黄芪苷通过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α通路改善线粒体功能减轻糖尿病肾脏疾病肾损伤

目的探讨黄芪苷(astragalin,AG)减轻糖尿病肾脏疾病肾损伤的作用及机制。方法16周龄db/m、db/db小鼠按照随机数字表法分为db/m组、db/m+AG(5 mg/kg灌胃)组、db/db组、db/db+AG(5 mg/kg灌胃)组。体外培养原代人肾皮质近曲小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2),并将其分为对照(5 mM葡萄糖)组、对照+AG(5 mM葡萄糖+10μM AG)组、高糖(30 mM)组、高糖+AG(30 mM葡萄糖+10μM AG)组。检测各组小鼠尿白蛋白肌酐比、血糖、体重水平;通过PAS染色和Masson染色观察小鼠肾组织病理学改变;通过蛋白质免疫印迹法测定腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、磷酸化(p)-AMPK、氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)及抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达情况;通过荧光染色检测PGC-1α蛋白的表达水平;通过分子对接检测AG与PGC-1α蛋白的结合力。结果(1)与db/m组相比,db/m+AG组小鼠未出现体重、血糖变化及肾损伤(P>0.05),提示口服AG具有一定的安全性;与db/db组相比,db/db+AG组小鼠体重下降,可降低血糖及尿白蛋白肌酐比水平,并缓解肾组织病变(P<0.01);(2)蛋白质免疫印迹法的结果显示与db/db组相比,db/db+AG组可增加pAMPK/AMPK比值、PGC-1α蛋白的表达,并增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(均P<0.01);与对照组相比,高糖组的p-AMPK/AMPK比值、PGC-1α蛋白表达下降,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达也下降(均P<0.001);与高糖组相比,高糖+AG组可提高p-AMPK/AMPK比值、PGC-1α蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(均P<0.01);(3)荧光染色的结果显示与db/db组相比,db/db+AG组增加PGC-1α蛋白的表达增加(P<0.01);与高糖组相比,高糖+AG组PGC-1α蛋白的表达增加(P<0.01);(4)在分子对接中,黄芪苷AG可与PGC-1α蛋白稳定结合。结论黄芪苷可通过AMPK/PGC-1α通路来改善线粒体功能,减轻肾损伤,从而延缓糖尿病肾脏疾病进展。

黄芪苷抗生物氧化作用的研究

0.02、0.04、0.06mmol ASI和0.008、0.016、0.024mmol SK可对抗远志皂苷的溶血作用,且随剂量的增加而增大。12.5mg/kg ASI及6mg/kg SK,ig每日二次,连续5天,可对抗CCl_4所致死亡。12.5、25mg/kg×d ASI,6、12mg/kg×d SK,ig持续14～16天,可引起昆明种小鼠或C_(57)BL/6小鼠的红细胞内超化歧化酶活性明显增加。12.0mg/kg×d SK、25mg/kg×d ASI持续4天,可使昆明种小鼠或C_(57)小鼠的肝内MDA含量明显下降,GSH含量明显上升。以上结果提示黄芪苷具有抗生物氧化性质,这不仅可能有助于解释黄芪苷对抗CCl_4的毒性作用和远志皂苷的溶血作用,这一基本生化机制,也有助于阐明中医应用黄芪异病同治的原理。

黄芪苷 Ⅳ对正常和心功能受抑制大鼠左心室心肌力学的影响

目的 研究黄芪苷 对正常和心功能受抑制大鼠左心室心肌力学的效应。方法 采用左心室导管法 ,测定左心室压力 (L VP)及其微分 (dp/dt) ,对 iv黄芪苷 (1m g/kg)对左心室心肌力学的效应。iv普萘洛尔 (0 .75m g/kg)抑制大鼠心功能 ,观察黄芪苷 的对抗作用。结果 黄芪苷 使心率 (HR)略有减慢 ;使左室压力上升最大速度 (dp/dtmax)明显提高 ,具有正性肌力作用 ;使左室压力下降的时间常数 (T)显著缩短 ,改善心脏舒张功能 ;左心室射血的张力 -时间指数 (TTI)无明显改变 ,表明该药在增强心肌收缩力的同时并未增加心肌耗氧量。对普萘洛尔抑制心功能的大鼠 ,用黄芪苷 后 dp/dtmax无显著降低 ,即该药可对抗普萘洛尔抑制心肌收缩力的作用 ;T值显著缩短 ,表明心脏舒张功能也有改善 ;心肌耗氧量不增加。结论 黄芪苷 可改善心脏收缩及舒张功能 。

淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ对骨髓基质细胞增殖及成骨能力的影响

目的:探讨补肾药有效成分淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ对实验犬骨髓基质细胞(BMSCs)增殖及其成骨能力的影响。方法:抽取犬BMSCs,诱导培养、传至第三代时于培养液中添加淫羊藿苷或黄芪苷Ⅰ使两种药物的终浓度为50 ng/m l。设BMP-2阳性对照和空白对照组,分别于第1至第8天每天测细胞的MTT值,绘制BMSCs生长曲线、观察其增殖情况;于第1、3、6、10、14天检测BMSCs的ALP和OD值,绘制该OD值变化曲线判断ALP的活性。结果:淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ预处理后BMSCs的MTT值从第1天至第7天均高于空白对照组;BMSCs分泌ALP的OD值也均高于空白对照组,二者差异有显著性(P<0.05)。结论:淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ能促进BMSCs增殖、促进BMSCs合成ALP从而增强其成骨能力。

黄芪苷对人外周血自然杀伤活性影响因素的研究

应用^(51)Cr释放法研究黄芪苷ASI和SK对人外周血NK活性的影响。结果表明,高浓度(250 μg/ml)有抑制作用,在适当浓度范围内(5μg/～0.05μg/ml)有较显著的促进作用(P<0.05),当与PHA、rIFN α或rIL-2联合作用时对NK活性有明显的增强作用。本文还证明了黄芪苷对地塞米松抑制NK活性有一定的恢复作用。本研究证实黄芪苷是增强机体免疫功能的一种有效成分。它是一种免疫调变剂,其作用强弱与机体的免疫水平有关。本研究也为临床使用黄芪制剂提供一些依据。

黄芪苷Ⅳ对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的研究黄芪苷Ⅳ(astragalosideⅣ,AST)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大鼠心肌细胞肥大的保护作用并探讨其作用机制。方法AngⅡ刺激新生大鼠心肌细胞,制备心肌细胞肥大模型,分别用AST10mg·mL-1和20mg·mL-1进行预防性治疗。检测心肌细胞直径及细胞总蛋白含量,测定心肌细胞[Ca2+]i、肌浆网钙泵(SERCA)活力和钙调神经磷酸酶(CaN)活性。结果AngⅡ组细胞直径增大,总蛋白含量增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);AST10mg·mL-1和20mg·mL-1能够降低心肌细胞肥大程度(P<0.05或P<0.01)、[Ca2+]i(P<0.01)及CaN活性(P<0.05或P<0.01)、提高SERCA活力(P<0.01)。结论AST对AngⅡ诱导心肌细胞肥大有明显的保护作用,可能与其降低[Ca2+]i、提高心肌SERCA活力及降低CaN活性有关。

黄芪苷Ⅳ对心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的研究黄芪苷Ⅳ对阿霉素所致心肌细胞损伤的保护作用。方法以原代培养乳鼠心肌细胞建立损伤模型。实验分3组。正常对照组;模型组:阿霉素分别为0.5、1.0mg/L与乳鼠心肌细胞共同培养;黄芪苷Ⅳ组:在加入阿霉素前1h分别给予黄芪苷Ⅳ10、20mg/L,然后加入与模型组相同浓度的阿霉素共同培养。观察心肌细胞四甲基偶氮唑盐(MTT)代谢率、丙二醛(MDA)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性的变化,并测定心肌细胞内的游离钙离子浓度。结果阿霉素组心肌细胞的MTT代谢率显著降低(P<0.01),MDA含量增加(P<0.05),NOS活性升高(P<0.05),[Ca2+]i升高(P<0.01)。黄芪苷Ⅳ可使阿霉素损伤的心肌细胞MTT代谢率提高,MDA含量减少(P<0.05),NOS活性降低(P<0.05),[Ca2+]i降低(P<0.01)。结论黄芪苷Ⅳ对受损伤的心肌细胞具有明显的保护作用。

黄芪苷Ⅳ对损伤的人血白细胞变形能力的影响

目的研究黄芪苷Ⅳ（ＸＧＡ）对损伤的人血白细胞变形能力的影响。方法人血白细胞经孵化后损伤，用核孔膜滤过法观察ＸＧＡ对白细胞变形能力的影响，并在电镜下观察白细胞形态的变化。结果人血白细胞在孵化２４及４８ｈ后受到损伤，白细胞阻塞率（ＣＩ）值明显增加，５０μｇ／ｍｌ样品的ＸＧＡ对损伤的白细胞能明显降低其ＣＩ值，改善白细胞的变形能力；ＸＧＡ在２５～２５０μｇ／ｍｌ样品的剂量范围内对损伤的白细胞均能明显降低其ＣＩ值，改善白细胞的变形能力；电镜下观察到５０μｇ／ｍｌ样品的ＸＧＡ对损伤的白细胞有修复作用。结论ＸＧＡ能明显改善受损白细胞的变形能力，而白细胞变形能力的改善可能是ＸＧＡ防治心脑血管疾病的作用机制之一。

黄芪苷Ⅳ对心律不齐大鼠的作用及相关机制

目的研究黄芪苷Ⅳ对心律不齐大鼠的作用及初步机制。方法建立心律不齐大鼠模型,实验随机分为假手术组、模型组、低剂量组(黄芪苷Ⅳ20 mg/kg)和高剂量组(黄芪苷Ⅳ40 mg/kg),观察给药前和给药后30 min、60 min、120 min和240 min的心电图;Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶试剂盒检测心肌细胞膜中Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶的活性。结果与模型组相比,黄芪苷Ⅳ在30~240 min内显著减少心律不齐大鼠的室性早搏和室性心动过速次数,并增加心肌细胞膜中Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶的活性。结论黄芪苷Ⅳ通过增加心肌细胞膜中Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶的活性降低心律不齐发生的概率。

绵毛黄芪苷和苦玄参苷的中枢抑制作用

报道了绵毛黄芪苷(SK)及其同类结构苦玄参苷(PIA)给予昆明种式BLC_(57)/1小鼠50mg/kg腹腔注射能明显延长硫贲妥钠的睡眠时间,用扭体法或热板法证实同量SK或PIA静脉注射能产生明显的镇痛作用。用格斗试验证实:同量SK或PIA腹腔注射可使小鼠格斗试验次数明显减少。提示两种苷可能具有中枢镇静、镇痛和安定作用;此类中枢抑制作用说明四环三萜皂苷类具有药用价值的前景。

黄芪苷Ⅳ对阿霉素损伤培养乳鼠心肌细胞保护作用机制研究

目的：研究黄芪苷Ⅳ（astragaloside Ⅳ，AST）对阿霉素所致培养乳鼠心肌细胞损伤的保护作用，并从乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）、线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential，△ψm）、肌浆网钙泵（sarcoplasmic reticulum Ca^2＋-ATPases，SERCA）和凋亡相关蛋白Bcl-2／Bax四方面探讨其作用机制。方法：采用体外培养乳鼠心肌细胞，用阿霉素（adfiamycin，ADR）制备心肌细胞损伤模型。心肌细胞随机分为四组：空白对照组（C组）；ADR组在培养液中加入ADR2mg／L，作用3小时；AST组在培养液中加入AST20mg／L，作用4小时；AST＋ADR组为在加入ADR2mg／L前1小时给予AST20mg／L，继续作用3小时。

黄芪苷IV对小鼠心肌缺血损伤的保护作用

目的观察黄芪苷IV对异丙肾上腺素(isoproteronol,ISO)诱发的小鼠心肌缺血损伤的影响.方法采用皮下注射ISO制造心肌缺血模型,记录小鼠标Ⅱ导联心电图,用J点变化评价心肌损伤,并记录注射ISO后5 min内的心律失常发生情况;取血,以羟胺法测定SOD活性;快速断头,观察小鼠耐急性缺氧的能力;取心肌观察其超微结构的变化.结果与模型组比较,黄芪苷IV能明显降低J点的抬高程度(1.83±1.1)mV vs(13.15±1.24)mV,P<0.01;减少缺血后室性心率失常的发生(2.1±1.3)vs(12.4±3.8),P<0.01;升高SOD活性(378±66)NU.mL-1vs(311±46)NU.mL-1,P<0.05;提高小鼠耐急性缺氧的能力(28.6±2.5)s vs(16.4±2.4)s,P<0.05;并能显著缓解ISO所导致的心肌超微结构的损伤.结论黄芪苷IV对ISO诱发的小鼠心肌缺血损伤具有保护作用.

黄芪苷Ⅳ防治大鼠脑皮层缺血-再灌注损伤的作用和对APE／Ref-1表达的研究

目的：研究黄芪苷Ⅳ（Astragaloside Ⅳ，AST）对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及探索AST治疗脑缺血-再灌注损伤的可能药物作用靶点。 方法：实验大鼠被随机分为4个实验组：缺血-再灌注模型组（M组），低剂量治疗组（AST1），高剂量治疗组（AST2），假手术组（Sham）。AST1和AST2组大鼠在缺血前30min腹腔注射AST 1mg／kg、4mg／kg。所有接受手术的鼠均采用线栓法制备局灶性大脑中动脉阻塞模型（Middle cerebral artery occlusion，MCAO）。再灌注后6h处死大鼠前进行神经行为评分，应用TYC染色法检测脑梗塞范围，HE染色观察病理变化；

HPLC测定咳速停口服液中黄芪苷的含量

目的建立咳速停的质量控制方法。方法在Spherigel ODS C18,5μm,4.6mm×25cm柱上,甲醇-0.4%磷酸(52:48)为流动相,检测波长为波长为280nm,流速为1.0ml/min。结果黄芪苷的量在0.24～1.20μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9998),回归方程为A=3995054C+203489。精密度试验RSD为0.23%,该方法平均回收率为98.83%,RSD=1.04%。结论该方法简单、快速、准确。

ERK1/2信号通路对黄芪苷Ⅳ抗H_2O_2诱导H9c2细胞氧化损伤的作用

目的:研究黄芪苷Ⅳ(AST)是否通过细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路发挥对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用。方法:用200μmol/L的H2O2处理细胞6 h,采用MTT法检测细胞存活率,建立H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤模型;比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活力以及丙二醛(MDA)含量;Western blot检测H9c2细胞ERK1/2蛋白的磷酸化水平。结果:在H2O2浓度为200μmol/L作用6 h条件下,细胞存活率降低程度适中,实验结果重复性好,确定后续实验采用200μmol/L H2O2作用6 h建立模型。与H2O2组比较,10 mg/L及20 mg/L AST均显著提高细胞存活率(P<0.01),使细胞培养液中LDH活性显著降低(P<0.01),T-SOD及Mn-SOD活力显著提高(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.01)。10 mg/L及20 mg/L AST均显著增加H2O2损伤的H9c2细胞p-ERK1/2蛋白的表达(P<0.01),当用PD98059(ERK1/2的抑制剂)预处理后,AST的作用则被取消。结论:黄芪苷Ⅳ可以通过ERK1/2通路发挥对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用。

黄芪有效成分黄芪苷Ⅳ强心作用实验研究

目的:观察中药黄芪的有效成分黄芪苷Ⅳ(XGA)对心肌的变力作用以及对心率的影响。方法:本实验采用豚鼠离体乳头肌及心房标本,观察加入不同浓度XGA后乳头肌收缩力及心房搏动频率的变化。结果:实验结果显示,XGA能明显提高豚鼠离体乳头肌收缩力,呈正性肌力作用,并有浓度依赖性,对离体右心房标本,XGA致负性频率作用,且心房收缩力减弱,亦有浓度依赖性。结论:中药黄芪有利于作为新一代抗心力衰竭药物的应用,是一种有研究价值的非洋地黄类强心药。

黄芪苷Ⅳ对多柔吡星诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的：探讨黄芪苷Ⅳ对多柔吡星诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护作用，并初步探讨其作用机制。方法：采用1～3d的SD大鼠分离心肌细胞，培养72h后随机分为正常组、多柔吡星模型组（1．0mol·L-1）、不同剂量黄芪苷1V（18g·mL-1、36g·mL-I、72g·mL-1）与多柔吡星（1．0mol．T-1）同时给药组（黄芪苷Ⅳ低、中、高剂量组）。培养24h，检测心肌细胞存活率，以及培养基中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）含量，TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况，检测Caspase-3活性32．Bcl-2、Bax蛋白表达。结果：与正常组比较，多柔吡星模型组心肌细胞存活率明显降低（P〈0．01），培养基中CK、LDH含量显著增加（P〈0．01）；与多柔吡星模型组比较，黄芪苷Ⅳ中、高剂量组细胞存活率升高（P〈0．05或P〈0．01），培养基中CK、LDH释放量降低（火0．05或P〈0．01），TUNEL实验表明心肌细胞凋亡比率减少（P〈0．01），Caspase-3含量降低（P〈0．05），Bcl-2蛋白表达增加（P〈0．01），Bax表达降低（P〈0．05）。结论：黄芪苷Ⅳ对多柔吡星诱导的大鼠心肌细胞损伤具有保护作用，其机制可能与其抑制心肌细胞凋亡、提高Bcl-2表达有关。

高效液相色谱法测定复方黄芪颗粒中黄芪苷的含量

目的:探讨高效液相色谱法测定复方黄芪颗粒中黄芪苷的含量。方法:色谱条件:流动相为甲醇-水-乙腈,流速为1mL/min,紫外检测波长为250nm,进样量10μL,柱温35℃。结果:标准曲线方程为Y=013.614X-1.4897,相关系数R=0.9979;本实验方法精密度符合要求,回收率高,稳定性强,黄芪苷在24h内稳定性良好,高效液相色谱法测定复方黄芪颗粒中黄芪苷的含量为3.39mg/5g。结论:高效液相色谱法测定复方黄芪颗粒中黄芪苷的含量操作简便迅速,精密度和稳定性均较理想,回收含量高,可为测定中药中黄芪苷物质含量提供方法依据。

基于近红外光谱技术建立湿加松针叶黄芪苷含量的预测模型

研究使用DA2700型近红外光谱仪采集了112个湿加松Pinus elliottii×P.oaribaea松针粉末样本的光谱数据。结合实际测定值,采用偏最小二乘(PLS)回归法并选择最佳光谱预处理方法和最佳主成分数,建立湿加松松针黄芪苷含量的近红外快速预测模型。结果表明:当采用一阶导数(FD)+标准正态变量转换法(SNV)对光谱数据进行预处理,主成分数为6,此时模型的预测效果最好,校正集相关系数(R_(v))和交互验证集相关系数(R_(v))分别为0.808 2和0.710 9。校正集均方根误差(RMSEC)和交互验证集均方根误差(RMSEV)分别为1.931 4和2.398 8,说明模型的预测效果较好。利用外部验证集对模型进行验证,得到模型的外部验证相关系数R=0.812 9,预测均方根误差RMSEP=2.973 8。