抗鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及其应用研究

为制备针对鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)的单克隆抗体,以CIAV的VP2原核表达蛋白作为抗原免疫小鼠,经杂交瘤技术获得3株能稳定分泌抗VP2蛋白特异性抗体的细胞株,进一步经IFA筛选出特异性和灵敏度俱佳的杂交瘤细胞Mab-VP2-4株,制备的小鼠腹水效价达到1∶2000。结果显示,制备的抗VP2蛋白单克隆抗体可与多株CIAV感染的MDCC-MSB1细胞发生特异性反应,而对EDSV、ALV、ILTV、ARV以及空白MDCC-MSB1细胞、CEF细胞等均无交叉反应,特异性良好,且应用于IFA方法时对CIAV感染的最低检出限为5 TCID 50。以该单克隆抗体对市场上10种不同来源的禽活疫苗进行病毒分离结合单克隆抗体IFA检测,同时与《中国兽药典》规定的鸡检查法进行对比检测,结果一致,均未检出CIAV污染。本研究制备了针对CIAV VP2蛋白的特异性单克隆抗体,为该病特异性诊断方法的建立奠定了基础。

一株鸡传染性贫血病毒对不同日龄SPF鸡的致病性研究

为评价鸡传染性贫血病毒AV1550株的致病性,取1日龄、7日龄和14日龄SPF鸡分别经胸部肌肉注射不同病毒含量的病毒液,同时设置正常对照,隔离饲养观察21 d。感染后14 d采血测定红细胞压积,21 d统计死亡率、体重变化以及胸腺、骨髓、法氏囊病变情况并测定1日龄SPF鸡感染后不同组织中的病毒载量。结果表明,1日龄SPF鸡感染AV1550株后,表现出精神沉郁、增重减缓、贫血等明显的临床症状,死亡率为53.9%;死亡鸡或观察期结束时存活鸡剖检,可见胸腺萎缩,骨髓变成淡黄色;不同剂量感染后14 d,均能引起红细胞压积显著下降;21 d时,胸腺病毒载量最高,可达10^(6.7) copies/mg。7日龄SPF鸡感染后,出现增重减缓,高感染剂量(100000EID_(50))出现贫血,部分鸡出现胸腺萎缩和骨髓病变,但病变率低于30%。14日龄SPF鸡感染后,不引起明显临床症状。研究证实,CAV对SPF鸡的致病性具有明显的日龄依赖性,红细胞压积降低、骨髓病变、胸腺萎缩以及胸腺病毒载量测定可作为评价CAV致病的指标。

鸡群中鸡传染性贫血病原与抗体检测及分离株VP1基因序列分析

为了解鸡群中鸡传染性贫血病毒(CAV)感染及抗体产生情况,从黑龙江省两个无临床症状鸡群(B群和S群)中,分别采集血清通过ELISA方法进行抗体检测,采集抗凝血并分离淋巴细胞,针对基因组保守序列设计引物,通过PCR方法进行病原检测,并对从B群病原阳性鸡分离到的分离株进行VP1基因序列分析。结果显示,B群和S群CAV抗体阳性率分别为62.7%(79/126)和68.2%(88/129),病原阳性率分别为43.0%(49/114)和62.3%(48/77),其中,B群和S群中抗体和病原双阴性的鸡分别为23.7%(27/114)和15.6%(12/77),而抗体和病原双阳性的鸡分别高达28.1%(32/114)和46.8%(36/77);在双阳性鸡中,B群和S群分别有62.5%(20/32)和58.3%(21/36)抗体滴度在1.0×10^(4)及以上,从B群病原阳性鸡全血中分离到一株CAV(HLJ/2022株),分离株HLJ/2022第394位氨基酸为谷氨酰胺,具有强毒的分子特征;两个鸡群的环境拭子CAV阳性率为10.0%(3/30),存在于消毒前的鸡蛋表面、更衣处和鞋底。研究表明,检测鸡群的CAV抗体阳性率在62.7%以上,病原阳性率在43.0%以上,抗体滴度在1.0×104及以上CAV仍可存在,CAV流行株(HLJ/2022)具有强毒分子特征,鸡群环境中存在CAV污染,结果为CIA防控提供重要的参考意见。

一株鸡传染性贫血病毒的分离鉴定及致病性分析

为鉴定来自山东某种鸡场196日龄疑似鸡传染性贫血病毒(CAV)感染的2份种鸡肝脏样品的致病原,本实验利用马立克病肿瘤淋巴母细胞(MDCC-MSB1细胞)对2份肝脏样品进行病毒的分离培养与传代,每代均观察细胞是否出现细胞病变(CPE)。将传至5代的病毒液分别采用PCR和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,PCR结果显示,扩增到与CAV JL17株阳性对照一致的约600 bp的目的条带;IFA结果显示,感染分离病毒与JL17株阳性对照的细胞均出现绿色荧光,而阴性对照既未扩增到目的条带也无绿色荧光。上述结果表明分离到一株CAV,命名为SDNN2022。为分析SDNN2022株的分子特征,采用PCR扩增其VP1基因并测序,采用DNAStar软件对SDNN2022株VP1基因与GenBank登录的39株CAV参考株VP1基因序列进行同源性分析;采用Megalign分析SDNN2022株VP1的氨基酸序列,构建SDNN2022株VP1基因的进化树。VP1基因的同源性结果显示,SDNN2022株与CAV参考株的VP1基因序列的同源性为95.0%~99.8%,其中与CAV参考株JS2020-PFV的同源性最高;SDNN2022株VP1高变区的氨基酸位点(aa139~aa151)与大多数强毒株一致。但在aa89、aa92、aa411和aa417与大多数CAV参考株不同,均发生了氨基酸突变,分别为T^(89)K、G^(92)D、S^(411)T和V^(417)I,其中后两个位点的突变为本研究首次发现。SDNN2022株与CAV强毒参考株CUX-1的aa394均为谷氨酰胺,符合CAV强毒的分子特征,表明SDNN2022株为一株CAV强毒株。VP1基因的进化树结果显示,分离株SDNN2022与CAV参考株CUX-1、JS2020-PFV、CAV-JL190130等聚为一支,且与JS2020-PFV株的遗传距离最近,均属于A群,进一步表明SDNN2022株为一株强毒株。将该株病毒分别感染6胚龄SPF鸡胚和14日龄SPF雏鸡进行致病性试验,结果显示,SDNN2022株对鸡胚的致死率为30%(3/10),病死鸡胚体的肝脏黄化;该株病毒感染14日龄SPF雏鸡后7 d出现精神萎靡、呆滞、羽毛凌乱等临床症状,发病率为83.3%(5/6),但无死亡;感染后14 d,与空白对照组鸡相比,感染组鸡体重显著降低(P<0.05),胸腺明显萎缩,且胸腺指数极显著降低(P<0.01)。本研究分离到一株强毒力CAV,且对SPF鸡胚和雏鸡均具有较强的致病性,丰富了国内CAV的病毒资料,为深入研究CAV的致病机制提供了数据支持。

表达鸡传染性贫血病毒VP1蛋白的新型重组血清4型禽腺病毒的构建

为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光试验和蛋白免疫印迹试验对重组病毒进行验证,通过体外病毒生长曲线来研究其复制效率。结果显示:该重组病毒构建成功,能有效表达CIAV VP1蛋白,命名为rFAdV-4-CIAV-VP1,且发现rFAdV-4-CIAV-VP1在LMH细胞中的复制效率远低于野生型FAdV-4。研究表明构建的重组病毒rFAdV-4-CIAV-VP1为CIAV和FAdV-4的联防联控提供了二联候选疫苗株。

海南省文昌鸡传染性贫血的血清学调查

为掌握海南省文昌鸡传染性贫血(CIAV)的流行情况,分别从海南省4个文昌鸡主要养殖地区海口、文昌、琼海和儋州的14个不同规模未免疫CIA疫苗的文昌鸡场采集血液样品1709份,采用ELISA检测CIAV抗体。结果显示,1709份血液样品共检出阳性样品564份,文昌鸡的CIAV抗体总阳性率为33%;4个地区的文昌鸡场均有不同程度的CIAV感染,其中儋州市文昌鸡的CIAV抗体阳性率最高,达到55%;成年文昌鸡的CIAV感染程度高于其他生长阶段鸡,抗体阳性率达到53.63%;CIAV在一年四季均有发生,以冬季高发,抗体阳性率为48.06%;不同规模文昌鸡场CIAV的感染率存在差异,以中小规模文昌鸡场的CIAV感染程度较高,抗体阳性率分别为41.48%和40.10%;在不同类型的文昌鸡群中商品代蛋鸡的CIAV抗体阳性率最高,达到62.62%。结果表明,CIAV在海南省文昌鸡养殖地区普遍存在,且在冬季、成年文昌鸡中高发,以商品代蛋鸡感染最为严重,因此,应针对性地加强对海南省文昌鸡传染性贫血的防控。

鸡传染性贫血病的危害及防控措施

鸡传染性贫血病(Infectious Anemia of Chickens,简称IA)是一种严重威胁家禽养殖业的传染病。该病以其高度传染性和致命性而闻名,给鸡的健康和生产力造成了巨大的危害。患病的鸡表现出明显的贫血症状,包括脸色苍白、食欲减退、发育迟缓等。

一例蛋鸡传染性贫血与法氏囊病混合感染的诊治报告

鸡传染性贫血病(CAV)是由鸡传染性贫血病毒引起的一种鸡免疫抑制病,病鸡表现为贫血、鸡肉髯、面部皮肤及可视黏膜颜色苍白,鸡胸、腿部肌肉出血。该病具有较强的免疫抑制作用,可导致疫苗免疫失败,患有传染性贫血的鸡群很容易混合感染法氏囊病,降低鸡群的生产性能。临夏县某蛋鸡养殖场,饲养罗曼褐蛋鸡1500羽,3周龄时先出现鸡传染性贫血病例,后又继发感染鸡法氏囊病。通过诊断分析,结合各种治疗与防控措施,有效控制了病情蔓延,病鸡恢复健康。现将诊治过程报告如下。

鸡传染性贫血病的防控措施

鸡传染性贫血病是一种病毒性、传染性疾病,致病原是鸡传染性贫血病病毒,主要症状是再生障碍性贫血,全身淋巴组织萎缩、皮下和肌肉出血,鸡肉髯、皮肤及可视黏膜苍白。该病有较强的免疫抑制作用,容易混合感染其他疾病,导致鸡死亡。目前,鸡传染性贫血病尚无有效的治疗药物,以防控为主,治疗则重点以补气血、提升免疫力为主;防控方面,需要加强免疫接种、做好卫生清洁工作等,从而降低该疾病的发病率,提升养殖经济效益。

白羽肉鸡圆圈病毒3型与鸡传染性贫血病毒混合感染的诊断

2011年以前,圆圈病毒属(GyVs)仅有一个成员(鸡传染性贫血病毒),2011年以后研究人员不断检测出10种类似于鸡传染性贫血病毒基因结构的病毒。2016年以来国际病毒分类委员会将该病毒属重新分类,把圆圈病毒属从圆环病毒科划分到指环病毒科。

鸡传染性贫血病的诊断与防控

鸡传染性贫血病是鸡养殖业中多发的一类传染性疾病,其传染性强、发病率高,尤其对雏鸡危害性严重,可通过种蛋垂直传播,发病后严重影响鸡的生长发育和生产性能。本病尚无特效治疗药物,加强对本病的诊断,及时淘汰病鸡,净化鸡群,同时采取有效的防控手段,是降低本病危害性的关键。本文对鸡传染性贫血病的病原、流行特点、临床特征以及诊断措施进行了简单阐述,并提出了几点防控措施,以供从业者参考。

我国部分地区祖代鸡群鸡传染性贫血的血清学调查与分析

为了解祖代鸡群中鸡传染性贫血病毒(CIAV)的感染情况,研究采集18个省(市)未免疫CIAV疫苗的44个祖代种鸡场4847份血清样品,采用ELISA方法对CIAV抗体进行检测,通过比较群间、空间、阳性场的抗体滴度,解析祖代鸡群CIAV感染状况。结果显示:祖代鸡群中CIAV感染较普遍,场阳性率为97.7%,个体阳性率为66.0%;不同生产用途、来源的种鸡群均有感染,且分布范围广泛;43个抗体阳性场中,有1个种鸡场抗体滴度高且变异系数小,42个种鸡场抗体滴度低或抗体滴度较高但离散程度大,有发生垂直传播的风险。结果表明,我国祖代鸡群中CIAV抗体阳性率较高,存在向父母代场垂直传播CIAV的风险。

湖北荆州地区鸡传染性贫血病病毒的流行病学调查及致病性分析

为了调查鸡传染性贫血病病毒(CAV)在肉鸡群中的流行情况及CAV毒株的致病性,于2021年在湖北荆州地区收集鸡肝样品224份,采用PCR方法进行检测,并对CAV的全基因扩增片段克隆测序,用生物信息学软件对测序结果进行遗传进化及分子特征分析;通过动物回归试验探究分离毒株JZ2118的致病性。结果显示,18份样品为CAV阳性,CAV阳性率为8.04%。CAV全基因序列与CAV VP1氨基酸序列的遗传进化树分组基本相同,说明CAV的遗传进化主要与VP1蛋白氨基酸的突变有关;1日龄SPF鸡感染JZ2118毒株14 d后致死率高达82.6%,在体重、病毒载量、血常规检测与病理组织切片等方面都具有显著性变化,表明JZ2118分离株是具有较强致病性的强毒株。

鸡传染性贫血病毒抑制干扰素的研究进展

鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)为目前已知的指环病毒科(Anelloviridae)环病毒属(Gyrovirus)的唯一成员。CIAV直径为19~26.5 nm,无囊膜,由12个五边喇叭状的衣壳体组成二十面体结构的衣壳。CIAV对高温和化学试剂有较强抵抗力,100℃下处理15 min才能完全失活,对氯仿、乙醚和丙酮等试剂的处理也很不敏感~([1])。CIAV基因组是单链共价环状DNA,全长约2.3 kb,编码3个病毒蛋白;VP1为衣壳蛋白,是病毒颗粒中唯一的蛋白质~([3]);VP2具有多种功能,对病毒颗粒的形成至关重要~([4]);VP3在体内外可引起细胞凋亡~([2])。

2021年中国部分地区鸡传染性贫血病毒VP1基因遗传变异分析

为全面了解鸡传染性贫血病毒(CIAV)在我国的流行情况和VP1基因遗传变异情况,研究对2021年全国25个省市421份疑似CIAV或其他病原感染的临床样本进行鉴定。结果显示,共有64份临床样本的VP1基因PCR鉴定为阳性,序列对分析发现有59株VP1基因位于基因A型分支,5株VP1基因位于基因C型分支,氨基酸位点分析发现第394位氨基酸为谷氨酰胺(Q),与3-1株、CAV-10株等高致病性CIAV一致,且第75、89、125、139、141、144位氨基酸位点也出现了不同程度的变异。研究表明目前我国鸡群流行的CIAV以A型为主,且VP1基因存在变异,结果为了解CIAV在我国的变异情况及传染性贫血防控提供了数据参考。

鸡传染性贫血的研究

近年来,家禽养殖业高速发展,而疫病频发是全球家禽业面临的主要挑战。在各种鸡疫病暴发报告中,鸡传染性贫血的流行报告十分频繁,被认为是新发疫病。鸡传染性贫血又被称为贫血-皮炎综合征和蓝翅病,会导致再生障碍性贫血和胸腺萎缩。鸡是许多传染性病原体的宿主,这些病原体可通过受污染的蛋和肉传播给人类。

3株鸡传染性贫血病毒的分离鉴定、VP1基因遗传进化分析及致病性评价

为了解国内鸡场鸡传染性贫血(CIA)的流行状况和鸡传染性贫血病毒(CIAV)的遗传变异规律,以期对CIA的传播流行和预警防控提供技术支持。本试验对2020年在3个省份疑似发生CIA的3个规模鸡场采集10份组织脏器样品,应用鸡胚进行病毒的分离培养,并对培养物进行CIAV PCR检测,进而对CIAV阳性样本进行VP 1基因扩增和测序,应用Lasergene和MEGA 6.0软件,对获得的所有分离毒株结构蛋白VP 1基因序列与GenBank中CIAV参考毒株进行比对,构建系统发育进化树,同时对分离的CIAV毒株进行动物回归试验,评价其对鸡的致病性。结果显示,10份样品中3份为CIAV阳性,共分离到3株CIAV,分别命名为202006-NX-4-2、202006-SD-2-1和202006-JX-016。VP 1基因相似性分析显示,3株CIAV分离株核苷酸相似性介于97.7%~99.6%,且均与国内分离株具有较高同源性;氨基酸序列分析显示,3株CIAV分离株毒力相关位点均与国内强毒株GD-101株一致。遗传进化分析结果显示,3株分离株属于同一进化分支(Ⅱ分支),202006-SD-2-1株和202006-JX-016株与JL15120株进化关系最近,202006-NX-4-2株则与以国内强毒株GD-101株为代表的其他Ⅱ分支参考株进化关系最近。动物回归试验结果显示,3株CIAV均能够引起1日龄鸡发生严重的淋巴器官萎缩、骨髓黄化,为典型的高致病性病毒株特征。本试验结果为当前国内CIAV的流行、毒株的遗传变异分析及相关疫苗研发提供了参考依据。

鸡传染性贫血鉴别诊断

从2019年至今,国内各地养鸡过程中普遍发现疑似贫血病症,具有明显的传染性和流行性;发病鸡群生产性能不达标、生长迟缓、残次鸡多等,商品蛋鸡或种鸡发病后产蛋率下降,蛋壳色浅呈不明原因下降病症。经确诊为鸡传染性贫血(CIAV)感染病症。

一例鸡传染性贫血和法氏囊病混合感染的诊断

鸡传染性法氏囊病(IBD)是由鸡传染性法氏囊病病毒引起的危害雏鸡的一种急性、高度接触性的传染病;鸡传染性贫血病(CAV)是由鸡传染性贫血病毒引起的,病鸡表现为贫血、骨髓黄染、免疫机能受损。IBD和CAV均可直接导致病鸡死亡、鸡群生产性能降低,还可导致鸡群免疫抑制。

中国部分地区鸡传染性贫血流行病学调查及病原分离鉴定

为了调查近年来鸡传染性贫血病(CIA)在我国发病鸡群中的流行特点、分布及其危害,本研究于2016年1月~2019年9月,从黑龙江、北京、山东等13个省市的381个疑似CIA发病鸡群中采集肝脏样品1677份,PCR检出鸡传染性贫血病毒(CAV)阳性样品共242份,分布于85个鸡群,阳性样品检出率为14.43%(242/1677),阳性鸡群率为22.31%(85/381)。CAV与鸡马立克氏病病毒、鸡白血病病毒等免疫抑制病病毒混合感染在检测鸡群中普遍存在,占CAV感染总量的52.94%(45/85)。将来自山东临沂某CAV阳性鸡场的病鸡肝脏样品处理后接种MDCC-MSB 1细胞,连续传代6次,经PCR及间接免疫荧光鉴定,确定分离到一株CAV细胞适应病毒株,命名为CAV-SD19/4604。对分离株VP1基因测序并与GenBank中19株CAV参考株VP1基因序列比对,显示同源性为95.00%~98.80%,遗传进化树表明CAV-SD19/4604与多数亚洲病毒株位于同一分支。本研究为CAV感染的研究和疾病防控提供了数据支持。