鸟嘌呤核苷酸交换因子1与厚体1在胃癌发生发展及转移过程中的作用研究

目的检测鸟嘌呤核苷酸交换因子1(Vav1)、厚体1(Dkk1)在胃癌及癌旁组织中的表达水平,探讨Vav1和Dkk1在胃癌发生发展及转移过程中的作用及临床价值。方法选取2020年6月至2022年6月于内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院外科行胃癌根治术且经过病理确诊的57例胃癌患者作为研究对象,收集患者胃癌组织、癌旁组织(癌组织边缘5 cm)各57份。应用免疫组化法检测Vav1和Dkk1在胃癌及癌旁组织中的表达,分析胃癌中Vav1与Dkk1阳性表达率的相关性,不同临床病理特征与Vav1和Dkk1表达情况的关系,ROC曲线分析Vav1和Dkk1在胃癌中的诊断价值。结果胃癌组织中Vav1和Dkk1的阳性表达均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。Vav1和Dkk1在癌旁组织很少表达,Vav1和Dkk1在胃癌组织中表达于细胞质,镜下可见胞质中散在黄色或黄褐色染色的颗粒。Vav1阳性与阴性患者肿瘤分期、淋巴结转移、肿瘤直径比较差异有统计学意义(P<0.05),性别、年龄、肿瘤部位、分化程度比较差异无统计学意义。Dkk1阳性与阴性患者分化程度、肿瘤分期、淋巴结转移和肿瘤直径比较差异有统计学意义(P<0.05),性别、年龄、肿瘤部位比较差异无统计学意义。胃癌中Vav1与Dkk1阳性表达率呈正相关(r>0,P<0.05)。Vav1和Dkk1的AUC分别为0.952和0.857,对胃癌的诊断效能均较理想。结论Vav1、Dkk1在胃癌中的表达呈正相关。Vav1和Dkk1在胃癌发生发展及转移过程中起重要作用,Vav1、Dkk1特异性靶向药物有望为胃癌有效治疗提供新思路。

硫酸铈对5′-腺嘌呤及5′-鸟嘌呤核苷酸的水解断裂的催化作用

本文用核磁共振 (NMR)波谱和化学定磷法研究了 Ce(SO4) 2 对 5′-腺嘌呤核苷酸 (5′- AMP)及5′-鸟嘌呤核苷酸 (5′- GMP)的水解断裂作用。结果表明 :Ce(SO4) 2 在 37℃ ,酸性条件下使 5′- AMP断裂为腺嘌呤核苷 (A)及无机磷 ,使 5′- GMP断裂为鸟嘌呤核苷 (G)及无机磷 ,SO2 -4 浓度及酸强度对 5′- AMP及 5′- GMP的水解断裂程度有很大影响 ,并对其水解断裂机制进行了研究。

巯嘌呤甲基转移酶基因多态性联合硫鸟嘌呤核苷酸血药浓度监测在硫唑嘌呤治疗炎症性肠病治疗中的临床应用

目的：探讨巯嘌呤甲基转移酶（TPMT）基因多态性联合红细胞中硫鸟嘌呤核苷酸（6-TGNs）血药浓度监测在硫唑嘌呤治疗炎症性肠病中的临床应用，为实施个体化治疗方案提供参考。方法：选取临床确诊为炎症性肠病的患者，采用PCR扩增、焦磷酸基因测序法技术检测其TPMT基因第7外显子G460A和第10外显子A719G的2个多态性位点；应用高效液相色谱法测定患者红细胞（RBC）中6-TGNs浓度。结果：15例患者TPMT＊3基因均为野生型，未发现突变；首次检测的6-TGNs浓度为 147.31～875.26 pmol/L（8×10^8）RBC，服用相同剂量的患者个体差异较大。结论：TPMT基因多态性检测有助于预测硫唑嘌呤治疗炎症性肠病的骨髓毒副作用，6TGNs浓度测定有助于药物剂量的调整，两者联合应用可为接受硫唑嘌呤治疗的炎症性肠病患者的个体化治疗提供参考依据。

高效液相色谱法测定人红细胞硫鸟嘌呤核苷酸的浓度

目的建立测定人红细胞（RBC）硫鸟嘌呤核苷酸（6-TGNs）浓度的高效液相色谱法。方法 RBC首先经70%高氯酸沉淀蛋白,并在酸性条件下100℃加热45 min,6-TGNs水解生成6-硫鸟嘌呤（6-TG）后进样分析。HypersilGOLD C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,检测波长342 nm,柱温35℃;流动相为20 mmol.L-1磷酸二氢钾溶液（pH3.3）-乙腈（95：5,V/V）;流速：1.0 mL.min-1。结果 6-TG在8.09-809.89 pmol.（8×108）-1RBC浓度范围内线性关系良好（r=0.997 8）,最低定量浓度为8.09 pmol.（8×108）-1RBC。日内及日间RSD分别〈7.71%,6.64%,方法回收率为98.07%-108.08%,平均提取回收率〉60%。结论该法操作简便快速、灵敏,专属性强,可应用于患者服用硫唑嘌呤后RBC 6-TGNs浓度的测定。

高效液相色谱法测定人血红细胞内硫鸟嘌呤核苷酸浓度

目的:建立以高效液相色谱法测定人血红细胞内硫鸟嘌呤核苷酸浓度的方法。方法:色谱柱为HypersilODS,流动相为甲醇-水(10∶90),检测波长为342nm;硫鸟嘌呤核苷酸经加热水解生成6-硫鸟嘌呤(6-TG),6-TG经提取至0.1mol/L盐酸中进样分析,以外标法定量。结果:6-TG浓度线性范围为30～1200pmol/8×108RBCs,水解时间以1h为宜,提取时pH值以11～12为宜,提取液中醋酸苯汞的量为1.3mmol/L。结论:在优化条件下,本方法测定硫鸟嘌呤核苷酸快速、准确、灵敏度高。

HPLC测定炎症性肠病患者红细胞中6-硫鸟嘌呤核苷酸及6-甲巯基嘌呤的浓度

目的:建立HPLC法同时测定炎症性肠病(IBD)患者红细胞中硫唑嘌呤代谢物6-硫鸟嘌呤核苷酸(6-TGNs)及6-甲巯基嘌呤(6-MMP)浓度,为硫唑嘌呤(AZA)个体化治疗提供依据。方法:红细胞经高氯酸沉淀,6-TGNs在酸性条件下加热水解生成6-硫鸟嘌呤(6-TG),6-MMP水解生成4-氨基-5-(甲硫基)羰基咪唑(AMTCI),以5-溴尿嘧啶(5-BU)为内标,采用HPLC法测定其含量。色谱柱:Kromasil 100-5-C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-20 mmol·L1磷酸二氢钾溶液(6∶94),流速:0.8 ml·min^(-1),柱温:30℃;6-TG、6-MMP及5-BU检测波长分别为340,303,280 nm。10例IBD患者,口服AZA 50~100 mg·d-11个月以上,检测其6-TGNs及6-MMP浓度,焦磷酸测序检测TPMT基因型。结果:6-TG在8~800pmol﹒(8×108)-1RBC浓度范围内线性关系良好(r=0.994 0);低、中、高3个浓度的绝对回收率为63.24%~69.09%(n=5)。AMTCI在250~16 000 pmol·(8×108)-1RBC浓度范围内线性关系良好(r=0.997 8);低、中、高3个浓度的绝对回收率为85.17%~92.28%(n=5)。10例患者TPMT均为野生型。1例患者6-TGNs浓度偏高,白细胞减少;2例患者6-MMP浓度较高,碱性磷酸酶轻度升高。结论:本方法专属性、精密度及稳定性较好,灵敏度高,适用于同时测定炎症性肠病患者红细胞中6-TGNs及6-MMP的浓度。

前列腺癌组织肝激酶B1,Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子-5 mRNA表达水平与临床病理特征和预后的相关性研究

目的研究前列腺癌患者癌组织中肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)及Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子-5(Rab guanine nucleotide exchage factor-5,Rab EX-5)mRNA表达及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测92例前列腺癌组织和80例良性前列腺增生组织中LKB1及RabEX-5 mRNA的表达,比较LKB1,RabEX-5 mRNA表达组间差异及与临床病理特征的关系。Pearson线性相关分析LKB1与RabEX-5 mRNA表达的相关性。Kaplan-Meier生存分析LKB1,RabEX-5 mRNA表达与前列腺癌患者生存预后的关系。多因素COX回归分析影响前列腺癌患者生存预后的危险因素。结果与前列腺增生组织相比,前列腺癌组织中RabEX-5 mRNA表达明显升高(1.311±0.374 vs 0.457±0.083),差异有统计学意义(t=20.758,P=0.000),而LKB1 mRNA表达显著降低(0.373±0.052 vs 1.234±0.268),差异有统计学意义(t=30.181,P=0.000)。LKB1,RabEX-5 mRNA表达与Gleason评分、骨转移、TNM分期有关(t=2.419~9.965,均P<0.05),与年龄、前列腺特异抗原(PSA)水平无关(t=0.379~1.453,均P>0.05)。前列腺癌组织中LKB1与RabEX-5 mRNA的表达呈显著负相关(r=-0.402,P=0.000)。低LKB1表达组3年总体生存率低于高LKB1表达组(χ^(2)=55.605,P=0.000),高RabEX-5表达组3年总体生存率低于低RabEX-5表达组(χ^(2)=29.435,P=0.000)。多因素COX回归分析结果表明,Gleason评分≥7分(OR=2.671,P=0.018)、骨转移(OR=1.528,P=0.031)、TNM分期为Ⅲ期(OR=1.634,P=0.037),LKB1 mRNA低表达(OR=1.764,P=0.008)及RabEX-5 mRNA高表达(OR=2.587,P=0.000)是影响前列腺癌患者生存预后的危险因素(P<0.05)。结论前列腺癌组织中RabEX-5 mRNA表达升高,而LKB1 mRNA表达降低,二者共同参与前列腺癌的发生发展,有望成为评估前列腺癌患者预后的组织肿瘤标志物。

鸟嘌呤核苷酸与核黄素氧化性自由基之间的电子转移研究

应用 ２４８ ｎｍ激光光解时间分辨吸收方法，研究了 ２’－鸟嘌呤核苷酸与核黄素氧化性自由基之间的单电子转移机理，给出了电子转移的直接证据。改变溶液的酸碱性，探讨了不同形式自由基之间电子转移的可行性。

胃癌中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2表达与临床病理的关系及罗格列酮对其表达的影响

目的探讨胃癌组织中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子(Rho GDI)2的表达与临床病理的关系及可能机制。方法 60例胃癌患者,取相邻的胃癌癌旁组织为对照组。检测两组Rho GDI2的表达,并对Rho GDI2的表达与胃癌临床病理进行统计学分析。结果胃癌组织中Rho GDI2的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05);胃癌组织中Rho GDI2表达的阳性率(76.67%)显著高于癌旁组织(45.00%)(χ2=2.491 8,P=0.012 7);胃癌组织中Rho GDI2的表达与病理分期、分化程度、淋巴结转移、肿瘤大小有显著相关性(P<0.05);胃癌组织中Rho GDI2及MMP2表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01);罗格列酮作用后胃癌组织中Rho GDI2 mRNA、MMP2 mRNA的表达水平明显低于作用前(P<0.01);罗格列酮作用前和作用后胃癌组织中Rho GDI2与MMP2的表达之间呈正相关(rs=0.595,P=0.000;rs=0.612,P=0.000)。结果 Rho GDI2在胃癌中呈高表达;胃癌中Rho GDI2的表达参与了胃癌的发病、转移和进展;罗格列酮可以抑制Rho GDI2的表达;Rho GDI2可能通过调控MMP2的表达参与胃癌的发病、转移及进展。

采用X射线衍射解析人鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(RalGDS)Ras结合结构域的空间结构

Ras结合结构域(RBD)是鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(Ral GDS)家族成员C-端的高保守区,通过它连接Ras和Ras相关蛋白。利用Red Wings和SGC-1 screens相关的悬滴法设盘结晶,按体积比1∶1加蛋白液到含1∶100胞内蛋白酶Glu-C(w/w)的结晶溶液(2 mol/L(NH4)2SO4,0.2 mol/L Na Ac,0.1 mol/L HEPES,5%MPD,p H 7.5)中,晶体3天长成可组装大小。利用X-射线晶体衍射技术解析了人Ral GDS的Ras结合域(Ral GDS-RBD)的晶体结构,对比鼠和人Ral GDS-RBD,主要是Ras结合区的C-端不同。人Ral GDS-RBD通过Glu838和Glu840在Ral GDS和Ras蛋白间形成氢键,而在同一位点,鼠Ral GDS-RBD通过Asp820和Asp822形成氢键。人Ral GDS-RBD结构中含ββαββαβ-型三维结构的泛素样构象,一个单体的C-端残基与相邻单体的β折叠形成平行βββββ结构。

高效液相色谱测定红细胞内硫鸟嘌呤核苷酸的探讨

目的：建立一种简便，可靠，适于一般实验室操作的检测红细胞内硫鸟嘌呤核苷酸的HPLC。方法：通过高效液相色谱仪来测定红细胞内硫鸟嘌呤核苷酸浓度。结果：高效液相色谱仪测定硫鸟嘌呤核苷酸的低限为30pmol/8×10^8RBCs，水解的时间以1h为宜，萃取有机相的pH值以12为佳，用于螯合的酸苯汞以1．3mmol/L为好，患儿的TGNs浓度在7－14天达到稳态浓度，范围为230－520pmol/8×10^8RBCs，结论：以高效液相色谱仪测定硫鸟嘌呤核苷酸可为今后6－MP化疗的个体化提供可靠的参考数据。

肝癌组织中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2的表达及临床意义

目的：探讨肝细胞肝癌组织中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2（RhoGDI2）的表达与临床病理的关系及临床意义。方法：选择2011年7月至2015年1月期间70例肝细胞肝癌患者为研究对象，检测患者肝癌组织和癌旁组织RhoGDI2的表达，并对其表达与肝癌临床病理进行统计学分析。结果：RhoGDI2在肝细胞肝癌组织中的表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（P〈0．05）；肝细胞肝癌组织中RhoGDI2的阳性率（77．14％）高于癌旁组织（47．14％），差异有统计学意义（χ2=13．39，P=0．000）；不同病理分期、分化程度、肿瘤体积以及是否出现淋巴结转移与RhoGDI2的表达有显著相关性（P〈0．05）；肝细胞肝癌组织申RhoGDI2、MMP2（基质金属蛋白酶2）mRNA均高于癌旁组织，差异有统计学意义（P〈0．05）；siRNA干扰前肝细胞肝癌组织中RhoGDI2与MMP2的表达之间呈正相关（rs=0．581，P=0．000）；siRNA干扰后肝癌中RhoGDI2与MMP2亦呈正相关（rs=0．592，P=0．000）。结论：RhoG-D／2在肝细胞肝癌组织中呈高表达；RhoGDI2在肝细胞肝癌的发病、转移和进展中起重要作用；RhoGDI2与MMP2在肝细胞肝癌的发病、转移及进展中可能共同起作用。

小分子干扰RNA沉默鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2基因表达对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)基因表达对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响。方法选取2016年1月至2019年12月于张家港市第一人民医院进行手术的60例患者的胰腺癌肿瘤组织标本作为研究对象。应用Western blot检测RhoGDI2在人胰腺癌细胞株CFPAC-1、HPAF-Ⅱ、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990中的表达,利用siRNA沉默CFPAC-1细胞中RhoGDI2的表达,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞体外迁移能力和侵袭能力,Western blot检测P21蛋白激活激酶1(Pak1)表达情况,免疫组织化学染色检测胰腺癌组织标本中RhoGDI2和Pak1的表达情况。结果Western blot检测结果显示,RhoGDI2蛋白在胰腺癌细胞株中呈不同程度的表达水平,表达水平由高到低的细胞顺序依次为CFPAC-1、SW1990、PANC-1、HPAF-Ⅱ、MIA PaCa-2。WT、si-NC及si-RhoGDI2组细胞的RhoGDI2蛋白表达量分别为(1.25±0.09)、(1.19±0.11)、(0.38±0.07);转染si-RhoGDI2后RhoGDI2蛋白的表达显著下降,3组蛋白表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞的48 h划痕迁移率分别为(62.33±5.29)%、(62.27±3.37)%、(17.60±6.16)%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞的48 h划痕迁移率分别为(62.33±5.29)%、(62.27±3.37)%、(17.60±6.16)%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞穿膜细胞数分别为(132.3±10.3)、(120.7±16.5)、(24.3±9.5)个,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组细胞的Pak1蛋白表达量分别为(0.82±0.06)、(0.73±0.07)、(0.23±0.03),3组蛋白表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学染色检测结果显示,RhoGDI2阳性47例,阳性率为78.3%,Pak1阳性45例,阳性率为75.0%。Spearman等级相关分析结果显示,RhoGDI2与Pak1的表达水平呈正相关(r>0,P<0.05)。结论沉默RhoGDI2基因表达能够抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭,RhoGDI2可能在胰腺癌发生发展过程中具有重要作用。

Rho鸟嘌呤核苷酸交换因子家族及其在疾病发生中的作用

Rho GTP酶(Rho GTPase)家族在真核生物细胞中参与细胞骨架调节、基因转录、膜泡运输等过程,扮演着分子开关的角色。Rho型鸟嘌呤核苷酸交换因子(RhoGEF)是调节Rho GTPase活性的关键因子,在Rho GTPase信号调节、组织器官的生长发育及免疫应答中起着至关重要的作用。RhoGEF与肿瘤、发育及神经类疾病、病原微生物感染等也有密切关系,对其功能的深入了解有助于人们认识某些生理和病理现象的发生机制。

鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2通过调控miRNAs参与肺癌侵袭转移机制研究

目的探讨鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)通过调控miRNA的变化参与肺癌侵袭转移过程。方法构建过表达和表达沉默的RhoGDI2表达载体,稳定转染肺癌A549细胞,利用实时定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法验证。利用miRNA芯片,筛选可能受RhoGDI2调控的候选miRNAs。结果成功构建过表达和表达沉默的RhoGDI2表达载体,获得稳定表达细胞系,利用miRNA芯片筛选出12个可能受RhoGDI2调控的候选miRNAs。结论证实RhoGDI2在肿瘤细胞表达异常参与肿瘤侵袭转移过程,存在转录后水平的调控方式,为肺癌的侵袭转移机制提供实验及理论依据。

鸟嘌呤核苷酸抑制因子2基因表达与肝癌细胞迁移和侵袭能力的关系

目的:探讨鸟嘌呤核苷酸抑制因子2(RhoGDI2)对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:选取肝癌细胞株HCCLM3细胞,随机分为对照组、空白转染组和shRNA转染组,其中空白转染组转染空白质粒,shRNA转染组转染RhoGDI2-shRNA,采用MTT法检测各组细胞增殖,Transwell试验检测各组细胞迁移及侵袭能力,qRT-PCR检测各组细胞RhoGDI2 mRNA表达,Western blot检测各组细胞MMP-9、pAKT和VEGF表达。结果:shRNA转染组细胞RhoGDI2 mRNA相对表达量为(0.201±0.082),明显低于对照组和空白转染组(P<0.05);shRNA转染组细胞培养6 h、12 h和24 h时OD值分别为(0.312±0.110)、(0.562±0.107)和(0.700±0.110),明显低于对照组和空白转染组(P<0.05);shRNA转染组细胞迁移率和穿膜细胞数分别为(0.310±0.030)%和(9.28±1.11)个,明显低于对照组和空白转染组(P<0.05);shRNA转染组细胞MMP-9、pAKT和VEGF相对表达量分别为(0.762±0.100)、(0.201±0.092)和(0.501±0.101),明显低于对照组和空白转染组(P<0.05)。结论:下调RhoGDI2表达,可抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,值得进一步研究。

鸟嘌呤核苷酸抑制因子2和N-myc下游调节基因2在肝癌的表达及与病理生物学特点的相关性

目的探讨鸟嘌呤核苷酸抑制因子2(RhoGDI2)和N-myc下游调节基因2(NDRG2)在肝癌组织中的表达及意义。方法所有患者手术中取原发灶癌组织及癌组织旁的正常组织,做好标签,立即放到液氮中保存,以备后期对标本石蜡包埋,免疫组化染色,对RhoGDI2和NDRG2的定位和表达情况进行分析。结果肝癌组织RhoGDI2阳性表达率为69.66%,明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05),而NDRG2阳性表达率为22.47%,明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期患者RhoGDI2阳性表达率为91.11%,明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05),而NDRG2阳性表达率为8.89%,明显低于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移患者RhoGDI2阳性表达率为87.50%,明显高于无淋巴结转移患者(P<0.05);RhoGDI2与NDRG2表达呈负相关(r s=-0.640,P<0.05)。结论RhoGDI2在肝癌组织中呈高表达,而NDRG2呈低表达,与临床病理特征有一定关系,值得进一步研究。

HPLC法测定炎症性肠病患者红细胞中硫鸟嘌呤核苷酸浓度

目的:测定硫唑嘌呤与6-巯基嘌呤的活性代谢产物硫鸟嘌呤核苷酸(6-TGNs)在红细胞内的浓度,为提高临床疗效和降低副作用提供参考。方法:红细胞稀释液经高氯酸沉淀,6-TGNs在酸性条件下加热水解生成6-硫鸟嘌呤(6-TG),采用高效液相色谱法测定其含量。色谱柱为Hypersil ODS2,流动相为乙腈-20mmol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调节pH3.3)(5∶95);流速为1.0ml/min;柱温为30℃;检测波长为340nm,以外标法定量。结果:6-TGNs在上述条件下水解生成6-TG,在7.87～787.40pmol(/8×108)红细胞浓度范围内线性关系良好(r=0.9997);日内及日间RSD在0.46%～7.64%之间;平均方法回收率在99.10%～102.07%之间。结论:本方法准确,专属性和稳定性较好,灵敏度高,适用于接受硫唑嘌呤或6-巯基嘌呤治疗的炎症性肠病患者红细胞中6-TGNs浓度监测,可为临床在实施个体化治疗时提供参考。

2-蒽醌磺酸三重态与高聚鸟嘌呤核苷酸相互作用的激光光解

利用248nm(KrF)激光光解技术研究了乙腈-水(97:3)溶液中2-蒽醌磺酸激发三重态电子转移光氧化高聚鸟嘌呤核苷酸的原初过程.直接检测了上述电子转移氧化反应生成的阴阳离子自由基对的瞬态吸收光谱,分别获取了各自的表观反应速率常数,协同反应的自由能变化,阐明了电子转移反应的三重态机理.