MyD88两者呈显著正相关(r=0.70,P<0.01);发生SIRS、MODS和预后差的病例,其窒息后第1天TLR4和MyD88的表达呈++～+++的比例增多,与未发生SIRS、MODS和预后好的病例相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论新生儿窒息早期可能激活了TLR4及其信号转导通路MyD88,引起单核巨噬细胞系统释放一系列炎症因子,导致了SIRS和MODS的发生。TLR4及其信号转导通路MyD88可以作为诊断新生儿窒息后SIRS和MODS的早期指标和估计预后的指标之一。

灯盏花素对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞髓样分化因子88、肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的:研究灯盏花素对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cells,RPMCS)髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。方法:采用腹膜组织块消化法获取RPMCS并进行原代培养,第3代细胞分组培养:(1)对照组;(2)1.5%、2.5%、4.25%葡萄糖组:用1.5%、2.5%、4.25%葡萄糖分别培养细胞4、6、8 h;(3)各浓度组培养细胞6 h后加入灯盏花素干预8 h。MTT法测定各组的OD值,ELISA法检测上清液中MyD88、TNF-α的浓度。结果:腹透液培养后,RPMCS的OD值较对照组显著降低(P<0.01),细胞增殖下降,且葡萄糖浓度越高,刺激时间越长,OD值下降越显著(P<0.05)。加入灯盏花素干预后,各组OD值升高(P<0.05)。各组加入葡萄糖后与对照组比较MyD88、TNF-α表达显著升高(P<0.01),灯盏花素干预后二者的表达下降(P<0.05)。结论:高糖抑制RPMCS增殖,刺激细胞MyD88、TNF-α表达上调,灯盏花素可缓解高糖对细胞增殖的抑制,下调炎症因子的表达,改善腹膜炎症,保护腹膜功能。

加味柴芍六君颗粒对溃疡性结肠炎大鼠的治疗效果及对结肠组织髓样分化因子88表达的影响

目的探讨加味柴芍六君颗粒对溃疡性结肠炎(UC)大鼠的治疗效果及对结肠组织髓样分化因子88(MyD88)表达的影响。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组以及中药大、中、小剂量组,每组10只。除正常组外,其他组均采用免疫法建立大鼠UC模型。造模成功后,正常组及模型组给予生理盐水灌胃,SASP组给予SASP混悬液灌胃,中药大、中、小剂量组分别给予浓度为1 mg/mL、0.5 mg/mL、0.25 mg/mL的加味柴芍六君颗粒溶液灌胃。造模及用药期间观察所有大鼠的一般情况,评价结肠黏膜损伤指数(CMDI)。治疗4周后,取各组大鼠结肠组织进行病理学检查,并采用免疫组化法及蛋白免疫印记法检测各组大鼠结肠黏膜组织MyD88蛋白表达水平。结果(1)造模过程中,正常组大鼠一般情况良好,大便正常;模型组及各药物组大鼠出现黏液脓血便,但经干预后各药物组大鼠黏液脓血便逐渐消失。(2)正常组CMDI评分均低于其余5组(均P<0.05),各药物组CMDI评分均低于模型组(均P<0.05),中药中剂量组CMDI评分均低于其他药物组(均P<0.05)。(3)免疫组化法及蛋白免疫印记法检测结果均显示,正常组MyD88蛋白表达水平均低于其余5组(均P<0.05),各药物组MyD88蛋白表达水平均低于模型组(均P<0.05),中药小剂量组、中药大剂量组、SASP组、中药中剂量组MyD88蛋白表达水平依次降低(均P<0.05)。结论加味柴芍六君颗粒可改善UC大鼠的症状及结肠黏膜病理变化(以中剂量效果最佳),其机制或为通过降低MyD88蛋白水平,抑制UC大鼠的炎症反应,提高免疫耐受。

尼古丁对哮喘大鼠树突状细胞髓样分化因子88及白介素-10、白介素-12表达的影响

目的通过研究尼古丁对哮喘大鼠模型树突状细胞(DCs)Toll受体转导途径中重要接头蛋白髓样分化因子88(MyD88)表达影响及其与白介素-10(IL-10)、白介素-12(IL-12)的关系,从细胞水平探讨尼古丁加重哮喘的免疫学机制。方法制备哮喘大鼠模型,培养骨髓来源的DCs及脾脏来源的淋巴细胞,实验随机分为4组:对照组、哮喘组、尼古丁组和哮喘加尼古丁组,其中对照组和哮喘组大鼠DCs在培养5 d后在培养液中加入一定体积的PBS继续培养72 h,尼古丁组和哮喘加尼古丁组大鼠DCs在培养5 d后加入质量浓度为400μg/ml尼古丁作用72 h。收集各组细胞及细胞上清,采用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)测定各组IL-10和IL-12的浓度。采用免疫印迹(Western blot)法测定细胞内MyD88的含量。采用MTT法测定DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。结果①哮喘加尼古丁组和哮喘组大鼠DCs IL-10的表达均高于对照组,IL-12的表达均低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.01)。哮喘加尼古丁组大鼠DCs IL-10和IL-12的表达均低于哮喘组大鼠,差异均具有统计学意义(P<0.05)。②尼古丁组、哮喘组和哮喘加尼古丁组大鼠DCs MyD88的表达低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。哮喘加尼古丁组大鼠DCs MyD88的表达低于哮喘组,差异均具有统计学意义(P<0.01)。③哮喘组大鼠DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力与对照组相比明显增强,差异具有统计学意义(P<0.01)。哮喘加尼古丁组大鼠DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力与哮喘组和对照组相比明显减弱,差异均具有统计学意义(P<0.05)。④DCs MyD88的表达与IL-12呈显著的正相关(r=0.644,P<0.01),与IL-10的表达无明显相关性。IL-12与IL-10的表达呈显著的负相关(r=-0.388,P<0.05)。DCs中IL-10的表达与淋巴细胞增殖活性呈显著的正相关(r=0.524,P<0.01);IL-12的表达与淋巴细胞增殖活性无明显相关性。结论尼古丁可以抑制哮喘大鼠DCs MyD88以及IL-10、IL-12的表达,并降低DCs刺激淋巴细胞的增殖能力。这可能是吸烟加重哮喘的免疫学机制之一。其中MyD88依赖的Toll受体转导途径可能在尼古丁下调IL-12的表达中发挥了一定作用。

脂氧素A4受体激动剂及白介素-1β在Toll样受体2/髓样分化因子88/核因子-κB信号通路对哮喘小鼠气道炎症的调控作用

目的:研究脂氧素(LX)A4受体激动剂及白介素-1β抗体在Toll样受体2(TLR2)/髓样分化因子88(My D88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路中对哮喘小鼠气道炎症的调控机制。方法:以卵清蛋白(OVA)致敏激发法制备小鼠哮喘模型,60只二级雄性Balb/c小鼠随机分为6组,分别给予脂氧素A4受体激动剂(BML-111)、白介素(IL)-1β抗体、BML-111载体、兔Ig G治疗。末次激发后留取血清和肺组织标本,光镜下观察支气管周围炎症浸润情况;测定血清IL-1β、IL-4、IL-8、干扰素(IFN)-γ水平;检测肺组织TLR2、My D88、NF-κB的表达。结果:OVA致敏的小鼠血清IL-1β、IL-4、IL-8水平升高,IFN-γ浓度降低;OVA致敏导致明显的支气管周围炎症细胞浸润,使支气管炎症分级指数有明显提高;BML-111或IL-1β抗体治疗均能明显阻止上述OVA介导的炎症变化(χ2=28.14,P<0.01)。OVA致敏使肺组织TLR2、My D88表达及NF-κB活性升高,BML-111及抗IL-1β抗体可抑制由OVA引发的上述表达变化。结论:OVA可诱导产生气道炎症,这一作用可能受TLR2/My D88/NF-κB信号通路调控,IL-1β在这一过程中起了至关重要的作用。BML-111和IL-1β抗体可能通过对TLR2/My D88/NF-κB信号通路的负调控而实现抑制OVA诱发的呼吸道炎症的作用。

人胎盘胎儿来源间充质干细胞通过下调髓样分化因子88和转化生长因子β信号通路减轻小鼠肺纤维化

目的探讨无血清培养人胎盘胎儿来源间充质干细胞(hf PMSC)对博来霉素所致小鼠肺纤维化的疗效及分子机制。方法培养并采用流式细胞术鉴定hf PMSC,取无特定病原体级雄性6周龄C57BL/6J小鼠随机分为博来霉素组、hf PMSC治疗组和阴性对照组。博来霉素组和hf PMSC治疗组分别经气管内注入50μL博莱霉素(1 g/L)制备肺纤维化模型,阴性对照组经气管内注入50μL PBS。hf PMSC治疗组,在造模3 d后,经尾静脉注射200μL含5×105个hf PMSC。第21天全部处死各实验组小鼠,取肺组织进行HE染色、Masson染色以及胶原蛋白含量测定;提取各组肺组织总蛋白,Western blot法检测髓样分化因子88(My D88)、转化生长因子β(TGF-β)的表达;ELISA检测各组血清中TGF-β的浓度。结果所培养具有典型的间充质干细胞形态特征并表达表面标志分子CD73、CD90和CD105,而不表达CD14、CD34和CD45。与博来霉素组比较,HE和Masson染色显示,hf PMSC治疗组可显著性降低肺组织纤维化程度、降低肺组织胶原蛋白含量以及My D88和TGF-β蛋白水平。结论hf PMSC可通过My D88下调TGF-β的表达减轻小鼠肺纤维化。

髓样分化因子88基因rs7744多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病易感性及严重程度的关系

目的探讨中国北方汉族人群髓样分化因子88(MyD88)基因3’非编码区(3’-UTR)rs7744多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)发病风险及严重程度的关系。方法收集2013年9月至2015年9月中国医科大学附属第一医院血液标本810例。CAD组540例,对照组270例,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测rs7744多态性,并收集临床资料。结果 MyD88基因rs7744符合Hardy-Weiberg平衡(P>0.1)。对MyD88基因rs7744多态性与CAD发病风险的关系进行总体和分层分析。MyD88基因rs7744多态位点,年龄<50岁,AG突变杂合型携带者CAD的发病风险是AA野生纯合型携带者的0.38倍(95%CI:0.17~0.93;P=0.029)。对My D88基因rs7744多态性与CAD严重程度的关系进行冠状动脉病变支数及改良Gensini评分分析。在改良Gensini评分分析中,My D88基因rs7744多态位点,GG突变纯合型携带者的改良Gensini评分显著低于AA野生纯合型携带者(5.23±3.85 vs 7.49±4.96;P=0.011)。结论 MyD88基因3’-UTR区rs7744多态性与CAD发病风险及严重程度存在关联关系。携带rs7744突变基因型的年龄<50岁人群,CAD的发病率比较低。rs7744突变基因型携带者的改良Gensini评分显著低于野生型携带者。

髓样分化因子88抑制剂ST2825对重组耻垢分枝杆菌感染THP-1细胞自噬的影响

目的探讨髓样分化因子88抑制剂ST2825对重组耻垢分枝杆菌感染THP-1细胞自噬的影响。方法使用髓样分化因子88抑制剂ST2825作用于重组耻垢分枝杆菌感染的THP-1细胞,确定ST2825干预的实验组、无ST2825作用的对照组以及空白组。运用荧光显微镜观察自噬小体,RT-PCR检测Beclin-1基因和Bcl-2基因的m RNA的表达。结果与对照组比较,实验组的自噬荧光小点数目明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05);RT-PCR检测结果显示Beclin-1和Bcl-2 m RNA表达较对照组下调。结论髓样分化因子88抑制剂ST2858可能通过干扰Beclin-1和Bcl-2的分离,抑制THP-1细胞自噬。

脂多糖对类风湿关节炎外周血单核细胞Toll样受体4、髓样分化因子88蛋白表达的影响

目的观察脂多糖(LPS)对类风湿关节炎(RA)患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)蛋白表达的影响。方法采用活动期RA患者外周血进行单核细胞的分离培养,并与健康志愿者做对照。分为以下5组观察:健康对照组、健康+LPS组、RA对照组、RA+LPS组、RA+LPS+TAK-242组,并采用Western blot法检测各组TLR4、My D88蛋白的表达。结果健康+LPS组或RA+LPS组TLR4、My D88蛋白表达与健康对照组或RA对照组比较均明显升高(均P<0.01);RA对照组或RA+LPS组TLR4、My D88蛋白表达与健康对照组或健康+LPS组比较均明显升高(均P<0.01);RA+LPS+TAK-242组TLR4、My D88蛋白表达与RA+LPS组比较明显降低(均P<0.01)。结论 RA活动期单核细胞可能存在TLR/My D88信号通路的激活,且对LPS的刺激反应性增强。

髓样分化因子88在结直肠癌患者癌组织中的表达及其临床意义

目的:分析髓样分化因子88(MyD88)在结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中的表达,探讨其表达与结直肠癌患者临床病理参数和预后的关系,阐明MyD88表达的临床意义。方法:收集90例结直肠癌患者的癌组织及其相对应的癌远旁组织标本并分析其临床病理资料,免疫组织化学法检测MyD88在结直肠癌及癌远旁组织中的表达,应用Image-Pro Plus 6.0软件半定量分析MyD88在不同组织中的表达水平,采用Kaplan-Meier法对90例结直肠癌患者进行生存分析。结果:MyD88在结直肠癌组织中的表达水平明显高于癌远旁组织(P<0.01);MyD88表达水平与结直肠癌患者年龄、性别、肿瘤大小和组织学分化无明显关联(P>0.05),MyD88表达水平与结直肠癌患者临床分期、T分期、M分期和淋巴结转移状态有关联(P<0.05);MyD88高表达组结直肠癌患者生存率明显低于MyD88低表达组(P<0.05)。结论:MyD88在结直肠癌患者癌组织中高表达,且与患者的临床分期、T分期、M分期和淋巴结转移状态有关联。

卵巢癌紫杉醇耐药细胞耐药性和髓样分化因子88关系的研究

目的:研究卵巢癌亲本A2780细胞与卵巢癌紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol生物学特性及与髓样分化因子(Myeloid dif-ferentiation factor 88,MyD88)的关系。方法:应用CCK-8法检测A2780细胞和A2780/Taxol细胞的耐药性和耐药指数,采用流式细胞法检测A2780和A2780/Taxol细胞的细胞周期。应用罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)排出实验测定P-糖蛋白(P-gly-coprotein,P-gp)表达。应用Western blot检测A2780和A2780/Taxol细胞中P-gp的表达情况。应用细胞免疫化学检测A2780和A2780/Taxol细胞中MyD88、P-gp的表达情况。结果:A2780与A2780/Taxol相比,A2780/Taxol生长缓慢,呈G1期阻滞;CCK-8结果显示A2780/Taxol细胞对紫杉醇的IC50为(36.81±2.05)μg/ml,A2780细胞对紫杉醇的IC50为(1.40±0.18)μg/ml;两者的耐药指数(Resistance index,RI)为26.35。Rh123排出实验显示A2780/Taxol平均荧光强度显著降低。Western blot检测发现A2780/Taxol的P-gp表达比A2780明显升高(P<0.05)。细胞免疫化学检测发现A2780/Taxol中的P-gp和MyD88表达明显高于A2780细胞。结论:A2780/Taxol细胞株具有明确的耐药性,紫杉醇耐药与MyD88的表达密切相关,该细胞株可用于卵巢癌紫杉醇耐药的基础研究。

髓样分化因子88对小鼠肠缺血再灌注致急性肺损伤的影响

目的观察髓样分化因子88（MyD88）对小鼠肠缺血再灌注致急性肺损伤（ALl）的影响。方法6～8周龄雄性MyD88基因敲除小鼠（MyD88-α）和野生型C57BL／6J小鼠各24只，两种品系小鼠均各随机分入假手术组（sham组，分别为基因敲除sham组和野生型sham组）和肠缺血再灌注组（IR组，分别为基因敲除I／R组和野生型I／R组），每组12只。麻醉后I／R组小鼠制备肠缺血再灌注致ALI模型，sham组小鼠除不钳夹血管外其余操作同I／R组，待再灌注6h后处死小鼠开胸取肺标本，苏木精-伊红染色后在光学显微镜下观察肺组织病理学改变并行肺组织病理半定量评分，计算肺湿千重比，应用酶联免疫吸附试验检测肺组织肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）一6水平，应用反转录一聚合酶链反应检测Toll样受体4（TLR4）mRNA表达水平。结果野生型I／R组的肺组织病理半定量评分显著高于野生型sham组（P％0．05），而基因敲除I／R组显著低于野生型I／R组（P〈O．05）。野生型I／R组的肺湿干重比显著高于野生型sham组（P〈O．05），而基因敲除I／R组与基因敲除sham组的差异无统计学意义（P〉O．05）。野生型I／R组肺组织TNF-α和IL-6水平均显著高于野生型sham组（P值均〈0．05），而基因敲除I／R组肺组织TNF-α和IL-6水平显著低于野生型I／R组（P值均〈O．05）。野生型I／R组肺组织TLR4mRNA的表达显著高于野生型sham组（P〈O．05），而基因敲除I／R组肺组织TLR4mRNA的表达显著低于野生型I／R组（P〈0．05）。结论MyD88基因敲除可明显减轻小鼠肠缺血再灌注后的ALI，减轻肺水肿和肺血管通透性，下调肺组织TLR4mRNA表达和TNF_a、IL-6水平。

水牛髓样分化因子88融合蛋白真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

将水牛髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)cDNA全长定向克隆至pEGFP-C1真核表达载体,通过酶切和测序鉴定正确后,经脂质体介导将重组质粒转染至HEK293细胞,应用荧光显微镜、流氏细胞术和Westernblotting检测MyD88蛋白的表达。结果表明,酶切及测序结果证实重组质粒含有MyD88全长CDS序列,融合蛋白读码正确;荧光显微镜、流式细胞术和Western blotting检测证实,水牛EGFP-MyD88融合蛋白真核表达载体能够在HEK293细胞表达。本研究成功构建了pEGFP-C1-MyD88真核表达载体,并使其在HEK293细胞中获得表达,为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础。

髓样分化因子88抑制肽对小鼠脑缺血损伤的保护作用及机制研究

目的:研究髓样分化因子88抑制肽(MIP)对小鼠脑缺血损伤的保护作用及其机制。方法:将45只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(sham)、局灶性脑缺血组(FCI)和给药组(MIP)。用光化学法诱导小鼠脑缺血损伤,给药组在缺血后第2 d开始给予MIP腹腔注射,10 mg/kg·d,连续3 d。分别于缺血后1、3、7和14 d观察前肢运动功能的变化,用HE染色观察梗死体积的变化,TUNEL染色检测缺血损伤区神经元凋亡,免疫荧光染色和Western Blot检测损伤区BDNF的表达。结果:与sham组相比,FCI组小鼠前肢运动能力明显下降(P <0.01),损伤区可见大量TUNEL阳性细胞;与FCI组相比,MIP组小鼠在脑缺血后第7 d,前肢运动功能显著改善(P <0.01);梗死体积明显减小(P <0.05),损伤区TUNEL阳性细胞的数量明显减少(P <0.01),而BDNF的表达显著上调(P <0.01)。结论:MIP对小鼠脑缺血损伤具有保护作用,其机制可能与其减少神经元凋亡,增加局部BDNF的表达有关。

妊娠期高血压和子痫患者血清中髓样分化因子88的表达

目的:探讨髓样分化因子88(MyD88)在妊娠期高血压和子痫患者血清中的表达及意义。方法:选取32例妊娠期高血压孕妇(妊娠期高血压组),正常孕晚期孕妇32例(正常对照组)以及子痫孕妇30例(子痫组),分别采用免疫印迹法检测孕妇血清中MyD88蛋白表达水平,酶联免疫吸附法检测血清中白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果:与正常对照组相比,妊娠期高血压组和子痫组孕妇IL-6、IL-8、TNF-α以及MyD88蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);子痫组孕妇IL-6、IL-8、TNF-α和MyD88的表达水平明显高于妊娠期高血压组,差异有统计意义(P<0.05),Myd88的表达水平与IL-6、IL-8和TNF-α水平呈正相关。结论:MyD88与妊娠期高血压的病情程度密切相关,可能是妊娠期发病机制中的重要参与者。