性别差异对脓毒症大鼠肺组织Toll样受体4及髓样分化蛋白-2基因表达的影响

目的 探讨性别差异对脓毒症大鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白-2(MD-2)和 肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的影响。方法 脂多糖(LPS)刺激前后留取雌性和雄性大鼠肺组织标本, 提取总RNA,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TLR4、MD-2和TNF-α的基因表达情况, 采用放射免疫测定法检测大鼠血浆雌二醇(E2)含量。结果 正常雌性和雄性大鼠肺组织均可表达少量 TLR4、MD-2和TNF-α基因,性别间差异均无显著性(P均>0．05),但脓毒症雌性大鼠各项指标表达均明 显弱于雄性(P均<0．01)。相关分析表明,雌性和雄性脓毒症大鼠肺组织TLR4、TNF-α的mRNA表达与血 浆E2含量均呈显著负相关(P均<0．05)。结论 LPS诱导的肺组织TLR4信号转导通路活化存在性别差异, 内源性雌激素作用可能导致雌性脓毒症大鼠对LPS的反应性弱于雄性。

宣肺通腑方对脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织髓样分化蛋白-2、核因子-κB表达的影响

目的观察宣肺通腑方对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织髓样分化蛋白-2(MD-2)、核因子-κB(NF-κB)蛋白及其基因表达的影响,并探讨其作用机制。方法 Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组和宣肺通腑方大、中、小剂量组,每组8只。尾静脉注射LPS 6 mg/kg制备大鼠ALI模型。宣肺通腑方各组于造模前以15.12、7.56、3.78 g原药材/kg宣肺通腑方水煎液灌胃,1次/d,连续3 d;地塞米松组在造模前1 h按5 mg/kg腹腔注射地塞米松。造模后9 h麻醉取材,采用免疫组化ABC法和实时荧光定量聚合酶链反应检测MD-2、NF-κB蛋白及其基因表达,光镜下观察大鼠肺组织病理变化。结果与正常组比较,模型组MD-2、NF-κB蛋白及其基因表达均明显上调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,地塞米松组和宣肺通腑方各组MD-2、NF-κB蛋白及其基因表达明显降低(P<0.05,P<0.01);地塞米松组和宣肺通腑方各剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。病理观察结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肺组织出现大片出血及坏死,炎症细胞大量浸润;宣肺通腑方各剂量组和地塞米松组大鼠肺组织病理改变明显轻于模型组,肺细支气管偶见炎症改变,水肿较轻,炎性细胞渗出较少。结论宣肺通腑方能减轻ALI大鼠肺组织损伤,对肺损伤有保护作用,其机制可能与其降低ALI大鼠MD-2、NF-κB蛋白及其基因表达有关。

脓毒症大鼠肝脏组织Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的变化规律

目的探讨脓毒症大鼠肝脏组织内毒素复合受体--Toll样受体4 (TLR4)/髓样分化蛋白-2(MD-2)mRNA的表达变化,研究其与肝脏组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的关系.方法腹腔注射内毒素(LPS)5mg/kg制作大鼠脓毒症模型.动物分为正常对照组(20只)及内毒素注射后1h、2h、6h组(各20只),检测肝脏组织TLR4/MD-2以及TNF-α mRNA的表达.结果 LPS注射后1h,TLR4/MD-2及TNF-α mRNA表达开始升高并达高峰,伤后2～6h逐渐下降,各时间点的表达量均显著高于对照组(P<0.01),TLR4与MD-2 mRNA的表达呈明显正相关(P<0.05),且分别与TNF-α mRNA的表达呈显著正相关(P<0.05).结论 LPS可迅速上调肝脏组织TLR4/MD-2的基因表达并诱导早期炎症细胞因子TNF-α的基因表达.脓毒症时TLR4识别LPS是可能以TLR4/MD-2复合体的形式完成的,且在识别过程中MD-2是TLR4必需的作用分子.

乙醇性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症肝组织Toll样受体及髓样分化蛋白-2的表达变化

目的:探讨乙醇性肝病大鼠创伤弧菌(VV)脓毒症肝组织Toll样受体及髓样分化蛋白-2的表达及其动态变化。方法:制作乙醇性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症模型。大鼠随机分为正常对照组、乙醇性肝病对照组和乙醇性肝病创伤弧菌脓毒症组。观察乙醇性肝病创伤弧菌脓毒症组大鼠在染菌后各时点脓毒症表现,并采用逆转录聚合酶链(RT-PCR)技术检测各时点大鼠肝组织TLR2、TLR4、MD-2 mRNA表达及其动态变化。结果:乙醇性肝病创伤弧菌脓毒症组大鼠染菌后6 h开始出现较明显的毒血症状,随着时间的延长毒血症状加剧。乙醇性肝病大鼠在染菌后2 h,TLR2、TLR4、MD-2 mRNA表达开始升高,12 h达峰值,染菌后24 h下降。染菌后各时点TLR2、TLR4、MD-2 mRNA表达较正常对照组及乙醇性肝病对照组显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:乙醇性肝病大鼠VV脓毒症肝组织TLR2、TLR4、MD-2 mRNA表达水平随脓毒症病情的进展而升高,其与脓毒症的发生、发展密切相关,动态监测其改变对创伤弧菌脓毒症发病过程具有一定的意义。

髓样分化蛋白-2在识别和转导内毒素信号中的作用

脂多糖(LPS)通过TLR4介导细胞炎症反应.研究表明,髓样分化蛋白-2(MD-2)通过与TLR4形成复合物参与LPS诱导的细胞信号过程.TLR4/MD-2复合物中的MD-2结合LPS后,引起TLR4低聚化,进而激发下游信号.MD-2合成后,大部分在内质网/高尔基体和TLR4结合,然后以TLR4/MD-2复合物的形式在细胞表面表达.这既能调节TLR4的胞内分布,又能辅助TLR4识别LPS.还有一部分MD-2释放到血浆中,形成可溶性的MD-2(sMD-2).sMD-2在CD14参与下,能结合血浆中的LPS,形成LPS-sMD-2复合物从而辅助只表达TLR4而不表达MD-2的细胞识别LPS,但过度表达的sMD-2又能抑制LPS信号.MD-2在TLR4介导的内毒素识别和信号转导过程中发挥了重要的调控作用.

性别差异对脓毒症大鼠心肌Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的影响

目的:探讨性别差异对脓毒症大鼠心肌Toll样受体4(TLR4)和髓样分化蛋白-2(MD-2)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的影响。方法:取40只清洁级Wistar大鼠,雌雄各半,分为正常雌雄性对照组(各10只),雌雄性脓毒症组(各10只)。采用腹腔注射5mg/kg内毒素(LPS)制作脓毒症大鼠模型,无菌留取大鼠心肌组织标本,利用RT-PCR法检测心肌组织TLR4、MD-2以及TNF-α基因表达,利用放免法检测大鼠血浆雌二醇含量。结果:正常雌雄性大鼠心肌组织均可表达少量TLR4、MD-2及TNF-α基因,两组差异无统计学意义(P>0.05),但是注射LPS后雌性大鼠心肌组织各项指标明显低于雄性大鼠(P<0.01)。相关分析表明,雌性及雄性脓毒症大鼠心肌组织TLR4及TNF-α基因表达与相应性别大鼠血浆中雌二醇含量呈显著负相关(P<0.05)。结论:LPS注射后大鼠心肌组织TLR4、MD-2及TNF-α基因表达存在性别差异,内源性雌激素的作用可能导致雌性脓毒症大鼠心肌组织对LPS的反应性弱于雄性。

中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2 cDNA的克隆与原核表达

本试验旨在克隆并表达中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2(myeloid differentiation protein-2,MD-2)基因,并用West-ern blotting进行鉴定。采用RT-PCR技术从中国荷斯坦奶牛外周血白细胞中扩增MD-2cDNA,并将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经测序鉴定后,构建pET28a-MD-2重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果表明,目的基因含有1个483bp的开放阅读框,编码161个氨基酸;与黄牛、黑猩猩和小鼠MD-2的cDNA序列同源性分别为99.38%、77.02%、68.12%,氨基酸同源性分别为98.75%、65.00%和58.13%。融合蛋白以包涵体的形式存在,分子质量约为25ku。说明本研究成功克隆并表达了中国荷斯坦奶牛MD-2cDNA,为其进一步的功能研究提供了理论依据。

髓样分化蛋白-2在天然免疫中的作用

Toll样受体 (Toll likereceptor ,TLR)家族作为模式识别受体 ,在天然免疫中具有重要作用。髓样分化蛋白 2 (myeloiddifferentialprotein 2 ,MD 2 )可能含有两个相对独立的功能结构域 ,既能与Toll样受体家族中的TLR4、TLR2结合 ,也能与多种配体结合 (包括lipopolysaccharide ,LPS)。这种特殊的结构可能与其三方面的主要功能有关 :(1)MD 2与TLR4结合 ,赋予TLR4对各种配体 (包括LPS)的反应性 ;(2 )MD 2与TLR2结合 ,赋予TLR2对LPS的反应性 ,并增强TLR2对细菌及其胞壁成分的反应性 ;(3)MD 2能促进TLR4和TLR2的表达 ,并且与TLR4在细胞内的分布密切相关。这表明MD 2可以通过两种方式直接或间接调控TLRs的功能 :与TLR2 /TLR4结合 ,或调控TLR2 /TLR4的表达与分布。因而MD 2不仅仅是TLR4的辅助分子 ,而且还是天然免疫中的调控分子 ,可能在感染、炎症。

人类髓样分化蛋白-2的原核表达

目的 :在大肠杆菌DH 5α中表达人类髓样分化蛋白 2 (humanmyeloiddifferentiatonprotein 2 ,hMD 2 )与谷胱甘肽巯基转移酶 (glutathione s transferase ,GST)的融合蛋白 (GST/hMD 2 ) ,并对融合蛋白进行免疫学鉴定及初步的变性复性处理 .方法 :建立GST/hMD 2表达菌 ,在不同温度下以不同浓度IPTG诱导不同时间后采样 ,用SDS PAGE分析各种组合条件下融合蛋白的表达量和溶解性 ;用Western Blot鉴定融合蛋白免疫性 ;用尿素变性和透析法对融合蛋白进行初步纯化 .结果 :在 37℃经 0 .4mmol/LIPTG诱导 4h后 ,GST/hMD 2可获最高表达量 (约占菌体总蛋白的 2 0 % ) ,未见可溶性表达 ;Western Blot证实GST/hMD 2能与抗MD 2单克隆抗体特异性结合 ;GST/hMD 2溶于 8mol/L尿素 ,梯度透析后纯度提高至4 0 % .结论 :hMD 2可在大肠杆菌DH

TOLL样受体-4和髓样分化蛋白-2在血吸虫病小鼠肝脏的表达及意义

目的:探讨血吸虫病小鼠肝脏TOLL样受体-4(TLR-4)和髓样分化蛋白-2(MD-2)的表达及其在肝脏损害中的作用。方法:将40只健康小鼠随机分成正常对照组(N组,20只)与模型组(M组,20只),M组采用腹部敷贴法制作血吸虫病模型,造模150天后处死动物,鲎试验法测定血清内毒素水平;免疫组化和RT-PCR方法检测肝脏中TLR-4和MD-2的表达。结果:M组血清内毒素水平高于N组(P<0.01);M组小鼠肝脏TLR-4/MD-2表达水平高于N组(P<0.01);M组小鼠肝脏TLR-4/MD-2高表达主要位于肝窦内皮细胞及肝窦区周围细胞。结论:血吸虫病肝硬化可发生肠源性内毒素易位、内毒素血症;脂多糖通过其信号转导蛋白TLR-4和MD-2在肝脏的高表达,激活一系列促炎基因的转录,可能是引起血吸虫病肝脏损害的原因之一。

髓样分化蛋白-2模拟肽抑制巨噬细胞吞噬革兰阴性菌

目的探讨髓样分化蛋白-2模拟肽(MD-2 mimetic peptide,MDMP)对巨噬细胞吞噬革兰阴性菌的影响及所致炎症因子分泌的抑制效应。方法采用PCR从p EGFP-C3质粒中扩增出表达EGFP的基因片段,通过基因重组构建原核表达载体p ET-32a(+)-EGFP,经测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)PLys S中筛选出稳定表达的重组菌p ET-32a(+)-EGFP-BL21(DE3)PLys S(简称为EGFPBL21)。以IPTG诱导重组质粒表达后,通过免疫荧光和流式细胞术检测RAW264.7细胞对EGFP-BL21的吞噬能力以验证EGFP-BL21的构建情况。进一步检测RAW264.7细胞对经不同浓度MDMP(1.0、10、100μg/m L)预处理后的EGFP-BL21的吞噬效应;采用ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α和IL-6的分泌水平。结果筛选获得稳定表达EGFP的重组大肠杆菌BL21(DE3)PLys S,重组菌经巨噬细胞RAW264.7吞噬后流式和激光共聚焦检测结果显示细胞内出现明显的绿色荧光。MDMP预处理后,流式检测结果显示RAW264.7细胞对EGFP-BL21的吞噬能力受到明显抑制,预处理组(10、100μg/m L)的吞噬系数(PI)显著低于经血清调理的阳性对照组(P<0.01),且细胞培养上清TNF-α和IL-6的分泌水平显著降低(P<0.01)。结论 MDMP预处理可明显抑制RAW264.7细胞对革兰阴性菌的吞噬作用,并降低该过程中炎症因子TNF-α和IL-6的分泌。

髓样分化蛋白-2在内毒素与内皮细胞结合中的作用

目的 探讨髓样分化蛋白 2 (myeloiddifferentiationprotein 2 ,MD 2 )在人内皮细胞中的表达及其在内毒素 (LPS)与内皮细胞结合中的作用。方法 分离、培养人脐静脉内皮细胞 ,RT PCR和Westernblot方法检测内皮细胞MD 2的表达以及LPS对其表达的影响 ;流式细胞仪检测在有或无血清时LPS与内皮细胞的结合以及TLR4、MD 2抗体对其结合的影响。结果 内皮细胞有MD 2mRNA及相关蛋白的表达 ,LPS能明显上调其表达水平 ,并呈一定的时间和剂量依赖性 ;血清能明显促进不同剂量LPS与HUVEC的结合 ,尤其是小剂量LPS ;TLR4、MD 2单克隆抗体分别能阻断LPS与内皮细胞的结合 ,且阻断程度与抗体剂量呈依赖关系。结论 TLR4、MD 2是内皮细胞上与LPS结合的主要受体 ,MD 2在LPS与内皮细胞的结合中起着重要的作用。

髓样分化蛋白-2及Toll样受体4在星形细胞瘤中的表达及临床意义

目的检测不同级别星形细胞瘤中髓样分化蛋白-2(MD2)和Toll样受体4(TLR-4)的表达,并探讨其临床意义。方法收集2019年1月~2020年8月于山东国欣颐养集团新汶中心医院接受手术切除治疗的低级别星形细胞瘤(LGA)患者50例及高级别星形细胞瘤(HGA)患者50例,所有患者的肿瘤组织样本于术中离体后立刻保存于液氮中,采用免疫组化法检测肿瘤组织中TLR4、MD2、髓样分化因子88(MYD88)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测肿瘤组织中TLR4、MD2、MYD88和TNF-α的mRNA表达水平。采用Pearson线性相关分析探讨TLR4、MD2与下游因子MYD88和TNF-α的相关性。结果HGA组患者肿瘤组织中TLR4、MD2、MYD88、TNF-α及其mRNA的表达水平均高于LGA组(P<0.01)。星型细胞瘤患者MYD88和TNF-α的表达水平与TLR4、MD2均呈正相关(P<0.05)。结论MD2、TLR-4在HGA中表达水平高于LGA,同时下游关键信号因子MYD88和TNF-α表达水平也高于LGA,且MD2、TLR-4的表达水平与MYD88和TNF-α的表达水平显著相关,提示MD2、TLR-4在星形细胞瘤发生发展中具有重要的作用。

髓样分化蛋白-2调控AMPK介导肥胖所致心肌损伤的研究

目的探讨髓样分化蛋白-2(MD-2)通过调控AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)介导肥胖引起的心肌损伤中的作用。方法用高脂饲料喂养制备肥胖小鼠模型。将野生型和MD-2基因敲除小鼠随机分为野生型对照组(正常饲养)、野生型模型组(高脂饲料)、敲除对照组(正常饲养)和敲除模型组(高脂饲料),每组8只。用试剂盒测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,用小动物超声检测左心室射血分数(LVEF)和左短轴缩短率(LVFS),用苏木精-伊红(HE)染色法和Masson染色法观察心肌组织病理变化,用蛋白质印迹法检测心肌组织中磷酸化AMPK(p-AMPK)蛋白的表达情况。结果HE染色和Masson染色结果发现野生型模型组小鼠心肌组织出现明显变性坏死和纤维化,而敲除模型组心肌细胞变性坏死与心肌组织纤维化明显减轻。野生型对照组、野生型模型组、敲除对照组和敲除模型组的LVEF值分别为(83.98±7.58)%、(52.03±4.91)%、(76.42±3.89)%和(73.71±4.22)%,LVFS值分别为(53.61±8.51)%、(24.56±3.76)%、(48.14±5.00)%和(44.07±3.74)%,CK-MB值分别为(49.83±15.49)、(83.75±11.90)、(54.03±18.66)和(66.85±12.98)U·L^(-1),LDH值分别为(12.24±3.20)、(27.90±6.10)、(13.55±3.55)和(15.53±2.58)U·L^(-1),p-AMPK蛋白相对表达水平分别为221.31±88.76、46.29±10.07、148.66±32.02和161.49±78.11。野生型模型组的上述指标与野生型对照组比较,敲除模型组的上述指标与野生型模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论高脂饲料通过MD-2抑制AMPK活性介导了肥胖小鼠的心肌损伤。

基于髓样分化蛋白-2靶点探讨熊果酸抗脓毒症的作用机制

目的以髓样分化蛋白-2(MD-2)为研究载体,探讨熊果酸抗脓毒症的作用机制。方法应用生物膜干涉技术测定熊果酸与MD-2的亲和力,基于分子对接技术测定熊果酸与MD-2的键合方式。RPMI 1640培养基培养巨噬细胞Raw 264.7,细胞密度达到80%~90%时进行传代培养,取第2代细胞进行实验,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测8、40和100 mg/L熊果酸对细胞活性的影响。将细胞分为空白组、内毒素组(LPS 100μg/L)和熊果酸组(加入8、40或100 mg/L熊果酸后给予100μg/L LPS处理)。用酶联免疫吸附试验(ELISA)评价熊果酸对一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-1β)等细胞因子释放的影响;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)评价熊果酸对TNF-α、IL-6、IL-1β、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)mRNA表达的影响;蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测熊果酸对内毒素-Toll样受体4/MD-2-核转录因子-κB(LPS-TLR4/MD-2-NF-κB)通路中蛋白表达的影响。结果熊果酸可能进入MD-2的疏水性空腔,通过疏水键与MD-2的氨基酸残基结合表现出与蛋白的较高亲和力〔解离常数(KD)=1.43×10^(-4)〕。随着熊果酸浓度升高,细胞活性略有降低,8、40和100 mg/L熊果酸处理的细胞活性分别为96.01%、94.32%和92.12%,与空白组(100%)比较差异均无统计学意义。与空白组比较,LPS组细胞因子水平明显升高;而8、40和100 mg/L熊果酸处理可使细胞因子水平显著下降,且浓度越高作用越明显〔100 mg/L熊果酸与LPS组比较:IL-1β(μmol/L):38.018±0.675比111.324±1.262,IL-6(μmol/L):35.052±1.664比115.255±5.392,TNF-α(μmol/L):39.078±2.741比119.035±4.269,NO(μmol/L):40.885±2.372比123.405±1.291,均P<0.01〕。与空白组比较,LPS组TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、COX-2的mRNA表达均明显升高,LPS-TLR4/MD-2-NF-κB通路中MD-2、髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)和iNOS的蛋白表达明显上调。与LPS组比较,100 mg/L熊果酸与MD-2蛋白作用,可使TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、COX-2的mRNA表达明显下降〔TNF-α(2^(-ΔΔCt)):4.659±0.821比8.652±0.787,IL-6(2^(-ΔΔCt)):4.296±0.802比11.132±1.615,IL-1β(2^(-ΔΔCt)):4.482±1.224比11.758±1.324,iNOS(2^(-ΔΔCt)):1.785±0.529比4.249±0.811,COX-2(2^(-ΔΔCt)):5.591±1.586比16.953±1.651,均P<0.01〕,并显著下调LPS-TLR4/MD-2-NF-κB通路中MD-2、MyD88、p-NF-κB p65和iNOS的蛋白表达(MD-2/β-actin:0.191±0.038比0.704±0.049,MyD88/β-actin:0.470±0.042比0.875±0.058,p-NF-κB p65/β-actin:0.178±0.012比0.571±0.012,iNOS/β-actin:0.247±0.035比0.549±0.033,均P<0.01)。但3组间NF-κB p65的蛋白表达差异无统计学意义。结论熊果酸抑制细胞因子和介质的释放及表达,通过阻断MD-2蛋白调控LPS-TLR4/MD-2-NF-κB信号通路,从而起到抗脓毒症的作用。

性别差异对脓毒症大鼠肝脏Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的影响

目的探讨性别差异对脓毒症大鼠肝脏组织Toll样受体4(TLR4)和髓样分化蛋白- 2(MD-2)基因表达的影响。方法以脂多糖(LPS)按5 mg/kg体重由大鼠腹腔注射制作脓毒症动物模型,注射后2 h留取肝脏组织检测TLR4、MD-2和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达,同时测定各组大鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)及雌二醇含量。结果正常雌雄性大鼠肝脏组织均可表达少量TLR4、MD-2、TNF-α基因,其中雌性组分别为0．175±0．034、0．211±0．044、0．201±0．068; 雄性组分别为0．205±0．061、0．243±0．049、0．243±0．063,两组数据差异无统计学意义(P> 0．05),但LPS刺激后雌性大鼠肝脏组织上述指标分别为0．615±0．089、0．708±0．181、0．730± 0．118,血浆中ALT含量为(81．07±10．72)U／L;雄性组分别为0．723±0．091、1．123±0．272、 0．881±0．156,ALT含量为(106．39±14．21)U／L,雌性组各项指标均明显低于雄性大鼠(P< 0．05)。相关分析表明雌性及雄性脓毒症大鼠肝脏组织TLR4及TNF-α基因表达与相应性别大鼠血浆中雌二醇含量呈显著负相关(P<0．05)。结论 LPS刺激后大鼠肝脏组织TLR4、MD-2及 TNF-α基因表达存在性别差异,内源性雌激素的作用可能导致雌性脓毒症大鼠肝脏组织损伤较雄性轻。

创伤患者外周血单核细胞Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的变化

目的 研究创伤患者外周血单核细胞内内毒素复合受体Toll样受体 4(TLR4) 髓样分化蛋白 - 2 (MD - 2 )mRNA的表达变化 ,观察其与临床预后的关系。 方法 35例创伤患者 [损伤严重度评分 (ISS)≥ 9分 ]与 14例正常对照 ,采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)法扩增TLR4、MD - 2 ,以 β肌动蛋白 (β -actin)的表达作为内参照 ,比较TLR4、MD - 2的表达水平 ;采用鲎试剂法测血浆脂多糖 (LPS)浓度 ;同时观察患者的预后情况。 结果 所观察的创伤患者中 ,血浆LPS浓度均发生不同程度的升高 ;TLR4、MD - 2基因的表达均降低 ,但预后良好的可在伤后第 5天恢复正常水平 ,预后差的在伤后第 5天的表达仍处于低水平。 结论 创伤可引起内毒素血症 ,创伤后人外周血单核细胞内TLR4、MD - 2mRNA的表达与患者的免疫机能、预后情况密切相关。

脓毒症大鼠心肌Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的变化和意义

目的探讨脓毒症大鼠心肌组织内毒素信号转导复合受体Toll样受体4(TLR4)／髓样分化蛋白-2(MD-2)基因表达的变化情况,研究其与心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的关系。方法采用腹腔注射5 mg／kg体重内毒素(LPS)制作大鼠脓毒症模型。动物分为正常对照组(10只),内毒素注射后1、2、6 h组(各10只),利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测心肌组织TLR4／MD-2以及TNF-α的基因表达。结果LPS注射后1 h,TLR4／MD-2及TNF-α基因表达开始升高,2 h达高峰,6 h逐渐下降,各时间点的表达均显著高于对照组(P<0．01)。相关分析表明,心肌TLR4／MD-2基因表达分别与TNF-α基因表达呈显著正相关(P<0．05)。结论LPS 可上调心肌组织TLR4／MD-2基因表达并诱导早期炎症细胞因子TNF-α基因表达。TLR4识别 LPS信号是以TLR4／MD-2复合受体的形式完成的,而且在识别过程中,MD-2是TLR4必需的作用分子。

手术创伤后Toll样受体4/髓样分化蛋白-2的表达

目的研究手术创伤对Toll样受体4(TLR4)/髓样分化蛋白2(MD2)表达的影响及其临床意义。方法设计自身配对实验,采集12例手术患者外周静脉血;用密度梯度离心法和黏附洗脱法分离单核细胞,用流式细胞仪检测单核细胞TLR4和MD2的表达;血浆脂多糖(LPS)、血浆TNFα和IL10,以及血浆TLR4和MD2含量分别用鲎试剂法、放免法和ELISA法检测。结果单核细胞TLR4和MD2在术后第1～3天显著上调表达(P<0.01),两者具有显著相关性;围手术期血浆LPS在正常范围波动(<50μg/L),血浆TNFα在各时间点差异无统计学意义(P>0.05);血浆IL10于术后第3天显著升高(P<0.01);血浆MD2在术后第3～5天显著升高(P<0.01),而TLR4仅在第3天轻度升高(P>0.05)。结论手术创伤早期可导致TLR4/MD2上调表达,致机体敏感性增强;此后血浆抑制性介质IL10和MD2升高并产生免疫抑制效应。这种双向性变化可能是大手术后全身炎症反应综合征(SIRS)和脓毒症发生的分子机制之一。

髓样分化蛋白-2在内毒素激活内皮细胞核因子-кB中的作用

目的 探讨髓样分化蛋白 - 2 (myeloiddifferentiationprotein - 2 ,MD - 2 )在内毒素(LPS)对内皮细胞核因子 -кB(NF -кB)激活中的作用。 方法 以ECV30 4细胞为模型 ,逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)方法检测内皮细胞MD - 2mRNA的表达 ;转染MD - 2功能突变体 ,观察MD - 2在内毒素对内皮细胞NF -кB激活和内皮细胞分泌IL - 8中的作用。 结果 内皮细胞有MD - 2mRNA的表达 ,转染MD - 2的突变体能明显抑制内毒素对内皮细胞NF -кB的激活和内皮细胞IL - 8的分泌。 结论 MD - 2在内毒素对内皮细胞NF -κB激活中发挥着不可缺少的作用 ,且在内毒素对内皮细胞激活 /损伤效应中占有重要的地位。