提升鲁西黄牛品种改良效果的技术推广

一、鲁西黄牛的品种特点、发展历史及保种的必要性鲁西黄牛属于牛科牛属动物,役肉兼用型品种,是我国五大良种黄牛之一,公牛体型较大、胸深而宽广、体型前高后低,母牛后躯发育良好,背腰平直。该品种耐粗饲、适应性和抗病力较强,肉质鲜嫩、口感独特、肌间脂肪分布均匀,大理石纹明显,牛肉品质优良。其毛色以黄色居多,也有淡黄和棕红色,大部分牛的眼圈、口轮和腹下均为粉白色,被称为“三粉”。

鲁西黄牛前胃弛缓的中西药结合治疗效果

为了解中西药结合治疗鲁西黄牛前胃弛缓的效果,该试验搜集12头年龄、质量等生理状态相近且确诊为前胃弛缓的鲁西黄牛,随机分成2组,分别采取西药治疗和中西药结合治疗,比较不同用药方案的治疗效果。结果表明,中西医结合治疗总有效率更高,痊愈平均时间显著缩短,但与西医治疗效果无明显差异。综合可知,中西药结合治疗鲁西黄牛相较于单一西药治疗更有优势,疗效好且见效快。

鲁西黄牛H-FABP基因的多态性及其与肉质性状关系的分析

利用PCR-RFLP方法在鲁西黄牛H-FABP基因内发现了1个变异酶切位点,为in tron 2上的H aeⅢ-RFLP。利用最小二乘线性模型对不同分子标记基因型效应值间肉品质大理石花纹评分和嫩度性状差异显著性检验,结果表明:鲁西黄牛H-FABP基因中BB纯合基因型对牛肉嫩度剪切力值有较大的影响(P<0.05);对大理石花纹评分来说,3种基因型AA、AB和BB之间差异不显著。

鲁西黄牛成年母牛体重与体尺指标的相关回归分析

[目的]分析鲁西黄牛成年母牛体尺指标与体重的相关性,并进一步进行估测体重的回归分析,指导该品种牛的生产实际及选育工作。[方法]以山东省鲁西黄牛产区2006年测量的110条相关数据为基础,分析体重与体高、体长、胸围、管围的相关系数,构建估测鲁西黄牛成年母牛体重的回归模型。[结果]结果表明:体重与体高、体长、胸围、管围的相关系数分别为0.7510、.814、0.9090、.855;得到了2个估测体重的回归模型,估测值与实测值之间的相关程度分别为0.954和0.953,并根据2个模型用Visual Basic语言编写了鲁西黄牛体重计算程序。[结论]鲁西黄牛成年母牛体重与体高、体长、胸围、管围存在明显的线性关系。

鲁西黄牛肉用品系育种目标性状经济权重计算

根据鲁西黄牛肉用品系的育种和生产实际,在基础母牛群体规模固定的二阶开放核心群育种生产体系下,构建了核心群和商品群中犊牛、青年母牛、青年公牛、成年母牛、成年公牛和育肥牛6个群体,包含断奶重、周岁重、成年母牛体重、育肥期日增重、胴体等级、屠宰率、初产年龄、产犊间隔和生产年限9个目标性状的利润函数模型。采用边际预算法计算目标性状的经济值,经贴现指数和遗传标准差校正后估算其经济权重。结果表明,6个群体体系中,每头母牛年利润为-1033.96元;9个目标性状经济值分别为:1.44元/kg,1.49元/kg,-3.02元/kg,1.81元/g,315.45元/级,66.85元/%,-0.54元/d,-4.43元/d,0.09元/d;相对经济权重分别为0.11,0.11,0.14,0.26,0.14,0.12,0.01,0.08,0.03。结果表明,鲁西黄牛从役肉兼用向专门化肉用方向选育,需要加强生长发育性状选择的同时,兼顾胴体性状和繁殖性状。

鲁西黄牛胚胎骨骼肌卫星细胞分离培养及生物学特性

为研究鲁西黄牛胚胎骨骼肌卫星细胞生物学特性,取30～50日龄鲁西黄牛胚胎四肢骨骼肌,分离培养鲁西黄牛胚胎骨骼肌卫星细胞。结果显示,试验成功地分离了鲁西黄牛胚胎骨骼肌卫星细胞,原代培养并传代至16代,免疫细胞化学染色检测卫星细胞表面特异性标志Desmin、MyoD呈阳性表达,RT-PCR检测Desmin、c-Met、Myf5、pax7呈阳性表达;绘制生长曲线,结果说明细胞具有较强增殖能力;应用流式细胞仪对细胞进行周期分析,结果显示S期细胞所占比例为8.94%;骨骼肌卫星细胞向成肌细胞诱导10d后,免疫细胞化学染色检测成肌特异性标志骨骼肌肌球蛋白呈阳性表达;骨骼肌卫星细胞向脂肪细胞诱导7d后,油红O染色呈阳性,RT-PCR检测脂肪细胞特异性标志pparγ、LPL呈阳性表达。结果表明试验成功建立了鲁西黄牛胚胎骨骼肌卫星细胞的体外扩增培养体系,且该骨骼肌卫星细胞有发育形成肌管和脂肪细胞的多项分化潜能。

中国荷斯坦牛和鲁西黄牛mtDNA D-loop序列多态性分析

为了从母系遗传角度深入阐明中国荷斯坦牛和鲁西黄牛的群体遗传多样性以及起源进化,本研究采用PCR测序法测定了9头中国荷斯坦牛和11头鲁西黄牛的线粒体DNAD-loop区的部分序列,并经剪切后进行生物信息学软件分析。结果表明,20个个体D-loop区共711bp,共检测到19种单倍型和50个多态位点。核苷酸多样性(Pi)为0.02133±0.00454,单倍型多样性(Hd)为0.994±0.019,平均核苷酸差异数(k)为15.14620。构建的NJ网络进化树共分为两大支系,其中部分鲁西黄牛与瘤牛聚为一支,而中国荷斯坦牛和部分鲁西黄牛与普通黄牛聚为一支。说明中国荷斯坦牛和鲁西黄牛群体遗传多样性均较高;鲁西黄牛同时含有瘤牛和普通黄牛的血统,而中国荷斯坦牛只含有普通黄牛的血统。

鲁西黄牛遗传多样性及其系统地位的研究

以中心产区简单随机抽样在山东省鄄城县和梁山县共抽取鲁西黄牛87头,用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和水平淀粉凝胶电泳技术检测21个编码血液蛋白(酶)的结构基因座的基因频率,同时引用国内外13个群体7个相同座位的研究资料,进行聚类分析。结果表明,在所检测的21个基因座中,有9个存在多型,多态位点百分比为42.86%,群体内遗传变异水平相对较高,平均杂合度为0.1416;鲁西牛与东南亚牛种亲缘关系较近,证实了鲁西牛是由北方蒙古利亚牛系和南方瘤牛的混血种,但不可能含有巴厘牛的血统。目前应扩大保种群的数量,以维持群体内的遗传多样性。

鲁西黄牛皮肤成纤维细胞分离与培养的研究

研究了鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞的分离与培养、纯化方法及生长特征 ,获得了传代培养的鲁西黄牛皮肤成纤维细胞和上皮细胞。鲁西黄牛耳皮肤细胞在体外培养时呈贴壁生长 ,其原代或早期传代培养物由上皮样细胞与成纤维细胞混合组成。传代培养混合生长的细胞用 0 .2 5 %胰蛋白酶液 37℃下消化处理 3～ 4 min,脱壁悬浮的主要为成纤维细胞。采用反复消化法在传代过程中将二者逐步分离纯化 ,获得了可正常传代的鲁西黄牛耳上皮细胞系和成纤维细胞系。通过绘制生长曲线研究了鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞的增殖规律。传代培养至 12代的鲁西黄牛皮肤成纤维细胞染色体倍性正常。利用第 6代成纤维细胞作核供体克隆试验结果证明重构胚体外发育正常 ,囊胚发育率为 2 7.3%。

鲁西黄牛主要经济性状的数量遗传学分析

采用动物模型和DFREML,估测了1989—1994年期间出生的1050头鲁西黄牛的主要经济性状的遗传参数。结果表明:鲁西黄牛的初生重、6月龄体重、18月龄体重、体高、体长、尻长、胸围和管围的遗传力分别为0.396、0.330、0.249、0.617、0.462、0.561、0.374和0.592;初生重与6月龄体重和18月龄体重之间的遗传相关分别为0.487和0.673;6月龄体重与18月龄体重之间的遗传相关为0.561;18月龄体重与18月龄体尺的遗传相关在0.681￣0.947之间。

鲁西黄牛成纤维细胞MSTN基因敲除研究

肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)又称GDF-8,属于转化生长因子超家族,是在骨骼肌中广泛表达的一类糖蛋白。试验根据已知牛MSTN基因的序列设计引物,通过PCR技术克隆获得同源长短臂,利用pPNT质粒为骨架构建含有loxP-Neo-loxP结构的打靶载体,然后利用脂质体转染鲁西黄牛成纤维细胞,G418和GANC双向筛选,收集打靶细胞,PCR法进行鉴定,初步确定筛选到的细胞为MSTN基因敲除细胞,为后续试验获得MSTN基因敲除牛奠定了基础。

鲁西黄牛肉用品系育种目标性状和选择性状研究

为了选育鲁西黄牛肉用品系,结合鲁西黄牛肉用品系育种实际,经过系统分析,确定了鲁西黄牛肉用品系近期的育种目标性状和相应的选择性状,并采用差额法计算了各选择性状的边际效益。结果表明,鲁西黄牛肉用品系近期的育种目标性状有3类,分别为生长发育性状、胴体性状和繁殖性状,包括有周岁质量、育肥期日增质量、生长能力、胴体等级、屠宰率、初产年龄、产犊间隔和射精量8个选择性状。在预期的市场和生产条件下,对于上述各选择性状的边际效益分别为:5.71元/kg,0.90元/g,2.84元/kg,402.00元/级,60.30元/%,-3.52元/d,-6.16元/d,55.23元/mL;通过遗传标准差校正,3类性状中生长发育、胴体性状和繁殖性状的经济权重之比为0.55∶0.21∶0.24,近似于2∶1∶1。说明鲁西黄牛向肉用方向发展过程中,需要加强生长发育性状的选择力度,同时要兼顾胴体性状和繁殖性状的选择。

鲁西黄牛血液蛋白多态性及表型特征的研究

以中产区简单随机抽样在山东省鄄城县和梁山县共抽取鲁西黄牛90头,用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和水平淀粉凝胶电泳技术检测21个编码血液蛋白(酶)的结构基因座,并观察其外形特征,结果表明:在所检测的21个基因座中,有9个存在多型,多态位点百分比为42.86%,群体内遗传变异水平相对较高,平均杂合度为0.1416;证实了鲁西黄牛是北方牛和南方牛的混血种,同时可能还含有巴厘牛的血统;但目前应扩大保种群的数量,以维持群体内的遗传多样性。

中国鲁西黄牛生产现状调查分析

通过对我国鲁西黄牛生产状况的全面调查分析,结果表明,10年来牛群质量停滞、出现老龄化(6岁以上占29.93%)现象,牛数减少10多倍,毛色趋向棕黄(77.80%),公牛数目严重不足(仅28头),品种杂交利用率高,不利于纯种保存和繁育。需要加强对其的保护、开发和利用,建立我国的黄牛品牌。

鲁西黄牛肉用品系的选择方案评估

在现行鲁西黄牛肉用品系青年公牛体系和二阶开放核心群育种方案的基础上,根据不同可利用记录作为不同的选种标准。通过超声波扫描周岁活体牛眼肌面积和背膘厚,测定犊牛断奶后第28、42和56天血浆中IGF-Ⅰ平均浓度,将它们作为胴体性状选择的早期记录,设定4种选择方案,采用确定性模型从遗传和经济角度评估这些方案的育种效果。结果表明,以现行方案(方案1)为参照,超声波选择方案(方案2)、IGF-Ⅰ选择方案(方案3)以及超声波和IGF-1组合方案(方案4)的指数准确性、遗传进展和育种效益分别提高了0.19、39.05%、63.60%,0.01、25.55%、14.90%和0.21、40.68%、64.08%。以上数据说明,将超声波活体扫描和IGF-Ⅰ浓度测定应用到育种方案中可获得相对理想的育种效果。

鲁西黄牛calpain基因PCR-RFLP的初步分析

对鲁西黄牛m-calpain的30kD大小的调节亚基的DNA序列通过PCR扩增得到1800bp大小的产物,这个产物序列包括从外显子4到外显子8的5’末端的全部序列(包括它们之间的内含子序列)。利用限制性内切酶HhaⅠ对PCR产物进行酶切,在31头鲁西黄牛群体中检测到2个等位基因A和B,2个等位基因的频率分别为0.39和0.61,检测到3种基因型AA、BB和AB,3个基因型的频率分别为0.1、0.4和0.5。

鲁西黄牛体细胞克隆保种技术的研究

以体外培养的鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞作核供体,研究利用体细胞克隆技术保存我国地方黄牛优良品种的技术方法。通过组织块培养法建立的鲁西黄牛(1♂,4♀)成纤维细胞系,作为核移植供体细胞,利用屠宰场母牛卵巢卵母细胞经体外培养成熟后作为核受体进行核移植,试验结果表明:重构胚的融合率为62.5%(242/387),分裂率为63.6%(154/242),体外培养第7天囊胚发育率为42.9%(66/154)。体外培养第7天的囊胚的内细胞团细胞(ICM)与滋养层细胞数平均为37和47,ICM占44.2%。体外发育到7 d的囊胚新鲜胚胎的移植妊娠率(新鲜胚胎)移植受体10头,60 d妊娠率为20%(2/10)。

健康鲁西黄牛消化道和阴道的细菌多样性研究

为了研究健康鲁西黄牛口腔、瘤胃、肠道和阴道的细菌组成及其相似性,分别提取各部位样本细菌的总DNA,特异扩增16Sr DNA的V3～V4高变区,扩增产物进行测序,对测序结果进行Chao1和Shannon Index多样性指数分析、OTUs交叠分析、聚类分析、物种分布波动性分析。结果发现,阴道和肠道的菌群多样性更高且比较相似,而口腔和瘤胃的则相对较低且比较相近;各样本中厚壁菌门、拟杆菌门所占的比例均较高;口腔和阴道的变形菌门较多,瘤胃的纤维杆菌门较多;阴道和肠道厚壁菌门占优势。结果表明：健康鲁西黄牛阴道和肠道细菌相似性很高并且含有相同的优势菌为厚壁菌门。阴道与口腔和瘤胃细菌的相似性很低,口腔、瘤胃和肠道的细菌相似性也很低。

鲁西黄牛妊娠周期血清生殖及相关激素变化规律研究

[目的]为了进一步提高鲁西黄牛的繁殖性能,有必要对妊娠周期中生殖及相关激素的分泌规律进行研究。[方法]利用放射性免疫法对空怀期、妊娠3个月、妊娠6个月、围产期以及分娩后母牛血清中雌二醇、孕酮、催乳素、游离T3(甲状腺素)和IGF-Ⅰ(胰岛素样生长因子-Ⅰ)等激素浓度进行测定。[结果]随妊娠时间的延长,体重、胸围、腰角宽、尻长、髋宽和管围等体尺指标都逐渐增加,并且体重与游离T3含量有极显著的相关关系。妊娠早期循环血液中雌二醇含量很低,到妊娠中期开始增长,围产期达到高峰。而孕酮分泌量在妊娠早期逐渐上升,妊娠中期稍有下降,到围产期时又逐渐增加并达到高峰。IGF-Ⅰ含量在整个妊娠周期中一直保持上升趋势。催乳素含量在妊娠6个月以前增加不明显,直到围产期时分泌量开始迅速增加,分娩后持续上升。[结论]通过对鲁西黄牛妊娠周期血清生殖及相关激素的检测,为以后进一步提高其繁殖性能提供依据。

季节和激素剂量对鲁西黄牛超数排卵的影响

通过检疫,选择35岁健康鲁西黄牛190头,集中饲养,分别在春、秋、冬三个不同季节,按照鲁西黄牛体重随机分为三种不同剂量,即0.0100.012 mg/kg体重,0.0130.014 mg/kg体重和0.0150.016 mg/kg体重进行超数排卵。结果表明,不同季节对鲁西黄牛超数排卵影响差异不显著(P>0.05),但胚胎可用率冬季高于春、秋两季(P<0.01)。激素不同剂量对鲁西黄牛超数排卵亦没有影响(P>0.05),但0.0130.014 mg/kg体重、0.0150.016 mg/kg体重超排有效头数都高于0.0100.012 mg/kg体重(P<0.01);0.0130.014 mg/kg体重胚胎可用率高于0.0150.016 mg/kg体重(P<0.05)和0.0100.012mg/kg体重(P<0.01)。