基于pegB基因的鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别方法的建立

为建立一种能快速、准确、简便区分鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的方法,研究通过对鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌pegB序列进行分析,发现存在3个单核苷酸多态性位点,基于此建立了一种特异性PCR方法用于鉴别鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌。结果显示,该方法特异性强、耗时短,检测限为10.14 pg/反应。临床样品检测表明,该方法不仅具有良好的特异性,且操作比传统方法更为简便。该方法的建立为准确区分鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌提供了实用技术,将在分子检测中发挥重要作用。

鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的PCR-RFLP分子鉴别

根据鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌fliC基因可变区两端的保守序列设计1对引物,PCR扩增出约600bp的产物,用Hin6I对PCR产物进行酶切,经RFLP分析区分鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌的生物型。利用该技术对6株鸡白痢沙门氏菌标准株及2株鸡伤寒沙门氏菌标准株进行分子鉴别,得到的结果与预计的RFLP模式相符,证明该方法可行。在此基础上对我国不同地区、不同年代的191株鸡沙门氏菌进行分子鉴别,191株中有185株分离株符合鸡白痢沙门氏菌的RFLP模式,6株分离株符合鸡伤寒沙门氏菌的RFLP模式,其中有176株PCR-RFLP鉴定结果与生化特性符合率达100%,另有15株根据生化特性不能鉴别。

鹧鸪鸡伤寒沙门氏菌感染的诊断与防治

某鹧鸪养殖场饲养 1 0 0 0 0只鹧鸪 ,2 40日龄发病 ,临床症状表现为病鹧鸪采食量突然下降 ,精神不振、羽毛蓬松杂乱、粪便呈稀白色 ,病程持续近一个月 ,死亡鹧鸪约 2 0 0只。共送检3 0只 ,剖检病理变化主要为肝肿大、质地极脆易破裂 ,其中 60 %肝呈土黄色 ,2 0 %血液稀薄 ,80 %盲肠内有硬泥块样物质 ,2 0 %眼周皮下水肿 ,3 0 %肾肿大、有出血 ,3 0 %泄殖腔有白色粪便。根据病史调查、症状观察、病理剖检、细菌分离以及染色镜检、生化试验、血清型鉴定一系列试验 ,诊断为由鸡伤寒沙门氏菌感染所引起的细菌性疾病。同时根据药敏试验结果对发病群进行治疗 ,使病情得到迅速控制 。

建立实时荧光PCR快速鉴定鸡制品中鸡伤寒沙门氏菌的方法

建立基于Taqman探针实时荧光PCR检测鸡伤寒沙门氏菌(Salmonella gallinarum)的方法.根据GenBank公布的鸡伤寒沙门氏菌基因序列,设计引物和Taqman探针,采用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验.结果表明:特异性引物和探针可从34株鸡伤寒沙门氏菌菌株、26株其他血清型沙门氏菌和7株非沙门氏菌菌株中检测出全部的34株鸡伤寒沙门氏菌.以鸡伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数(R2)为0.999,扩增效率为88.2%,最低检测浓度为5cfu/mL.对已接种鸡伤寒沙门氏菌的模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定,两者结果一致.该方法特异性好、灵敏度高,是快速鉴定鸡伤寒沙门氏菌的有效方法.

鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌基因组消减文库的构建

为了解鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌的基因组差别,筛选鸡白痢沙门氏菌特有的序列,利用SSH对鸡白痢沙门氏菌C79-13(实验方)与鸡伤寒沙门氏菌Sg9(驱动方)基因组进行了比较。选择四碱基内切酶Rsa I将C79-13与Sg9基因组DNA酶切,酶切的C79-13基因组DNA分成两份,分别与接头1和接头2R连接,然后进行两轮杂交和两轮PCR,得到消减混合物,将其与PCR 2.1克隆载体连接,转化感受态E.coli DH5α建立消减文库。结果共获得400个阳性克隆;筛选240个克隆制备质粒进行PCR检测,均扩增出100～2000 bp大小的片段。差异DNA消减文库的构建为进一步筛选、克隆鸡白痢沙门氏菌特异的未知新基因、建立分子鉴别新体系奠定了基础。

电化学共沉积石墨烯纳米金鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌新型免疫传感器

为研制一种新型快速检测鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的方法,本研究采用电化学还原法,将石墨烯(ERGO)与纳米金(AuNPs)共沉积修饰于丝网印刷碳电极表面,建成电学和生物学相容性显著改进的ERGO-AuNPs电极,结合双抗体夹心法,构建快速检测鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌的酶免疫传感器。以硫堇为分子探针采用循环伏安法(CV)和交流阻抗谱法(EIS)检测不同修饰电极的电化学特性。结果显示,在优化的测定条件下,该传感器对目标菌的检测线性范围为103cfu/mL^109cfu/mL,检测限为1.18×102cfu/mL(S/N=3)。石墨烯和纳米金共沉积形成的复合膜能够显著提高电极表面电子传递能力,增大电流响应信号,增强了酶免疫传感器的灵敏度、特异性和稳定性(4℃放置30 d后,响应电流为初始值的97.14%)。不仅可以检测鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌,还可以成为研究快速检测其它致病微生物及毒素等各类抗原物质免疫传感器的基础模型。

斑点免疫金渗滤法检测鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌抗体的应用研究

将鸡伤寒沙门氏菌LPS抗原包被于渗滤盒检测区(T区),针对沙门氏菌O9抗原单克隆抗体3-47-0包被在质控区(C区),用胶体金标记鸡伤寒沙门氏菌LPS抗原,建立了一种抗原夹心法快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌抗体的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。DIGFA比玻板凝集试验(PAT)灵敏度高,人工感染鸡试验表明在感染后第7d即可从32只鸡中的7只检测到抗体,在时间上早于PAT。722份现场血清样品的检疫结果表明,DIGFA的阳性检出率稍高于PAT,阳性样品抗体几何平均滴度DIGFA大于PAT法(p<0.05〉。DIGFA的结果得到细菌分离试验的验证。这些结果表明DIGFA快速、灵敏、准确,为鸡伤寒和鸡白痢的检疫提供了一个新的有效手段。

复合亚氯酸钠熏蒸剂对鸡伤寒沙门氏菌的杀菌效果试验

测试复合亚氯酸钠熏蒸剂对鸡伤寒沙门氏菌的杀菌效果,培养基表面涂布法测定结果表明,熏蒸消毒后鸡沙门氏菌均全部杀灭;玻片法测定结果表明,该熏蒸剂对鸡沙门氏菌的杀菌率为99.995%。试验结果表明,复合亚氯酸钠熏蒸剂熏蒸消毒对鸡沙门氏菌的杀菌效果显著。

鸡伤寒沙门氏菌病的病因与防控

鸡伤寒沙门氏菌病是养禽生产中常见的传染病,流行范围广,发病率高,对养禽业危害较大。本文根据当地的发病情况,详细的阐述了此病的病因,并从加强检疫、净化鸡群、加强饲养管理等方面介绍了防控措施,以供养鸡从业者参考。

雏鸡鼠伤寒沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌 混合感染的诊断

为对发病雏鸡群进行确诊,通过流行病学调查、病雏剖检观察及细菌分离鉴定,并对分离菌进行小白鼠接种观察,证实鸡群发生了由鼠伤寒沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌混合感染引起的禽副伤寒和禽伤寒,其中鼠伤寒沙门氏菌是主要病原,感染率高于鸡伤寒沙门氏菌。药物敏感试验结果表明,分离菌对多种常见抗生素表现敏感。

泰州地区鸡胚源沙门氏菌的分离鉴定及耐药基因和毒力基因的检测

为探究泰州地区某规模化孵化场鸡胚源沙门氏菌的生物学特征,试验对临床疑似沙门氏菌感染的死亡鸡胚中的沙门氏菌进行选择性增菌和分离,并对分离菌进行革兰氏染色鉴定、特异性基因扩增、毒力基因检测、药物敏感试验和耐药基因检测。结果表明:共分离到6株细菌,在沙门氏菌显色培养基上均呈现紫色小菌落,均为革兰氏阴性菌,特异性基因扩增鉴定为鸡伤寒沙门氏菌;从6株菌中共检测出15种毒力基因,除均不携带sopE基因外,sipA、sopA、sopB、ssaB、mgtC、misL、siiE、pipC、stn、fimA基因携带率为100%(6/6),sipC、sseL基因携带率为83.3%(5/6),ssaR、spvB基因携带率为66.7%(4/6);6株菌对大部分抗生素敏感,仅对多西环素(66.7%,4/6)、林可霉素(100%,6/6)、阿奇霉素(83.3%,5/6)和多黏菌素B(83.3%,5/6)的耐药率高于50.00%,3重耐药率为83.3%(5/6),4重耐药率为66.7%(4/6),5重耐药率为16.7%(1/6),6重耐药率为0(0/6);从6株菌中共检测出5种耐药基因,其中tet(A)、tet(B)和Sul2基因检出率均为100%(6/6),bla_(SHV)基因检出率为83.3%(5/6),Sul1基因检出率为66.7%(4/6),bla_(KPC)、bla_(NDM)、bla_(CTX)、bla_(TEM)、aadA1、aadB、floR、qnrA、qnrB、qnrS、mcr-1基因均未检测出。说明分离到的6株鸡伤寒沙门氏菌表现为多重耐药且携带大量毒力基因,可能是引起该规模化孵化场鸡胚死亡的重要病原之一。

鸡伤寒白痢沙门氏菌灭活菌苗的研制

由鸡沙门氏菌株 C79-1 3和 C79-2 0及新疆分离株 AS97-1 9和 AS96-4四株菌 ,经自制的改良硫代硫酸钠培养基 ,通气搅拌培养 ,甲醛灭活制成氢氧化铝佐剂苗 ,经免疫接种健康鸡。免疫后 2 1 d抗体水平达到最高 ,经 ANAE方法和 T淋巴细胞 E花环方法检测 ,免疫组的细胞免疫水平明显高于非免疫对照组 ,差异极显著 ,1 0 LD剂量强毒株攻菌试验 ,死亡保护率达 94 .7%,免疫组分离菌率为 3 .1 %,表明该苗具有良好的安全性和免疫效果。

鸡伤寒白痢沙门氏菌培养基和培养方法的研究

本试验用 5种培养基对鸡伤寒白痢沙门氏菌 (Sgp)菌株C79_2 0和AS96_1进行了静止培养对比试验 ,结果表明 ,改良硫代硫酸钠培养基和EEM培养基为最适合Sgp的培养基 ,硫代硫酸钠培养基次之 ,普通营养琼脂和SBG琼脂最差 ;对C79_13菌株用改良硫代硫酸钠培养基进行了通气搅拌培养、静止厌氧培养和静止需氧培养的对比试验及pH值对细菌生长的影响试验 ,结果表明 ,通气搅拌培养方法明显优于其它两种培养方法 ,调整pH的试验组菌悬液的OD值和菌数明显高于不调整pH值的试验组。

肠炎、白痢、鸡伤寒和都柏林沙门氏菌多重PCR检测方法建立及应用

为了有效区分D血清群的肠炎沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌和都柏林沙门氏菌,比对分析4个血清型菌株全基因组序列,获得差异区域,设计3对引物建立多重PCR方法,鉴定4个血清型。特异性分析结果表明3对引物均不能扩增出临床常见的非沙门氏菌病原菌。敏感性分析结果表明多重PCR方法的最低检测限度为100 CFU/μl。检测收集自5个养殖场的310份禽类样本,分离获得38株肠炎沙门氏菌、3株鸡白痢沙门氏菌和1株鸡伤寒沙门氏菌。综上,建立的多重PCR方法能有效区分4个血清型,为临床沙门氏菌的感染调查提供技术支持。

新疆某种鸡场蛋鸡沙门氏菌分离鉴定及耐药性分析

为了解新疆米泉某种鸡场沙门氏菌的感染情况,采用平板凝集试验对该场种鸡和商品蛋鸡进行了鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌病血清学调查,采集平板凝集强阳性鸡只的肛拭子,进行沙门氏菌的分离培养,对分离株进行血清分型和耐药性检测。结果显示,该鸡场鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌病抗体阳性率为19.6%(105/537),其中种鸡阳性率为14.3%(12/84),商品蛋鸡阳性率为20.5%(93/453);从鸡肛拭子中分离到3株鸡伤寒沙门氏菌,分离率为5.5%(3/55);药敏结果显示,有1株沙门氏菌XJMQ-S39呈多重耐药表型,其对5类9种抗菌药物耐药。结果表明,该种鸡场沙门氏菌血清阳性率高,主要是由鸡伤寒沙门氏菌感染引起的,且分离菌对多种抗菌药物耐药。

4种鸡源致病性沙门氏菌多重PCR检测方法的建立及应用

建立一种多重PCR方法,同时检测肠炎、鼠伤寒、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌。针对沙门氏菌属特异性invA基因、肠炎沙门氏菌特异性Sdf I序列、鼠伤寒沙门氏菌特异性STM4497基因、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌flhB基因设计引物,对引物浓度和反应条件进行优化,并对多重PCR特异性和灵敏度进行评估。利用建立的多重PCR方法调查河北地区蛋种鸡生产链中沙门氏菌流行现状。研究建立的多重PCR方法可快速、特异性鉴别肠炎、鼠伤寒、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌,最低检出限为100 CFU细菌和0.5 ng基因组DNA。沙门氏菌流行病学调查显示,肠炎沙门氏菌是河北地区蛋种鸡生产链中沙门氏菌主要流行血清型。成功建立鉴别肠炎、鼠伤寒、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌的多重PCR方法,对沙门氏菌流行病学调查及临床快速诊断具有重要意义。

鸡场沙门氏菌的净化与防控

鸡白痢(简称PD)由鸡白痢沙门氏菌感染引起,主要引起雏鸡和火鸡的败血病,但其他鸟类如鹌鹑、野鸡、鸭子、孔雀、珍珠鸡也易感。该种疾病可通过种蛋垂直传播。鸡白痢沙门氏菌很少引起其他宿主明显的临床症状、发病与死亡。1病原学1.1分类鸡白痢沙门氏菌属肠杆菌科,具有高度宿主适应性,为沙门氏菌属中少数几个不能运动的成员之列。它们属于D血清群。

鸡伤寒病的诊断与防治

鸡伤寒是由鸡伤寒沙门氏菌引起鸡的败血性传染病。该病可感染鸡、火鸡、鹌鹑与鸭等禽类,但主要以青年鸡和成年鸡发病居多。主要经消化道感染,另外通过感染蛋可进行垂直传播。从该病的病原、流行病学特点、诊治等方面进行阐述,以期为科学防控鸡伤寒病提供参考。

鸡伤寒的的诊断与防制

鸡伤寒是由鸡伤寒沙门氏菌引起的一种败血性疾病,引起其他家禽发病称为禽伤寒。该病呈世界性分布,有的国家实施消灭禽白痢-禽伤寒计划,在商业禽群中已经将该病消灭,我国一直存在该病,在一些鸡场的发病呈上升趋势,对养鸡业带来较严重的危害。

鸡副伤寒的实验室诊断技术

鸡副伤寒是指由有鞭毛能运动的沙门氏菌所致的疾病的总称。幼雏多表现为急性败血症,与鸡白痢相似;成鸡一般呈慢性经过或隐形感染。该病不仅可以给幼龄雏鸡造成死亡,而且由于其慢性性质和难于根除,是养鸡业比较严重的细菌性传染病之一。主要对病菌的分离培养、理化特性和血清学诊断进行了阐述,以期为更好地防治该病提供参考。