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过敏物的高效液相排阻色谱测定
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作者 李金华 Vera Pacakova 《理化检验(化学分册)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期442-444,共3页
采用高效液相排阻色谱对几种过敏物质,树木花粉、寄生虫和猫狗毛萃取物进行分析,测定主要成分的分子量。结果表明,高效液相排阻色谱适合过敏物质的成分分离和分子量测定。
关键词 高效液相排阻色谱 过敏物质 主成分 相对分子质量
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体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱测定印度芥菜中镉的形态 被引量:15
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作者 杨红霞 刘崴 +3 位作者 李冰 魏巍 张惠娟 陈登云 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1511-1514,共4页
建立了体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(SEC-HPLC-ICP-MS)测定镉超积累植物印度芥菜中镉的形态分析方法。在镉胁迫下,诱导产生植物螯合肽(PCs)。因此,在叶片和根部均检测到植物螯合肽(PC)3-Cd、植物螯合肽(PC)2-Cd、谷胱甘... 建立了体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(SEC-HPLC-ICP-MS)测定镉超积累植物印度芥菜中镉的形态分析方法。在镉胁迫下,诱导产生植物螯合肽(PCs)。因此,在叶片和根部均检测到植物螯合肽(PC)3-Cd、植物螯合肽(PC)2-Cd、谷胱甘肽(GSH)-Cd,及半胱胺酸(Cys)-Cd4种形态。研究结果证明,植物螯合肽的合成机制为先形成GSH-Cd而后形成植物螯合肽。在植物不同部位,Cd存在形态不同。叶片中主要以GSH-Cd存在,而在根部主要以PC2-Cd为主,结合不同镉刺激浓度条件下植物体内镉分布规律初步推断:根部PC2-Cd除了自身合成产生外,还有部分为叶部转移。为了防止巯基化合物氧化反应的发生,样品采取液氮保护并于-70℃保存,样品分析全流程用氮吹防氧化措施。 展开更多
关键词 形态分析 体积高效液相 电感耦合等离子体质
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体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定海产贝类中镉的形态 被引量:22
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作者 赵艳芳 尚德荣 +1 位作者 宁劲松 翟毓秀 《分析化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第5期681-686,共6页
运用体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术(SEC-HPLC-ICP-MS)分析了高镉积累扇贝和低镉积累菲律宾蛤仔中镉的存在形态,并结合体外全仿生消化技术,研究了在唾液、胃、肠无机物和有机物(含消化酶)作用下,扇贝和菲律宾蛤仔... 运用体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术(SEC-HPLC-ICP-MS)分析了高镉积累扇贝和低镉积累菲律宾蛤仔中镉的存在形态,并结合体外全仿生消化技术,研究了在唾液、胃、肠无机物和有机物(含消化酶)作用下,扇贝和菲律宾蛤仔中镉的主要存在形态。结果发现:扇贝中Cd总量约为菲律宾蛤仔的10倍;在扇贝中检测到3种Cd形态:金属硫蛋白(MT)-Cd、谷胱甘肽(GSH)-Cd和半胱氨酸(Cys)-Cd;在菲律宾蛤仔中检测到2种Cd形态:MT-Cd和GSH-Cd;以峰面积作参考进行比较,扇贝中MT-Cd和GSH-Cd含量分别约为菲律宾蛤仔的5.6和2.0倍。结合体外全仿生模型发现,在扇贝胃全仿生提取液中,检测到1种未知小分子有机镉形态(Cd-X),在扇贝肠全仿生提取液中检测到4种Cd形态,其中MT-Cd是主要形态;而在菲律宾蛤仔胃、肠全仿生提取液中均仅检测到1种未知小分子有机态镉(Cd-X)。本实验证明贝类中的MT-Cd,GSH-Cd,Cys-Cd中络合的Cd在生物体胃肠消化液作用下会发生解离。 展开更多
关键词 形态分析 体积高效液相 电感耦合等离子体质 体外全仿生消化
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体积排阻高效液相色谱—电感耦合等离子体质谱法测定紫菜中镉(Cd)的形态 被引量:9
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作者 赵艳芳 尚德荣 +3 位作者 宁劲松 翟毓秀 盛晓风 张明 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期148-152,共5页
运用体积排阻高效液相色谱—电感耦合等离子体质谱联用技术(SEC-HPLC-ICP-MS)分析了紫菜中Cd的存在形态,结果发现,在紫菜水提取液中检测到3种Cd形态,根据其保留时间确定为植物螯合肽(PC)3-Cd、谷胱甘肽(GSH)-Cd和1种未知小分子有机态Cd... 运用体积排阻高效液相色谱—电感耦合等离子体质谱联用技术(SEC-HPLC-ICP-MS)分析了紫菜中Cd的存在形态,结果发现,在紫菜水提取液中检测到3种Cd形态,根据其保留时间确定为植物螯合肽(PC)3-Cd、谷胱甘肽(GSH)-Cd和1种未知小分子有机态Cd,结合体外全仿生消化技术,研究了在唾液、胃、肠无机物和有机物(含消化酶)作用下,紫菜中Cd的主要存在形态,分析发现在紫菜胃全仿生提取液中,检测到2种未知小分子有机态Cd,其中以保留时间为24.2 min的Cd形态为主要存在形态。在肠全仿生提取液中检测到2种Cd形态,其中(PC)3-Cd是主要存在形态。有关(PC)3-Cd在生物体内的代谢规律还需进一步研究。实验确证了Cd在紫菜中的主要有机形态,为紫菜食用安全风险评价提供重要依据。 展开更多
关键词 形态分析 体积高效液相 电感耦合等离子体质 体外全仿生消化
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体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法同时测定印度芥菜(Brassica Juncea)中镉铜锌形态 被引量:5
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作者 杨红霞 刘崴 +3 位作者 李冰 魏巍 张惠娟 陈登云 《岩矿测试》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期9-13,共5页
建立了体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法同时测定印度芥菜中镉、铜、锌形态分析方法。为了防止巯基化合物氧化反应的发生,样品采取液氮保护并在-70℃保存,样品分析全流程采取氮吹防氧化措施。在镉、铜、锌胁迫下,诱导产生... 建立了体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法同时测定印度芥菜中镉、铜、锌形态分析方法。为了防止巯基化合物氧化反应的发生,样品采取液氮保护并在-70℃保存,样品分析全流程采取氮吹防氧化措施。在镉、铜、锌胁迫下,诱导产生植物螯合肽(PCs)。在叶片和根部均检测到3种元素的4种形态,植物螯合肽(PC)3-Cd(Cu,Zn)、植物螯合肽(PC)2-Cd(Cu,Zn)、谷胱甘肽(GSH)-Cd(Cu,Zn)、半胱胺酸(Cys)-Cd(Cu,Zn)及其在植物体内的分布规律。结合植物不同部位Cd、Cu、Zn分布规律初步推断,Cd、Cu、Zn在与GSH及Cys的结合上存在竞争。 展开更多
关键词 形态分析 印度芥菜 体积高效液相-电感耦合等离子体质
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高效排阻液相色谱法分析大豆7S和11S球蛋白的分子质量和纯度 被引量:2
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作者 高雪丽 陈复生 +2 位作者 张丽芬 郭兴凤 樊明涛 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第2期98-103,共6页
本文采用SE-HPLC法定量分析大豆7S和11S球蛋白的分子质量和纯度。首先,对SE-HPLC的色谱条件进行优化,最佳的SE-HPLC色谱条件是:洗脱液(水/乙腈)70/30,洗脱液流速1.0 m L/min,进样量10μL。其次,绘制分子质量分析的标准曲线,分子质量标... 本文采用SE-HPLC法定量分析大豆7S和11S球蛋白的分子质量和纯度。首先,对SE-HPLC的色谱条件进行优化,最佳的SE-HPLC色谱条件是:洗脱液(水/乙腈)70/30,洗脱液流速1.0 m L/min,进样量10μL。其次,绘制分子质量分析的标准曲线,分子质量标准曲线方程为Log(M)=-0.222 1 x+3.878 9,线性相关系数为R^2=0.996 9。以10倍信噪比确定定量限,得到7S(y=299.59x+3.771 2,R^2=0.979 2)和11S(y=197.08x+4.148 5,R^2=0.986 1)纯度分析标准曲线方程。最后根据分子质量和纯度分析的标准曲线方程计算大豆7S和11S球蛋白的分子质量和纯度。将所提纯的7S和11S样品的分子质量与7S和11S标品特征峰分子质量进行比对,表明所提纯样品为7S和11S。本试验所制得7S和11S的纯度分别达到86.3%和92.0%。 展开更多
关键词 高效液相 大豆7S和11S球蛋白 分子质量 纯度
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高效液相分子排阻色谱法分析重组人复合α干扰素稳定性
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作者 吴丹 《江南大学学报(自然科学版)》 CAS 2011年第6期721-725,共5页
采用高效液相分子排阻色谱法(HPLC-SEC)分析不同温度、振荡时间和pH条件下缓冲液中重组人复合α干扰素(cIFN)单体降解和聚合程度,以研究cIFN的体外稳定性。分析表明,振荡会引起cIFN同时发生严重的降解和聚合,在振荡15 min后,聚合体质量... 采用高效液相分子排阻色谱法(HPLC-SEC)分析不同温度、振荡时间和pH条件下缓冲液中重组人复合α干扰素(cIFN)单体降解和聚合程度,以研究cIFN的体外稳定性。分析表明,振荡会引起cIFN同时发生严重的降解和聚合,在振荡15 min后,聚合体质量分数23.8%,降解产物质量分数29.6%。温度和pH会引发严重降解和部分聚合,40°C下放置66 h会产生质量分数16.3%的聚合体和质量分数49.3%的降解产物;在pH 9放置66 h后会产生质量分数11.5%聚合体和质量分数37.7%的降解产物。研究显示HPLC-SEC方法能对不同环境条件下cIFN单体所发生的聚合和降解变化进行精确定量分析。不同环境下cIFN单体容易产生聚合体和降解产物表明:cIFN稳定性较差,蛋白质单体之间作用形式容易受到环境因素影响而发生改变。 展开更多
关键词 高效液相分子 人复合α干扰素 聚合体 降解产物
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高效液相体积排阻色谱法测定稻米支链淀粉链长的相对分子质量分布 被引量:5
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作者 杨小雨 刘正辉 +3 位作者 李刚华 王强盛 王绍华 丁艳锋 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第16期3488-3495,共8页
【目的】建立稻米支链淀粉链长相对分子质量分布的高效液相体积排阻色谱法(high performance sizeexclusion chromatography,HPSEC)的测定方法。【方法】先采用丁醇沉降法分离提纯稻米支链淀粉,纯化后的支链淀粉经异淀粉酶酶解切开分支... 【目的】建立稻米支链淀粉链长相对分子质量分布的高效液相体积排阻色谱法(high performance sizeexclusion chromatography,HPSEC)的测定方法。【方法】先采用丁醇沉降法分离提纯稻米支链淀粉,纯化后的支链淀粉经异淀粉酶酶解切开分支糖苷键,然后运用HPSEC测定其相对分子质量分布。建立了稻米支链淀粉链长相对分子质量分布的HPSEC分析方法:Shodex SB-G、Shodex SB-803(1 000—100 000)、Shodex SB-802.5(300—10 000)3根凝胶色谱柱串连,柱温40℃;流动相为0.1 mol.L-1Tris+0.1 mol.L-1NaCl,pH=7.40,流速0.5 mL.min-1;采用示差折光检测器(Differential refractive index detector,RI),检测器温度为37℃;待测样品浓度为5mg.mL-1,进样量20μL。【结果】本法提纯的稻米支链淀粉:淀粉含量为99.4%、蛋白残余为0.02%、支链淀粉碘复合物最大吸收峰为517 nm,为高纯度支链淀粉。供试大米样品脱分支支链淀粉的平均聚合度(DP)分布在2—120,无杂峰干扰。【结论】试验结果和方法验证表明本方法数据可靠、重复性好、简单易行。 展开更多
关键词 稻米支链淀粉 相对分子质量分布 高效液相体积
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高效液相体积排阻色谱法测定苦木注射液中大分子物质 被引量:2
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作者 刘艳红 刘尧奇 +3 位作者 刘地发 邓双炳 方礼 李志勇 《中国药师》 CAS 2019年第2期353-355,共3页
目的:建立苦木注射液中大分子物质的高效液相体积排阻色谱(HPSEC)检测方法。方法:色谱柱为TSK G2000SWxl凝胶柱(300 mm×7. 8 mm,5μm);以乙腈-0. 08%三氟乙酸水溶液(30∶70)为流动相;体积流量为0. 6 ml·min^(-1);检测波长为21... 目的:建立苦木注射液中大分子物质的高效液相体积排阻色谱(HPSEC)检测方法。方法:色谱柱为TSK G2000SWxl凝胶柱(300 mm×7. 8 mm,5μm);以乙腈-0. 08%三氟乙酸水溶液(30∶70)为流动相;体积流量为0. 6 ml·min^(-1);检测波长为214 nm;柱温为30℃;按面积归一化法计算大分子物质的质量分数。结果:相对分子质量在1 638~13 700的物质,其相对分子质量对数-保留时间呈现良好的线性关系(r=0. 998 7);生长抑素、胸腺肽α1、人胰岛素、核糖核酸酶A的平均回收率分别为98. 9%,99. 4%,96. 6%,101. 2%,RSD分别为2. 5%,4. 4%,2. 7%,0. 6%(n=6); 20批苦木注射液均未检出大分子物质。结论:本方法简便易行,结果准确可靠,可作为苦木注射液质量控制方法。 展开更多
关键词 高效液相体积 大分子物质 苦木注射液 生长抑素 胸腺肽Α1 人胰岛素 核糖核酸酶A
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高效凝胶排阻色谱法测定大豆多肽相对分子质量分布及不确定度评估 被引量:2
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作者 武利庆 王晶 杨彬 《计量学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期476-480,共5页
采用高效凝胶排阻色谱法测定大豆多肽保健品的肽相对分子质量分布。通过优化标准物质的选择和流动相组成比例等测定条件,考察方法的日内和日间精密度。以相对分子质量标准物质制作标准曲线,对大豆多肽中100~1000分子量范围的多肽分... 采用高效凝胶排阻色谱法测定大豆多肽保健品的肽相对分子质量分布。通过优化标准物质的选择和流动相组成比例等测定条件,考察方法的日内和日间精密度。以相对分子质量标准物质制作标准曲线,对大豆多肽中100~1000分子量范围的多肽分布进行了测定,测定结果的扩展不确定度为9.2,测量结果可表示为(63.3±9.2)%。 展开更多
关键词 计量学 多肽 高效凝胶液相 不确定度 标准物质
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冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)体积分子排阻-高效液相色谱主峰右侧峰2蛋白鉴定
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作者 张秋菊 杨雪 +7 位作者 冯子祎 赵博 林洪娟 田丽媛 杨光 刘畅 李子莉 孙宏亮 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第7期801-805,共5页
目的对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)体积分子排阻-高效液相色谱(size exclusion chromatograghy-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)主峰右侧峰2蛋白进行鉴定,以明确该峰的蛋白成分,保证疫苗质量。方法将... 目的对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)体积分子排阻-高效液相色谱(size exclusion chromatograghy-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)主峰右侧峰2蛋白进行鉴定,以明确该峰的蛋白成分,保证疫苗质量。方法将冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)进行SEC-HPLC分析,收集主峰右侧峰2,经超滤浓缩后,进行二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)还原、碘代乙酰胺(iodoacetamide,IAM)烷基化和胰蛋白酶(Trypsin)酶解,产物进行nanoLC-MS/MS串联质谱分析。结果冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)SEC-HPLC主峰右侧峰2成功鉴定4个蛋白,单个蛋白匹配肽段数在59~79个之间;单个蛋白匹配特征肽段种数在6~12种之间;单个蛋白匹配特征肽段检出次数在20~36次之间;鉴定蛋白的序列覆盖率在37.40%~64.31%之间。参与统计的肽段共280个,质谱偏差均小于0.15 Da。结论冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)SEC-HPLC主峰右侧峰2均来源于狂犬病病毒株4aGV,为疫苗颗粒解离物。 展开更多
关键词 狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白) 狂犬病病毒株4aGV 体积分子-高效液相 蛋白鉴定 nanoLC-MS/MS分析 疫苗病毒颗粒
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高效液相体积排阻色谱法测定银杏二萜内酯提取物中大分子物质 被引量:3
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作者 王雪 张伟 +3 位作者 李家春 黄文哲 王振中 萧伟 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期436-439,共4页
目的建立银杏二萜内酯提取物中大分子物质的高效液相体积排阻色谱(HPSEC-RI)检测方法。方法色谱柱为Phenomenex Biosep-SEC-S2000(300 mm×7.8 mm,5μm);以0.05 mol/L硫酸钠为流动相;体积流量为0.7 m L/min;柱温30℃;示差检测器... 目的建立银杏二萜内酯提取物中大分子物质的高效液相体积排阻色谱(HPSEC-RI)检测方法。方法色谱柱为Phenomenex Biosep-SEC-S2000(300 mm×7.8 mm,5μm);以0.05 mol/L硫酸钠为流动相;体积流量为0.7 m L/min;柱温30℃;示差检测器,按面积归一化法计算大分子物质的质量分数。结果相对分子质量在2 500~84 400的物质,其相对分子质量对数-保留时间呈现良好的线性关系(r=0.998 3);平均回收率为96.8%,RSD为1.5%;5批银杏二萜内酯提取物和14批银杏二萜内酯葡胺注射液均未检出大分子物质。结论本方法简便易行,结果准确可靠,可作为银杏二萜内酯提取物及银杏二萜内酯葡胺注射液质量控制方法。 展开更多
关键词 银杏二萜内酯提取物 大分子物质 高效液相体积 右旋糖酐 银杏二萜内酯葡胺注射液
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喜炎平注射液中大分子物质的高效液相体积排阻色谱法测定 被引量:2
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作者 刘尧奇 刘艳红 +3 位作者 李志勇 邓双炳 方礼 刘地发 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1365-1367,共3页
目的 建立喜炎平注射液中大分子物质的高效液相体积排阻色谱(HPSEC-UV)检测方法。方法 色谱柱为TSK G2000 SWxl凝胶柱(300 mm×7.8 mm,5μm);以乙腈-0.03%三氟乙酸水溶液(30:70)为流动相;体积流量为0.8 mL/min;检测波长为214 nm;柱... 目的 建立喜炎平注射液中大分子物质的高效液相体积排阻色谱(HPSEC-UV)检测方法。方法 色谱柱为TSK G2000 SWxl凝胶柱(300 mm×7.8 mm,5μm);以乙腈-0.03%三氟乙酸水溶液(30:70)为流动相;体积流量为0.8 mL/min;检测波长为214 nm;柱温30℃;按面积归一化法计算大分子物质的质量分数。结果 相对分子质量在1638~13700的物质,其相对分子质量对数-保留时间呈现良好的线性关系(r=0.9991);胸腺肽α1和生长抑素的平均回收率分别为100.8%、100.6%,RSD分别为0.5%、2.0%;20批喜炎平注射液均未检出大分子物质。结论 该方法简便易行,结果准确可靠,可作为喜炎平注射液质量控制方法。 展开更多
关键词 高效液相体积 喜炎平注射液 生长抑素 胸腺肽Α1 人胰岛素 核糖核酸酶A
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分子排阻高效液相色谱法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白纯度 被引量:2
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作者 王婉如 高雪峰 +3 位作者 刘宇阳 杨军 张艳丽 毛晓燕 《微生物学免疫学进展》 2020年第5期16-20,共5页
目的建立检测促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-Fc fusion protein,简称E4F4)纯度的分子排阻高效液相色谱法(size exclusion high performance liquid chromatography,SEC-HPLC),并对该方法进行验证。方法使用Waters 515系列高效液相... 目的建立检测促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-Fc fusion protein,简称E4F4)纯度的分子排阻高效液相色谱法(size exclusion high performance liquid chromatography,SEC-HPLC),并对该方法进行验证。方法使用Waters 515系列高效液相色谱仪,利用TSK G2000SWXL色谱柱检测E4F4的纯度,并从系统适应性、专属性、重复性和中间精密度进行验证,同时使用20、50、100 mmol/L磷酸盐缓冲液的流动相对样品进行了6次纯度检测。结果空白溶剂在目标峰积分范围内无干扰峰;专属性验证表明样品与阴性对照分离度良好;6次重复进样目标峰面积相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.49%,保留时间RSD为0.11%;中间精密度分析目标峰面积RSD为0.47%,保留时间RSD为0.48%;使用不同盐浓度(20~100 mmol/L PBS,pH 6.8)的流动相对样品进行6次纯度检测后,各样品纯度均大于99.0%,目标峰面积RSD为0.53%,保留时间RSD为0.76%。结论经验证,建立的SEC-HPLC法各项指标均符合要求,可用于E4F4的纯度检测。 展开更多
关键词 分子高效液相 促胰岛素分泌肽融合蛋白 纯度 验证
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重组人生长激素-Fc免疫融合蛋白多聚体含量尺寸排阻高效液相色谱检测方法的优化及验证
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作者 马陌 孙瑞欣 +2 位作者 王江林 刘冰莹 刘景会 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1235-1241,共7页
目的 优化重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)-Fc免疫融合蛋白多聚体含量尺寸排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)检测方法,并对优化的方法 进行验... 目的 优化重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)-Fc免疫融合蛋白多聚体含量尺寸排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)检测方法,并对优化的方法 进行验证。方法 利用SEC-HPLC法对rhGH-Fc免疫融合蛋白中多聚体含量进行检测,优化检测条件(盐浓度、流动相pH、流速、柱温及色谱柱型号),观察目的 蛋白与聚合体分离的效果。对方法 的系统适应性、专属性、线性与范围、精密性、准确性及定量限进行验证。结果 优化后的方法 为采用TSK-gel G2000SW_(xl)色谱柱(5μm,7.8 mm×300 mm)进行测定,流动相50 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.80),检测波长280 nm,进样量100μL,流速0.6 mL/min,柱温45℃。rhGH-Fc免疫融合蛋白与聚合物分离度、理论塔板数、拖尾因子均能满足要求;rhGH-Fc免疫融合蛋白样品与对照品出峰时间一致,GH国家标准品与对照品出峰时间不同,蛋白缓冲液不出峰;rhGH-Fc免疫融合蛋白浓度在0.307~1.842 mg/mL范围内,其峰面积与上样量呈良好的线性关系(R^(2)=0.999 4);重复性验证峰面积和纯度的RSD分别为0.7%和0.1%;中间精密性验证的RSD为0.8%;准确性验证的平均回收率为99.1%,RSD为1.9%;定量限为6μg/mL。结论 采用优化后的SEC-HPLC法检测rhGH-Fc免疫融合蛋白多聚体含量,准确性有所提高,柱效与分离度符合《中国药典》四部(2020版)的相关规定,可用于对样品中高分子含量的检测。 展开更多
关键词 尺寸高效液相 重组人生长激素 免疫融合蛋白 多聚体
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鸡传染性法氏囊病病毒rVP2蛋白高效组装亚病毒颗粒的鉴定 被引量:5
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作者 王彦伟 张素玲 +7 位作者 吴芃 耿笑林 黄玉欣 李鹏昊 王孟月 李向东 逄文强 田克恭 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第6期1677-1684,共8页
为获得高纯度的鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白自组装的亚病毒颗粒(subviral particles,SVPs),并对重组VP2蛋白(rVP2)SVPs的组装效率和均一性进行评价,本试验利用大肠杆菌表达IBDV rVP2,通过SDS-P... 为获得高纯度的鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白自组装的亚病毒颗粒(subviral particles,SVPs),并对重组VP2蛋白(rVP2)SVPs的组装效率和均一性进行评价,本试验利用大肠杆菌表达IBDV rVP2,通过SDS-PAGE和Western blotting对蛋白表达情况和免疫反应性进行鉴定,通过阴离子交换层析和切向流超滤浓缩系统纯化rVP2蛋白,并通过透射电镜(TEM)、高效液相尺寸排阻色谱(HPSEC)、蔗糖密度梯度离心及粒径和表面电位(Zeta potential)等多种检测技术对单个SVP组装形态和整体组装情况进行分析检测,初步建立了IBDV rVP2 SVPs组装效率的系统性检测方法。结果显示,在大肠杆菌中实现IBDV rVP2的大部分可溶性表达,且能与鸡IBDV阳性血清有明显的免疫反应性,纯化后rVP2纯度提高66.9倍,回收率达到93.3%。TEM观察rVP2自组装成直径约25 nm的SVPs,视野内SVPs大小均一,均匀分散。HPSEC检测结果显示,rVP2 SVPs的分子质量约为2482 ku,与20个VP2三聚体形成的T=1二十面体SVPs分子质量一致。蔗糖密度梯度离心检测结果显示,rVP2 SVPs体积分布均一,组装效率高。粒径和Zeta电位检测结果表明,rVP2 SVPs颗粒分散度较好、体系稳定,有利于rVP2 SVPs的长期保存。本试验通过多种检测技术对rVP2 SVPs的组装情况进行检测分析,实现了rVP2 SVPs的高效组装,为IBDV SVPs疫苗的质量控制提供了有力支撑。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒(IBDV) rVP2蛋白 亚病毒颗粒(SVPs) 高效液相尺寸(HPSEC)
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高效液相色谱在流感疫苗血凝素含量检测中的应用进展
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作者 童光伟(综述) 吴业红(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1005-1009,共5页
目前,流感疫苗血凝素(hemagglutinin,HA)含量最常用的检测方法仍为单向免疫扩散法(single-radial immunodiffusion,SRID),但该方法所需标准品制备耗时较长,通常需要2~3个月。在大流行流感发生初期无法获得标准参考品时,如何精确定量分析... 目前,流感疫苗血凝素(hemagglutinin,HA)含量最常用的检测方法仍为单向免疫扩散法(single-radial immunodiffusion,SRID),但该方法所需标准品制备耗时较长,通常需要2~3个月。在大流行流感发生初期无法获得标准参考品时,如何精确定量分析HA,一直是HA含量检测面临的难题。高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)具有快速、灵敏度高、重复性较好以及准确性高的特点,利用不同的分离原理可快速测定HA含量,在流感疫苗HA含量检测方面已得到很多应用。本文对HPLC在流感疫苗HA含量检测中应用的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 流感疫苗 血凝素 单向免疫扩散 反相高效液相 体积高效液相
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大米直链淀粉分子量分布及分子旋转半径的研究 被引量:10
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作者 李玥 钟芳 麻建国 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第11期36-41,共6页
为了从大米淀粉中有效的分离出直链淀粉,建立直链淀粉分子量的分析方法,从而得出确切的大米直链淀粉分子结构方面的信息,通过使用流变仪控制大米淀粉的升温糊化过程,用浸出法在不同温度下分离出大米直链淀粉,利用高效液相分子排阻色谱(... 为了从大米淀粉中有效的分离出直链淀粉,建立直链淀粉分子量的分析方法,从而得出确切的大米直链淀粉分子结构方面的信息,通过使用流变仪控制大米淀粉的升温糊化过程,用浸出法在不同温度下分离出大米直链淀粉,利用高效液相分子排阻色谱(HPSEC)与多角度光散射仪(MALLS)及折光检测器(RI)连用系统,分析了大米直链淀粉的分子量分布和分子旋转半径。得到不同品种的大米淀粉中分离出的直链淀粉的重均分子量范围为3.29×10^5~2.75×10^6。研究表明,90℃以上高温不利于用浸出法从直链淀粉含量低的大米淀粉中分离直链淀粉,当温度低于90℃而高于糊化温度时,各个温度下均可用浸出法分离出直链淀粉,得到的直链淀粉具有十分相似的分子量分布、重均分子量和分子旋转半径。该方法是一种简便、快速的分离大米直链淀粉,并测定其分子量的方法,具有较高的准确性。 展开更多
关键词 大米直链淀粉 分子量分布 分子旋转半径 高效液相排阻色谱 多角度光散射仪 折光检测器
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酪蛋白酶解制备酪蛋白磷酸肽研究 Ⅱ.产物分析及反应动力学模型 被引量:4
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作者 齐崴 何志敏 史德青 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第8期37-40,共4页
利用高效液相排阻色谱对酪蛋白──碱性蛋白酶水解产物分子量分布进行了分析。在最适酶解工艺条件下,求得各表观动力学常数:Km=0.3132g/L,Kcat=12.9248/min,Ks=9.5565g/L,Kp=0.00285g/L。建立了考虑酶一级热失活、底物反竞争性抑制... 利用高效液相排阻色谱对酪蛋白──碱性蛋白酶水解产物分子量分布进行了分析。在最适酶解工艺条件下,求得各表观动力学常数:Km=0.3132g/L,Kcat=12.9248/min,Ks=9.5565g/L,Kp=0.00285g/L。建立了考虑酶一级热失活、底物反竞争性抑制和产物竞争性抑制三方面因素共同影响的本征反应动力学模型,经实验拟合平均相对误差为6.21%。 展开更多
关键词 酪蛋白磷酸钛 碱性蛋白酶 高效液相排阻色谱 反应动力学模型 酶解
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微波干燥对生物解离富肽豆粉蛋白亚基及功能性的影响 被引量:13
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作者 王欢 佟晓红 +3 位作者 钟明明 齐宝坤 李杨 江连洲 《农业机械学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第7期363-368,共6页
以生物解离大豆水解液为研究对象,运用高效液相体积排阻色谱技术研究了不同微波干燥条件对富肽豆粉中蛋白类物质亚基组分和空间构象的变化规律,并对生物解离富肽豆粉的粉体性质及功能性质进行研究。结果表明,微波干燥条件对HPLC-SEC峰... 以生物解离大豆水解液为研究对象,运用高效液相体积排阻色谱技术研究了不同微波干燥条件对富肽豆粉中蛋白类物质亚基组分和空间构象的变化规律,并对生物解离富肽豆粉的粉体性质及功能性质进行研究。结果表明,微波干燥条件对HPLC-SEC峰的强度影响明显,分子量18~44 ku的蛋白质水解物约占总蛋白质类的73.47%~89.36%,主要亚基成分为大豆球蛋白,这是由于不同微波干燥条件下的物相转换率和分子间碰撞机会不同,蛋白纤维化聚集形成的速度不同,从而对生物解离富肽豆粉分子量产生影响。此外,生物解离富肽豆粉的水溶性和分散性在不同微波干燥条件下具有相似趋势,这与粉体残余水分量、蛋白质分子运动剧烈程度、分子构象变化及分子聚集和解离相关。 展开更多
关键词 富肽豆粉 微波干燥 生物解离 高效液相体积
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