灵杞黄斑颗粒的薄层鉴别研究

目的建立灵杞黄斑颗粒的质量控制方法,为控制其产品质量提供依据。方法采用薄层色谱法对处方中肉苁蓉、枸杞子、灵芝、当归、川芎和丹参等主要药味进行定性鉴别研究。结果灵杞黄斑颗粒中肉苁蓉、枸杞子、灵芝、当归、川芎和丹参的薄层色谱上具有鉴别特征,色谱斑点清晰,Rf值适中,阴性对照无干扰。结论鉴别方法简便可靠,专属性强,重复性好,可用于灵杞黄斑颗粒的定性质量控制。

灵杞黄斑颗粒中阿魏酸含量测定

目的建立测定灵杞黄斑颗粒中阿魏酸的反相高效液相色谱法。方法采用色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇(A)-0.1%磷酸水溶液(B)进行梯度洗脱,梯度洗脱程序为进样0～3 min,调节流动相A∶B(10∶90);3～20 min,流动相A∶B(36∶64);20～22 min,流动相A∶B(10∶90);流速:1.0 mL.min-1;检测波长:316 nm;柱温:30℃;进样量:10μL。结果阿魏酸在0.058～0.579 mg.mL-1浓度范围内与峰面积值呈良好的线性关系,标准曲线的回归方程为:Y=4 443.6ρ-10.135(r=0.999 6,n=6),阿魏酸的加样回收率为97.9%～101.5%(n=9),3批样品中阿魏酸的平均含量均不低于0.210 mg.g-1。结论该方法简便、快速、准确,灵敏度高,专属性强,可用于灵杞黄斑颗粒中阿魏酸的含量测定。

中药黄斑颗粒对大鼠视网膜光损伤的防护作用

目的：观察中药复方制剂黄斑颗粒对大鼠视网膜光损伤的防护作用。方法：雄性SD大鼠24只,随机分为正常对照组、模型组和黄斑颗粒组,每组8只。黄斑颗粒组采用黄斑颗粒3.125g/kg,1次/d,灌胃10d。暗适应24h后,采用自制光损伤箱,平均光照强度2800Lux,散瞳放入光损伤箱中持续光照5h后,置于暗环境饲养,继续用药。2周后做视网膜电流图（electroretinogram,ERG）,记录最大反应a、b波及振荡电位（oscillatory potentials,OPs）,并留取眼球HE染色,光学显微镜测算外核层层数。结果：光照2周后,与模型组相比,黄斑颗粒组视网膜结构保存完好,正常对照组外核层平均有9－11层,黄斑颗粒组外核层平均仍有7－9层,而模型组仅有3－6层,差异有统计学意义（P〈0.01）。黄斑颗粒组ERG反应振幅明显高于对照组,其中b波黄斑颗粒组为（319.38±71.96）μV,模型组为（135.16±42.30）μV;a波振幅黄斑颗粒组为（184.63±47.23）μV,模型组为（83.35±27.75）μV;OPs黄斑颗粒组为（239.38±20.19）μV,模型组为（125.44±26.23）μV。两组间差异有统计学意义（P〈0.01）。a、b波潜伏期差异无统计学意义。结论：中药复方制剂黄斑颗粒对大鼠视网膜光损伤在形态和功能上有明显的防护作用。

中药黄斑颗粒灌胃对大鼠视网膜光损伤细胞凋亡的影响

目的:观察中药复方黄斑颗粒对大鼠视网膜光损伤细胞凋亡的影响。方法:雄性SD大鼠21只分为给药组、对照组和正常组,光损伤前10d用中药复方黄斑颗粒灌胃,对照组用等体积蒸馏水灌胃,正常对照组正常饲养。光损伤白色荧光灯平均光照强度2800Lux,暗适应24h后,散瞳光照5h后置暗环境饲养,光损伤后继续给药给水,3d后取眼球做石蜡包埋切片,用TUNEL方法进行染色,同时留取眼球进行电镜观察超微形态改变。结果:正常组视网膜结构规整,几乎无TUNEL染色阳性细胞,对照组外核层有大量黄色阳性细胞,结构紊乱,给药组散在少量阳性细胞;电镜下观察可见对照组色素上皮细胞微绒毛消失,光感受器外段排列紊乱,外核层有较多的固缩凋亡细胞核,而给药组则散在少量凋亡细胞。结论:中药黄斑颗粒可能通过对抗细胞凋亡而对大鼠视网膜光损伤起到保护作用。

灵杞黄斑颗粒对光损伤大鼠视网膜氨基酸类神经递质水平的影响

目的探讨灵杞黄斑颗粒对光损伤大鼠视网膜游离氨基酸类神经递质水平的影响。方法将42只大鼠随机分为正常对照组、阳性对照组、中药组,每组14只。建立光损伤模型,于光照后14d作组织病理学检查,并计数视网膜外核层感光细胞层数;运用柱前衍生高效液相色谱方法测定各组大鼠视网膜游离氨基酸的变化。结果光照后14d,阳性对照组和中药组视网膜外核层感光细胞层数均减少,阳性对照组明显减少,与中药组比较有显著性差异(P<0.01);阳性对照组和中药组大鼠视网膜谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)、牛磺酸(Tau)、γ-氨基丁酸(GABA)含量均增高,与正常对照组比较,阳性对照组增高明显(P<0.01),而中药组无明显差异(P>0.05);中药组与阳性对照组比较,视网膜5种游离氨基酸含量均较低,两者差异有统计学意义(P<0.01)。结论灵杞黄斑颗粒对光损伤引起的视网膜形态改变有保护作用,可能与抑制视网膜游离氨基酸水平的增高有关。

灵杞黄斑颗粒治疗视网膜静脉阻塞继发黄斑水肿的疗效观察

目的探讨灵杞黄斑颗粒与联合抗血管内皮生长因子(VEGF)药物玻璃体腔内注射治疗视网膜静脉阻塞(RVO)继发黄斑水肿(ME)的临床疗效。方法 RVO继发ME患者90例(90只眼),随机分为3组。中药治疗组30例(30只眼),予口服灵杞黄斑颗粒;西医治疗组30例(30只眼),予玻璃体腔注射雷珠单抗;中西医治疗组30例(30只眼),予口服灵杞黄斑颗粒联合雷珠单抗玻璃体腔注射。治疗观察6个月,治疗前后进行视力、眼底照相、光学相干断层扫描(OCT)、闪光视网膜电图(F-ERG)及荧光素眼底血管造影(FFA)检查,评价疗效。结果治疗6个月后,中药治疗组30只眼,显效5只眼,有效12只眼,无效13只眼,总有效率56.7%;西医治疗组30只眼,显效9只眼,有效9只眼,无效12只眼,总有效率60.0%;中西医治疗组30只眼,显效15只眼,有效9只眼,无效6只眼,总有效率80.0%。中西医治疗组疗效好于其他两组(与中药治疗组比较,P=0.023,与西医治疗组比较,P=0.177),中药治疗组与西医治疗组的疗效接近(P=1.000)。中西医治疗组在视力改善、眼底出血吸收及降低中央视网膜厚度(CRT)方面明显好于其他两组(P<0.05);中医治疗组的眼底出血吸收情况好于西医对照组(P<0.05),在改善视力、减少CRT方面与西医治疗组大致相当(P>0.05)。各组治疗后ERG视锥细胞反应b波振幅均较治疗前明显增加(P<0.05),但组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论灵杞黄斑颗粒治疗RVO继发的ME有一定的临床疗效,联合抗VEGF药物治疗可更好的达到标本兼治、多靶点治疗的效果。

灵杞黄斑颗粒对大鼠视网膜光损伤时自由基代谢的影响

目的研究灵杞黄斑颗粒对大鼠视网膜光损伤时自由基代谢的影响。方法 SD大鼠随机分为3组:正常对照组、光损伤给水组、光损伤给药组。建立光损伤模型,于光照后1 d,行视网膜电流图(ERG)检查,取视网膜组织,测定各组MDA含量及T-SOD、GSH-Px、CAT活性的变化。结果与正常对照组相比,光损伤给水组ERGa波、b波及Ops总振幅明显降低(P<0.01),视网膜MDA含量增高(P<0.01),T-SOD、GSH-Px、CAT活性降低(P<0.01);与光损伤给水组比较,光损伤给药组ERG a波、b波及Ops总振幅升高(P<0.01),视网膜MDA含量降低(P<0.05),T-SOD、GSH-Px、CAT活性增高(P<0.05)。结论灵杞黄斑颗粒具有干预自由基代谢作用,明显减轻光照引起的视网膜氧化应激损伤,对视网膜功能起保护作用。

灵杞黄斑颗粒对光损伤大鼠视网膜c-fos、caspase-3及bcl-xL表达的影响

目的:研究灵杞黄斑颗粒对大鼠光损伤模型视网膜细胞凋亡相关基因c-fos、caspase-3及bcl-xL表达的影响。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、光损伤给水组、光损伤给药组。采用白色荧光灯持续照射5h建立光损伤模型,于光照2·5h、5h及光照后1d及3d,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫蛋白印迹(western blot)分析视网膜c-fos、caspase-3及bcl-xL的转录表达。结果:c-fos、caspase-3mRNA和蛋白表达下调,bcl-xL mRNA和蛋白表达上调。结论:灵杞黄斑颗粒可调控光损伤大鼠视网膜细胞凋亡相关基因的表达。

灵杞黄斑颗粒含药血清预处理对人视网膜色素上皮细胞衰老的保护作用

目的探讨中药灵杞黄斑颗粒(LQHB)含药血清预处理对氧化应激诱导的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞衰老的保护作用。方法运用血清药理学方法制备不同剂量LQHB含药血清,以过氧化氢(H2O2)(150μmol/L)诱导建立体外人RPE细胞衰老模型,分为正常对照(NC)组、模型(M)组、模型+空白血清(MB)组、模型+低剂量药物血清(ML)组和模型+高剂量药物血清(MH)组,分别采用MTS法、流式细胞法检测各组RPE细胞的活力和周期,衰老相关-β-半乳糖苷酶试剂盒检测各组RPE细胞的衰老情况。相关统计分析采用SAS 9.13统计学软件。结果模型组RPE细胞活力较正常对照组明显降低,而LQHB含药血清组细胞活力虽低于正常对照组,但高于模型组。LQHB含药血清组停滞在G1期的RPE细胞较模型组少。模型组衰老相关-β-半乳糖苷酶活性染色阳性的细胞高达70%,而正常对照组仅占5%,LQHB含药血清组衰老细胞百分比介于两者之间,但不同剂量间无统计学意义的差异。结论 LQHB含药血清对氧化应激诱导的人RPE细胞衰老损伤具有一定的保护作用。

灵杞黄斑颗粒治疗不伴黄斑水肿的缺血型RVO的疗效观察

目的研究视网膜激光光凝联合灵杞黄斑颗粒口服治疗不伴有黄斑水肿的缺血型视网膜静脉阻塞(RVO)的临床疗效。方法收集2014年5月—2015年5月就诊于上海市第一人民医院北院眼科门诊的不伴有黄斑水肿的缺血型RVO患者40例40眼,随机分为对照组和治疗组,治疗组为采取激光光凝联合口服黄斑颗粒治疗;对照组采取激光光凝治疗,分别于治疗前及治疗后1周、1个月、3个月、6个月进行随访,收集患者患眼最佳矫正视力、ERG、FFA无灌注区改变等数据,进行统计分析。结果治疗后两组的视力均有明显提高,治疗前后比较有统计学差异(P<0.05),其中治疗组视力优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。在治疗后3个月及6个月,对照组a波振幅较治疗前有所下降(P<0.05),治疗组a波振幅较之前无明显下降(P>0.05);在治疗3个月、6个月时,两组的b波振幅均较治疗前有所增加,潜伏期有所缩短(P<0.05),其中治疗组b波振幅增加大于对照组,b波潜伏期缩短多于对照组(P<0.05);两组OPs波振幅在治疗3个月、6个月时,均有所增加,其中治疗组增加的幅度显著大于对照组(P<0.05)。在治疗至3个月及6个月时,治疗组出现新生血管比例均低于对照组,该差异不具有临床意义(P>0.05);在治疗至6个月时,治疗有效患者比例差异无统计学意义,在有效病例中,治疗组显效患者比例高于对照组,二者差异有统计学意义(P<0.05)。结论灵杞黄斑颗粒治疗不伴有黄斑水肿的缺血型RVO,可以减少激光能量对正常视网膜组织的损伤,改善视网膜循环,抑制新生血管的产生,减少并发症,提高患者的临床预后,具有一定的临床应用前景与推广价值。

高效液相梯度洗脱法测定灵杞黄斑颗粒中毛蕊花糖苷和丹酚酸B含量

目的建立同时测定灵杞黄斑颗粒中毛蕊花糖苷和丹酚酸B含量的反相高效液相梯度洗脱法。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)进行梯度洗脱,梯度洗脱程序为进样0～8min,调节流动相A∶B(20∶80,V/V);8～20min,流动相A∶B(30∶70,V/V);20～23min,流动相A∶B(20∶80,V/V);流速:1.0mL·min-1,检测波长:334nm,柱温:30℃,进样量:10μL。结果毛蕊花糖苷和丹酚酸B分别在1.50～14.97mg·L-1和18.92～189.23mg·L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9998和0.9999,平均加样回收率毛蕊花糖苷为(99.7±s1.1)%,RSD=1.12%,丹酚酸B为(99.5±1.0)%,RSD=1.02%,3批样品中毛蕊花糖苷平均含量均不低于36.9μg·g-1,RSD均不大于1.54%,丹酚酸B平均含量均不低于344μg·g-1,RSD均不大于1.94%。结论该方法简便、快速、准确、灵敏度高、专属性强,可用于灵杞黄斑颗粒剂的质量控制。

黄斑颗粒含药血清预处理对人RPE细胞缺氧损伤的保护作用

目的:观察中药黄斑颗粒含药血清预处理后对人视网膜色素上皮(hRPE)细胞缺氧损伤的保护作用。方法:制备不同剂量中药黄斑颗粒含药血清,用含药血清预处理hRPE细胞,分不同时间段建立化学缺氧损伤模型,培养24h后,用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果:黄斑颗粒含药血清组细胞活力较空白血清组与模型组细胞活力显著提高,其中高剂量含药血清组细胞活力高于低剂量含药血清组,但仍低于正常对照组,有显著性差异;各含药血清组细胞活力抑制率均明显降低,其中高剂量组低于低剂量组。此外,含药血清能促进缺氧条件下RPE细胞由G0/G1期进入S期,促进RPE细胞的增殖。结论:中药黄斑颗粒含药血清预处理对人视网膜色素上皮细胞缺氧损伤具有一定的保护作用。

黄斑明目颗粒对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用及机理探讨

目的:观察中药黄斑明目颗粒防治实验性高眼压所致大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的疗效观察。方法:所有大鼠随机分为正常对照组、模型组、黄斑明目颗粒组。经前房恒压灌注生理盐水60 min,建立视网膜缺血-再灌注损伤的动物模型。黄斑明目颗粒组于造模前7 d开始予以黄斑明目颗粒灌胃给药,正常对照组及模型组给予等量生理盐水灌胃。观察缺血-再灌注损伤后1、7、14、28 d各组视网膜电图中a波及b波的变化,分析视网膜厚度,并进行视网膜电镜检查,结果:正常对照组大鼠不同时间点ERG的潜伏期和振幅无显著性差异;缺血-再灌注损伤后,模型组大鼠ERG的潜伏期和振幅均呈持续性、进行性下降,黄斑明目颗粒组大鼠ERG的潜伏期和振幅较模型组有显著改善(P<0.05),但仍差于正常对照组。眼病理试验结果表明,与模型组比较,黄斑明目颗粒组缺血-再灌注所致的大鼠视网膜损伤显著减轻。结论:黄斑明目颗粒对视网膜缺血-再灌注损伤有保护作用,是治疗视网膜缺血性疾病的有效中药复方制剂。

黄斑明目颗粒对光化学损伤大鼠视网膜的保护作用

目的:观察黄斑明目颗粒对大鼠光化学损伤后视网膜的保护作用。方法:60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、黄斑明目颗粒组。除正常对照组外,各组大鼠接受(1 900±106.9)Lux绿色荧光灯24 h持续光照射,建立大鼠视网膜光化学损伤模型。黄斑明目颗粒组于光照前7天分别予以黄斑明目颗粒2.5 g/(kg/d)灌胃给药,正常对照组及模型组予以等量生理盐水。光照后6、6、14 d,检测视网膜组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)的含量,并进行视网膜透视电子显微镜和光学显微镜的组织学观察。结果:光化学损伤后6 d及14 d,黄斑明目颗粒组视网膜中SOD的活性显著高于模型组(P<0.05),MDA的含量显著低于模型组(P<0.05);通过视网膜透视电子显微镜和光学显微镜的组织学观察,黄斑明目颗粒组的病理组织学损害较模型组明显减轻。结论:黄斑明目颗粒对视网膜光化学损伤有明显的防护作用。

黄斑明目颗粒对N-甲基-N-亚硝脲诱导大鼠视网膜光感受器细胞损伤的防护作用

目的探讨黄斑明目颗粒对N-甲基-N-亚硝脲(MNU)诱导的大鼠视网膜光感受器细胞变性动物模型的防护作用,为防治视网膜变性提供一种有价值的现代化中药。方法 将鼠龄为43 d的雌性SD大鼠33只随机分为3组。黄斑明目颗粒组(n=10)以黄斑明目颗粒溶解后灌胃,正常对照组(n=10)和模型对照组(n=10)以等量蒸馏水灌胃,bid,连续7 d。给药7 d后,黄斑明目颗粒组和模型对照组大鼠予MNU 40 mg/kgi,p;正常对照组注射等量生理盐水。观察MNU处理后122、4、48、72 h各组大鼠视网膜电图a波及b波的变化,并于MNU作用后7 d处死大鼠,取眼球测定视网膜全层及外核层厚度。结果 正常对照组大鼠不同时间点视网膜电图(ERG)a波及b波的振幅差异无统计学意义(P>0.05);模型对照组在MNU处理后ERG a波及b波的振幅均呈持续性、进行性下降,黄斑明目颗粒可明显抑制ERG a波及b波振幅的降低(P<0.05)。眼病理结果,黄斑明目颗粒组与模型对照组比较,MNU诱导的大鼠视网膜光感受器细胞损伤明显减轻(P<0.05)。结论 黄斑明目颗粒可减轻MNU对大鼠视网膜光感受器细胞的损伤程度,促进MNU诱导的大鼠视网膜光感受器细胞损伤的功能恢复。

黄斑I号颗粒的定性鉴别

目的 :黄斑I号颗粒中肉苁容、苍术、当归、川芎、丹参的定性鉴别 ;方法 :薄层层析色谱法鉴别肉苁容和苍术 ;高效液相色谱法鉴别当归、川芎、丹参。结果 :肉苁蓉、苍术均呈阳性反应 ;阿魏酸在波长 3 13nm处有吸收峰 ;丹参素在波长2 80nm处有吸收峰。结论 :该方法简便 ,重复性好 ,其他组分对检测无干扰 ,可用于黄斑I号颗粒的质量控制。

多指标优选糖网黄斑水肿方颗粒提取工艺及蒲黄影响溶出的机制考察

目的：优选糖网黄斑水肿方颗粒提取工艺,并考察蒲黄影响黄芪药效成分溶出的机制。方法：采用HPLCELSD法测定黄芪甲苷含量,HPLC-DAD法同时测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷、香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷含量。以4个成分为评价指标,优选蒲黄提取方式。以蒲黄指标成分为评价指标,单因素法优选蒲黄提取工艺。以黄芪指标成分和干膏率为评价指标,以综合评分法建立三因素三水平正交试验,优选黄芪等7味药提取工艺。通过测定不同阶段下黄芪指标成分的变化,考察蒲黄对黄芪成分溶出的影响。结果：最佳提取工艺为：称取蒲黄,加11倍水,煎煮4次,每次50 min,过滤,得蒲黄单煎液;称取黄芪等7味药,加8倍水,煎煮3次,每次40 min,过滤,得黄芪等7味药合煎液。蒲黄的吸附作用是影响黄芪成分溶出的主要原因。结论：糖网黄斑水肿方颗粒中蒲黄粉末和黏液质具有吸附作用,影响黄芪指标成分溶出,制备时蒲黄应采用单煎法。优选的工艺合理可行、稳定科学,适合于该制剂的工业化生产。

黄斑明目颗粒对N-甲基-N-亚硝脲诱导视网膜变性大鼠的保护作用

目的观察黄斑明目颗粒对N-甲基-N-亚硝脲(MNU)诱导视网膜变性大鼠的保护作用。方法生后43 d的雌性SD大鼠30只随机分为3组(n=10):正常对照组、模型对照组、黄斑明目颗粒组。黄斑明目颗粒组以黄斑明目颗粒溶解后灌胃,正常对照组和模型对照组以等量蒸馏水灌胃,每日2次,连续7 d。于生后50 d,黄斑明目颗粒组和模型对照组大鼠腹腔注射MNU 40 mg.kg-1,正常对照组注射等量生理盐水。观察MNU处理后12,24,48,72 h各组大鼠视网膜电图中a波及b波的变化,并于MNU处理后72 h处死大鼠,取眼球做组织学观察。结果正常对照组大鼠不同时间点视网膜电图(ERG)a波及b波的振幅差异无显著性的意义,模型对照组在MNU处理后ERG a波及b波的振幅均呈持续性、进行性下降,黄斑明目颗粒可明显抑制ERG a波及b波振幅的降低。通过视网膜透视电子显微镜的组织学观察显示,黄斑明目颗粒组的病理组织学损害较模型对照组明显减轻。结论黄斑明目颗粒对MNU诱导的视网膜变性大鼠有保护作用,是治疗视网膜变性疾病的有效中药复方制剂。