OsmY缺失对伤寒沙门菌在高渗应激早期基因表达的影响

目的:研究伤寒沙门菌OsmY在高渗应激早期对其他基因表达的调节。方法:通过同源重组的方法利用自杀质粒制备伤寒沙门菌osmY基因缺陷变异株;采用伤寒沙门菌全基因组芯片比较野生株和osmY基因缺陷变异株在高渗应激早期的基因表达差异,并对其中部分表达差异基因进行实时定量PCR验证。结果:成功制备伤寒沙门菌osmY基因缺陷变异株;基因芯片结果显示,在高渗应激早期,与野生株相比,伤寒沙门菌osmY基因缺陷变异株有128个基因表达下调,有27个基因表达上调。实时定量PCR与芯片结果一致。结论:OsmY可作为一调节因子在伤寒沙门菌高渗应激早期对基因表达起重要调节作用。

mig-14对伤寒沙门菌在高渗应激早期基因表达的调节

目的:探查伤寒沙门菌mig-14在高渗应激下对若干基因表达的调节作用。方法:用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌mig-14基因缺陷变异株,用基因芯片分析高渗应激早期野生株和mig-14缺陷株基因表达差异,并对部分结果采用实时荧光定量PCR进行验证。结果:成功制备伤寒沙门菌mig-14缺陷株,高渗应激早期mig-14变异株与野生株相比有77个基因表达下调和72个基因表达上调。结论:mig-14可能是一种调节基因,主要参与调节细菌的物质和能量代谢。

PmrA对伤寒沙门菌高渗应激后期基因表达调节初探

目的:探讨伤寒沙门菌调节因子PmrA在高渗应激后期对基因表达调节的影响。方法:应用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌pmrA基因缺陷变异株;利用伤寒沙门菌全基因组芯片分析技术,比较伤寒沙门菌野生株和pmrA基因缺陷变异株在高渗应激后期的基因表达谱差异,并选择部分差异表达基因进行RT-RCR验证。结果:经PCR及序列分析证实,伤寒沙门菌pmrA基因缺陷变异株制备成功;基因表达谱比较分析结果表明伤寒沙门菌pmrA基因缺陷变异株在高渗应激后期有81个基因表达上调,有22个基因表达下调。结论:PmrA在伤寒沙门菌高渗应激后期的基因表达调节中发挥重要作用。

高渗应激对肾髓细胞的影响

肾髓细胞长期暴露于高渗环境并能正常发挥功能。在过去多年中,研究者在探索肾髓细胞是如何在高渗的环境中得以生存并发挥功能的过程中发现,细胞能产生一系列变化来适应高渗应激,例如有机渗透物的聚积以及热休克蛋白的表达增高等。然而,无论是在体内还是体外,即便是细胞适应了高渗环境之后,高盐引起DNA断裂仍持续存在,但细胞却仍能快速增殖并发挥功能。当盐浓度降低时,DNA断裂被迅速修复。本文对肾髓细胞在高渗应激下发生的损伤性改变及其保护性反应等方面的新近研究进展予以综述。

Hfq对伤寒沙门菌高渗应激早期基因表达的调节

目的:探查伤寒沙门菌hfq基因在高渗应激早期对其他基因表达的影响。方法:用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌hfq基因缺陷变异株;利用伤寒沙门菌全基因组芯片技术,比较伤寒沙门菌野生株和hfq基因缺陷变异株在高渗应激早期的基因表达谱差异,并选择部分表达差异基因进行实时定量PCR验证。结果:伤寒沙门菌hfq基因缺陷变异株制备成功;基因表达谱比较分析结果表明伤寒沙门菌hfq基因缺陷变异株在高渗应激早期有62个基因表达上调,有32个基因表达下调。实时定量PCR结果与芯片分析一致。结论:Hfq作为一个调节因子在伤寒沙门菌高渗应激早期对基因表达起重要调节作用。

高渗应激对肝细胞癌Huh7细胞增殖和凋亡的影响

目的观察高渗应激对肝细胞癌Huh7细胞增殖和凋亡的影响，并探讨其调控机制。方法免疫组织化学法检测64例肝细胞癌组织中渗透压调控的转录因子活化T细胞核因子5（NFAT5）的表达；氯化钠模拟肿瘤高渗微环境，Westernblot法检测NFAT5蛋白的表达；流式细胞仪检测细胞凋亡；噻唑蓝（MTF）比色法检测细胞体外增殖活力。结果癌组织NFAT5的阳性表达率为9．38％，明显低于癌旁组织（68．75％，P〈0．01）。高渗24h组（100mmol／LNaCl）能使Huh7细胞NFAT5蛋白的表达显著升高（P〈0．01）。高渗24h组（100mmol／LNaCl）细胞凋亡率[（26．0±3．2）％]明显高于空白对照组[（0．8±0.2）％，P〈0．01]。高渗24h（100mmol／LNaCI）能明显抑制Huh7细胞增殖．细胞生长抑制率为（31．35±2．09）％（P〈0．01）。结论作为哺乳动物唯一的渗透压调节相关因子NFAT5，肝细胞癌组织与癌旁组织在NFAT5高表达率上差异有统计学意义，高渗应激能上调肝癌细胞NFAT5的表达，诱导肝癌细胞凋亡，并抑制细胞增殖。

p38丝裂原激活蛋白激酶信号通路参与高渗应激诱导黏蛋白5AC高表达研究

目的探讨p38丝裂原激活蛋白激酶(P38)信号通路参与高渗应激诱导黏蛋白5AC(MUC5AC)高表达的作用机制。方法利用545、695、855、1055和1280mOsm/L高渗氯化钠溶液培养人气道上皮NCl-H292细胞。同时以1280m Osm/L高渗氯化钠为刺激因素,以P38特异性抑制剂SB203580、c-jun氨基末端激酶(JNK)特异性抑制剂SP600125及细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)特异性抑制剂U0126为干预因素,采用RT-PCR技术及ELISA观察培养细胞MUC5AC转录水平和MUC5AC蛋白水平改变。采用Western blotting法检测1280mOsm/L高渗氯化钠培养上清液中细胞匀浆磷酸化P38(p-P38)、磷酸化JNK(p-JNK)及磷酸化ERK(p-ERK)蛋白水平。结果分别以545、695、855、1055和1280mOsm/L高渗氯化钠刺激后,培养细胞中MUC5AC mRNA及蛋白含量显著高于对照组(P<0.01),且呈现出与渗透浓度相关的趋势。SB203580显著下调1280mOsm/L高渗氯化钠所致的p-P38含量升高,同时显著下调MUC5AC mRNA及蛋白含量(P<0.05);SP600125则明显下调p-JNK的含量,并下调MUC5AC mRNA转录及蛋白含量(P<0.05),但作用弱于SB203580;1280m Osm/L高渗氯化钠对ERK的含量无影响(P>0.05),U0126对MUC5AC mRNA转录及蛋白含量也无明显影响(P>0.05)。结论高渗应激可呈浓度依赖性地从转录水平诱导气道上皮细胞呈现黏液高分泌状态,且P38信号通路起主要作用。

高渗状态下肾脏COX2表达的基因调控

目的本研究旨在阐明核转录因子C/EBPβ和NFκB是否协同作用影响高渗状态下COX2的基因表达。方法体外培养肾髓间质细胞(RMICs),通过病毒转导或质粒转染技术将体外构建的COX2基因突变载体转入培养细胞,经高渗培养不同时间后,采用免疫印迹、荧光素酶报告基因活性检测等方法观察培养细胞COX2蛋白表达及活性的改变,同时应用染色质免疫沉淀分析法观察COX2基因与C/EBPβ、NFκB结合能力的改变。结果免疫印迹显示,高渗刺激能明显提高对照组COX2蛋白表达,应用突变序列IκBm阻断NFκB活性后COX2表达明显下降,应用突变序列C/EBP-βP20阻断C/EBPβ亦能显著降低COX2表达,但同时运用突变序列C/EBP-βP20和IκBm无法使COX2表达进一步下降。然而,将野生型、含NFκB或C/EBPβ结合位点突变的COX2启动子萤火虫荧光素酶报告基因的重组质粒转染至RMICs,高渗培养24h后显示:高渗刺激能显著增加野生型组COX2荧光素酶的活性,NFκB位点突变无法阻断该作用,而C/EBPβ结合位点突变却能完全抑制COX2高活性。进一步应用染色质免疫沉淀分析研究显示,高渗刺激能显著增加NFκB(P65)或C/EBPβ与COX2基因的结合,并呈时间依赖性;NFκB结合位点突变不能消除高渗诱导的NFκB(P65)与COX2基因的结合增强,但在NFκB和C/EBPβ结合位点同时突变组该作用被阻断。结论在NFκB活化COX2基因转录过程中需要另一个核转录因子C/EBPβ的参与,C/EBPβ途径在高渗诱导肾脏内髓间质细胞表达COX2过程中具有重要作用。

应用球面对称设计方法优化谷胱甘肽生物合成条件

研究了提高细胞内谷胱甘肽质量分数的方法。谷胱甘肽的总产量与细胞的数量和细胞内谷胱甘肽质量分数有关,通过添加底物和刺激物可以促进谷胱甘肽生物合成,提高胞内谷胱甘肽的质量分数。实验考察了高渗刺激物与前体氨基酸对胞内谷胱甘肽质量分数的影响,并应用球面对称设计优化了实验条件,使得胞内谷胱甘肽质量分数达4.47%,产量达257.3mg.L-1,分别比优化前提高了约69.3%和75.7%。

发酵工业中酿酒酵母耐性机制的研究进展

由于工业生产条件和成本的限制,发酵过程中酿酒酵母会经受多种不同环境胁迫因子的影响。研究不良环境中酿酒酵母的耐性机制,旨在为提高产品质量、降低生产成本以及相应的基因改良提供理论依据。文中主要综述了酿酒酵母耐受高渗、氧化和乙醇等胁迫因素的机理以及海藻糖对酵母细胞的保护作用。

酵母HOG-MAPK途径

酿酒酵母Saccharomycescerevisiae的高渗透性甘油促分裂原活化蛋白激酶(highos-molarityglycerolmitogen-activatedproteinkinase,HOG-MAPK)途径是高度保守的信号转导途径,很多方面和高等真核生物MAPK途径类似。该途径在高渗应激环境下控制信号转导和基因表达,是细胞生存所必需的。现对酵母HOG-MAPK途径的信号转导以及信号传递的专一性控制、HOG-MAPK途径各组分的亚细胞定位和基因表达调控机制进行综述。

高渗条件下相容性溶质对乳酸杆菌的作用

乳酸杆菌在发酵工业有着极其重要的作用,然而在乳酸杆菌高密度培养中却很难达到高的活菌数(一般活菌数在109 cfu/m L),这与其培养及生长过程中所处的环境有关。由于乳酸杆菌在高密度培养过程中往往通过流加碱液来消除酸的反馈抑制,而随之便会产生高渗应激问题,因此提出了相容性溶质的概念,在此就乳酸杆菌高渗应激反应及相容性溶质的作用等进行了简单的阐述和讨论。