鹿茸多肽对顺铂所致卵巢早衰大鼠卵巢功能的保护作用及其机制

目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对顺铂(DDP)致卵巢早衰模型大鼠的影响及机制。方法:取动情周期正常的雌性大鼠并将其随机分为对照组、模型组、VAP干预组,每组各10只。模型组和VAP干预组通过连续20 d腹腔注射DDP(4 mg·kg^(−1)·d^(−1))建立卵巢早衰大鼠模型,干预组同时连续20 d灌胃VAP(400 mg·kg^(−1)·d^(−1))。HE染色观察卵巢形态学表现,并对各级发育卵泡计数。ELISA检测血清雌二醇(E2)、促卵泡生成素(FSH)、抗穆勒管激素(AMH)水平。生化法检测卵巢组织中谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平。探针标记法检测卵巢组织中活性氧(ROS)水平。普鲁士蓝染色观察卵巢组织中铁蓄积情况并检测亚铁离子(Fe^(2+))水平。免疫组化和Western blot检验卵巢组织中溶质载体家族7成员11(SCL7A11)、谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)和酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)的表达。通过生育力监测观察各组大鼠生育能力。结果:与对照组相比,模型组卵巢萎缩,铁蓄积(P<0.01),各级发育卵泡和总卵泡减少(P<0.05),闭锁卵泡增多(P<0.01),产仔数减少(P<0.01),血清E2、AMH水平降低(P<0.01),FSH水平提高(P<0.01),卵巢组织中GSH水平、SCL7A11和GPX4蛋白表达均降低(P<0.05),Fe^(2+)、MDA和ROS水平及ACSL4蛋白表达均升高(P<0.01)。与模型组相比,VAP能改善DDP导致的上述指标改变(P<0.01)。结论:鹿茸多肽可改善顺铂致卵巢早衰大鼠的卵巢功能、维持正常的卵泡发育并提高其生育能力,机制可能与脂质过氧化反应和铁死亡有关。

鹿茸多肽对骨质疏松模型大鼠的改善作用及对SIRT1/FOXO1信号通路的影响

目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对骨质疏松(OP)模型大鼠的保护作用,并阐明其可能的作用机制。方法:60只12周龄SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组(1 mg·kg^(-1)·d^(-1)阿仑膦酸钠灌胃)、低剂量(100 mg·kg^(-1)·d^(-1))VAP组、中剂量(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))VAP组和高剂量(300 mg·kg^(-1)·d^(-1))VAP组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠肌肉注射地塞米松(2 mg·kg^(-1))复制OP大鼠模型,对照组大鼠肌肉注射等体积生理盐水,每周2次,连续11周。双能X射线骨密度仪检测各组大鼠股骨骨密度(BMD),酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血清中血钙(Ca^(2+))、血磷(P)、骨保护素(OPG)、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)水平,生化法检测各组大鼠血清中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性,HE染色观察各组大鼠骨组织病理形态表现,Western blotting法检测各组大鼠骨组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)、过氧化氢酶(CAT)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和叉头框蛋白O1(FOXO1)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠股骨BMD明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠股骨BMD明显升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,模型组大鼠血清中Ca^(2+)、P和OPG水平及SOD活性明显降低(P<0.05),ALP、OCN和MDA水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,低剂量VAP大鼠血清中OPG水平明显升高(P<0.05),阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠血清中Ca^(2+)、P和OPG水平及SOD活性明显升高(P<0.05或P<0.01),阳性药组和各剂量VAP组大鼠血清中ALP、OCN和MDA水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。HE染色,与对照组比较,模型组大鼠骨组织中骨细胞数量减少且排列混乱,骨小梁纤细,出现大片断裂,髓腔扩大;与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠骨组织中骨小梁粗壮,排列紧密。Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠骨组织中SIRT1、CAT、RUNX2和FOXO1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠骨组织中SIRT1、CAT、RUNX2和FOXO1蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:VAP对OP模型大鼠具有保护作用,其作用机制可能与介导SIRT1/FOXO1信号通路抗氧化应激作用有关。

鹿茸多肽对肾阳虚证心肌损伤大鼠心肾功能的保护作用

目的分析鹿茸多肽(VAP)对肾阳虚证心肌损伤大鼠心肾功能的保护作用。方法48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组〔盐酸贝那普利片0.5 mg/(kg·d)〕、低、中、高剂量VAP组〔100、200、300 mg/(kg·d)VAP〕,每组8只。除空白组外,各组连续21 d肌肉注射氢化可的松〔25 mg/(kg·d)〕并同时腹腔注射阿霉素〔2.2 mg/(kg·d)〕造模,造模成功后进行灌胃给药28 d。观察各组体征及状态,检测各组心电图ST段变化,苏木素-伊红(HE)染色法观察各组心肌和肾脏组织纤维化和微血管损伤情况,生化法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血清环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)和磷酸肌酸同工酶(CK-MB)水平,Western印迹检测各组肾脏组织中血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导结合蛋白(HIF)-1和转化生长因子(TGF)-β1蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组两眼无神,精神萎靡,行动迟缓,活动耐力下降,皮毛干枯易脱落,相互扎堆,足背水肿,体质量下降,食欲不振,尿量减少等明显变化;与模型组比较,阳性药组、中、高剂量VAP组眼睛有神,动作敏捷,毛发光泽浓密,紧贴躯体,食量和排泄均接近于空白组。与空白组比较,模型组ST段显著抬高;与模型组比较,阳性药组和低、中、高剂量VAP组ST段抬高的水平显著降低。与空白组比较,模型组心肌纤维排列混乱,纤维化明显,有大量炎症细胞浸润,间隔变大;与模型组比较,阳性药组、中、高剂量VAP组心脏组织的侵袭及纤维化程度均明显降低;与空白组比较,模型组肾小球萎缩、基膜增厚及管腔狭窄或闭塞,小管萎缩及纤维化,可见上皮细胞肿胀、增殖,可见瘢痕形成;与模型组比较,阳性药组、中、高剂量VAP组肾小球萎缩及纤维化均有所减轻。与空白组比较,模型组LDH、MDA和cGMP水平、TGF-β1、HIF-1蛋白表达明显升高,SOD活性、cAMP和CK-MB水平、VEGF蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,阳性药组、中、高剂量VAP组LDH、MDA和cGMP水平、TGF-β1、HIF-1蛋白表达明显降低,SOD活性、cAMP和CK-MB水平、VEGF蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论VAP对肾阳虚证心肌损伤模型大鼠心肾功能有明显保护作用,该作用机制可能是通过抑制氧自由基产生,改善心肌过氧化损伤,调节心肌细胞内外离子浓度,延长动作电位来达到抗心肌损伤的效果,并通过下调TGF-β1蛋白表达水平延缓肾间质纤维化,介导HIF-1/VEGF信号通路减轻肾阳虚证心肌损伤模型大鼠心脏及肾脏的微血管损伤。

鹿茸多肽多功效研究进展

鹿茸作为传统名贵中药材,医用历史悠久,功效广泛,针对肾阳不足、精血亏虚、阳痿滑精、宫冷不孕、腰脊冷痛、筋骨痿软、崩漏等症状均有良好疗效。研究发现鹿茸的多重功效与其最主要的活性成分鹿茸多肽密切相关。作为代表性动物源中药多肽,鹿茸多肽的相关研究揭示了鹿茸的物质基础和作用机制,不断为我们展现传统中药的现代奥秘。鹿茸多肽的提取方式需要保证活性和营养的最大保存,主要采用酶解法、溶液萃取法、CO_(2)超临界提取法等。笔者通过查阅国内外相关文献,系统性地归纳与总结了鹿茸多肽在人体多个系统中重要的治疗作用和保健价值,对鹿茸多肽修复神经、改善血管心肌、减轻肝细胞损伤、调节骨骼活动等多重功效进行重点介绍。为进一步挖掘开发动物药资源宝库提供理论参考,为源自动物药多肽创新药的研发提供新思路。

鹿茸多肽对大鼠绝经后骨质疏松的改善作用及其机制

目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对绝经后骨质疏松症(PMOP)模型大鼠的保护作用,并阐明其可能的作用机制。方法:60只12周龄SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、阿仑膦酸钠组(1 mg·kg^(-1)·d^(-1)阿仑膦酸钠灌胃)、低剂量VAP组(100 mg·kg^(-1)·d^(-1) VAP灌胃)、中剂量VAP组(200 mg·kg^(-1)·d^(-1) VAP灌胃)和高剂量VAP组(300 mg·kg^(-1)·d^(-1) VAP灌胃),每组10只。除假手术组外,其余各组大鼠摘除双侧卵巢,复制PMOP大鼠模型。双能X射线骨密度仪检测各组大鼠股骨骨密度(BMD),酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血清中血钙(Ca^(2+))、血磷(P)、骨碱性磷酸酶(BALP)和Ⅰ型前胶原N端前肽(PINP)水平,采用相关试剂盒检测各组大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,HE染色法观察各组大鼠骨组织病理形态表现,Western blotting法检测各组大鼠骨组织中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠股骨BMD降低(P<0.01);与模型组比较,阿仑膦酸钠组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠股骨BMD升高(P<0.05或P<0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠血清中Ca^(2+)、P、BALP及PINP水平和SOD活性降低(P<0.05或P<0.01),MDA水平升高(P<0.01);与模型组比较,中剂量VAP组大鼠血清中P水平升高(P<0.01),阿仑膦酸钠组和高剂量VAP组大鼠血清中Ca^(2+)、P、BALP及PINP水平和SOD活性升高(P<0.05或P<0.01),MDA水平降低(P<0.05)。HE染色,与假手术组比较,模型组大鼠骨组织中骨小梁纤细,大片断裂,髓腔扩大;与模型组比较,阿仑膦酸钠组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠骨组织中骨小梁粗壮,排列紧密,骨细胞数量多。Western blotting法,与假手术组比较,模型组大鼠骨组织中p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值降低(P<0.01);与模型组比较,各剂量VAP组大鼠骨组织中p-PI3K/PI3K比值升高(P<0.05或P<0.01),阿仑膦酸钠组和高剂量VAP组大鼠骨组织中p-AKT/AKT比值升高(P<0.01)。结论:VAP对大鼠PMOP具有改善作用,其机制可能与VAP调控骨组织中PI3K/AKT信号通路及降低骨组织氧化应激有关。

鹿茸多肽通过SDF-1α/CXCR4轴调控PI3K/AKT信号通路促进下肢动脉硬化性闭塞症大鼠血管新生的作用机制

目的:探索鹿茸多肽通过基质细胞衍生因子(SDF-1α)/趋化因子受体(CXCR4)轴对磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路促进下肢动脉硬化性闭塞症(PAD)大鼠血管新生的作用机制。方法:采用结扎并离断大鼠股动脉及分支造成肢体缺血、给予高脂饲料喂养制作大鼠下肢动脉硬化闭塞症模型。将100只雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为10组,分别为空白组、模型组、假手术组,鹿茸多肽低剂量组、鹿茸多中剂量肽组、鹿茸多肽高剂量组、抑制剂LY294002组、鹿茸多肽低剂量+抑制剂LY294002组、鹿茸多肽中剂量+抑制剂LY294002组、鹿茸多肽高剂量+抑制剂LY294002组。将空白组、模型组及假手术组灌胃等容量蒸馏水。鹿茸多肽低、中、高剂量组+抑制剂LY294002组先行腹腔注射再灌胃,于造模完第1天开始给药,每日1次,28 d后处死。采用流式细胞术检测给药后外周血、骨髓中造血干细胞(CD 34+细胞)比例;免疫荧光法检测给药后患侧腓肠肌SDF-1α、PI3K的阳性细胞数比例。结果:造血干细胞(CD 34+细胞)比例模型组均显著高于空白组(P<0.05);其中鹿茸多肽低剂量组较鹿茸多肽低剂量+抑制剂LY294002组阳性细胞比例升高,鹿茸多肽中剂量组较鹿茸多肽中剂量+抑制剂LY294002组阳性细胞比例升高,鹿茸多肽高剂量组较鹿茸多肽高剂量+抑制剂LY294002组阳性细胞比例升高(P<0.05);给药组SDF-1α、PI3K的阳性细胞数高于模型组及抑制组(P<0.05),鹿茸多肽中剂量组高于鹿茸多肽低剂量组(P<0.05),鹿茸多肽高剂量组高于鹿茸多肽高剂量组+LY294002组(P<0.05)。结论:鹿茸多肽通过SDF-1α/CXCR4轴影响PI3K/AKT信号通路促进了内皮祖细胞的增殖及分化、PAD血管新生。

马鹿茸多肽A的表面结构分析

目的:对马鹿茸多肽A的表面结构进行分析,并探讨其结构对药效的作用。方法:采用原子力显微镜观察马鹿茸多肽A的表面结构。结果:马鹿茸多肽A表面呈三维的曲面、板状结构;其基部为不规则网格状结构,3D结构显示其网格边缘具有粗细不均、长短不等的支链形成椎体状突起,呈栅状或片状。质量浓度为0.50、0.25、0.10µg·mL^(–1)的马鹿茸多肽A的粗糙度分别为0.6672、0.7000和0.7900,表面高度分别为14.5105、39.4588、6.1397 nm。在相同波长下,一维各向同性功率谱密度越大,则二维各向同性功率谱密度越大,样品对于测定的响应越灵敏。结论:马鹿茸多肽A的曲面板状结构可增加与作用靶点的接触面积,其栅状或片状椎体支链结构则更有利于和作用靶点的相互接触或渗入而易发挥药效作用。随着质量浓度的增大,其粗糙度逐渐变小;而表面高度没有随质量浓度的变化呈现出规律性的变化。

鹿茸多肽调节Nrf-2/HO-1/NF-κB信号通路减轻非酒精性脂肪肝大鼠小肠黏膜屏障损伤

目的:研究鹿茸多肽调节核因子E2相关因子2(Nrf-2)/血红素加氧酶-1(HO-1)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路减轻非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠小肠黏膜屏障损伤的机制。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、鹿茸多肽低剂量(14 mg/kg)组、鹿茸多肽高剂量(28 mg/kg)组、鹿茸多肽(28 mg/kg)+Nrf-2抑制剂ML385(30 mg/kg)组,每组12只,除正常对照组外其余各组大鼠通过饲喂高脂饲料12 w诱导建立NAFLD模型,正常对照组大鼠饲喂普通饲料12 w,经分组给药处理后,检测大鼠血脂及肝功能指标、肝组织病理学变化及脂肪变性、NAFLD活动度评分(NAS)、小肠黏膜组织病理形态及血清DAO、I-FABP、IL-17、IL-6、IL-18、SOD、CAT、MDA水平和小肠组织Nrf-2/HO-1/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肝组织病理损伤及脂肪变性明显,小肠黏膜组织发生明显的病理损伤,NAS、油红O染色阳性面积及血清TG、FFA、ALT、AST、DAO、I-FABP、IL-17、IL-6、IL-18、MDA水平和小肠组织p-NF-κB P65/NF-κB P65水平显著升高,绒毛高度及血清SOD、CAT水平和小肠组织Nrf-2、HO-1蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,鹿茸多肽低、高剂量组大鼠肝组织病理损伤、脂肪变性及小肠黏膜组织病理损伤明显减轻,NAS、油红O染色阳性面积及血清TG、FFA、ALT、AST、DAO、I-FABP、IL-17、IL-6、IL-18、MDA水平和小肠组织p-NF-κB P65/NF-κB P65水平显著降低,绒毛高度及血清SOD、CAT水平和小肠组织Nrf-2、HO-1蛋白表达显著升高(P<0.05),高剂量鹿茸多肽的作用更强。ML385可逆转高剂量鹿茸多肽对模型大鼠各指标的作用(P<0.05)。结论:鹿茸多肽可通过激活Nrf-2/HO-1信号从而降低NF-κB磷酸化,进而改善NAFLD大鼠脂代谢,抑制炎症及氧化应激,修复其小肠黏膜屏障功能,最终减轻NAFLD大鼠肝组织脂肪变性及小肠黏膜组织损伤。

基于mTOR信号通路探讨鹿茸多肽对大鼠退变椎间盘髓核细胞自噬的影响

目的 探讨鹿茸多肽(pilose antler polypeptides, PAP)对大鼠退变椎间盘髓核细胞自噬的影响。方法 购入1月龄的60只健康SD大鼠,随机分为正常组(normal)、对照组(control)、鹿茸多肽组(PAP)、雷帕霉素组(Rapamycin, Rap)、鹿茸多肽+雷帕霉素组(PAP+Rap)5组,每组12只。后4组采用双前肢去势直立法复制大鼠腰椎间盘退变模型。造模6周后,正常组普通饲养不做任何处置,对照组用0.9%氯化钠注射液灌胃,鹿茸多肽组用4.5 mg/mL浓度的鹿茸多肽灌胃,雷帕霉素组腹腔注射0.2 mg/mL浓度的雷帕霉素,鹿茸多肽+雷帕霉素组腹腔注射0.2 mg/mL浓度的雷帕霉素联合4.5 mg/mL浓度的鹿茸多肽灌胃,各组均给药8周。给药结束后,5组中,半数样本取L5-L6椎间盘及上下相邻椎体,用10%的甲醛溶液固定后使用苏木精-伊红染色和阿利新蓝染色进行切片染色,置于显微镜下观察;另半数样本取完整L5-L6椎间盘组织,经液氮罐速冻后移入-80℃冰箱冻存,Western blot检验Akt-mTOR信号通路相关蛋白p-mTOR、p-Akt和自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达。结果 Alcian blue染色及苏木精-伊红染色下,与对照组比较,PAP组、Rap组、PAP+Rap组均可显著延缓椎间盘退变。蛋白质印迹法检测p-Akt、p-mTOR的表达水平排列为:PAP+Rap>PAP>control>Rap(P<0.05);LC3-Ⅱ的表达水平排列为:Rap>PAP+Rap>control>PAP(P<0.05);LC3-Ⅱ/Ⅰ的比例排列为:Rap>PAP+Rap>control>PAP(P<0.05)。结论 鹿茸多肽具有抑制大鼠椎间盘髓核细胞自噬的作用,进而延缓大鼠椎间盘退变,这可能与激活mTOR信号通路有关。

鹿茸多肽预处理通过miR-133a调控TGF-β/Smad信号通路对TBHP诱导心肌H9c2细胞损伤的保护作用

目的:探讨鹿茸多肽(VAP)预处理对叔丁基过氧化氢(TBHP)诱导大鼠心肌H9c2细胞损伤的保护作用,阐明VAP对miR-133a/转化生长因子β(TGF-β)/Smad轴的作用及其机制。方法:将H9c2心肌细胞分为空白对照组、空白血清组、TBHP组、TBHP+低剂量(100 mg·kg^(-1))VAP组、TBHP+高剂量(400 mg·kg^(-1))VAP组和miR-133抑制剂(miR-133 inhibitor)组。空白对照组不做任何处理,其余各组细胞经VAP处理24 h后,给予200μmol·L^(-1)TBHP处理;miR-133inhibitor组细胞转染miR-133 inhibitor 24 h,给予400 mg·kg^(-1)VAP处理24 h,并给予200μmol·L^(-1)TBHP处理。MTT法检测各组H9c2细胞存活率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞培养上清液中肌钙蛋白T(cTnT)、肌钙蛋白I(cTnI)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组H9c2细胞中miR-133表达水平,Western blotting法检测各组H9c2细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)和Smad4蛋白表达水平。结果:MTT法检测,与TBHP组比较,TBHP+低剂量VAP组和TBHP+高剂量VAP组H9c2细胞存活率升高(P<0.05),miR-133inhibitor组H9c2细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA法检测,与空白对照组比较,TBHP组H9c2细胞中cTnT、cTnI和CK-MB水平升高(P<0.05);与TBHP组比较,TBHP+低剂量VAP组和TBHP+高剂量VAP组H9c2细胞中cTnT、cTnI和CK-MB水平降低(P<0.05)。RT-qPCR法检测,与空白对照组比较,TBHP组H9c2细胞中miR-133a表达水平降低(P<0.05);与TBHP组比较,TBHP+低剂量VAP组和TBHP+高剂量VAP组H9c2细胞中miR-133a表达水平升高(P<0.05或P<0.01),miR-133 inhibitor组H9c2细胞中miR-133a表达水平明显降低(P<0.01)。Western blotting法检测,与空白对照组比较,TBHP组H9c2细胞中TGF-β1、p-Smad2/3和Smad4蛋白表达水平升高(P<0.05);与TBHP组比较,TBHP+低剂量VAP组和TBHP+高剂量VAP组H9c2细胞中TGF-β1、p-Smad2/3和Smad4蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:VAP预处理通过miR-133a调控TGF-β/Smad信号通路保护TPHP诱导的大鼠心肌H9c2细胞损伤。

鹿茸多肽对TBHP诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响

目的探讨鹿茸多肽(velvet antler peptide,VAP)预处理对叔丁基过氧化氢(TBHP)诱导H9c2大鼠心肌细胞损伤及凋亡的影响。方法采用含10%胎牛血清(FBS)培养液(DMEM)传代培养细胞7d后,将H9c2心肌细胞分为空白对照组(Blank control group)、空白血清组(Blank serum group)、TBHP组(TBHP group)、100 mg·kg^(-1)VAP低剂量含药血清组(TBHP+VAPLgroup)、400 mg·kg^(-1) VAP高剂量含药血清组(TBHP+VAPHgroup)。正常对照组不做任何处理,其余给药组给予VAP处理24h后,给予200μmol·L^(-1)TBHP处理。MTT法检测各组细胞存活率;Hochst染色法检测各组细胞凋亡情况;Western blotting法检测心肌细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平。结果MTT检测结果表明,与TBHP组比较,VAP高和低剂量组的H9c2细胞活性升高(P<0.01)。Hoechst染色法结果显示,与空白对照组比较,TBHP组的活细胞减少;与TBHP组比较,VAP高和低剂量组的活细胞增多。Western blotting法检测结果表明,与空白对照组比较,TBHP组上调心肌细胞Bax、Caspase-3蛋白表达水平,降低Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05);与TBHP组比较,VAP高和低剂量组降低Bax、Caspase-3蛋白表达水平,升高Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05)。结论VAP含药血清预处理可保护TPHP诱导的H9c2细胞心肌损伤。通过降低心肌细胞中Caspase-3蛋白的表达或抑制其活性,增加Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达,上调Bcl-2/Bax,从而抑制心肌细胞凋亡。

鹿茸多肽对训练创伤致脊髓损伤模型大鼠的作用及机制

目的探讨鹿茸多肽(VAP)对训练创伤致脊髓损伤(SCI)模型大鼠的作用及机制。方法将48只SD雄性大鼠随机分为空白(Control)组、模型(SCI)组、阳性对照(MSI-1436)组及VAP低、中、高剂量组(20,40,60 mg/kg),各8只。适应性饲养2 d后,结扎坐骨神经复制SCI模型,MSI-1436组大鼠术后14 d鞘内注射4μg MSI-1436(溶于20μL生理盐水)1次(单次给药),并于术后14,15,16 d各给药1次(连续给药);VAP低、中、高剂量组大鼠术后14 d分别腹腔注射20,40,60 mg/kg VAP 1次(单次给药),并于术后15,16,17,18 d各给药1次(连续给药);Control组和SCI组大鼠均给予等量生理盐水。使用Von Frey纤维丝测量大鼠的机械痛觉阈值和热痛觉潜伏期;采用免疫印迹(Western blot)法测定大鼠脊髓中多聚嘧啶序列结合蛋白(PTB)、磷酸化c-Jun氨基端蛋白激酶(p-JNK)、磷酸化p38(p-p38)、磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)及炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的蛋白表达水平;采用免疫荧光化学法检测脊髓中神经元特异性烯醇化酶(NSE)的蛋白表达水平。结果与SCI组比较,VAP中、高剂量组大鼠单次给药2.0,4.0,8.0 h时同侧足的机械痛觉阈值均显著升高,热痛觉潜伏期均显著延长(P<0.05);VAP中剂量组大鼠连续给药5 d时同侧足的机械痛觉阈值均显著升高,热痛觉潜伏期均显著延长(P<0.05);VAP低、中、高剂量组大鼠脊髓中p-p38,p-JNK,PTB,IL-1β,TNF-α的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);VAP中、高剂量组大鼠脊髓中NSE的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论VAP可能通过抑制PTB的表达发挥对SCI模型大鼠的神经性疼痛和神经炎症的治疗作用,并促进神经修复。

鹿茸多肽促进表皮和成纤维细胞增殖及皮肤创伤愈合

目的 研究总鹿茸多肽 (TVAP)及天然鹿茸多肽 (nVAP)和合成鹿茸多肽 (sVAP)对细胞增殖的影响。方法分离乳鼠表皮细胞和家兔肋软骨细胞 ,体外加入TVAP ,nVAP和sVAP ,观察其对 [3H]TdR参入细胞DNA合成的影响。整体观察TVAP对大鼠实验性皮肤损伤的修复作用。结果 TVAP 0 8和 3 2mg·g- 1 膏剂外涂对实验性大鼠皮肤损伤有加速修复作用。离体TVAP 5 - 5 0mg·L- 1 和nVAP 0 4 - 5 0mg·L- 1 均能促进大鼠表皮细胞有丝分裂 ,提示nVAP是TVAP中促进表皮细胞分裂和加速皮肤创伤愈合的主要活性多肽。sVAP对表皮细胞和成纤维细胞增殖有促进作用。结论 马鹿茸多肽通过促进表皮细胞和成纤维细胞增殖加速皮肤创伤愈合。

鹿茸多肽对胎大鼠脑神经干细胞体外诱导分化的实验研究

目的 探讨鹿茸多肽对胎大鼠脑神经干细胞体外分化的影响。 方法 从E12～ 14d的Wistar大鼠脑中分离扩增获得大量神经干细胞后 ,加入不同浓度的鹿茸多肽 ,观察其对胚胎神经干细胞分化的影响 ,并通过免疫组织化学染色检测神经干细胞分化为神经元和星形胶质细胞的状况。 结果 5 0 μg L组分化细胞总数与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 1) ;5 0 μg L、10 0 μg L、2 0 0 μg L组神经元特异烯醇化酶 (NSE)阳性率与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 1) ,并呈一定的剂量依赖性。 结论 鹿茸多肽在体外可明显促进神经干细胞向神经元分化 ,为鹿茸多肽应用于神经系统损伤性疾病的治疗提供了实验依据。

鹿茸多肽对小鼠耐缺氧和抗疲劳能力的影响

实验观察鹿茸多肽(piloseantlerpolypeptide,PAP)对小鼠耐缺氧和抗疲劳能力的影响。实验设立对照组和实验组(PAP低剂量、中剂量和高剂量组),其中实验组灌胃给予高、中、低剂量的PAP,对照组灌胃给予同低剂量PAP组相同体积的生理盐水。连续灌胃30d,常压耐缺氧法观察小鼠存活时间,断头缺氧缺血法观察小鼠张口喘气时间,并观察小鼠爬杆时间、负重游泳时间,测定游泳前、游泳后0min和20min血清乳酸含量的变化。结果显示PAP能显著增加小鼠常压缺氧存活时间、断头喘气时间、爬杆时间和负重游泳时间;并能显著降低游泳后血清乳酸的增加量。说明PAP能够提高小鼠耐缺氧和抗疲劳的能力。

鹿茸多肽对骨、软骨细胞增殖的实验研究

用3H－TdR参入法观察鹿茸多肽对兔助软骨细胞、人胚关节软骨细胞及鸡胚头盖骨成骨样细胞DNA合成的影响。结果表明，10～50μg／ml鹿茸多肽能明显刺激软骨细胞和成骨样细胞的增殖，其增殖作用有明显的量效关系且无种属特异性。

鹿茸多肽的生物学活性研究

采用醇沉法从新鲜马鹿茸中提取出活性多肽。该多肽为一系列分子量低于17kD的多肽混合物，Western blotting检测到其含有胰岛素样生长因子-1（IGF-1）。Bradford法定量总多肽约为1～2mg／g鲜重，RIA法定量IGF-1为300～400pg／g鲜重。小鼠腹腔连续注射多肽6d后，对其促生长、免疫调节、抗氧化、抗疲劳等生物学活性进行了研究。结果表明：小鼠体重较对照组有增加趋势（P〉0．05）；腹腔注射1，4，8mg／kg鹿茸多肽组小鼠玫瑰花环成环率分别高于对照组（生理盐水）33．3％，34．2％，39．6％，差异显著（P〈0．05）。注射8mg／kg鹿茸多肽的小鼠血清溶血素OD值与对照组差异极显著（P〈0．01）。实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率分别比对照组高22．1％，25．8％，26．5％，差异显著或极显著（P〈0．05或P〈0．01），说明鹿茸多肽具有免疫调节作用，且呈剂量依赖性。注射4，8mg／kg鹿茸多肽组老年小鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活性分别升高51．1％，59．2％，血清丙二醛（MDA）含量分别下降14．9％，16．7％，与对照组差异显著（P〈0．05），说明鹿茸多肽对老年小鼠有较强的抗氧化作用。小鼠负重游泳实验中，注射小鼠存活时间比对照组延长了21．67min（P〈0．05），说明鹿茸多肽具有抗疲劳作用。

鹿茸多肽对周围神经再生的影响

目的探讨鹿茸多肽局部给药和鹿茸多肽-PLGA复合膜对大鼠坐骨神经损伤后神经再生的影响。方法制备厚度为50μm、浓度分别为3mg/g及15mg/g的鹿茸多肽-PLGA复合膜。取3～6月龄Wistar大鼠72只,雌雄不限,体重(250±50)g,制备坐骨神经切断模型。模型制备后随机分成4组,每组18只。A组:吻合后不作任何处理;B组:术后每隔1d术侧腓肠肌内注射10mg/L鹿茸多肽1mL;C组:神经吻合口部位包绕3mg/g鹿茸多肽-PLGA复合膜;D组:神经吻合口部位包绕15mg/g鹿茸多肽-PLGA复合膜。术后第2、4及6周,大体观察神经断端粘连情况,行电生理检测、免疫组织化学染色及半定量分析、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)逆行示踪。结果术后各组大鼠行为无明显异常,足底、足趾均无溃疡;神经吻合口处均无神经瘤形成。术后2、4及6周,A组神经吻合处与周围组织粘连明显,B组仅有轻度粘连,C、D组无明显粘连。术后各时间点小腿三头肌诱发电位恢复率B、C、D组明显高于A组(P<0.01),D组优于B组和C组(P<0.05);2、4周B组和C组差异无统计学意义(P>0.05),6周时C组优于B组(P<0.05)。再生神经纤维轴突及髓鞘TGF-β1、IGF抗原染色:A组轻度着色,B、C、D组随观察时间的延长着色逐渐加深。各时间点B、C、D组TGF-β1、IGF抗原表达均较A组高(P<0.05);术后6周,D组与B、C组比较差异有统计学意义(P<0.05),B、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。HRP逆行示踪实验:随时间延长,被标记的有髓神经纤维逐渐增多,B、C、D组标记阳性的有髓神经纤维数明显高于A组,D组高于其他组,B组和C组差异不明显。结论鹿茸多肽局部应用和鹿茸多肽-PLGA复合膜包绕神经吻合口周围对神经再生均有促进作用,此作用与鹿茸多肽有明显量效关系,鹿茸多肽-PLGA复合膜有预防神经粘连作用。

鹿茸多肽对大鼠乳腺癌骨转移模型肿瘤生长及破骨细胞的影响

目的探讨鹿茸多肽对乳腺癌骨转移大鼠模型肿瘤生长及破骨细胞的影响。方法 40只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、唑来膦酸组和鹿茸多肽组,每组10只。假手术组在大鼠胫骨内注射生理盐水,其他三组通过胫骨内注射乳腺癌细胞(MRMT-1)建立乳腺癌骨转移模型,各组分别给予对应药物,模型组造模后不予处理,给药20 d。在造模后第21天处死大鼠取材,测定瘤体的体积,采用TRAP法染色计数瘤体内破骨细胞数量,测定骨密度(BMD)和矿物质含量。结果与模型对照组相比,鹿茸多肽组骨矿物质含量升高,破骨细胞减少,肿瘤体积明显减小(均P<0.05)。结论鹿茸多肽能抑制破骨细胞的过度激活,并可以减少骨吸收和保护骨质,维持成骨作用和破骨作用的平衡,从而抑制肿瘤的生长。

鹿茸多肽对人骨髓间充质干细胞BMP-2和Runx2表达的影响

目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中骨形态发生蛋白2(BMP-2)和骨特异性转录因子2(Runx2)基因和蛋白表达的影响,阐明其对骨合成及hBMSCs向成骨细胞方向分化的作用机制。方法:体外培养的hBMSCs分为对照组和5、10、15、20g·L-1 VAP组,通过检测各组hBMSCs中碱性磷酸酶(ALP)活性,确定体外用药最佳药物浓度;CCK-8法检测对照组和10g·L-1 VAP组hBMSCs增殖情况;荧光定量PCR法与Western blotting法测定对照组和10g·L-1 VAP组hBMSCs中BMP-2和Runx2基因与蛋白的表达。结果:VAP各组细胞中ALP活性均高于对照组,其中以10g·L-1 VAP组细胞中ALP活性最高(P<0.01);CCK-8法,10g·L-1 VAP组hBMSCs增殖率明显高于对照组(P<0.05),VAP诱导培养第9天hBMSCs增殖率最高,且进入平台期,之后hBMSCs的增殖率开始下降;荧光定量PCR和Western blotting检测,10g·L-1 VAP组hBMSCs中BMP-2和Runx2基因及蛋白表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VAP能够提高hBMSCs中ALP活性,促进hBMSCs增殖分化,上调hBMSCs中BMP-2及其下游Runx2基因和蛋白的表达,这可能是VAP对hBMSCs骨形成及骨代谢影响的分子调控机制之一。