酶解鱼鳞蛋白制备抗氧化肽的研究

以鱼鳞蛋白为原料,采用Neutrase蛋白酶酶解鱼鳞蛋白制备抗氧化活性肽,结合单因素实验筛选关键因子,通过响应面分析法,以.OH自由基的清除率为响应值,确定制备鱼鳞抗氧化活性肽的最佳工艺条件为:酶解时间5h、酶解温度50℃、底物浓度5.51%、pH5.64、酶用量4.12%,该条件下得到的鱼鳞抗氧化活性肽对.OH的清除率达78.82%。

菠萝蛋白酶酶解鱼鳞蛋白的工艺优化研究

鱼鳞中含有丰富的蛋白质资源,对其进行温和、环保的酶法水解受到更多的关注。本文采用菠萝蛋白酶水解鱼鳞蛋白,制备胶原多肽制品。通过考察温度、时间、酶量、料液比等单一因素对酶解的影响,设计了L9(34)正交实验,最终获得了菠萝蛋白酶水解鱼鳞蛋白的优化工艺条件,即温度60℃,时间3h,酶量4%(质量分数),底物浓度5%(质量分数),水解度为18.1%,该条件具有生产应用前景。

木瓜蛋白酶水解海洋鱼鳞蛋白的工艺研究

研究了木瓜蛋白酶水解鱼鳞蛋白的单一影响因素,并采用L9(34)正交实验,考察了温度、时间、酶量、底物浓度等因素对水解鱼鳞蛋白的影响。确定了木瓜蛋白酶水解鱼鳞蛋白工艺条件,即温度65℃,时间75 min,酶量0.04 g/g鱼鳞,底物浓度10%,适合规模化生产。

鱼鳞蛋白酶解物为基料的涂膜剂对鲫的保鲜效果

研究了鱼鳞蛋白酶解物为基料的复合涂膜剂对鲫4℃贮藏过程中其鲜度指标变化和保鲜效果的影响。实验将去鳞、去内脏并洗净后的鲫分别于4℃的鱼鳞蛋白酶解物溶液和添加了迷迭香的鱼鳞蛋白酶解物溶液中浸泡1.5 min,沥干后用保鲜膜包好于4℃条件下贮藏。通过测定鱼体贮藏过程中细菌总数、TBA值、TVB-N值、K值、重量损失、感官评分等鲜度指标的变化规律,评价了鱼鳞蛋白酶解物对鲫在4℃贮藏条件下保鲜作用效果。结果表明,涂有鱼鳞蛋白酶解物的鲫的细菌总数、TVB-N值、K值、TBA值、重量损失在10 d内显著(P<0.05)低于对照组,而感官品质显著(P<0.05)高于对照组,在4℃条件下能延长鲫贮藏期8 d左右;涂有添加了迷迭香提取物的鱼鳞蛋白酶解物的鲫的TVB-N值、K值、重量损失在4～6 d内显著(P<0.05)低于对照组,而感官品质显著(P<0.05)高于对照组,但不能有效延长鱼体的贮藏期。鱼鳞蛋白经过胃蛋白酶在一定条件下酶解后,其产物对鱼体具有较好的保鲜效果,是一种良好的鱼体生物保鲜涂膜材料,但不适宜与迷迭香提取物联合使用。

鲤鱼鱼鳞蛋白酶解液对鲤鱼肉冷藏期间品质变化的影响

为研究鲤鱼鱼鳞蛋白酶解液对鲤鱼肉冷藏期间品质的影响,本文以新鲜鲤鱼肉为研究对象,将鱼肉分别在不同浓度鲤鱼鱼鳞蛋白酶解液(0.01、0.03、0.04 g/m L)作浸渍处理(无菌水浸渍处理为对照组),置于4℃条件下贮藏,在0、2、4、6、8、10 d进行各组样品的菌落总数、可溶性蛋白含量、蒸煮损失率、汁液流失率、硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)值、酸价、总巯基与游离巯基含量等指标测定。结果得出,经鲤鱼鱼鳞蛋白酶解液处理后鲤鱼肉样品,各浓度处理组的总巯基与可溶性蛋白含量的降幅均缓于对照组,且游离巯基含量、TBA值、汁液流失率、蒸煮损失率与酸价值的增幅不大。其中,对照组样品在第6 d时的菌落总数超过二级鲜度,而处理组样品在第10 d时仍处在二级鲜度(4.01~6.01lg CFU/g)。并且0.03 g/m L鲤鱼鱼鳞蛋白酶解液的处理效果最佳,使鲤鱼鱼肉的保藏期延长4 d。说明鲤鱼鱼鳞蛋白酶解液能有效减缓鲤鱼肉冷藏期间的脂肪与蛋白质氧化。

双酶水解鱼鳞蛋白制备ACE抑制肽的工艺优化研究

本试验的原料为脱钙鱼鳞粉,以ACE抑制率为指标,用胃蛋白酶、胰蛋白酶先后水解并进行单因素和正交优化试验,确定制备ACE抑制肽的最佳条件。结果表明,胃蛋白酶水解脱钙鱼鳞粉的最佳酶解条件:当胃蛋白酶的添加量为6%,料液比1∶50(g/ml),水解时间2 h时,鱼鳞蛋白的ACE抑制率为84.89%;胰蛋白酶水解脱钙鱼鳞蛋白的最佳酶解条件:胰蛋白酶的添加量为6%,水解时间2 h,此时ACE抑制率为93.37%。

响应面法研究鱼鳞胃蛋白酶酶解特性

以响应面试验设计方法研究了胃蛋白酶对鱼鳞蛋白的水解特性．得到拟合良好的响应面方程，在选定范围内胃蛋白酶水解鱼鳞蛋白的最优条件为：pH=1．5，时间为6h，温度为60℃，此时蛋白得率的最优值为164．0mg／g原料。

鱼鳞胶原蛋白对免疫低下小鼠皮肤伤口愈合的影响

目的探索鱼鳞胶原蛋白对大鼠成纤维细胞增殖、免疫低下小鼠皮肤伤口愈合的影响。方法通过水提法提取鱼鳞胶原蛋白,利用环磷酰胺诱导小鼠免疫低下模型,MTT法检测鱼鳞胶原蛋白对成纤维细胞增殖的影响,实时定量荧光PCR(real time PCR),酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测免疫低下小鼠伤口处血小板衍生因子(platelet derived growth factor,PDGF)、转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)mRNA表达、合成及M2型巨噬细胞含量。结果鱼鳞胶原蛋白促进了成纤维细胞增殖,并呈一定的剂量依赖关系,当浓度达到40 mg/L时,增殖率可达38.65%。鱼鳞胶原蛋白0.5 mg组及1 mg组明显促进了免疫低下小鼠伤口愈合。治疗第15天,鱼鳞胶原蛋白1 mg组愈合率可达96.34%;鱼鳞胶原蛋白1 mg组明显促进了伤口处PDGF、TGFβmRNA表达及合成,并且增加了伤口处M2型巨噬细胞含量。结论水提法提取的鱼鳞胶原蛋白具有良好的相容性,可促进免疫低下小鼠伤口愈合,具有潜在的临床应用价值。

原子力显微镜研究鱼鳞胶原蛋白的溶液聚集行为

用原子力显微镜(AFM)考察了样品质量浓度、溶液pH及温度对鱼鳞胶原蛋白溶液聚集态的影响。结果表明,在pH2.7的醋酸溶液中,当鱼鳞胶原蛋白质量浓度为10μg/mL时,鱼鳞胶原蛋白主要以单体和线性小聚集体形式存在,随着质量浓度继续增大,胶原分子开始自组装形成网状结构,当质量浓度达到4 mg/mL时,形成无规线团结构;而在pH7.2的Tris-HC l溶液中,即使在10μg/mL的低质量浓度下,鱼鳞胶原蛋白也能自组装成不规则的片状聚集体,并通过横向融合形成多孔网状结构。随着质量浓度的增大,纤维直径和高度明显增加;鱼鳞胶原蛋白在40℃处理1 h,其聚集行为发生明显改变,聚集体由线性变为球状;当处理温度升至80℃时,其高级结构基本被破坏,AFM图像上只可见少许不规则分布的团状聚集体。

鱼鳞胶原蛋白的提取鉴定初探

胶原蛋白是生物体内含量极高的一种蛋白质,可达30%左右。目前胶原蛋白的主要来源局限于牛和猪的皮和骨,作为下脚料大部分被浪费的鱼鳞也是胶原蛋白的重要来源。采用碱提取、酸提取以及水提取方法提取鱼鳞中的胶原蛋白,并通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法对提取的胶原蛋白进行鉴定,确定水提法为鱼鳞胶原蛋白的较佳提取方法,并进一步对该提取方法的提取条件进行优化,得出鱼鳞胶原蛋白的最佳提取条件:提取温度70℃,提取时间20min,料液比1:25和1:50之间。

鱼鳞水解胶原蛋白在蛋糕和灌肠中的应用

通过蛋糕焙烤和灌肠加工实验,对鱼鳞水解胶原蛋白在蛋糕和灌肠中的应用效果进行研究。结果表明,适量添加鱼鳞水解胶原蛋白可以提高蛋糕的成品率和蛋糕的比容,增加灌肠制品的成品率,提高灌肠的持水力,并能获得感官品质良好的蛋糕和灌肠制品。在本实验条件下,鱼鳞水解胶原蛋白在蛋糕和灌肠中的最佳添加质量分数分别为3%和2%。

鱼鳞胶原蛋白肽钙螯合物制备工艺的优化

采用响应面法对罗非鱼鳞胶原蛋白肽钙螯合物的制备工艺进行优化,建立了肽钙螯合率与时间、肽与氯化钙质量比、温度、pH的数学模型。最佳制备参数为:时间39min、肽与氯化钙质量比3.3∶1、温度61℃和pH7.2,此条件下肽钙螯合率的验证值为65.01%,与预测值(65.05%)无显著性差异。红外光谱分析表明罗非鱼鳞胶原蛋白肽与钙形成了螯合物。为新型钙制剂的开发及鱼鳞的高值化利用提供了理论依据。

罗非鱼鳞胶原蛋白肽锌螯合物制备工艺优化

为了获得罗非鱼鳞胶原蛋白肽锌螯合物的最佳制备工艺,采用响应面法进行优化其制备工艺,建立了肽锌螯合率与pH、肽锌质量比、时间和温度的数学模型。得到最佳制备工艺参数为:pH 5.0、肽锌质量比2.5∶1、时间35 min和温度54℃,肽锌螯合率的预测值为92.79%,验证试验值为91.96%,与预测值无显著性差异。

不补料连续酶解-膜分离耦合制备鱼鳞胶原蛋白抗氧化肽的研究

以克服传统酶解技术存在的不足,提高酶解反应效率为目的,研究了鱼鳞胶原蛋白抗氧化肽制备的不补料连续酶解-膜分离耦合反应技术。从实验得到的加酶量、底物浓度和循环泵转速对蛋白转化率的影响规律分析了酶膜耦合反应技术优于传统的酶解技术的原因。通过正交实验,得到最优的酶解工艺条件为:底物浓度4%(W/W)、加酶量1.5%、反应时间30min、反应温度60℃、循环泵转速120r/min和pH9.5,该条件下蛋白转化率高达97.56%。

草鱼鱼鳞胶原蛋白-壳聚糖共混膜的制备及其性能研究

以草鱼鱼鳞胶原蛋白和壳聚糖为原料制备共混膜,测定了共混膜的力学性能、水溶液稳定性、水蒸气透过系数、透光率,并用红外光谱、X射线衍射、显微镜等方法表征了共混膜的结构。结果表明:共混膜的最佳组成是1.5%壳聚糖溶液与0.3%胶原蛋白溶液的体积比为1:3。在此条件下形成的共混膜的力学性能、水溶液稳定性、水蒸气透过系数,较单一成分的膜有明显改善,壳聚糖与胶原蛋白之间有强烈的相互作用和良好的相容性,为共混膜在医学材料领域的应用提供试验数据。

鱼鳞胶原蛋白提取及对成纤维细胞功能的影响

通过水提法提取鱼鳞胶原蛋白,分离大鼠皮肤成纤维细胞,观察鱼鳞胶原蛋白对成纤维细胞增殖,细胞内血小板衍生因子(platelet derived growth factor,PDGF)、转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)mRNA表达、蛋白合成及cGMP含量的影响。结果发现:鱼鳞胶原蛋白可促进成纤维细胞增殖,并呈一定的剂量依赖关系,当质量浓度达到40mg/L时,增值率可达42.75%;鱼鳞胶原蛋白能通过促进cGMP合成,明显促进成纤维细胞PDGF、TGFβmRNA表达及蛋白合成,当质量浓度为40mg/L时,PDGF、TGFβmRNA表达量分别为对照组的1.514±0.047和1.595±0.032倍。水提法提取的鱼鳞胶原蛋白具有良好的相容性,可促进成纤维细胞增殖及活化,具有潜在的临床应用价值。

罗非鱼鳞胶原蛋白肽铁螯合物制备工艺的优化

设计四因素三水平的响应面实验进行优化罗非鱼鳞胶原蛋白肽铁螯合物的制备工艺,建立了肽铁螯合率与pH、肽铁质量比、时间、温度的数学模型。结果表明,pH、肽铁质量比、时间对肽铁螯合率影响显著。最佳制备工艺参数为:pH=5.4、温度40℃、肽铁质量比3∶1、时间41 min。在该条件下,得到肽铁螯合率的验证值为90.49%,与预测值无显著差异。

淡水鱼皮鱼鳞胶原蛋白粉的成分比较

对淡水鱼皮、鱼鳞胶原蛋白粉的成分进行了分析比较:两者的氨基酸总量、蛋白质、酸溶蛋白、多肽、游离氨基酸含量基本接近,鱼鳞胶原蛋白粉的羟脯氨酸含量、矿物质含量高于鱼皮胶原蛋白粉。

鲤鱼鱼鳞硬蛋白的营养学评价

以含16%蛋白质的低蛋白饲料为基础,添加不同数量的鲤鱼鱼鳞硬蛋白到低蛋白饲料中,配制6种饲料即低蛋白基础日粮饲料、低蛋白基础日粮饲料+0.5%鱼鳞硬蛋白、低蛋白基础日粮饲料+2%鱼鳞硬蛋白、低蛋白基础日粮饲料+2%鱼鳞硬蛋白+0.2%色氨酸、低蛋白基础日粮饲料+5%鱼鳞硬蛋白和含20%蛋白质的正常蛋白日粮。上述6种饲料被分别饲喂6组SD大鼠,分析鱼鳞硬蛋白对大白鼠增重率、饲料利用率、表观消化率、生物学价值、血清尿素氮及血清总蛋白的影响。结果表明:在低蛋白饲料中,氨基酸构成不均衡的鲤鱼鱼鳞硬蛋白能够部分代替饲料中的蛋白质,在添加限制氨基酸的条件下,鲤鱼鱼鳞硬蛋白能够代替饲料中的多量蛋白质,鲤鱼鱼鳞硬蛋白在补充限制氨基酸的条件下具有良好的营养学价值。

草鱼鱼鳞胶原蛋白-壳聚糖共混膜的制备及其性能研究(续)

以草鱼鱼鳞胶原蛋白和壳聚糖为原料制备共混膜,测定了共混膜的力学性能、水溶液稳定性、水蒸气透过系数、透光率,并用红外光谱、X射线衍射、显微镜等方法表征了共混膜的结构。结果表明:共混膜的最佳组成是1.5%壳聚糖溶液与0.3%胶原蛋白溶液的体积比为1:3。在此条件下形成的共混膜的力学性能、水溶液稳定性、水蒸气透过系数,较单一成分的膜有明显改善,壳聚糖与胶原蛋白之间有强烈的相互作用和良好的相容性,为共混膜在医学材料领域的应用提供试验数据。