高效阴离子交换色谱法分离不对称PCR产物

目的为分离制备高纯度的DNA单双链提供新的技术方法.方法利用SOURCE15Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链,并测定回收率.结果SOURCE 15Q柱在紫外检测波长为260nm,流速为1ml/min,流动相为pH9.0时,以20mmol/L Tris-HCl缓冲液+2.0mol/LNaCl,线性浓度梯度洗脱的分离条件下,能很好地对85个碱基长度不对称PCR产物的单双链进行分离;对24mer单链样品进行回收率测试,回收率为92.46%.结论利用SOURCE 15Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链的方法简便、快捷、稳定、分辨率高、纯度高,适合核酸单链和双链样品的分离、纯化、鉴定和制备.

高效阴离子交换色谱法分析杜氏盐藻多糖的单糖组成

选用CarboPacPA20分析柱(3mmi.d.×150mm),以H2O-250mmol/LNaOH-1mol/LNaAc为流动相,建立了三元梯度洗脱分离、积分脉冲安培检测多糖中常见的8种中性单糖和2种糖醛酸的高效阴离子交换色谱分析方法;利用离子交换色谱柱(DEAESepharoseCL6Bfastflow,3.5cm×30cm)和凝胶过滤色谱柱(SepharoseCL6B,2.6cm×100cm)从提取出β-胡萝卜素的杜氏盐藻残渣中分离出PD1、PD2、PD3、PD4a和PD4b共5个多糖级分,选用适当的条件水解后,利用高效阴离子交换色谱法测定了各多糖级分的单糖组成。其中具有显著生物活性的多糖级分PD4a中主要含有半乳糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、盐藻糖及鼠李糖6种中性糖,还含有少量糖醛酸;PD4b中主要含有核糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖及木糖5种中性糖,不含糖醛酸。该结果与PMP柱前衍生化反相高效液相色谱法测定的单糖摩尔比基本一致。10种单糖的离子色谱法的检出限为0.76～2.92nmol/L(以3倍信噪比计),峰面积相对标淮偏差RSD为0.72%～3.25%。

乳果糖口服液中乳果糖及有关物质的高效阴离子交换色谱法测定

建立了高效阴离子交换色谱-积分安培检测器法测定乳果糖口服溶液中乳果糖及其5种有关物质。采用CarboPac PA20色谱柱及预柱,以250mmol/L氢氧化钠溶液-100mmol/L乙酸钠溶液-水(3︰3︰96)为流动相,金电极为工作电极,银-氯化银电极为参比电极。乳果糖及其5种有关物质分别在3.2～28.8、0.32～2.88、0.10～0.86、0.22～1.98、0.48～4.32和0.03～0.29μg/ml浓度范围内线性关系良好,检测限为0.02～0.04ng,回收率为97.5%～103.4%,RSD为0.5%～2.2%。

氨基酸分析的新方法——积分脉冲安培检测-高效阴离子交换色谱法

介绍一种新型氨基酸分析方法——采用积分脉冲安培检测的高效阴离子交换色谱法(HPIC-IPAD) 对氨基酸的阴离子交换色谱分离和积分脉;中安培检测进行了较详细的讨论 对方法的应用做了简要介绍。该方法与其它方法比较,无须进行柱后或柱前衍生反应,对氨基酸可以直接进行分析,灵敏度较高 大多数氨基酸的检测限小于1pmol,线性范围可以达到3个数量级以上。

高效阴离子交换色谱法同时测定菊粉酶解产物中的单糖、双糖和低聚果糖

建立了低聚果糖样品中的葡萄糖、果糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的高效阴离子交换色谱-脉冲安培法的定量分析方法。采用阴离子交换柱Carboa Pac^(TM) PA10(250 mm×2 mm)脉冲安培法进行检测,以氢氧化钠和醋酸钠为淋洗液进行梯度洗脱,柱温30℃,流速0.3 m L/min。结果表明,葡萄糖、果糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖在质量浓度0.1~10 mg/L范围内的线性关系良好,相关系数r^2大于0.996 1,各组分的相对标准偏差均在2.69%~7.21%之间。将此方法应用于菊粉酶解后反应产物的检测,结果表明该方法快速简便且灵敏度高,能满足反应样品中低聚果糖的检测要求。

阳离子交换高效液相色谱法快速测定蔬菜中灭蝇胺的残留量

取10 g蔬菜样品,加入20 mL体积比1∶99的乙酸-乙腈混合溶液,振荡提取20 min,加入6 g无水硫酸镁,振荡5 min,离心2 min,分取4 mL上清液,过活化好的氨基固相萃取柱,收集全部流出液。用2 mL体积比3∶1的乙腈-甲苯混合溶液洗脱柱子,收集洗脱液并合并至上述流出液中。所得溶液于40℃氮吹至近干,用1.0 mL体积比65∶35的含0.2%(体积分数)乙酸的20 mmol·L^(-1)乙酸钠溶液和乙腈的混合溶液(流动相)复溶,涡旋1 min,过0.22μm滤膜,滤液供高效液相色谱仪分析。在ZORBAX 300-SCX强阳离子交换色谱柱上以流动相等度洗脱分离滤液中的目标物,外标法定量。结果显示,灭蝇胺的质量浓度在0.02~2.00 mg·L^(-1)内和峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为0.006 mg·kg^(-1)。按照标准加入法进行回收试验,回收率为83.6%~90.5%,测定值的相对标准偏差(n=6)为1.5%~9.0%。方法用于43批蔬菜样品的分析,灭蝇胺的检出率为28%,有3批豇豆中灭蝇胺的残留量超过GB 2763—2021规定的限量。

阴离子交换色谱法同时测定乳酸钠林格注射液中乳酸钠和总氯含量

目的建立同时测定乳酸钠林格注射液中乳酸钠和总氯含量的阴离子交换色谱法。方法分析柱为Dionex IonPac^(TM)AS11-HC柱(250 mm×4 mm),保护柱为AS11-HC柱(50 mm×4 mm),淋洗液为10 mmol/L氢氧化钾溶液,流速为1.0 mL/min,检测器温度为35℃,柱温为30℃,电导检测器,抑制器抑制电流为25 mA,进样量为25μL。结果乳酸根离子、氯离子质量浓度分别在9.97~249.37μg/mL、15.27~381.70μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9997,1.0000,n=6);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%;平均加样回收率分别为100.74%,100.48%,RSD分别为1.17%,1.53%(n=9)。结论所建立的方法操作简便,灵敏度高,稳定性好,结果准确,可用于测定乳酸钠林格注射液中乳酸钠和总氯的含量。

高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定吸附无细胞百(三组分)白破灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗的多糖含量

目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定吸附无细胞百(三组分)白破灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗(以下简称DTac P-s IPV-Hib)中多糖含量,并对方法进行验证。方法 在1 ml样品中加入0.02 g柠檬酸钠,振荡混匀后,置于37℃保温24 h,4000×g离心5 min收集上清液,稀释后加入6 mol/L盐酸,100℃下加热2 h,冰浴10 min后加入0.8 ml氢氧化钠(1 mol/L)溶液用于终止酸水解。采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法根据检测信号峰面积计算对应水解荚膜多糖(PRP)含量,通过PRP占多糖含量干重的41.3%计算出总的多糖含量。结果 核糖醇参考品浓度在0.1~1.5μg/ml范围内标准曲线r2>0.99,检测下限可达10ng/ml。核糖醇加标回收率均在95%~105%;对高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法检测多糖的重复性和中间精密度进行验证,相对标准偏差(RSD)均小于5%,方法专属性和耐用性良好。结论 使用柠檬酸钠作为解吸附剂,与高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法相结合可用于DTac P-s IPV-Hib中Hib多糖的含量检测,为产品的质量控制和稳定性研究提供参考。

高效阴离子交换色谱法测定依诺肝素钠1,6-脱水衍生物含量

目的建立依诺肝素钠特异性末端结构1，6-脱水衍生物结构的含量测定方法。方法肝素酶混合液将依诺肝素钠水解成二糖或四糖单位，水解得到的寡糖峰经硼氢化钠还原后用-高效阴离子交换色谱法方法进行分析。采用WatersSpherisorbs5SAX（4．0mm×250mm，5μm）色谱柱，以0．28g·L^-1磷酸二氢钠溶液为流动相A含0．28g·L^-1磷酸二氢钠及140g·L^-1高氯酸钠的溶液为流动相B进行梯度洗脱（0～20min，3％～35％B；20～50min，35％～100％B；50～60min，100％B；60～61min，100％～3％B，61～79min，3％B），流速0．8mL·min^-1，柱温为50℃；检测波长为234nm，并用归一化面积百分比法计算摩尔百分含量。结果筛选出了酶解效果达标的国产肝素酶并优化了酶解条件，酶解后1，6-脱水△IS-IS与1，6-脱水△Is峰面积比〈1．15；优化色谱条件后△IA和1，6-脱水△IS的分离度〉1．5；硼氢化钠还原后的溶液色谱图中，△IS和还原△IS的峰面积比均小于0．02；两家国产依诺肝素钠生产企业样品结果均在15％～25％内。结论方法可对依诺肝素钠特征还原末端结构进行分离和定量，作为对低分子肝素进行微观结构分析的首个鉴别项目，已收栽入新修订依诺肝素钠国家标准草案中．

高效阴离子交换色谱法测定人凝血因子Ⅷ中枸橼酸离子的含量

目的采用高效阴离子交换色谱法测定人凝血因子Ⅷ中枸橼酸离子的含量。方法高效阴离子交换色谱法色谱条件：色谱柱：IonPacASll—HC离子交换柱（4mm×250mm）；流动相：20mmol／L的NaOH溶液，等度洗脱20min，流速：1．0ml／min；抑制器：ASRS4mm阴离子抑制器，抑制电流120mA；检测器：电导检测器，检测池温度30℃，进样量：25μl。对建立的方法进行线性范围、检测限的确定以及准确性、精密性验证，并进行初步应用。结果枸橼酸离子浓度在0．1～2．0μg／ml范围内，对照品色谱峰面积与枸橼酸离子浓度呈良好的线性关系，r=0．9990，按信噪比（S／N）为3确定方法的检测限为0．01μg／ml；准确性试验枸橼酸离子的总平均回收率为97．80％，RSD为0．69％；1份加样人凝血因子Ⅷ溶液连续测定6次峰面积的RSD为0．08％；高效阴离子交换色谱法、比色法及阳离子交换色谱法测定3批人凝血因子Ⅷ中枸橼酸离子含量的结果基本一致，均符合《中国药典》三部（2010版）规定。结论高效阴离子交换色谱法可用于测定人凝血因子Ⅷ中枸橼酸离子的含量，且该方法操作简便、快速，准确性、精密性高。

新型弱阴离子交换色谱柱-高效液相色谱法同时测定苯代谢产物的方法

目的:建立了苯及其同系物体内代谢产物粘糠酸、苯乙醛酸、马尿酸的弱阴离子交换-HPLC测定方法,并进行了方法学研究。方法:采用Acclaim Mixed-Mode WAX-1(150 mm×2.1 mm,5μm)弱阴离子交换色谱柱,以甲醇-50 mmol/L磷酸氢二钾(18∶82)为基础流动相,以波长时间程序分别在254 nm下检测粘糠酸、苯乙醛酸,224nm下检测马尿酸,探讨了弱阴离子交换色谱柱分离粘糠酸、苯乙醛酸及马尿酸的影响因素。结果:流动相的pH值、离子强度、有机相比例对上述三种代谢物产生的分离产生明显影响。结论:在确定的色谱条件下,从分离度、对称性、重复性、线性4个方面来评价,弱阴离子交换色谱柱分析酸性可离子化化合物要优于常规C18色谱柱。

阴离子交换高效液相色谱法测定婴幼儿食品与乳品中的核苷酸

建立了阴离子交换高效液相色谱测定婴幼儿食品和乳品中5种游离核苷酸———胞嘧啶核苷酸(CMP)、腺嘌呤核苷酸(AMP)、尿嘧啶核苷酸(UMP)、鸟嘌呤核苷酸(GMP)、次黄嘌呤核苷酸(IMP)的分析方法。样品经水提取和沉淀剂沉淀蛋白质后,采用强阴离子交换(SAX)色谱柱分离,以甲醇和磷酸二氢钾水溶液(10 mmol/L,p H 4.5)为流动相进行梯度洗脱,紫外检测波长254 nm,外标法定量。结果表明,该方法在0.200~200 mg/L范围内线性关系良好,5种核苷酸的相关系数(r)为0.999 8~1.000 0,加标回收率为95.5%~108%,相对标准偏差(RSD)为1.0%~3.2%。该方法的分离效果好,线性范围宽,稳定性和准确性好,解决了依据GB 5413.40-2016进行样品检测时的基质干扰问题。

高效阴离子交换色谱法测定那屈肝素钙中 2,5 - 脱水甘露醇和葡萄糖胺

目的：建立高效阴离子交换色谱法测定那屈肝素钙中2，5-脱水甘露醇和葡萄糖胺。方法：样品在3mol·L^-1三氟乙酸110℃下水解8h．旋蒸除酸后用CarbopacPA20（150mm×3mm）阴离子交换柱在流速0．4mL·min。和30℃下，以15mmol·L^-1氢氧化钠洗脱10min后用15mmol·L^-1氢氧化钠-150mmol·L^-1醋酸钠溶液洗脱10min，脉冲安培检测器检测。结果：2，5-脱水甘露醇和葡萄糖胺线性范围分别为1～50μg·mL^-1（r=0．9997）和4．2～124．6μg·mL^-1（r=0．9994），检测限分别为163．0ng·mL^-1和327．5ng·mL^-1，回收率（n=6）分别为102．4％和99．5％，RSD均小于3．0％。结论：该法简单、灵敏、可靠，可用于那屈肝素钙的质量控制。

阴离子交换高效液相色谱法测定单磷酸阿糖腺苷的含量

本文应用阴离子交换高效液相色谱法,以茶碱为内标,测定单磷酸阿糖腺苷的含量,使用西德SERVA公司的阴离子柱(4.6×250mm),流动相为磷酸二氢钾缓冲溶液,pH值为3.05±0.05,检测波长258um,在32～48mg/L范围内呈良好线性关系,r=0.9999,平均回收率100.1%.±RSD=1.07%(n=6),本法操作简单,准确度高,稳定性好.

用阴离子交换色谱法制备寡聚核苷酸

建立了用Source 15Q强阴离子交换柱分离纯化寡聚核苷酸的方法.在pH 9.0,以20 mmol/L Tris-HCl缓冲液+2.0 mol/L NaCl为流动相,线性浓度梯度洗脱,紫外检测波长为260 nm,流速为1 mL/min的分离条件下,能很好地分离18-78 mer的合成寡聚脱氧核苷酸和PCR的单双链产物,探讨了流速和盐浓度对分离的影响,并测得24mer OligoDNA的回收率为90%左右.该方法简便、快捷、分辨率高,可用于寡聚核苷酸、反义核酸药物的分离、纯化、鉴定和制备.

高效阴离子交换-脉冲安培检测色谱法测定人工培养蛹虫草多糖的单糖组成

目的采用高效阴离子交换-脉冲安培检测色谱法测定人工培养蛹虫草多糖的单糖组成。方法以人工培养蛹虫草子实体为原料,利用热水和稀碱液分别对其水溶性多糖成分进行提取,分离得到6种人工蛹虫草水溶性多糖化合物。其中水提部分主要分离得到3种精多糖P50、P70-1和P70-2,碱提部分则分离得到3种精多糖CBP- 1、CBP-2和CBP-3。高效阴离子交换-脉冲安培检测色谱法分别对上述6种精多糖的单糖组成成分进行了测定。结果除CBP-3为葡聚糖外,其他5个多糖均为由D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖组成的杂多糖。结论采用高效阴离子交换-脉冲安培检测色谱法进行多糖化合物的单糖组成成分测定,无需进行衍生化,可达到简便、高效、准确地进行单糖组成分析之目的。

高效阴离子交换色谱法检测山银花多糖的单糖组成

建立了山银花药材中鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖、核糖、甘露醇和果糖等9种单糖的高效阴离子交换色谱方法,并应用此方法分析了不同产地山银花多糖中单糖组成及含量。山银花多糖经超声提取,Savag试剂除蛋白,三氟乙酸水解,以CarboPac PA20(150 mm×3 mm)色谱柱分离,400 mmol/L醋酸钠-20mmol/L氢氧化钠-去离子水梯度。结果表明,9种单糖的定量限为0.2~2.0μg/kg,在各自线性范围内线性关系良好(r^2≥0.999 0),于高、中、低三个加标水平下回收率符合检测要求,回收率为81.8%~95.7%,且精密度良好(RSD<1.96%)。该方法简便、快速、准确、灵敏度高,可用于山银花多糖中的单糖组成分析。

高效阴离子交换色谱-脉冲积分安培法检测海带中的单糖、双糖和糖醛酸

建立海带多糖水解液中岩藻糖、葡萄糖、氨基半乳糖、氨基葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、核糖、乳糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸11种糖类化合物的高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法的定性定量分析方法。采用CarboPac PA10(250 mm×4 mm)作为糖分析柱,CarboPac PA10(50 mm×4 mm)作为糖保护柱,柱温为25℃,流速为1.0 mL/min,水-NaOH-NaAc组成三元淋洗液进行多级梯度淋洗。结果表明,11种糖在各自线性范围内R^(2)不小于0.9986,方法的检出限(R_(SN)=3)在1.27~47.49 mg/kg之间,精密度相对标准偏差均小于1.78%,样品加标回收率在89.35%~115.67%之间。结果表明,该方法操作简便,线性关系良好,灵敏度和精密度高,重复性好。

阴离子交换固相萃取-高效液相色谱法快速测定中成药中10种合成色素的方法研究

目的:建立快速测定中成药中苋菜红、胭脂红、诱惑红、赤藓红、酸性红73、新品红、罗丹明B、苏丹红Ⅰ、808猩红、苏丹红Ⅳ等10种合成色素的高效液相色谱法(HPLC)测定方法。方法:样品用70%乙醇超声提取后,再经阴离子固相去除大部分基质干扰,采用安捷伦C18色谱柱(250 mm×4. 6 mm,5μm);以甲醇-0. 02 mol/L乙酸铵溶液为流动相梯度洗脱,以二极管阵列检测器检测,流速为1. 0 m L/min,检测波长为520 nm,柱温为35℃。结果:以心脑康胶囊为基质,这10种色素在10～100μg/m L范围内线性关系良好,相关系数均在0. 999以上,检测限为1. 05～5. 55μg/m L,回收率为83. 6%～99. 2%(n=9),RSDs为1. 2%～3. 6%。结论:本方法简单可行,结果准确可靠,重复性好,可用于中成药中多种掺伪红色色素的快速检测。

离子交换色谱法同时测定啤酒中有机酸和无机阴离子

建立了用亲水性阴离子交换分离柱,KOH为淋洗液等浓度泵作梯度淋洗,电导检测,同时分离和检测16种无机阴离子和低分子量有机酸的离子色谱法。方法对所测无机阴离子和有机酸检出限在9.3～32μg/L之间;线性范围均在2个数量级以上;回收率在90.2%～107.2%之间。方法用于啤酒样品的分析,结果满意,样品的RSD小于5.3%(n=7)。