高良姜素调节CCL2/CCR2信号轴对自身免疫性甲状腺炎大鼠炎症反应的影响

目的:探讨高良姜素调节趋化因子配体2(CCL2)/趋化因子受体2(CCR2)通路对自身免疫性甲状腺炎(AIT)大鼠炎症反应的影响。方法:84只大鼠随机分为对照组、模型组、高良姜素低剂量组、高良姜素中剂量组、高良姜素高剂量组、硒酵母片组、高良姜素高剂量+大鼠CCL2重组蛋白(rCCL2)组,每组12只。除对照组外,其他组大鼠均构建AIT模型,造模成功后给药,1次/d,持续8周。ELISA检测大鼠血清中甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、游离甲状腺素(FT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)水平及甲状腺组织TNF-α、IL-6、IL-1β水平;HE染色检测大鼠甲状腺组织病理变化并对甲状腺组织进行炎症评分;qRT-PCR检测大鼠甲状腺组织CCL2、CCR2 mRNA表达;Western blot检测大鼠甲状腺组织CCL2、CCR2蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠甲状腺组织病理损伤严重,炎症评分、TGAb、TPOAb、FT4、FT3、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、CCL2、CCR2 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,高良姜素低剂量组、高良姜素中剂量组、高良姜素高剂量组、硒酵母片组大鼠甲状腺组织病理损伤减轻,炎症评分、TGAb、TPOAb、FT4、FT3、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、CCL2、CCR2 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05);与高良姜素高剂量组比较,高良姜素高剂量+rCCL2组大鼠甲状腺组织病理损伤加剧,炎症评分、TGAb、TPOAb、FT4、FT3、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、CCL2、CCR2 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05)。结论:高良姜素可能通过抑制CCL2/CCR2信号通路抑制AIT大鼠炎症反应。

高良姜素减轻乙型病毒性肝炎模型大鼠的炎性反应

目的探讨高良姜素(Gal)对乙型病毒性肝炎(乙肝)大鼠炎性反应的影响。方法大鼠随机分为对照组、乙肝组[尾静脉注射乙型肝炎病毒(HBV)]、Gal低(Gal-L)和高剂量(Gal-H)组、阳性药拉米夫定组、Gal-H+AMPK抑制剂(compound C)组,每组12只。造模后进行药物处理,给药1次/d,持续8周。检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、谷草转氨酶(AST)水平;HE染色检测肝组织病理变化;TUNEL染色检测细胞凋亡;染色质免疫共沉淀检测HBV病毒载量;ELISA检测肝组织中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p-AMPK、SIRT1蛋白表达。结果与乙肝组比较,Gal-L组、Gal-H组、拉米夫定组肝脏损伤减轻,血清中AST、TBIL、ALT水平降低,肝组织中细胞凋亡率、HBV病毒载量、MCP-1、IL-12、TNF-α水平及caspase-3、Bax蛋白降低,p-AMPK、SIRT1蛋白升高(P<0.05);Compound C减弱了高剂量Gal对乙肝大鼠肝组织中炎性反应、细胞凋亡及HBV病毒载量的抑制作用。结论Gal抑制乙肝大鼠炎性反应的机制可能与上调AMPK/SIRT1通路有关。

高良姜素通过调控NLRP3炎性小体抑制巨噬细胞焦亡

目的探讨高良姜素对骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)焦亡的影响。方法将体外培养的BMDMs分为空白对照组、模型组、不同浓度高良姜素组;采用脂多糖(LPS)+三磷酸腺苷(ATP)构建细胞焦亡模型用细胞增殖与毒性检测试剂盒8(CCK-8)测定不同浓度高良姜素对BMDMs增殖的影响;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测BMDMs培养上清液中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1p10亚基(caspase-1p10)、白细胞介素-1β(IL-1β)及细胞中NOD样受体蛋白3(NLRP3)的蛋白表达水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BMDMs上清液中IL-1β含量;采用碘化丙啶(PI)染色观察细胞死亡情况;采用高通量测序比较模型组和高良姜素20μmol/L组的差异基因表达。结果5、10、20、40、60、80μmol/L高良姜素组BMDMs的增殖水平比较差异均无统计学意义(均P>0.05)说明上述浓度高良姜素对BMDMs增殖无明显影响,故本研究选择5、10、20μmol/L高良姜素和处理1、2、4h观察不同浓度及时间对BMDMs焦亡的影响。与空白对照组比较,模型组caspase-1p10、成熟IL-1β蛋白表达和IL-1β含量均明显升高(均P<0.05);与模型组比较,高良姜素5、10、20μmol/L各组上清液中caspase-1p10、成熟IL-1β蛋白表达和IL-1β含量均明显降低[IL-1β蛋白表达(灰度值):0.155±0.006、0.113±0.006、0.111±0.007比1.000±0.000,caspase-1p10蛋白表达(灰度值):0.207±0.044、0.160±0.008、0.082±0.008比1.000±0.000,IL-1β(μg/L):99.80±10.36、85.21±8.78、26.53土4.56比494.10±35.47,均P<0.05],不同浓度高良姜素组间比较差异无统计学意义(均P>0.05),但随着高良姜素处理时间的延长,抑制作用增强,以高良姜素20μumol/L组作用4h的抑制作用最明显[IL-1β蛋白表达(灰度值):0.186±0.004比1.000±0.000,caspase-1p10蛋白表达(灰度值):0.247±0.009比1.000±0.000,IL-1β(μg/L):173.80±10.56比653.80±76.02,均P<0.05];20μmol/L高良姜素作用4h可减少焦亡细胞数量(个/视野:23.00±3.61比67.67±15.63,P<0.05),抑制NLRP3的蛋白表达水平(灰度值:0.178土0.025比0.406±0.066,P<0.05)。高通量测序显示,与模型组比较,高良姜素下调了Nlrp3、Nod2、IL-1β等基因,上调了Skp2(又称Fbxl1)、Fbxl20、Fbxl4、Fbxo32和Fbxw7等基因水平。结论高良姜素通过调控巨噬细胞中NLRP3炎性小体来抑制细胞焦亡。

高良姜素通过抑制细胞凋亡和炎性反应改善心肌梗死后心脏重构与心功能障碍

目的探讨高良姜素对心肌梗死(MI)后心脏重构和心功能的影响。方法选取32只雄性C57/BL6小鼠(8~10周龄),全部参与造模,最终成功入组24只,按照造模方式及灌胃处理的不同分为对照组[假手术+羟基纤维素钠(CMC-Na)]、模型组(MI+CMC-Na)和实验组(MI+高良姜素),每组8只。MI术后,实验组予以40 mg/kg高良姜素灌胃4周,对照组与模型组予以同体积(0.4 ml)的CMC-Na溶液灌胃。苏木精-伊红染色法评价MI范围。实时荧光定量PCR检测心脏炎性因子信使RNA水平。蛋白质免疫印迹检测相关信号通路蛋白的表达。免疫荧光染色检测梗死边缘区炎性细胞浸润。原位末端标记法染色检测梗死边缘区细胞凋亡情况。结果MI 4周后,与对照组比较,模型组小鼠MI面积、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、磷酸化(p)-P65、p核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)、Bax以及细胞凋亡率升高,心功能指标左心室短轴缩短率(FS)和左心室射血分数(LVEF)、B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)表达降低(P<0.05);与模型组比较,实验组小鼠MI面积[(11.64±0.64)%vs(21.84±1.94)%]、CD3阳性T细胞[(3.10±0.46)%vs(6.28±0.24)%]、F4-80阳性巨噬细胞[(1.98±0.50)%vs(5.35±0.62)%]、LY6G阳性中性粒细胞浸润程度[(6.33±0.67)%vs(11.33±1.77)%]、IL-1β、IL-6、TNF-α、p-P65、p-IκBα、Bax以及细胞凋亡率[(21.45±1.62)%vs(35.68±0.88)%]降低(P<0.05),心功能指标FS和LVEF、Bcl-2表达升高(P<0.05)。结论高良姜素通过抑制炎性反应和细胞凋亡改善MI后心肌重构与心功能障碍。

高良姜素通过下调lncRNA H19的表达抑制ox-LDL诱导的人源 正常主动脉内皮细胞血管生成活性

目的探索高良姜素对ox-LDL诱导的人源正常主动脉内皮细胞(HAECs)的影响及其机制。方法使用不同浓度(0、10、20、40、80μmol/L)的高良姜素孵育HAECs24h后,通过MTT检测细胞活性。以5mg/mLox-LDL诱导的HAECs为模型,使用20、40μmol/L高良姜素孵育24h。为观察高良姜素的作用机制,在HAECs中过表达lncRNAH19,使用40μmol/L高良姜素孵育24 h。通过qRT-PCR检测lncRNAH19的水平,划痕实验和血管形成实验用于观察迁移和管形成能力,使用流式细胞术检测ROS水平。通过Western blot检测VEGFA、MMP-2、MMP-9的蛋白水平。结果低浓度(0、10、20、40μmol/L)的高良姜素对细胞无明显毒性(P>0.05),而80μmol/L高良姜素会抑制HAECs细胞的活性(P<0.01)。ox-LDL诱导的HAECs中lncRNAH19的表达水平增加,高良姜素能降低ox-LDL诱导的HAECs的lncRNAH19的表达水平、迁移能力和血管形成能力,ROS水平以及VEGFA、MMP-2、MMP-9的蛋白水平(P<0.01)。但是,高良姜素的这些生物学作用均能被过表达lncRNAH19逆转(P<0.01)。结论高良姜素可能通过抑制lncRNAH19的表达以降低ox-LDL诱导的HAECs的迁移、氧化应激和血管形成能力来发挥治疗动脉粥样硬化的潜力。

高良姜素通过激活cGAS/STING信号通路抑制骨肉瘤MG63细胞的恶性生物学行为

目的:探讨高良姜素(Gal)是否通过调节cGAS/STING信号通路影响骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡。方法:体外培养人骨肉瘤MG63细胞,分别使用0、5、15、25、50、100、200μmol/L的Gal培养48 h后,CCK-8法检测Gal对细胞活力的影响。将MG63细胞分为对照组(未处理细胞)、Gal低浓度组(Gal-L组,50μmol/L Gal处理)、Gal高浓度组(Gal-H组,100μmol/L Gal处理)和Gal-H+STING抑制剂组(Gal-H+H-151组,100μmol/L Gal+8μmol/L H-151处理)。采用EdU染色法、划痕愈合实验、Transwell小室法、流式细胞术检测各组细胞增殖活力、迁移、侵袭和凋亡能力,WB法检测各组细胞中cGAS、STING蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,Gal-L组、Gal-H组细胞增殖活力、迁移、侵袭能力均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率和cGAS、STING蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05);与Gal-H组比较,Gal-H+H-151组细胞增殖活力、迁移和侵袭能力均显著升高(均P<0.05),细胞凋亡率和cGAS、STING蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05)。结论:Gal可能通过激活cGAS/STING信号通路抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。

高良姜素调节SIRT1/AMPK/mTOR信号通路对脂多糖诱导的大鼠关节软骨细胞自噬和凋亡的影响

目的探讨高良姜素调节沉默信息调节因子1(SIRT1)/增强腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的大鼠关节软骨细胞自噬和凋亡的影响。方法将大鼠关节软骨细胞分为对照组,模型组(1.0μg·mL^(-1)LPS),高良姜素低(1.0μg·mL^(-1)LPS+10μmol·L^(-1)高良姜素)、中(1.0μg·mL^(-1)LPS+20μmol·L^(-1)高良姜素)、高(1.0μg·mL^(-1)LPS+40μmol·L^(-1)高良姜素)剂量组,高良姜素高剂量+EX527(SIRT1抑制剂)组(1.0μg·mL^(-1)LPS+40μmol·L^(-1)高良姜素+40μmol·L^(-1)EX527)。用流式细胞术检测关节软骨细胞凋亡;丹酰尸胺(MDC)染色观察关节软骨细胞自噬;酶联免疫吸附法检测细胞中白细胞介素1β(IL^(-1)β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6水平;Western Blot法检测苄氯素(Beclin)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、SIRT1、AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、mTOR、p-mTOR表达情况。结果与对照组比较,模型组MDC阳性细胞比例,Beclin、LC3Ⅱ/Ⅰ、Bcl-2、SIRT1蛋白表达及p-AMPK/AMPK比值均降低(P<0.05);细胞凋亡率、IL^(-1)β、TNF-α、IL-6水平、Bax蛋白表达、p-mTOR/mTOR比值均升高(P<0.05)。与模型组比,高良姜素低、中、高剂量组的MDC阳性细胞比例及Beclin、LC3Ⅱ/Ⅰ、Bcl-2、SIRT1蛋白表达及p-AMPK/AMPK比值均增加(P<0.05);细胞凋亡率、IL^(-1)β、TNF-α、IL-6水平、Bax蛋白表达及p-mTOR/mTOR比值均降低(P<0.05)。与高良姜素高剂量组比较,高良姜素高剂量+EX527组的MDC阳性细胞比例及Beclin、LC3Ⅱ/Ⅰ、Bcl-2、SIRT1蛋白表达以及p-AMPK/AMPK比值明显降低(P<0.05),细胞凋亡率IL^(-1)β、TNF-α、IL-6水平、Bax蛋白表达、p-mTOR/mTOR比值明显升高(P<0.05)。结论高良姜素能促进LPS诱导的关节软骨细胞自噬,抑制细胞凋亡,可能是通过激活SIRT1/AMPK/mTOR信号通路发挥作用。

高良姜素对阻塞性黄疸大鼠肝组织细胞凋亡的影响及机制

目的基于Janus激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路探究高良姜素(GAL)对阻塞性黄疸(OJ)大鼠肝组织细胞凋亡的影响及机制。方法以雄性SD大鼠为对象,采用胆总管双重结扎法建立OJ模型,并将造模成功的48只大鼠分为OJ模型组(Model组)、低剂量GAL组(GAL-L组)、高剂量GAL组(GAL-H组)、高剂量GAL+JAK2激活剂colivelin组(GAL-H+colivelin组),每组12只;另取只开/关腹部不结扎的SD大鼠12只,作为假手术组(Sham组)。各药物组大鼠灌胃和/或腹腔注射相应药液,每天1次,连续7 d。末次给药后,观察各组大鼠的肝组织病理学形态,检测其血清中总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、丙氨酸转氨酶(ALT)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)水平,肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,肝组织细胞凋亡率,以及信号通路相关蛋白[磷酸化JAK2、JAK2、磷酸化STAT3、STAT3]、凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]的表达情况。结果与Sham组比较,Model组大鼠肝组织肝窦充血,肝小叶出现损伤,肝细胞排列紊乱、形态肿胀且核仁消失,可见大量炎症细胞浸润和纤维组织增生;血清中TBIL、DBIL、ALT、GGT水平,肝组织中MDA水平,肝组织细胞凋亡率,以及肝组织中Bax蛋白的表达水平和JAK2、STAT3蛋白的磷酸化水平均显著升高(P<0.05);肝组织中SOD水平、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05)。与Model组相比,GAL-L、GAL-H组大鼠肝组织病理损伤均有所减轻,各定量指标均显著改善,且GAL-H组的效果更显著(P<0.05);colivelin可显著逆转GAL对于OJ大鼠肝损伤及相关指标的改善作用(P<0.05)。结论GAL可抑制OJ大鼠肝组织细胞凋亡,改善其肝功能,减轻氧化应激,上述作用可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。

高良姜素通过调节Hippo信号通路抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究高良姜素(Galangin)对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及Hippo信号通路发挥的作用。方法:培养人甲状腺癌细胞8505C,CCK-8实验检测不同浓度Galangin处理8505C细胞后,对8505C细胞存活率的影响,筛选实验用Galangin浓度;将8505C细胞分为对照组、Galangin组、Galangin+DMSO组、Galangin+XMU-MP-1组;EDU法检测各组8505C细胞增殖;Transwell检测各组8505C细胞侵袭;划痕实验检测各组8505C细胞迁移;流式细胞术检测各组8505C细胞凋亡率;RT-qPCR实验检测各组8505C细胞MST1、YAP、TAZ mRNA水平;Western blot实验检测各组8505C细胞MST1、YAP、TAZ、MMP2、Ki67、cleaved-Caspase3、Caspase3蛋白水平。结果:与对照组相比较,Galangin组8505C细胞EDU阳性细胞率、侵袭细胞数量、划痕愈合率、YAP、TAZ mRNA和蛋白水平、MMP2、Ki67蛋白水平显著性降低,细胞凋亡率、MST1 mRNA水平、MST1、cleaved-Caspase3/Caspase3蛋白表达水平显著性升高(P<0.05);与Galangin+DMSO组相比,Galangin+XMU-MP-1组8505C细胞EDU阳性细胞率、侵袭细胞数量、划痕愈合率、YAP、TAZ mRNA和蛋白水平、MMP2、Ki67蛋白水平显著性升高,凋亡率、MST1 mRNA水平、MST1、cleaved-Caspase3/Caspase3蛋白表达水平显著性降低(P<0.05)。结论:Galangin可能通过激活Hippo信号通路抑制甲状腺癌细胞8505C的增殖、迁移和侵袭。

高良姜素调节Notch-1/Hes信号通路对胰腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨高良姜素(Gal)调节Notch-1/Hes信号通路对胰腺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:将人胰腺癌PCNA-1细胞分为空白组、Gal低剂量组、Gal中剂量组、Gal高剂量组、Jagged1组、Gal高剂量+Jagged1组,EdU染色和CCK-8、划痕实验、Transwell实验分别检测PCNA-1细胞增殖、迁移、侵袭;qRT-PCR检测PCNA-1细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2 mRNA表达;裸鼠体内移植瘤实验检测裸鼠体内肿瘤质量与体积;Western blot检测PCNA-1细胞及肿瘤组织中Notch-1、Hes1蛋白表达。结果:与空白组相比,Gal低剂量组、Gal中剂量组、Gal高剂量组PCNA-1细胞EdU阳性细胞率、OD 450值、划痕愈合率、细胞侵袭数目、Cyclin D1、MMP-9、MMP-2 mRNA表达、PCNA-1细胞中Notch-1、Hes1蛋白表达降低,且呈剂量依赖性,Jagged1组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);与Gal高剂量组相比,Gal高剂量+Jagged1组PCNA-1细胞EdU阳性细胞率、OD 450值、划痕愈合率、细胞侵袭数目、Cyclin D1、MMP-9、MMP-2 mRNA表达、PCNA-1细胞中Notch-1、Hes1蛋白表达升高(P<0.05)。与裸鼠-空白组相比,裸鼠-Gal低剂量组、裸鼠-Gal中剂量组、裸鼠-Gal高剂量组裸鼠肿瘤质量与体积、Notch-1、Hes1蛋白表达降低,且呈剂量依赖性(P<0.05),裸鼠-Jagged1组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);与裸鼠-Gal高剂量组相比,裸鼠-Gal高剂量+Jagged1组裸鼠肿瘤质量与体积、Notch-1、Hes1蛋白表达升高(P<0.05)。结论:Gal抑制PCNA-1细胞增殖、迁移、侵袭及裸鼠体内肿瘤的生长,可能与抑制Notch-1/Hes通路有关。

高良姜素调节MCP-1/CCR2信号轴对肺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的研究高良姜素通过调节单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)/趋化因子受体-2(CCR2)信号通路对肺癌细胞的恶性生物学行为产生的影响。方法将人肺癌细胞系A549分为ctrl组、低浓度高良姜素组(5μmol/L)、高浓度高良姜素组(100μmol/L)、吉非替尼组(10μmol/L)、高浓度高良姜素+MCP-1组(100μmol/L高良姜素+75 ng/mL MCP-1)。CCK-8试剂盒检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞划痕实验检测细胞迁移;transwell检测细胞侵袭能力;western blot检测MCP-1、CCR2、凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)、细胞增殖核抗原(Ki67)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达。结果与ctrl组比较,低浓度高良姜素组、高浓度高良姜素组、吉非替尼组肺癌细胞A549的细胞存活率、细胞迁移愈合率、细胞侵袭数、MCP-1、CCR2、Ki67、MMP-2蛋白表达降低,而细胞凋亡率、Caspase-3含量升高(P<0.05);与高浓度高良姜素组比较,高浓度高良姜素+MCP-1组A549细胞存活率、细胞迁移愈合率、细胞侵袭数、MCP-1、CCR2、Ki67、MMP-2蛋白表达升高,而细胞凋亡率、Caspase-3含量降低(P<0.05)。结论高良姜素可能通过抑制MCP-1/CCR2信号通路进而抑制肺癌A549细胞恶性生物学行为,促进其凋亡。

高良姜素调节核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/白细胞介素-1β信号通路对哮喘幼年小鼠气道炎症的影响

目的:探讨高良姜素(GA)对支气管哮喘(BA)幼年小鼠气道炎症及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路的影响。方法:构建BA幼年小鼠模型,将所有实验小鼠分为对照组、BA组和GA低、中、高剂量组(GA-L、GA-M、GA-H组)及GA高剂量+NLRP3激活剂尼日利亚菌素组(GA-H+Nig组)。检测各组小鼠肺泡灌洗液中炎症细胞总数、嗜酸粒细胞(EOS)计数、中性粒细胞(NEU)计数、淋巴细胞(LYM)计数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠肺泡灌洗液中炎症因子转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)、IL-17、IL-6水平;苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠支气管病理形态改变;高碘酸-无色品红(PAS)染色观察各组小鼠气道上皮杯状细胞变化;Western blot法检测NLRP3、IL-1β蛋白表达情况。结果:与对照组比较,BA组幼年小鼠肺组织异常,支气管管壁结构破坏,大量炎症细胞浸润,气道杯状细胞及黏液明显增多,肺组织蓝紫色明显,炎症细胞总数、EOS、NEU、LYM增多,IL-17、IL-6水平上升,NLRP3、IL-1β表达上升,TGF-β1、IL-10水平下降(P<0.05);与BA组相比,GA-L、GA-M、GA-H组幼年小鼠肺组织和支气管管壁损伤逐渐减轻,炎症细胞浸润减少,气道上皮杯状细胞及黏液减少,肺组织蓝紫色减少,炎症细胞总数、EOS、NEU、LYM减少,IL-17、IL-6水平下降,NLRP3、IL-1β表达下降,TGF-β1、IL-10水平上升(P<0.05);与GA-H组相比,GA-H+Nig组幼年小鼠肺组织和支气管管壁损伤加重,气道上皮杯状细胞及黏液增多,肺组织蓝紫色增多,炎症细胞总数、EOS、NEU、LYM增多,IL-17、IL-6水平上升,NLRP3、IL-1β表达上升,TGF-β1、IL-10水平下降(P<0.05)。结论:GA可以通过抑制NLRP3/IL-1β信号通路减轻哮喘幼年小鼠的气道炎症反应。

高良姜素的药效学研究

对高良姜素以镇痛和止呕为主要药效学指标进行研究,结果提示高良姜素具明显的镇痛和止呕的药理作用,表明高良姜素为高良姜的有效成分,以其作为评价高良姜药材质量标准是可行的。

高良姜素诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡的研究

目的：研究高良姜素诱导肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡。方法：MTT法测定BEL-7402细胞毒性及细胞生长，荧光显微镜观察细胞形态学的变化，流式细胞仪分析细胞周期和线粒体膜电位的变化。发色底物法检测Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9活性变化。结果：高良姜素对BEL-7402细胞IC50为30．15mg／L，BEL．7402细胞生长曲线表明，高良姜素浓度增高，生长率明显下降。细胞凋亡可在20～80mg／L高良姜素处理后24h出现。凋亡细胞主要表现为核染色质固缩，荧光染色增强。高良姜素阻断细胞于G1期，线粒体膜电位降低。Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9被激活，呈时间依赖性改变。高良姜素处理BEL-7402细胞6h时Caspase-9活性最高，而Caspase-6活性在12h达峰值，Caspase-3活性峰值时间在18h。结论：高良姜素可以诱导BEL-7402细胞发生凋亡，其途径可能是通过线粒体旁路。

蜂胶中白杨素和高良姜素的HPLC分析

目的:建立测定蜂胶中白杨素和高良姜素的反相高效液相色谱法,并用该方法测定9个产地蜂胶样品中白杨素和高良姜素的含量。方法:采用Zorbax SB-C_(18)(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱;流动相:甲醇-0.1%甲酸;梯度洗脱:0→35min,甲醇-0.1%甲酸比例由(50∶50)→(75∶25);流速:1.0mL·min^(-1);检测波长:267nm;柱温:30℃。结果:白杨素在0.08～4.1μg(r=0.9999)范围内线性关系良好,其高、中、低3个量的平均加样回收率分别为99.1%,101.2%,99.7%;RSD分别为1.3%,1.8%,1.4%。高良姜素在0.06～3.8μg(r=0.9998)范围内线性关系良好,其高、中、低3个量的平均加样回收率分别为99.7%,100.6%,100.2%;RSD分别为1.0%,1.7%,1.8%。9个蜂胶样品中白杨素和高良姜素含量范围分别为2.25%～5.58%和2.18%～3.44%。结论:该方法是一种灵敏、准确的分析方法。

制备色谱法分离纯化高良姜黄酮中高良姜素和山柰素

建立了制备型高效液相色谱(Prep-HPLC)分离高良姜黄酮中高良姜素和山柰素的方法。高良姜黄酮经HPD-600树脂吸附洗脱纯化后,采用Prep-HPLC分离高良姜黄酮中高良姜素和山柰素。制备色谱条件:流动相为甲醇-0.6%(v/v)乙酸水溶液(58∶42,v/v),柱温为常温,流速为7.0 mL/min,检测波长为360 nm,进样量为700μL,上样质量浓度为10.0 g/L。分离的单体由质谱和核磁共振氢谱、碳谱鉴定确证为高良姜素和山柰素,HPLC外标法定量,纯度分别为99.5%和99.7%。该方法分离效果好、高效、低毒,可用于高良姜中高良姜素和山柰素的分离制备。

HPLC法测定高良姜中高良姜素的含量

目的以高良姜中的专属性成分高良姜素为标准品 ,用HPLC法测定高良姜素的含量 ,制定高良姜的质量标准。方法用高效液相法测定了 10个不同地区的高良姜样品中高良姜素的含量 ,色谱柱 :HypersilODS ;检测波长 :2 6 7nm ;柱温 :4 0℃ ;流动相 :甲醇 - 0 .5 %磷酸 (5 8∶4 2 ) ;流速 :1mL/min。结果与结论本方法简便、可靠、重现性好 ,可作为高良姜质量控制的方法。据高良姜素含量的离散程度 ,提出了高良姜素的限量标准为不少于 6 .0mg/g。

高良姜素诱导肺癌A549细胞凋亡的研究

目的研究高良姜素诱导肺癌细胞系A549细胞凋亡效应。方法 MTT法测定A549细胞生长抑制率,荧光显微镜观察细胞形态学的变化,流式细胞仪分析细胞周期和线粒体膜电位的变化。Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达变化。结果随高良姜素浓度增高,A549细胞生长抑制率明显上升,IC50在30.15 mg/L。细胞凋亡可在10～80 mg/L高良姜素处理后24 h出现,呈浓度依赖性。高良姜素使线粒体膜电位降低。Caspases被激活,Bcl-2、Bcl-XL表达下调,p53、Bax、Bid表达呈浓度依赖性上调。结论高良姜素可能是通过线粒体途径诱导A549细胞发生凋亡。

高良姜素药理活性的研究进展

高良姜素(3,5,7-三羟基黄酮)是中药高良姜中一种重要的黄酮类活性成分。植物中的生物类黄酮具有治疗或预防多种疾病的潜力,因而被广泛关注。实验发现,高良姜素具有多种生物学活性及药用价值。本文对国内外高良姜素在抗癌、抗炎、抗过敏、抗氧化等药理活性方面的研究进展进行综述,以期为高良姜素的全面开发利用及深入研究提供参考。

高良姜素诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的研究

目的研究高良姜素促进人乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡作用。方法采用CCK-8法检测高良姜素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;以流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleavedcaspase-3和cleaved-PARP等相关蛋白的表达水平。结果高良姜素对MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,24 h和48 h的IC50分别为43.71μmol·L^(-1)和20.68μmol·L^(-1);高良姜素能够诱导MCF-7细胞凋亡,呈浓度依赖关系;高良姜素能上调Bax、cleaved-caspase-3和cleaved-PARP蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。结论高良姜素对MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,通过线粒体途径调节凋亡相关蛋白的表达水平诱导MCF-7细胞凋亡。